超顺磁性氧化铁纳米粒子标记人脐血间充质干细胞的可行性

目的探讨超顺磁性氧化铁纳米粒子（superparamagnetic iron oxide,SPIO）标记人脐血间充质干细胞（UCB-MSCs）的安全性和有效性。方法采用密度梯度离心法结合直接贴壁法分离培养UCB-MSCs,并应用不同浓度的SPIO标记UCB-MSCs,分别通过普鲁士蓝染色测定标记率,台盼蓝染色检测标记后细胞活性,四甲基偶氮唑盐（MTT）比色试验评价SPIO对细胞生长能力的影响。结果普鲁士蓝染色证实SPIO标记UCB-MSCs浓度为14、28、56、84μg/ml时细胞标记率达100%的时间分别为72h、48h、36h、12h,细胞内铁颗粒的浓度随孵育时间、标记浓度的增加而增加,当SPIO浓度〉140μg/ml时对UCB-MSCs活性有一定程度的影响。台盼蓝排斥试验发现各低浓度组的活细胞率均在90%以上,组间比较差异无统计学意义（P〉0.05）;高浓度组的活细胞率下降,组间比较差异有统计学意义（P〈0.05）,与低浓度各组及未标记对照组比较差异亦有统计学意义（P〈0.05）。MTT比色试验结果显示,低浓度组间吸光度值（OD值）比较差异无统计学意义（P〉0.05）,而高浓度组OD值有下降趋势,与低浓度各组及未标记对照组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论适宜浓度的SPIO标记UCB-MSCs安全、有效。     

Cdc42参与脐带间充质干细胞向炎性因子的趋化

背景：间充质干细胞移植后的归巢能力关系到细胞移植的疗效,研究其趋化和迁移的调控将有助于提高间充质干细胞临床应用的价值。目的：观察Cdc42在人脐带间充质干细胞定向迁移中的作用。方法：首先以组织块法分离培养人脐带间充质干细胞,与炎性因子肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β、转化生长因子β共培养后Western检测Cdc42表达变化。化学合成Cdc42的干扰RNA,转染细胞后分别采用Transwell和Matrigel胶观察细胞迁移和黏附能力。应用Western检测Cdc42下游靶分子ERK1/2的变化。结果与结论：与炎性因子共培养后的人脐带间充质干细胞中Cdc42表达明显增加,接近无因子对照组的2倍水平。siRNA下调Cdc42的表达能够显著抑制人脐带间充质干细胞的迁移和黏附,且其下游信号分子ERK1/2的表达以及磷酸化水平均相应受到抑制。提示体外培养环境下Cdc42参与了人脐带间充质干细胞的趋化过程。     

不同剂量降纤酶治疗急性脑梗死疗效对照研究

近年来，降纤酶治疗急性脑梗死有许多报道，并确认是一种安全、可靠、有效的溶栓药物，但关于降纤酶治疗急性脑梗死最佳剂量不十分明确，我院于2000年1月～2002年2月，用两种不同剂量降纤酶治疗急性脑梗死进行随机双盲对照研究。报道如下。 1 资料与方法……     

BEP-Ⅲ全自动酶免分析仪使用注意事项与常见故障排除

0引言随着检测技术和检测仪器的不断更新与发展,全自动酶免分析仪在血站和医院血液检测中的应用越来越广泛。利用全自动酶免分析仪进行检测工作,不仅大大地减轻了检测工作人员的劳动强度,而且还很好地避免了工作中人为性的误差,提高了检测结果的准确性和可靠性。本科于2010年引进了2台BEP-Ⅲ全自动酶免分析仪,现结合日常工作中的使用情况及常见故障分析处理作如下总结,供参考。     

