结核分枝杆菌EsxV亚单位疫苗黏膜免疫诱导的免疫应答

目的 研究结核分枝杆菌抗原Rv3619c(EsxV)黏膜免疫小鼠诱导的免疫应答水平。方法 PCR法扩增esxV基因克隆入原核表达载体pET28a(+),获得的重组E.coli诱导表达目的蛋白,SDS-PAGE电泳和Western Blot鉴定蛋白的表达,亲和层析法纯化EsxV蛋白。以EsxV和/或联合环二腺苷酸(c-di-AMP)经鼻黏膜免疫BALB/c小鼠,ELISA法检测小鼠特异性抗体水平及亚类,MTS法检测脾细胞增殖,qRT-PCR检测脾和肺脏细胞因子表达水平,ELISA法检测脾细胞因子分泌水平。结果 成功构建EsxV的原核表达载体pET28a(+)-esxV并诱导表达目的蛋白,亲和层析法获得了纯化的重组EsxV蛋白。EsxV经黏膜免疫可诱导显著的体液免疫应答,但诱导的细胞免疫应答水平不高。EsxV与c-di-AMP经黏膜接种可诱导特异性IgG水平增加,EsxV蛋白特异的脾细胞增殖,脾和肺细胞的IFN-γ转录增加。c-di-AMP显著提高EsxV特异的IFN-γ、IL-2、IL-10和IL-17细胞因子分泌,而不诱导炎症因子TNF-α和IL-6表达。结论 EsxV与c-di-AMP佐剂构建的亚单位疫苗可诱导特异性体液和细胞免疫应答,可进一步用于新型结核病亚单位疫苗的研制。     

硫化氢对异丙肾上腺素诱导小鼠急性心肌损伤的保护作用及机制研究

目的：观察硫化氢（hydrogen sulfide,H2S）对异丙肾上腺素（isoproterenol,ISO）诱导小鼠急性心肌损伤的保护作用及可能机制。方法：12周龄C57BL/6小鼠,腹腔注射H2S供体硫氢化钠（NaHS）10 μmol/（kg·d）2周,然后再联合给予大剂量ISO［150 mg/（kg·d）］皮下注射2 d,观察心肌组织病理结构,检测血浆肌酸激酶（creatine kinase,CK）、乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）活性,评估心肌组织活性氧、丙二醛（malondialdehyde,MDA）、总抗氧化能力（total antioxidant capacity,T?AOC）及超氧化物岐化酶（superoxide dismutase,SOD）活性与表达。结果：NaHS预处理改善大剂量ISO诱导的小鼠心肌组织病理结构紊乱,降低血浆CK和LDH活性,降低心肌活性氧和MDA水平,提高心肌T?AOC,增强心肌SOD活性和表达。结论：H2S减轻ISO诱导小鼠急性心肌损伤,机制可能与提高SOD表达与活力、减轻氧化应激有关。     

1-磷酸鞘氨醇受体2介导PI3K/AKT/eNOS通路抑制甲型流感病毒诱导的病毒性肺炎

目的:探讨1-磷酸鞘氨醇受体2(S1PR2)对甲型流感病毒诱导的病毒性肺炎的作用及机制。方法:采用甲型流感病毒鼠肺适应株FM1滴鼻感染野生C57BL/6小鼠和S1pr2~(-/-)小鼠,建立甲型流感病毒性肺炎动物模型。病毒感染4和6 d时观察比较对照组(模型组的野生小鼠)、JTE-013(S1PR2高效拮抗剂)处理的小鼠及S1pr2~(-/-)小鼠肺组织的病理改变,检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中的蛋白浓度、细胞总数及细胞因子[白细胞介素(IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子α(TNF-α)]的表达,Western blot法检测小鼠肺组织的AKT和e NOS的磷酸化水平。结果:与模型对照组的野生鼠比较,JTE处理组和S1pr2~(-/-)组甲型流感病毒性肺炎更加严重;BALF中的蛋白浓度,总细胞数及炎性细胞因子表达显著增加;且PI3K下游靶点AKT和e NOS磷酸化显著增高(P0.01)。结论:S1PR2通过介导PI3K/AKT/e NOS信号转导通路,调节NO生成,抑制血管通透性和炎性细胞因子释放,从而减轻甲型流感病毒诱导的病毒性肺炎。     

FTY-720通过TGF-β1/P38 MAPK/NF-κB信号通路对小鼠肺纤维化模型的影响

目的探讨FTY-720对博来霉素诱导的小鼠肺纤维化的影响及其作用机制。方法将40只无特定病原体级健康雄性Balb/c小鼠随机分为对照组、博来霉素组、生理盐水+FTY-720对照组、博来霉素+FTY-720组,每组各5只,在7天、14天处死小鼠,共8组。应用HE染色和Masson染色观察肺组织炎症及肺纤维化情况;通过瑞士-吉姆萨染色计数支气管肺泡灌洗液细胞;BCA法测定BALF蛋白含量;ELISA方法检测BALF上清液中炎症因子IL-1β、TNF-α的表达水平;免疫组织化学法检测肺组织中COL1A1的表达水平;Western blot方法检测TGF-β1、p-P38 MAPK和NF-κB表达水平的变化。结果FTY-720显著降低BLM诱导增加的小鼠肺组织细胞外胶原沉积;减少小鼠肺组织BALF中IL-1β和TNF-α表达水平,和蛋白质含量、细胞数;FTY-720抑制TGF-β1活性与P38 MAPK的磷酸化,进而抑制NF-κB的表达与活化。结论FTY-720通过抑制TGF-β1/P38 MAPK/NF-κB信号通路,进而抑制博来霉素诱导小鼠的肺纤维化。     

