电针对拟老年性痴呆大鼠学习记忆和海马神经元突触形态可塑性的影响研究

目的探讨电针对拟老年性痴呆大鼠学习记忆功能和海马CA1区突触可塑性的影响。方法采用腹腔注射D-半乳糖、东莨菪碱,胃饲三氯化铝（AlCl3）制备多因素损伤拟老年性痴呆动物模型,在造模同时给予电针干预,穴位选择为百会、大椎、肾俞、足三里。应用跳台实验检测大鼠学习和记忆能力,透射电镜测定突触面数密度、面积密度和体积密度变化。结果跳台实验（潜伏期、错误次数）提示,与空白对照组比较,模型组大鼠出现明显的学习记忆功能障碍,潜伏期缩短,错误次数增加（P〈0．01）。与模型组比较,电针治疗能够改善大鼠的学习和记忆功能,延长潜伏期和减少错误次数（P〈0．05,P〈0．01）。与空白组比较,模型组大鼠海马CA1区突触面数密度、面积密度和体积密度均减小（P〈0．05）;模型电针组大鼠海马CA1区突触面数密度、面积密度和体积密度均有所增大（P〈0．05）。结论电针可以改善拟AD鼠的学习记忆功能,机制可能为电针促进突触可塑性发挥的作用。     

海马内微注射NGF对小鼠学习记忆的影响

本实验观察了海马内多次注射神经生长因子（NGF）对小鼠学习记忆的影响，包括剂量－效应关系和时间－效应夫系以及3H－Leu掺入突触体蛋白质的示踪研究。结果表明：（l）与注射人工脑脊液（ACSF）的对照组相比，在五种剂量（0．01,0．05，0．l，0．5，1．0pg／pl，双侧海马内注射，每次1．0pl，共注射4次，累积剂量为0．04，0．2，0．4，2．0，4．0pg）中除0．01pg／外，其他4种剂量的NGF均能显著或极显著地提高小鼠Y一迷宫分辨学习的24h记忆保持率，其中0．05pg／pl剂量的效果最佳；（2）最佳剂量的NGF易化记忆的效应在训练后24h最好，96h出现明显的减退（P＜0.05）；（3）最佳剂量的NGF能使行为训练后小鼠脑突触体蛋白质的3H－Leu掺入量增加。以上结果说明，适当剂量的NGF在一定的时间内具有增强记忆的功效，并能促进脑内突触体蛋白质的合成。     

小鼠记忆保持能力与海马CA3区突触界面结构的相关性

本实验对记忆保持（ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ）良好组和低劣组小鼠海马ＣＡ３区ＧｒａｙＩ型突触界面结构进行了定量观察分析，结果表明，记忆保持良好海马ＣＡ３区突触后膜致密物质（ｐｏｓｔ－ｓｙｎａｐｔｉｃｄｅｎｓｉｔｙ，ＰＳＤ）极显著地密于记忆保持低劣组（Ｐ〈０．０１），同时，记忆良好的出现了穿孔性突触（ｐｅｒｆｏｒａｔｅｄｓｙｎａｐｓｅ）而记忆低劣组没有出现，此外，还测量了突触界面曲率，突触活性区长度和突触间     

双氢麦角碱对血管性痴呆小鼠海马乙酰胆碱酯酶活性变化的影响

目的探讨双氢麦角碱对血管性痴呆（VD）小鼠海马组织乙酰胆碱酯酶（AchE）活性变化的影响。方法将75只小鼠随机分为假手术纽、模型组和药物纽。药物组和模型组采用双侧颈总动脉反复缺血再灌注法制备VD模型，术后第29天和第30天测试学习记忆成绩，术后第30天检测海马AchE含量，并研究双氢麦角碱对二者的影响。结果（1）模型组小鼠学习记忆成绩较假手术组明显下降（P〈0．01），治疗组小鼠学习记忆成绩明显优于模型组小鼠（P〈0．01）；（2）模型组小鼠海马AchE活性较假手术组明显降低（P〈0．01），治疗组小鼠海马AchE活性显著高于模型组小鼠（P〈0．05）。结论双氢麦角碱能改善VD小鼠的学习记忆功能，提高海马组织内的AchE活性。     

