亚低温对蛛网膜下腔出血后迟发血管痉挛时大鼠脑内大血管的保护作用

目的 建立稳定可靠的SAH动物模型后,根据大鼠脑底大血管的病理改变,研究亚低温对于蛛网膜下腔出血后迟发血管痉挛时脑内大血管的保护作用.方法 (1)选择成年SD大鼠作为模型动物,采取改良的枕大池二次注血建立蛛网膜下腔出血模型.于二次注血后第5天进行研究,亚低温组用冰袋全身降温治疗另两组维持体温在正常范围.(2)应用激光多普勒(LDF)监测大鼠皮层脑血流的变化以及脑底大血管的病理改变证实血管痉挛的发生.(3)通过光镜、电镜研究对比脑底大血管的大体及超微结构变化,来探求亚低温对于迟发血管痉挛时脑内大血管的保护作用.结果 大鼠基底动脉光镜结果发现亚低温及常温组均发生了明显的血管痉挛,表现为血管直径减小、管壁增厚、管腔周长减少、内弹力膜皱褶,同时可见痉挛血管细胞增殖现象明显.测量发现常温组基底动脉直径减少了50.59％,管壁厚度增加了159.27％,管腔内周长减少了62.50％.透射电子显微镜观察:常温组伴有大量内皮细胞的剥离导致内弹力膜的裸露,平滑肌细胞的坏死.亚低温组未见细胞膜破裂,紧密连接尚好,内弹力膜未见裸露,细胞连接未见明显改变,胞质中细胞器结构尚清晰,可见内质网、高尔基氏器、胞饮小泡、微丝及核糖体,细胞间连接未见明显损伤,仍可见缝隙连接.结论 亚低温治疗可能在一定程度上减轻或减缓血管壁的病理改变,从而对维持脑供血、减轻因脑缺血造成的神经细胞损害起到积极的作用.     

大鼠蛛网膜下隙出血脑血管痉挛模型的建立

目的 采用两种注血方法建立大鼠蛛网膜下隙出血早期脑血管痉挛模型,比较两种制备方法对脑血管痉挛程度的影响.方法 分别采用枕大池一次注血和二次注血法制备蛛网膜下隙出血早期基底动脉痉挛动物模型,HE染色观察基底动脉形态变化,计算基底动脉血管横截面积;透射电子显微镜观察基底动脉超微结构变化.结果 光学显微镜观察,枕大池一次注血组和二次注血组大鼠颅底有凝血块沉积;一次注血组大鼠基底动脉血管横截面积略有缩小[(2.68±0.48)×10-2mm2],但与假手术组比较差异无统计学意义(q=2.630,P=0.070),二次注血组大鼠基底动脉血管横截面积[(2.41±0.24)×10-2mm2]显著小于假手术组(q=4.660,P=0.003),但与一次注血组之间差异无统计学意义(q=2.031,P=0.166).电子显微镜观察,一次注血组大鼠基底动脉内弹力层局部变薄,内皮细胞胞质少量空泡形成,胞膜损伤崩解,中膜平滑肌细胞空泡样变性;二次注血组大鼠中膜平滑肌细胞和内皮细胞胞质空泡样变性,内皮细胞胞膜受损.结论 经枕大池注血法可复制蛛网膜下隙出血早期脑血管痉挛动物模型,以二次注血法所复制的脑血管痉挛模型更为稳定.     

大鼠侧位液压脑损伤后早期大脑中动脉形态学改变的实验研究

目的研究大鼠侧位液压颅脑损伤后早期颅底大脑中动脉形态学改变。方法成年SD大鼠32只,随机分为对照组、实验组(假手术组、伤后3 h及伤后72 h组),每组8只,以改良的大脑中动脉定向侧位液压冲击法建立大鼠颅脑损伤模型。应用光镜、透射电镜,观察大鼠脑损伤后不同时间点大脑中动脉形态变化。结果伤后3 h组光镜下血管直径变小,管壁增厚,并有少量小空泡形成。电镜下内皮细胞轻度肿胀,内弹力膜开始轻微卷曲,平滑肌细胞内可见线粒体肿胀。伤后72 h组光镜下血管直径明显变小,管壁明显增厚。电镜下内皮细胞变性,内弹力纤维层明显皱褶,平滑肌细胞变性改变。结论侧位液压颅脑损伤后大鼠颅底大脑中动脉改变以血管内皮细胞损伤、内弹力膜增厚及平滑肌细胞变性为主要特征。这提示在应力作用线上的大血管存在直接损伤。     

一氧化氮合酶基因对兔SAH后大脑中动脉超微结构变化的影响

目的观察蛛网膜下腔出血（sAH）后大脑中动脉超微结构的变化及内皮型一氧化氮合酶（eNOS）基因对它的影响。方法采用枕大池二次注血法制备兔SAH模型。24只兔随机分成对照组、SAH组、携带eNOS基因重组腺病毒（AdeNOS）组。AdeNOS组造模前用微量泵经颈内动脉将AdeNOS缓慢泵人转染大脑中动脉内皮细胞。对照组枕大池内先后两次注射生理盐水。实验动物于首次注血后7d进行灌注固定,留取大脑中动脉标本,在电镜下观察其超微结构的改变。结果电镜下,对照组血管壁超微结构无变化,SAH组血管内皮层结构以及中层细胞结构发生严重变性;AdeNOS组组织变性程度明显轻于SAH组。结论SAH可引起血管内膜和中层超微结构发生明显的变性,eNOS基因可明显减小脑动脉壁内膜和中层超微结构的损伤,提示其可用于SAH后脑血管痉挛的预防。     