Cdc42 小干扰RNA对结肠癌细胞恶性表型的影响

 目的 研究细胞周期分裂蛋白Cell division cycle 42(Cdc42)小干扰RNA(siRNA)对人结肠癌细胞恶性表型的影响. 方法 Western blot 检测五种结肠癌细胞系中Cdc42的表达。设计并合成靶向Cdc42编码区的三对siRNA及阴性对照RNA,应用Lipofectamine^TM2000分别转染结肠癌细胞系中高表达Cdc42的Lovo和SW620细胞,RT-PCR和Western blot分别检测48h后Cdc42 mRNA及蛋白的表达。Cell Counting Kit-8检测细胞的增殖能力,损伤刮擦实验和Transwell小室法分别检测细胞迁移与侵袭能力的变化。 结果 RT-PCR和 Western blot检测显示,Cdc42-siRNA能显著下调Cdc42 mRNA和蛋白水平,尤其Cdc42-siRNA1;siRNA处理后的肿瘤细胞增殖受到抑制,细胞迁移、侵袭能力也显著降低。 结论 Cdc42-siRNA可有效抑制结肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭。提示Cdc42可能成为抑制结肠癌细胞增殖和转移新的分子靶点。     

烟雾病所致脑卒中6例临床分析

近年来随着医学影像学的发展,脑血管异常所致脑卒中的病例报道越来越多。本文6例患者均为烟雾病所致脑卒中,就其临床表现、影像学检查、诊断及鉴别诊断进行分析讨论。1临床资料1.1一般资料男4例,女2例,年龄分别是6、10、8、32、40、44岁。平均年龄23.3岁(2例来自上海华山医院,1     

体外诱导人脐带间充质干细胞分化为胰岛样细胞实验研究

目的 探索人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUC-MSCs)在胰岛细胞微环境中向胰岛样细胞的分化潜能及功能变化趋势.方法 将分离的第3代hUC-MSCs用低糖达尔伯克必需基本培养基(L-DMEM)重悬,接种单纯培养组及与大鼠胰岛细胞共培养组(共培养组).倒置显微镜观察hUC-MSCs的形态变化;流式细胞仪鉴定其细胞表面标志;免疫细胞化学鉴定胰十二指肠同源框-1基因(PDX-1)的表达;放免法检测hUC-MSCs胰岛素和C肽的分泌及对糖刺激的反应.结果 hUC-MSCs呈均一纺锤形平行排列或漩涡状排列生长,不表达CD34、CD45和CD14,高表达CD29、CD44和CD105;共培养组诱导后3 d及7 d经细胞逐渐变圆并聚集成团,PDX-1呈阳性表达,至10 d及14 d PDX-1阳性细胞罕见.单纯培养组细胞形态未发生变化,PDX-1表达阴性.共培养组培养上清中检测到较高水平的胰岛素及C肽,单纯培养组检测到少量的胰岛素,检测不到C肽,两组培养3、7、10和14 d的胰岛素分泌水平比较差异均有统计学意义(P<0.01).共培养组胰岛素及C肽水平以7 d最高,10 d次之,与3 d和14 d比较差异均有统计学意义(P<0.01),共培养组糖刺激指数为1.41.结论 hUC-MSCs在胰岛细胞微环境中具有向胰岛样细胞分化的潜能,其内分泌功能随体外诱导时间的延长呈现先递增后递减的趋势.     

葡萄糖酸钙和氯化钙制备的血小板凝胶上清对脐带间充质干细胞作用的比较

目的 观察葡萄糖酸钙和CaCl_2制备的血小板凝胶上清(platelet-rich plasma releasate,PRP releasate)在脐带间充质干细胞(umbilical cord mesenchymal stromal cells,ucMSCs)迁移和黏附方面的作用。方法 应用血细胞分离机收集PRP,10%葡萄糖酸钙或5% CaCl_2注射液制备PRP releasate,命名为葡萄糖酸钙-PRP releasate和CaCl_2-PRP releasate。以胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)培养的细胞作为对照组,采用Transwell板和Matrigel胶分别观察三组细胞的迁移和黏附能力;Western blot检测三组细胞信号分子Cdc42、RhoA和Rac1的表达。结果 与FBS培养组相比,两组PRP releasate对细胞迁移和黏附有明显促进作用,葡萄糖酸钙-PRP releasate促迁移最为明显。但两组PRP releasate对细胞黏附的影响无统计学意义。同时,与细胞迁移和黏附相关的Rho家族分子Cdc42、Rac1和RhoA表达上调,葡萄糖酸钙-PRP releasate组最显著。结论 较于CaCl_2,葡萄糖酸钙-PRP releasate可以更有效促进ucMSCs的迁移。为两者联合应用实现组织修复提供治疗策略。     