血管性痴呆小鼠海马细胞外信号调节激酶免疫组化表达及其意义

目的探讨血管性痴呆小鼠海马CA1区锥体细胞细胞外信号调节激酶1（extracellular signal—regulated kinase 1，ERKI）的免疫组化表达及其意义。方法采用双侧颈总动脉线结反复缺血-再灌注法制备血管性痴呆（VaD）小鼠模型，共设健康对照组、假手术组及VaD模型组，利用跳台试验和水迷宫试验观测其行为学改变，应用免疫组化技术观测其海马CA1区锥体细胞ERK1的表达变化，对小鼠学习成绩和记忆成绩与ERK1免疫反应阳性锥体细胞免疫组化评分进行相关性分析。结果VaD模型组小鼠学习、记忆成绩低于健康对照组和假手术组（P〈0．05）。VaD模型组小鼠ERK1免疫反应阳性锥体细胞免疫组化评分（13．38±3．32）较健康对照组（21．21±9．15）和假手术组（21．00±7．21）明显减少（P〈0．01），而且各组小鼠海马ERK1免疫反应阳性锥体细胞免疫组化评分与小鼠学习、记忆的各项参数存在相关关系。结论VaD小鼠海马CA1区锥体细胞ERK1表达减少可能是VaD小鼠学习、记忆成绩下降的分子机制之一。     

睡眠剥夺大鼠大脑皮层和海马nNOS表达的改变在其学习记忆损伤中的作用

目的观察睡眠剥夺（SD）后,大鼠学习记忆能力及大脑皮层和海马神经元型一氧化氮合酶（nNOS）蛋白表达的变化。方法采用小平台水环境法建立大鼠SD模型。观察大鼠经过不同时间SD后,各组“Y”迷宫成绩及大脑皮层和海马nNOS阳性神经元的变化情况。结果（1）“Y”迷宫实验：3组SD组的迷宫成绩较正常笼养对照组（CC）分别下降了24．3％、17．6％和41．9％（P〈0．01）。（2）nNOS阳性神经元数目：在皮层,SDld组较CC组增加了8．7％（P〈0．01）,SD2d组和SD3d组较CC组则减少了9．0％和16．0％（P〈0．01）;在海马CA。区,3个SD组较CC组分别减少了9．4％、16．0％和22．0％（P〈0．01）。结论SD可能通过改变大鼠大脑皮层和海马CA．区nNOS蛋白的表达来损害大鼠学习记忆能力。     

阿尔茨海默病大鼠模型海马MAPK的表达

目的探讨丝裂酶原激活蛋白激酶（mitogen activated protein kinase，MAPK）在阿尔茨海默病（Alzheimer’s diease，AD）发病中的变化及其可能机制。方法将β-淀粉样肽（beta—amyloid peptide，Aβ）1-40 1μl（10μg/μl）在立体定位仪下注人大鼠海马建立大鼠AD模型，2周后测水迷宫潜伏期、长时程增强（long term potentiation，LTP）、免疫组化SABC法检测MAPK的蛋白表达，并应用显微图像分析系统对二者的表达进行分析。结果AD模型组AB注射2周后，水迷宫潜伏期与模型组术前及对照组相比显著延长（P〈0．05）；模型组刺激前后fEPSP斜率变化及高频刺激增加的幅值与对照组相比显著下降（P〈0．01）；模型组海马CA，区、CA，区MAPK蛋白的表达显著降低（P〈0．05或P〈0．01）。结论AB可能通过抑制MAPK信号通路，导致大鼠海马LTP降低和学习记忆功能减退，参与AD学习记忆障碍和痴呆形成。     

