杞精明目汤联合人工泪液对结膜松弛症临床疗效及细胞衰老的影响

目的：观察中药杞精明目汤联合人工泪液对结膜松弛症(CCH)的临床疗效及细胞衰老的影响。

方法：收集40例80眼Ⅱ～Ⅳ级肝肾阴虚型CCH患者,随机分为联合治疗组(杞精明目汤联合人工泪液治疗)和人工泪液组(单纯人工泪液治疗),观察国际眼表疾病指数(OSDI)、泪膜破裂时间(BUT)、基础泪液分泌试验(SⅠt),治疗3mo后比较临床治疗效果。对于CCH分级在Ⅲ级及以上,随访3mo及以上并有手术意愿的CCH患者切除松弛结膜组织,冰冻切片行细胞衰老相关的β-gal染色观察,结果行统计学分析。

结果：治疗3mo后联合治疗组的OSDI评分(14.53±2.68分)、BUT(9.25±3.02s)、SⅠt(8.95±3.57mm/5min)均显著优于人工泪液组(P<0.05)。药物治疗后采取手术治疗的CCH患者人工泪液组为7例7眼,联合治疗组为4例4眼,且联合治疗组衰老阳性细胞计数显著低于人工泪液组(16.00±7.84个 vs 39.00±14.09个,P=0.013)。

结论：杞精明目汤联合人工泪液治疗CCH在缓解眼部症状、改善泪膜、促进泪液分泌方面,较单纯人工泪液治疗更为有效。联合治疗还可以减少CCH的细胞衰老,可作为除手术治疗之外安全、有效的治疗方案。     

杞精明目汤含药血清对结膜松弛症MAPK信号通路的影响

目的探讨杞精明目汤含药血清对结膜松弛症(CCh)成纤维细胞表达丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)的影响及其作用机制。方法体外培养结膜松弛症结膜成纤维细胞并鉴定,分为CCh对照组、CCh+20%含药血清组(含药血清组)、CCh+20%无药血清组(无药血清组),予20%的含药或无药血清干预48 h。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测p38MAPK、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、细胞外信号调节激酶(ERK)及其磷酸化水平的光密度值,Western Blot检测p38 MAPK、JNK、ERK蛋白及其磷酸化水平,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测p38 MAPK、JNK、ERK的m RNA表达,并行统计学分析。结果 ELISA结果显示:含药血清组较CCh对照组p38 MAPK、p-p38 MAPK光密度值明显降低(P0.05),而无药血清组与CCh对照组差异无统计学意义(P0.05)。含药血清组较CCh对照组JNK光密度值降低(P0.05),而无药血清组与CCh对照组差异无统计学意义(P0.05);含药血清组、无药血清组较CCh对照组p-JNK光密度值下降(P0.05)。含药血清组较CCh对照组ERK、p-ERK光密度值下降,差异有统计学意义(P0.05);而无药血清组与CCh对照组差异均无统计学意义(P0.05)。Western Blot结果显示:含药血清组、无药血清组较CCh对照组p-p38MAPK蛋白表达量明显下降(P0.05),且20%含药血清的p38 MAPK蛋白磷酸化水平下调更为明显。含药血清组、无药血清组与CCh对照组JNK、p-JNK蛋白表达量差异无统计学意义(P0.05)。含药血清组、无药血清组与CCh对照组ERK蛋白表达量差异无统计学意义(P0.05);含药血清组、无药血清组较CCh对照组p-ERK蛋白表达量均明显降低(P0.05),其中含药血清组的ERK蛋白磷酸化水平下调更为明显。RT-PCR结果显示:无药血清组和含药血清组较CCh对照组p38 MAPK、JNK、ERK的m RNA表达水平均显著下降,差异有统计学意义(P0.05),且20%含药血清组p38 MAPK、JNK、ERK m RNA水平下调更为明显。结论杞精明目汤含药血清可下调结膜松弛症成纤维细胞MAPK信号通路相关蛋白和基因的表达,其对p38 MAPK、ERK蛋白的磷酸化水平和基因表达的抑制,可能是该方疗效机制的关键。     