FTY-720 通过S1P1 受体调节哮喘小鼠气道炎症

目的:探究S1P1对哮喘小鼠气道炎症的影响,并研究FTY-720的作用机制是否与S1P1/WNT1/RAC1/P38-MAPK信号通路有关。方法:30只雄性BALB/c小鼠随机分为3组,OVA建立小鼠哮喘模型,24 h后检测小鼠病理组织学变化;小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中嗜酸性粒细胞数量,中性粒细胞数量、淋巴细胞数及细胞炎症因子水平;检测小鼠血清中IgE含量;Western blot检测小鼠肺组织S1P1、WNT1/RAC1/P38-MAPK等蛋白表达。结果:FTY-720可显著降低哮喘小鼠肺内炎症因子IL-1、IL-4、IL-5及血清中IgE水平,降低WNT1/RAC1/P38-MAPK等蛋白含量,抑制哮喘。结论:S1P1可参与哮喘发生并通过WNT1/RAC1/P38-MAPK通路改善哮喘小鼠气道炎症。     

再生障碍性贫血、骨髓增生异常综合征、急性髓系白血病患者CD8＋T细胞亚群的变化及临床意义

摘要本研究检测再生障碍性贫血（AA）、骨髓增生异常综合征（MDS）和急性髓系白血病（AML）患者细胞毒T细胞亚群平衡及其活性的改变，探讨三种疾病造血异常的细胞免疫机制，为临床治疗选择提供实验室依据。采用流式细胞术检测AA组17例、MDS组35例（其中RA19例，RAEB16例）、AML组15例和正常对照组10例的细胞毒性T细胞（Tc1、Tc2）以及部分T细胞亚群比例并进行对比分析。结果表明：与正常对照组相比，AA组、MDS-RA组Tc1、Tc1／Tc2、CD8＋HLA-DR＋、CD3＋CD8＋CD28＋、CD8＋CIM5RO＋显著升高，Tc2无明显统计学差异，CD8＋CD45RA＋显著减低；MDS-RAEB组Tc1、CD3＋CD8＋CD28＋、CD8＋HLA．DR＋比例显著减低，Tc、Tc1／Tc2无明显变化，CD8＋CD45RA＋减低但差异不明显，CD8＋CD45RO＋显著升高；AML组Tcl、CD3＋CD8＋CD28＋、CD8＋CD45RA＋、CD8＋CD45RO＋、CD8＋HLA。DR＋，Tc1／Tc2显著减低，Tc2显著上升。结论：AA、MDS不同阶段、AML患者的细胞免疫状态不同，在AA和MDS早期阶段，Tc1／Tc2的平衡向Tcl偏移，且伴有T细胞亚群活性增加；而在MDS晚期和AML阶段，则向Tc2偏移，T细胞亚群活性减低。前者可能与骨髓造血衰竭密切相关，而后者可能是恶性克隆免疫挑挽的重要机制之一．     

FK506作为佐剂刺激Tfh细胞增强体液免疫水平的研究

目的:探讨他克莫司(FK506)作为佐剂通过刺激Tfh细胞增强疫苗体液免疫水平的机制。方法:利用FK506与模式蛋白(卵清白蛋白,OVA)皮下注射免疫BALB/c小鼠,免疫三次,利用ELISA方法检测抗体水平;利用抗体染色流式细胞仪检测Tfh细胞、B细胞表面分子IL-21R及记忆性B细胞标志分子CD27表达。结果:FK506作为OVA蛋白佐剂,能够显著提高小鼠OVA特异性的IgG水平,增强体液免疫水平;免疫后的小鼠Tfh细胞表达IL-21水平显著高于其他对照组。同时,B细胞表达IL-21R及记忆性B细胞标志分子CD27显著高于其他对照组。表明FK506作为佐剂刺激Tfh细胞表达IL-21,作用于B细胞增强抗体水平。结论:FK506能够作为蛋白疫苗佐剂刺激Tfh细胞表达IL-21;IL-21可能通过与B细胞表面IL-21R作用,增强抗体的分泌;并刺激记忆性B细胞的产生,进而增强体液免疫水平。     