亚低温对大鼠短暂全脑缺血后神经元凋亡的影响

目的 探讨亚低温对大鼠脑缺血后神经元凋亡的影响，揭示亚低温的部分神经保护机制。方法 采用“双侧颈总动脉阻断＋全身低血压”方法来建立大鼠短暂性全脑缺血模型。用神经元尼氏体亚甲兰特殊染色法观察大鼠脑缺血后海马CA1区神经元损害情况；原位细胞凋亡检测法（TUNEL染色）及电镜观察脑缺血后CA1区神经元凋亡情况。结果 与假手术组、低温缺血组相比，常温缺血组海马CA1区神经元缺失明显（P＜0．01）。常温及低温缺血组海马CA1区均存在神经元凋亡，但低温缺血组海马CA1区凋亡神经元数明显少于缺血组（P＜0．01）。结论 经“双侧颈总动脉阻断＋全身低血压”方法建立的大鼠短暂全脑缺血模型证实了亚低温的脑保护作用。全脑缺血后的迟发性神经元死亡很可能经由凋亡途径，而亚低温可通过抑制缺血性神经元凋亡而发挥一定的神经保护作用。     

阿尔茨海默病脑海马神经元发生率增高

通过对阿尔茨海默病（Alzheimer's disease,AD)和老年对照患者死后脑海马凋亡神经元的检测，探讨AD脑神经元丢失的可能机制。使用TUNEL（terminal transferase-mediated dUTP-biotin nick end labeling)法对7例确诊的AD和9例老年对照患者死后海马组织中的凋亡神经元进行标记，用生物图像分析系统对结果进行定量分析。AD和对照组间TUNEL阳性细胞数无显著性差异；AD组海组CA1和CA4区正常神经元减少，其中CA1区减少具有显著性差异（P＜0．05）；AD组海马CA1和CA4区凋亡神经发生率高于对照组，其中CA1区具有显著性差异（P＜0．05）。AD组海马组织中凋亡神经元发生率明显增高，说明细胞凋亡可能参与了AD海马神经元退行性变的过程。     

缺血预处理后海马CA1区反应性星形胶质细胞增生与迟发性神经元缺血耐受性的关系

目的 探讨缺血预处理后海马CA1区反应性星形胶质细胞增生与迟发性神经元缺血耐受性的关系。方法 实验动物被随机分为手术组、缺血组、预缺血组、预缺血后再缺血组。阴断沙土鼠双侧颈总动脉造成前脑缺血模型。采用细胞特异性抗原胶质纤维酸性蛋白（GFAP）免疫组化法标记星形胶质细胞。结果 预缺血后1－7天,海马CA1区GFAP阳性的星形胶质细胞数轻度增加,至28天时增生非常显著（P＜0．01）。预缺血后1－7天再缺血,海马CA1区存活正常神经元数逐渐下降,预缺血后28天再缺血又显著增加（P＜0．01）。结论 缺血预处理后,神经元可出现迟发性缺血耐受,反应性星形胶质细胞增生可能起了重要作用。     

大鼠海马生后早期突触定量研究

为研究大鼠海马ＣＡ１ 区生后发育早期突触的变化,对发育过程中突触的可塑性进行分析,采用连续电镜切片观察与体视学技术——Ｄｉｓｅｃｔｏｒ法测量突触总体、穿孔突触及非穿孔突触的数密度并计算穿孔突触的比例。结果显示生后０～３０ ｄ 大鼠海马ＣＡ１ 区中,上述测量项目均随年龄增长而增长,提示在海马ＣＡ１ 区存在生后突触发育阶段     

