T淋巴瘤TOCRVβ核酸疫苗的构建和生物学活性的初步检测

T淋巴瘤是某种重排的T细胞恶性增殖的结果,这种恶性增殖T细胞上特异的TCR可以看作肿瘤特异性或相关抗原.本研究目的是制备T淋巴瘤TCRVβ核酸疫苗,诱导机体产生针对恶性增殖的T细胞克隆的免疫反应.从人T淋巴瘤细胞Jurkat中提取总RNA.合成cDNA.根据Jurkat细胞TCRVβ的基因序列设计引物,用PCR扩增TCRVβ的基因片段.PCR产物和表达载体pcDNA3经KpnⅠ和BamHⅠ双酶切后,回收酶切片段,用T_4 DNA连接酶连接.连接产物转化E.Coli DH5a,筛选阳性克隆,提取质粒,进行双酶切鉴定.大量提取双酶 切鉴定为正确的重组载体pcDNA3-TCRVβ,PEC法纯化后测序.用磷酸钙沉淀法将重组载体转染SP2/0细胞,24h后加200μg/ml G418筛选培养,挑取阳性克隆扩     

抗衰老药物对大鼠肝DNA甲基化酶活力的影响

用神方补肾生血药处理Ｗｉｓｔａｒ大鼠，发现有明显的抗衰老作用。用＾３Ｈ－甲基掺入法测定了鼠肝ＤＮＡ甲基化酶活力，发现药物处理可导致ＤＮＡ甲化酶层析行为的改变，比活力增高。说明神方补肾生血药改变了大鼠肝ＤＮＡ甲基化酶的分子结构，从而其比活力，这说明改变ＤＮＡ甲基化酶，从而影响其ＤＮＡ甲基化水平，可能是该药物抗衰老作用的机制之一。     

PAGE法分离CMLC的研究

采用了 PAGE 法,将由人心肌直接提取的粗提纯人心肌肌凝蛋白轻链(CMLC)进一步分离,每一次制备可以从凝胶中获得1—2 mg 电泳纯的 CMLC,量虽少,但具有抗原性,可用于建立临床诊断方法。     

T淋巴瘤TCR V β核酸疫苗的构建和生物学活性的初步检测

制备T淋巴瘤TCR V β核酸疫苗。方法：= 利用RT-PCR方法扩增出人T淋巴瘤细胞Jurkat 的TCR V β基因片段,并将其重组入真核表达载体pcDNA3。用重组表达载体转染SP2/0细胞,在mRNA水平上检测其表达。再用pcDNA3和重组载体分别免疫BALB/c小鼠,收集抗血清,用免疫组化技术检测抗体产生情况。结果： 扩增出TCR V β的基因片段,测序结果证实其序列与已发表的一致。并构建出重组表达载体pcDNA3-TCR V β。该质粒转染到SP2/0细胞,可在mRNA水平上检测到其表达。在用pcDNA3-TCR V β免疫的小鼠抗血清中检测到抗Jurkat细胞TCR V β的抗体。免疫组化结果表明,该血清不与表达TCR γδ的人T淋巴瘤细胞发生反应,而与转染该基因的SP2/0细胞产生强阳性反应。正常小鼠血清与pcDNA3免疫的小鼠血清与Jurkat细胞不产生显色反应。结论：所制备的T淋巴瘤TCR Vβ核酸疫苗能有效地诱导机体产生体液免疫反应。     

中国神方补肾生血药抗衰老分子机理的研究

本文就补肾生血药作用的分子基础作了深入研究。结果表明，补肾生血药能明显提高老龄大鼠ＤＮＡ合成代谢水平，提高骨髓有核细胞内ＤＮＡ、核酸含量，明显提高ＤＮＡ聚合酶活力，该药还能提高鼠肝ＤＮＡ甲基化酶活力及ＤＮＡ甲基化水平     

人心肌肌凝蛋白轻链的分离和鉴定

用一种简便易行的方法提纯了人心肌肌凝蛋白轻链。采用稀释方法先粗提纯肌凝蛋白,并用4M脲使它裂解为轻链和重链两部分,离心后,上清液中的轻链再用等电点法沉淀出来,经SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定,并直接用SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳分离制备了轻链。     

抗衰老药物对大鼠脑DNA甲基化酶的影响

以＾３Ｈ－甲基掺入法测定大鼠脑中ＤＮＡ甲基化酶活性，发现在长期服用神方补肾生血药后，大鼠脑ＤＮＡ甲基化酶比活力增高，酶的热稳定性和对ＮａＣｌ的耐受力略有增强，最适ｐＨ改变。用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检测酶粗提物的蛋白成分，发现给药组电泳笔为有所改变。     

鉴定人心肌肌凝蛋白轻链的指标探讨

供研究用的轻链是由人心肌提取的具有ATP酶活性的肌凝蛋白裂解而来,经SDS—PAGE方法纯化和鉴定,人心肌肌凝蛋白轻链CMLCⅠ,分子量27,000;CMLCⅡ,分子量20,000。本文除采用了一般测量分子量作为鉴定人心肌肌凝蛋白轻链的指标之外,观察到它具有特殊的紫外吸收光谱;在双向免疫扩散中它与免抗人CMLC抗血清形成免疫沉淀线并在酶联免疫实验中有呈色反应。     

参茸补血丸对去势大鼠生殖器官和DNA甲基化水平的影响

目的：为探讨参茸补血丸(SRBX)补肾填精。提高机体生命活力的分子机理，观察SRBXW对去势大鼠生殖器官及肝肾组织DNA甲基化水平的影响。方法：建立摘除双侧卵巢的雌性大鼠模型，观察生殖器官的组织形态，采用^3H-SAM法测定肝、肾组织DNA-甲基化酶活力，HPLC法分析DNA甲基化水平。^3H-UTP掺入检测RNA聚合酶活力。结果：大鼠摘除卵巢后。雌激素分泌障碍，生殖器官萎缩，整体效应明显下降，肝、肾组织甲基化酶活力、甲基化水平升高，处于高甲基化，对应组织RNA聚合酶活力明显降低，处于低表达；雌二醇组大鼠由于补充外源性雌激素，生殖器官组织发育得到了代偿，肝、肾组织甲基化酶活力、甲基化水平趋于降低，RNA聚合酶活力上升；SRBXW大、小剂量组大鼠子宫和阴道组织结构与模型组对比有明显改善，肝肾组织甲基化酶活力、甲基化水平呈规律性低下，呈剂量依赖性，RNA聚合酶活力明显提高。结论：参茸补血丸能促进去势大鼠生殖器官的发育，明显降低肝、肾组织DNA甲基化酶活力，DNA甲基化水平，提高对应组织中RNA聚合酶活力。能使受损机体肝、肾组织低甲基化，高表达以代偿因切除卵巢带来整体效应低下。