人白细胞介素12在哺乳动物细胞中的稳定表达及其生物活性的研究

目的采用遗传基因工程方法获得具有生物活性的人白细胞介素12,探索其治疗肿瘤和慢性肝炎的可行性。方法采用已克隆的国人IL-12基因序列,利用内部核糖体切入位点(IRES)完成IL-12P35、P40双亚基共表达载体的构建,通过转染CHODHFR缺陷细胞,双抗夹心ELISA法筛选阳性克隆,MTX加压扩增,PCR检测其基因整合,T淋巴细胞增殖和诱生γ干扰素实验检测其生物活性。结果获得了稳定高效表达人IL-12的工程细胞系,表达产物为70×103左右的糖蛋白。结论本研究得到的基因重组人IL-12具有良好的生物活性,有强的诱导产生γ干扰素的能力和诱导活化T淋巴细胞增殖能力。     

耐热可溶性戊型肝炎病毒基因工程抗原的表达

目的 利用硫氧还蛋白融合表达系统表达戊型肝炎病毒（Hepatitis E virus,HEV)结构基因片段，获得耐热，可溶、具有生物活性的HEV基因工程抗原。方法 将HEVORF26964-7126nt基因片段插入硫氧还蛋白融合表达载体pThioHisA，转化大肠埃希菌BL21，经IPTG诱导，表达融合蛋白。裂解细菌后，离心，取上清置于80℃处理10min，再次离心，取上清用ELISA方法测定表达产物的生物活性。结果 SDS-PAGE分析表明，HEV结构基因获得高效表达，相对分子质量约为20000，耐热，水溶性好，ELISA证实具有HEV特异抗原性。结论 应用硫氧还蛋白融合表达系统成功表达了耐热，可溶，具有生物活性的HEV基因工程抗原。     

我国部分地区人群中水痘-带状疱疹病毒流行率

本文首次报导我国部分城市居民中水痘－带状疱疹病毒（Ｖａｒｉｃｅｌａ－ｚｏｓｔｅｒｖｉｒｕｓ，ＶＺＶ）血清学流行率。标本来自上海、北京、大连、广州和成都市１～４５岁人群，共收集血清３０７６人份。用ＥＬＩＳＡ方法检测。结果显示，我国部分人群中ＶＺＶ抗体阳性率平均为６８７６％，年龄别流行率在１～３岁、４～６岁、７～１３岁和３６～４５岁组，分别为１５９６％、４９９０％、６９９４％和９３１２％。此结果将为我国ＶＺＶ疫苗免疫中免疫对象的选择提供科学依据     

35例庚型肝炎临床及酶学变化观察

目的探讨庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）感染的临床意义。方法应用逆转录－套式聚合酶链反应（ＲＴ－ｎＰＣＲ）检测１６５例肝炎患者血清ＨＧＶＲＮＡ和血清酶的变化。其中急性肝炎２４例，慢性肝炎７８例，肝硬化１８例，肝癌４例，乙、丙肝携带者４１例。结果在急性黄疸型肝炎中检出单纯性ＨＧＶ感染３例（１２５％），血清ＡＬＴ水平在４８８±６５Ｕ／Ｌ之间，ＡＳＴ在４５２±７１Ｕ／Ｌ之间，ＴＢｉＬ在７７１±１４３μｍｏｌ／Ｌ。急性肝炎酶的升高一般在１个月内降到正常，而ＨＧＶＲＮＡ在ＡＬＴ降到正常后仍持续一段时间才转阴，其中１例发病后９个月转阴。慢性肝炎中检出ＨＧＶＲＮＡ阳性１９例（２４４％），其中单纯性ＨＧＶ阳性４例（５１３％）。肝硬化肝癌中ＨＧＶＲＮＡ阳性４例，其中１例肝硬化为单纯性ＨＧＶ阳性。结论在急性黄疸型肝炎、乙型肝炎病毒携带者、慢性肝炎、肝硬化以及肝癌中均可检出庚型肝炎病毒，为单独感染或与乙、丙型肝炎病毒同时或重叠感染，其传播途径与乙、丙型肝炎的传播途径相同。     

一种逆转录－聚合酶链反应产物的快速分子克隆方法及其在丁型肝炎病毒基因组克隆中的应用

一种逆转录－聚合酶链反应产物的快速分子克隆方法及其在丁型肝炎病毒基因组克隆中的应用刘善虑，詹美云（中国预防医学科学院病毒学研究所，北京１０００５２）聚合酶链反应（ＰＣＲ）作为一种高效的ＤＮＡ扩增技术在当今分子生物学研究领域已得到广泛的应用；尤其是在逆...     

庚型肝炎诊断试剂研制

庚型肝炎病毒是1995年底和1996年初由美国两个科研小组先后发现的一种新型肝炎病毒分别称为GBV-C和HGV,经研究证明这两种病毒同属于黄病毒科不同于丙型肝炎病毒的同种病毒不同分离株,故统称为庚型肝炎病毒。我国是肝炎大国,在我国临床型肝炎中有10%～20%的急慢性肝炎病原不明。诊断HGV感染唯一的方法是靠RT-nPCR,检测感染者血清中病毒RNA,这种方法虽然敏感、特异,但对实验条件要求高,需要特殊的仪器设备,难于推广应用。     

抗甲肝病毒人源基因工程全抗体分子在杆状病毒中的表达

目的 探讨人源抗甲型肝炎病毒全抗体分子在杆状病毒中的表达。方法 将获得的人源抗甲肝病毒中和性抗体Fab段基因克隆入含信号肽及Fc的杆状病毒表达载体中并在杆状病毒细胞中表达。结果 获得了中和性人源抗甲肝病毒全抗体分子的表达产物并进行了纯化，轻重链表达产物位置大小正确，HAFc16抗体能与具有中和活性的鼠抗甲肝病毒单克隆抗体产生竞争抑制反应，并能在体外中和甲肝病毒，另一株HAFc78抗体同样具有体外中和甲肝病毒的活性，但系抗不同位点的抗体。结论 获得的人源抗甲肝病毒全抗体分子表达产物具有很好的体外中和甲肝病毒的活性，且为抗不同位点的抗体，为这些抗体的进一步开发及应用打下了基础，为防止甲型肝炎暴发流行提供应急措施。