颞叶癫痫大鼠海马CA1区突触可塑性与空间记忆能力关系的研究

目的探讨颞叶癫痫大鼠海马CA1区突触超微结构与空间记忆能力改变的关系。方法以海人酸杏仁核微量注射建立经典的雄性Wistar大鼠颞叶癫痫化学点燃模型,分别于点燃后11d、17d、21d测定大鼠的空间记忆能力,并观察第21d海马CA1区神经毡突触超微结构变化。结果颞叶癫痫大鼠空间记忆能力减低,同时伴有海马CA1区神经毡内突触数密度降低(P<0．05),突触活性区膜面积缩小(P<0．05),突触界面曲率降低(P< 0．05),比表面减小(P<0．05),突触小泡数密度降低(P<0．05)。结论颞叶癫痫大鼠海马CA1区神经毡内突触损害和活力可能是导致其空间记忆能力下降的重要机制。     

尼莫地平对癫痫大鼠学习记忆及海马超微结构的影响

目的探讨尼莫地平(nimodipin,NIM)对戊四氮(pentylenetetrazol,PTZ)点燃癫痫大鼠学习记忆能力及海马CA3区超微结构的影响。方法动物分为正常对照组、PTZ组和NIM PTZ组,采用PTZ慢性点燃癫痫模型,应用Morris水迷宫观察各组大鼠空间学习记忆能力,电镜观察海马CA3区突触界面结构,并对突触活性参数量化分析。结果PTZ点燃癫痫大鼠存在学习记忆能力下降,其海马CA3区突触后致密物显著变薄、突触小泡显著减少、突触间隙显著增宽(P<0.05);尼莫地平能改善癫痫大鼠学习记忆障碍,与PTZ组比较,突触后致密物增厚、突触小泡增多、突触间隙变窄(P<0.05)。结论PTZ点燃癫痫大鼠存在空间学习记忆受损,可能与突触界面参数改变有关;NIM可以改善癫痫大鼠突触超微结构,提高学习记忆能力。     

电压门控性钠通道mRNA在海人酸致痫大鼠表达的研究

目的:探讨电压门控性钠通道在癫痫发病机制中的作用。方法:采用海人酸颞叶癫痫模型,运用原位杂交技术检测不同时点海马DG区、CA1区、CA2区和CA3区SCN2A、SCN3A mRNA的表达。结果:SCN2A和SCN3AmRNA均表达于海马的DG区、CA1、CA2、CA3区。海人酸致痫后3小时在海马各区表达开始增强,6小时明显增强(P<0.05),12小时达到高峰(P<0.01),24小时开始下降,48小时恢复至正常水平。结论:电压门控性钠通道SCN2AmRNA和SCN3A mRNA的表达增加可能参与了颞叶癫痫急性期的发病。     

PTZ致痫大鼠海马区神经元损伤的研究

目的:为了解癫痫(Epilepsg,EP)发生后大脑海马区的损害情况,本文采用戊四氮诱导建立大鼠癫痫模型, 采用酶标免疫吸附法(EIA)和免疫组化染色法检测NSE的改变,使用电子显微镜研究超微结构的改变,探讨EP后脑组织的损坏情况。方法:雄性SD大鼠54只,随机分为对照组(A=13)及实验组(41只)。实验组腹腔注射(IP)PTZ 50mg/ kg体重1次,对照组IP生理盐水。根据EP发作分级,0-1级7只,视为B组,立即取脑:2级以上发作34只,随机抽样于EP发作后0h(C=10);6h(D=14);24h(E=10)断头。取脑前抽取躯干血,分离海马。A、D组随机抽取3只进行电镜观察。采用EIA法测试血清和海马NSE-值;以S-P免疫组化染色法染色,观察各组大鼠海马的NSE表达。结果:实验组海马和血清的NSE均明显高于对照组:即使无EP大发作,但有兴奋症状的大鼠,NSE亦高于对照组,表明也有脑组织损害。免疫组化染色显示:对照组海马组织几乎未见NSE的表达,即大发作后海马的NSE表达明显增加,但随时间推移而降低。电镜观察发现EP后大鼠海马CA1区的神经元细胞出现水肿、基质密度变淡、微丝溶解消失、细胞器减少、毛细血管周围间隙扩大等明显改变。结论:EP发作对大鼠海马区神经细胞造成了明显的损害。     