杞精明目汤颗粒剂对肿瘤坏死因子-α刺激下结膜松弛症成纤维细胞MAPK信号通路的影响

目的　观察肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）刺激下,杞精明目汤颗粒剂对结膜松弛症（conjunctivochalasis,CCH）结膜成纤维细胞表达丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase,MAPK）的影响,探讨CCH的发病机制及有效治疗策略。方法　体外培养CCH结膜成纤维细胞,分为CCH组、CCH+TNF-α组及CCH+TNF-α+杞精明目汤组。CCK-8确定杞精明目汤颗粒剂有效浓度,用含10^-2 mg·L^-1的TNF-α刺激培养的成纤维细胞,加入杞精明目汤颗粒剂干预48 h,分别采用ELISA、Western Blot和RT-PCR检测MAPK信号通路相关蛋白及mRNA的表达,并行统计学分析。结果　CCK-8确定杞精明目汤颗粒剂有效浓度为1.61 g·L^-1。三组MAPK信号通路相关分子细胞外调节蛋白激酶（extracellular regulated protein kinase,ERK）、c-jun氨基末端激酶（c-jun N-terminal kinase,JNK）、p38 MAPK及其磷酸化水平的吸光度（A₄₅₀）值总体差异均有统计学意义（均为P<0.05）,且TNF-α可明显上调CCH表达ERK1/2、JNK1/2、p-JNK1/2、p38 MAPK、p-p38 MAPK（均为P<0.05）,而杞精明目汤可显著下调TNF-α刺激后的CCH成纤维细胞表达ERK1/2、p-ERK1/2、JNK1/2、p38 MAPK、p-p38 MAPK（均为P<0.05）。三组p-ERK1/2、p38 MAPK、p-p38 MAPK蛋白总体差异均有统计学意义（均为P<0.05）,且TNF-α可明显上调CCH成纤维细胞p-ERK1/2、p-JNK1/2、p38 MAPK、p-p38 MAPK蛋白的表达（均为P<0.05）,杞精明目汤可显著下调TNF-α刺激后的CCH成纤维细胞表达p-ERK1/2、p38 MAPK（均为P<0.05）。三组ERK1/2、p38 MAPK mRNA表达总体差异均有统计学意义（均为P<0.05）,且TNF-α可明显上调CCH成纤维细胞ERK1/2、p38 MAPK mRNA的表达（均为P<0.05）,杞精明目汤可显著下调TNF-α刺激后的CCH成纤维细胞p38 MAPK mRNA表达（P<0.05）。结论　TNF-α可上调CCH成纤维细胞MAPK信号通路的表达,导致CCH的发生发展,而杞精明目汤颗粒剂在一定程度上可下调MAPK信号通路的表达从而发挥治疗作用。     

眼部成纤维细胞在眼科疾病中的研究进展

眼部成纤维细胞的增生、变性是诸多眼部疾病的发病机制之一，如结膜松弛症、翼状胬肉、角膜疾病、青光眼滤过术后的瘢痕化、视网膜疾病、基底细胞癌及Graves眼病等。对眼部成纤维细胞进行体外培养、传代及纯化成功后可广泛应用于相关的实验研究。本文就眼部成纤维细胞的生物学特征、体外培养的方法及其在眼科疾病中的研究进展作一综述。     

老年结膜松弛症中医证素分布的相关性研究

目的 研究老年结膜松弛症(CCh)中医证素分布特点及其与眼表之间的关联性，以求进一步诠释CCh的病因病机。方法 纳入2019年2月—2020年1月上海中医药大学附属普陀医院诊断为CCh的60岁及以上患者250例，均以右眼纳入研究。采用CCh流行病学调查表进行临床流行病学调查，利用上海中医药大学自主研发的“便携式中医智能镜”获取CCh中医证素，并行统计学分析。结果 (1)CCh临床分级与眼表疾病指数量表(OSDⅠ)评分的关系：Ⅰ级OSDⅠ评分为(12.15±3.97)分，Ⅱ级为(20.9±3.82)分，Ⅲ级及以上为(27.42±4.35)分，且差异有统计学意义(F=140.42,P=0.000)。(2)CCh临床分级与泪膜破裂时间(BUT)的关系：BUT<10 s的患者分别为Ⅰ级21例(77.8%),Ⅱ级121例(72.9%),Ⅲ级52例(91.2%)，且差异有统计学意义(χ²=8.175,P=0.017)。(3)CCh临床分级与基础泪液分泌试验(SⅠT)的关系：SⅠT<10 mm的患者分别为Ⅰ级20例(74.1%);Ⅱ级98例(59.0%);Ⅲ级48例...     

结膜松弛症中医证型、证素与眼部症状的关联规则分析

目的 探索结膜松弛症（CCh）中医证型-证素-症状之间的关联性。方法 纳入2019年2月—2020年1月上海中医药大学附属普陀医院诊断为CCh的患者250例，均以右眼纳入研究。制作CCh临床流行病学调查表，收集患者一般信息及眼部症状，由2名中医专家现场进行中医证型判定。利用“便携式中医智能镜”收集患者中医证素。将采集到的临床数据录入IBM SPSS Modeler 18.0进行预处理，形成“数据源-类型-Apriori-网络”数据流，再利用统计软件进行关联规则（AR）统计分析。结果 （1）一般情况：常见的中医证型有5个，分别为肝肾阴虚证、肺阴不足证、气阴两虚证、脾虚气弱证、阴虚湿热证。中医证素有5个，分别为气虚、阴虚、气滞、阳虚、痰湿。眼部症状共8个，分别为异物感、畏光、流泪、眼痒、疼痛、干涩、视疲劳、视物模糊。（2）中医证型与证素的AR分析：关联最强的前5位分别是气阴两虚-阴虚、肝肾阴虚-阴虚、气阴两虚-气虚、脾虚气弱-气虚、肝肾阴虚-气虚。（3）中医证型与眼部症状的AR分析：关联最强的前5位分别是脾虚气弱-流泪、肝肾阴虚-流泪、气阴两虚-视物模糊、气阴两虚-异物感、脾虚气弱-异物感...