腺病毒介导血管内皮生长因子转染脐带间充质干细胞的实验研究

目的探讨腺病毒载体介导血管内皮生长因子(VEGF)转染脐带间充质干细胞(UCMSCs)的可行性,以及VEGF转染对UCMSCs功能的影响。方法构建VEGF165-EGFP基因重组腺病毒载体,分离和培养UCMSCs,携增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的腺病毒载体转染UCMSCs,倒置荧光显微镜下观察细胞转染效果,流式细胞仪检测细胞转染率,确定最佳病毒感染复数(MOI)。将细胞分为VEGF-EGFP转染组、EGFP空载组及对照组3组,依据最佳MOI值转染并收集细胞,采用蛋白印迹法(Western blotting)检测VEGF及Akt表达变化;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测VEGF蛋白表达情况。采用CCK-8法评价转染对UCMSCs增殖的影响。结果腺病毒介导的VEGF165-EGFP基因能够成功转染UCMSCs,且VEGF基因在细胞内能够转录和表达,并能分泌到细胞外。转染后48 h VEGF-EGFP转染组VEGF、Akt水平显著高于EGFP空载组和对照组(P<0.05);转染后48 h采用ELISA法在VEGF-EGFP转染组细胞培养上清中即检测到VEGF的表达和分泌,在转染后第4天达到高峰,且VEGF表达显著高于EGFP空载组及对照组(P<0.01),以后逐渐下降,并稳定表达一定时间。CCK-8法检测结果显示,介导VEGF基因转染的腺病毒对UCMSCs增殖无明显影响。结论腺病毒介导VEGF基因能够成功转染UCMSCs,保持其原有生物学特性,并能持续高效表达VEGF,为通过VEGF基因联合UCMSCs治疗获得糖尿病下肢血液循环重建的可行性提供理论依据。     

超顺磁性氧化铁标记脐带间充质干细胞后的活体MRI示踪

背景:核磁成像以其有效成像时间长,空间、时间分辨率高,对比度好的优点,在细胞活体示踪中显现出其独有的优势。目的:观察超顺磁性氧化铁标记人脐带间充质干细胞的适宜浓度,及标记后干细胞移植入心肌梗死实验犬体内的MRI示踪成像。方法:无菌条件下留取健康新生儿脐带,分离培养间充质干细胞并进行细胞表面标志检测。不同质量浓度的超顺磁性氧化铁标记第3代人脐带间充质干细胞,采用开胸冠状动脉结扎法建立犬心肌梗死模型并经心电图和病理对模型进行鉴定。56mg/L超顺磁性氧化铁标记干细胞后移植实验组,相同质量浓度超顺磁性氧化铁注射对照组,分别于移植前、移植后第7,28天行核磁显像,第14,28天进行心肌病理检测。结果与结论:分离得到的人脐带间充质干细胞表达间充质干细胞表面标记CD29,CD44及CD105均在90%以上,不表达造血细胞系的特征CD14,CD34与CD45。超顺磁性氧化铁质量浓度在14-84mg/L时,对细胞增殖与活性无明显影响,标记率接近100%。心电图及组织病理检测均显示心肌梗死模型制作成功。56mg/L的超顺磁性氧化铁标记细胞并移植后,核磁可对移植细胞清晰显像;病理检测可见普鲁士蓝染色阳性的细胞,生长方向同心肌细胞一致。提示14-84mg/L范围的超顺磁性氧化铁可有效标记人脐带间充质干细胞,且核磁可以对超顺磁性氧化铁标记的人脐带间充质干细胞进行活体示踪。