Ultrastructural alterations in hippocampal mossy fiber synapses in schizophrenia: a postmortem morphometric study

Synapses formed between mossy fibers, the axons of hippocampal dentate granular cells, and the dendrites of CA3 pyramidal neurons are important links within the trisynaptic circuitry. Abnormalities in this circuitry are associated with the failure of schizophrenics to integrate affective experience with higher cognitive function, and with disturbances in memory and spatial learning processes. The abnormalities include reduced size and altered dendritic arborization of CA3 pyramidal neurons. In addition, decreased expression and binding activity of glutamate receptors have been reported, predominantly in the CA3 region of the hippocampus. These findings suggest that there are disturbed neuronal processes and connections in the hippocampus of schizophrenics. An electron microscope morphometric study of synaptic contacts between mossy fiber axon terminals (MFT) and branched dendritic spines of pyramidal neurons in stratum lucidum of the CA3 region of the hippocampus was performed in 10 normal controls and 9 age-matched chronic schizophrenics (postmortem delay 3-9 h). Schizophrenic cases with predominantly positive symptoms had a significantly reduced volume fraction of spines (-35%, P < 0.05), total number of invaginated spines (-47%, P < 0.01), and number of spines forming synapses (-32%, P < 0.05) per MFT compared with the control group. No effects of postmortem delay, age, duration of disease, or neuroleptic exposure were found. These data may reflect decreased efficacy of mossy fiber synapses in the CA3 hippocampal region in schizophrenics with predominantly positive symptoms. These data are in line with the neurodevelopmental hypothesis of schizophrenia.     

纳洛酮与舒必利对大鼠脑震荡后空间学习记忆及海马CA3区锥体细胞影响的对照研究

目的 研究比较纳洛酮和舒必利对大鼠脑震荡后空间学习记忆能力及海马CA3区锥体细胞影响的异同,并对可能发生的机制进行探讨.方法 用金属单摆打击装置制作SD大鼠脑震荡模型,将32只大鼠随机分为4组:假打击组(6只)、脑震荡组(8只)、脑震荡+纳洛酮治疗组(以下简称纳洛酮治疗组,9只)、脑震荡+舒必利治疗组(以下简称舒必利治疗组,9只).用Morris水迷宫训练方法 ,评价动物的空间学习记忆能力;用Nissl染色对海马CA3区锥体细胞计数;用激光共聚焦显微镜和钙荧光探针flou-3/AM技术,观察海马CA3区锥体细胞内钙离子荧光量值.结果 (1)行为学:打击后第8～13天脑震荡组隐匿平台逃避潜伏期长于假打击组、纳洛酮治疗组、舒必利治疗组(P＜0.01);穿越原平台位置的次数[(2.0±0.8)次/min]少于假打击组[(5.1±0.6)7欠/min]、纳洛酮治疗组[(4.8±1.0)次/min]、舒必利治疗组[(4.6±1.0)次/min],均P＜0.01.(2)海马CA3区锥体细胞计数:假打击组[(62.7±3.4)个]高于脑震荡组[(49.8±1.7)个]、纳洛酮治疗组[(57.3±1.5)个]和舒必利治疗组[(54.8±1.7)个],均P＜0.01;而纳洛酮和舒必利治疗组高于脑震荡组(P＜0.01);纳洛酮治疗组又高于舒必利治疗组(P＜0.01).(3)海马CA3区锥体细胞内游离钙荧光量:脑震荡组[(3.0±0.6)×106]高于假打击组[(1.0±0.3)×106]、纳洛酮治疗组[(0.9±0.4)×106]和舒必利治疗组[(1.1±0.3)×106],均P＜0.01.结论 大鼠脑震荡后学习记忆缺失与海马CA3区锥体细胞数减少有关;纳洛酮和舒必利对这种损害均有保护作用.     