再生障碍性贫血、骨髓增生异常综合征和急性髓系白血病患者CD4＋T细胞亚群转录因子表达的变化及其临床意义

本研究通过检测CD4＋T细胞亚群特异性转录因子的mRNA（T-bet、GA TA-3、Foxp3、RORγt）在再生障碍性贫血（AA）、骨髓增生异常综合征（MDS）和急性髓系白血病（AML）患者外周血中的表达变化,探讨3种疾病的细胞免疫状态及其作用机制.采用实时荧光定量方法检测AA组23例、MDS组42例、AML组17例和正常组16例外周血单个核细胞（PBMNC）中转录因子的T-bet、GA TA-3、Foxp3、RORγt mRNA表达并进行对比分析.结果显示：与正常组比较,AA组患者T-bet、RORγt mRNA的表达均显著增高（P＜0.01）,GATA-3、Foxp3表达减低（P＜0.01）.MDS组T-bet、GATA-3 mRNA表达无显著性变化,而Foxp3、RORγt表达均显著增高（P＜0.05）;MDS-RA组T-bet、RORγt表达均较正常组升高（P＜0.01）,GA TA-3表达显著性减低（P＜0.05）,Foxp3较正常组无显著性差异;MDS-RAEB和AML组T-bet、RORγt表达均低于正常对照（P＜0.05）,而GA TA-3、Foxp3mRNA表达均高于正常对照组（P＜0.01）.结论：AA、MDS不同阶段以及AML患者外周血中CD4＋T细胞转录因子表达水平不同,提示细胞免疫状态有差异,在AA和MDS早期阶段,异常免疫介导的造血细胞过度凋亡在骨髓衰竭中可能起重要作用,而在MDS晚期阶段和在AML时,恶性克隆的大量积聚可能是其主要原因.     

AA、MDS和AML患者CD4~+T细胞亚群的变化及其临床意义

目的探讨CD4+T细胞亚群(Th1、Th2、Th17及Treg细胞)在再生障碍性贫血(AA)、骨髓增生异常综合征(MDS)、急性髓系白血病(AML)患者免疫发病机制中的作用,为临床治疗提供实验依据。方法采用流式细胞术检测AA组25例,MDS组48例[其中难治性贫血(MDS-RA)22例,难治性贫血伴原始细胞增多(MDS-RAEB)26例],AML组12例和正常对照组8例的外周血单个核细胞Th1、Th2、Th17及Treg细胞比例并对比分析,评价各组的细胞免疫状态。结果与正常对照组相比,AA组Th1、Th17细胞及Th1/Th2升高,而Th2和Treg细胞比例减低(P<0.05);MDS组Th1、Th2细胞、Th1/Th2与正常对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05),而Th17和Treg细胞比例升高(P<0.05);MDS-RA组Th1、Th17细胞比例和Th1/Th2均升高(P<0.05),Th2细胞比例减低(P<0.05),而Treg细胞比例差异无统计学意义(P>0.05);MDS-RAEB组和AML组Th1、Th17细胞比例和Th1/Th2减低(P<0.05),Th2和Treg细胞比例升高(P<0.05)。结论 AA、MDS不同阶段与AML患者的细胞免疫状态不同,在AA和MDS早期阶段,免疫因素介导的凋亡过度是骨髓衰竭的主要原因;而在MDS晚期和AML阶段,异常克隆细胞的大量积聚可能是其主要原因。     

二甲双胍对2型糖尿病患者血清25-（OH）D3水平及心律失常发生率的影响

目的 分析二甲双胍对血清25-羟基维生素D₃［25-（OH）D₃］水平及糖尿病（DM）相关心律失常发生率的影响。方法 选取2019年7月—2020年6月就诊于北京大学人民医院的160例2型糖尿病（T2DM）患者，分为对照组、研究组，每组80例。两组分别接受利拉鲁肽、二甲双胍治疗。比较两组疗效、DM相关心律失常发生率，并观察治疗前、治疗24周后血清25-（OH）D₃、血糖［空腹血糖（FPG）、糖化血红蛋白（HbAlc）］、超敏C反应蛋白（hs-CRP）、血脂［总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）］及左心室结构指标［左心房前后径（LAD）、左心室舒张末期内径（LVEDd）、左心室收缩末期内径（LVESd）、左心室射血分数（LVEF）］变化。结果 研究组总有效率较对照组高。两组治疗前FPG、HbAlc、25-（OH）D₃、hs-CRP水平比较，差异无统计学意义（P >0.05）。研究组治疗24周后FPG、HbAlc、hs-CRP较对照组低，25-（OH）D₃较对照组高（P <0.05）。两组治疗24周后PG、HbAlc、hs-CRP较治疗前低，25-（OH）D₃较治疗前高（P <0.05）。两组治疗前TC、TG、LDL-C水平比较，差异无统计学意义（P >0.05）。研究组治疗24周后TC、TG、LDL-C水平较对照组低（P <0.05）。两组治疗24周后TC、TG、LDL-C水平较治疗前低（P <0.05）。两组治疗前LAD、LVEDd、LVEF比较，差异无统计学意义（P >0.05）。研究组治疗24周后LAD、LVEDd、LVEFLAD、LVEDd较对照组低，LVEF较对照组高（P <0.05）。研究组治疗24周后LAD、LVEDd、LVESd较治疗前低，LVEF较治疗前高（P <0.05）。研究组心律失常发生率较对照组低（P <0.05）。结论 二甲双胍可提升T2DM患者血清25-（OH）D₃水平，调节血糖和血脂代谢，改善心室重构，预防心律失常。