单侧液压脑损伤对大鼠双侧海马GFAP表达和CA1区突触传递的影响

目的研究单侧液压脑损伤(FPI)对大鼠双侧海马区胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达和CA1区突触传递的影响。方法建立大鼠单侧液压脑损伤模型,脑标本分为对照组(包括正常对照和假手术对照)、FPI损伤同侧组和FPI损伤对侧组。免疫组化法检测海马水平切片GFAP表达,对海马CA1区锥体神经元进行细胞内记录。结果FPI大鼠双侧海马齿状回门区和CA1区GFAP表达均比对照组明显增强。FPI损伤同侧组兴奋性输入-输出关系曲线的斜率比其他两组显著增大(P<0.05);FPI损伤同侧组和对侧组双脉冲易化(PPF)比值和抑制性突触后电位(IPSP)幅值均比对照组显著减小(P<0.05);FPI损伤同侧组和对侧组双脉冲抑制(PPD)比值均比对照组显著增大(P<0.05)。结论大鼠单侧液压脑损伤对双侧海马均可产生影响,导致双侧海马CA1区兴奋性突触传递增强,抑制性突触传递减弱。     

Electronmicroscopical and morphometrical study of rat hippocampal synapses]

The neuronal structure and synaptology of the hippocampus of the rat are studied using neurohistological, electron microscopical and morphometrical methods. After Golgi-impregnations the neurons of the hippocampus were classified by reason of special morphological features (pericaryon, dendritic, ramification, course and termination of the axons). The neurons of the hippocampus show from the region CA4 towards the region CA1 an increasing "pyramidalization" which is explained respecting the neuronal structure and synaptic architectonics as the result of a specific presynaptic representation of afferents at the neurons. The high degree of differentiation of the CA1-pyramids speaks for the progressive developmental tendency in the phylogenesis of these pyramids compared to the neocortical neurons. The ultrastructural investigations of the hippocampus show that each individual layer of the regions CA1, CA3 and CA4 has a characteristic synaptic architectonics. In all hippocampal layers the axo-spino-dendritic contacts are the most frequent type of synapses with the structural characteristics of the excitatory synapses; the synaptic contact appears as "Bouton en passage" respectively as "Bouton terminal". The axosomatic synapses of the stratum pyramidale (CA1 to CA3) predominantly are developed as symmetrical contacts with inhibitory function. As the terminals of the basket cells they represent the morphological correlate for the recurrent inhibitation of the pyramids by the inhibitory effecting basket cells. In the supra- and infrapyramidal layers of the regions CA3 and CA4 special contacts are developed for the connection withe the mossy fiber terminals--at the pericarya and the main dendrites as so-called somatic and dendritic protrusions and as micro-dendrites. As has been established for the neocortex, the dendritic spines are the decisive receptive postsynaptic structural characteristic of the hippocampus as well. Pre- and postsynaptic elements show a broad scope of variation in forming their structures. This also applies to the intrahippocampal systems with their highly complex structure which is the morphological expression of an extremely high degree of differentiation. The morphometrical investigations of the ultrastructure of synapses enclose the calculation of the number of synapses per mm3 of the volume of layers, the average individual volume of synapses, the presynaptic portion of volume of the relative volume of cortex of the hippocampal layers as well as the average number and size of the synaptic vesicles. The average number of synapses per mm3 brain tissue runs in CA1 to 5,9 X 10(9), in CA3 to 7,9 X 10(9) andin CA4 to 8,7 X 10(9) synapses per mm3. The average individual volume of synapses amounts to 0,2-0,3 mm3 whereas the average portion of volume of the presynaptic structures per relative cortical volume comes to 14% in CA1, 16-19% in CA3 and 15% in CA4.