实验性蛛网膜下腔出血后兔脑血管病理结构的动态变化

目的观察蛛网膜下腔出血后脑血管病理结构的动态变化,以建立可靠的脑血管痉挛模型。方法实验分正常组、对照组(枕大池注入等量生理盐水)、SAH3d组、SAH5d组、SAH7d组、SAH10d组和SAH14d组,枕大池二次注血法建立兔蛛网膜下腔出血模型,应用脑血管造影、光镜和透射电镜检查等方法观察SAH后基底动脉形态改变。结果脑血管造影发现SAH后第3d基底动脉狭窄,第7d达高峰。光镜和透射电镜检查显示出血后第3d开始出现血管管腔狭窄、管壁增厚、内皮细胞和平滑肌细胞变性,并随时间推移加重,第5d和第7d病理改变更明显,尤以第7d为著,10d后缓解。结论兔枕大池二次注血法是可靠的SAH后脑血管痉挛模型制作方法。     

不同浓度氧合血红蛋白对大鼠蛛网膜下腔出血后迟发性脑血管痉挛的影响

目的 观察不同浓度氧合血红蛋白对大鼠蛛网膜下腔出血（subarachnoid hemorrhage,SAH）后迟发性 脑血管痉挛（delayed cerebral vasospasm,DCV）的影响。 方法 将24只大鼠分为三组,对照组（8例）、动脉血SAH组（8例）、静脉血SAH组（8例）,分别用枕 大池二次注血法将0.3 mL生理盐水、自体动脉血、静脉血注入枕大池内,模拟SAH。7 d后处死大鼠, 观察脑组织肿胀情况及基底动脉周围血凝块情况,采用HE及免疫荧光染色观察基底动脉形态（管径 面积和管壁厚度）,电镜下观察基底动脉的超微结构变化。 结果 动脉血和静脉血SAH组脑组织肿胀、基底动脉周围可见不同程度的血凝块。光镜下,与对照 组相比,动脉血和静脉血SAH组管径面积缩小、管壁增厚;与静脉血SAH组相比,动脉血SAH组基底动 脉管径面积明显缩小（40 816.09±10 410.51 nm2 vs 68 480.89±12 687.4 nm2,P <0.001）,管壁厚度明 显增加（3.07±0.59 μm vs 2.36±0.25 μm,P =0.007）。电镜下,动脉血和静脉血SAH组均出现平滑 肌细胞排列紊乱和内皮细胞空泡变性,与静脉血SAH组相比,动脉血SAH组内皮细胞空泡变性更严重, 平滑肌细胞排列更加紊乱。 结论 用自体动、静脉血可以模拟不同浓度氧合血红蛋白引起的SAH后DCV,降低氧合血红蛋白浓 度能够减轻SAH后DCV。     

大鼠蛛网膜下腔出血后MMP-9在基底动脉壁中的表达变化

目的探讨大鼠蛛网膜下腔出血（subarachnoid hemorrhage,SAH）后基质金属蛋白酶-9（MMP-9）在基底动脉壁中的表达变化及其与脑血管痉挛（Cerebral Vasospasm,CVS）的关系。方法健康成年雄性SD大鼠51只,并随机分为正常组、对照组和SAH组,应用枕大池一次注血法制成SAH动物模型,对照组和SAH组大鼠在SAH后1 d,3 d,5 d,7 d,14 d时间点通过HE染色光镜下观察基底动脉的病理学变化,测定血管壁厚度及血管腔内径,以此评价脑血管痉挛;应用免疫组化法评估大鼠基底动脉管壁中MMP-9在不同时间点的表达水平。结果 HE染色显示SAH组基底动脉管腔狭窄,管壁增厚,3 d时最明显,之后狭窄程度渐减轻,14 d时基本正常;SAH后基底动脉壁MMP-9表达增加,表达高峰为注血后3～5 d,随后开始下降,14 d恢复正常。结论大鼠SAH存在明确的CVS,SAH后MMP-9在基底动脉壁中的表达上调,并与CVS的时相一致,提示MMP-9可能参与了CVS的病理过程。     

促红细胞生成素后处理在兔蛛网膜下腔出血中的作用

目的 探讨促红细胞生成素(EPO)后处理对家兔蛛网膜下腔出血(SAH)后脑血管痉挛的逆转作用.方法 30只新西兰白兔按照随机数字表法分为5组:Sham组、SAH0组、SAH1组、SAH2组、SAH3组.Sham组假穿刺,其他4组行枕大池穿刺注血的方法造模.Sham组和SAH0组造模24 h后静脉单次注入生理盐水0.1 mL/kg,SAH1组、SAH2组、SAH3组分别静脉单次注入EPO 500 IU/kg、1000 IU/kg、2000 IU/kg.所有动物存造模完成后48 h处死,使用Image Pro Plus 6.0图像分析系统测量分析并比较不同组问基底动脉管腔面积、基底动脉收缩系数以及海马CAI区神经元密度.结果基底动脉形态学观察结果可见Sham组血管管壁无增厚、无增生或坏死:SAH0组、SAH1组血管壁明显增厚,结构紊乱,中膜明显变厚,平滑肌排列紊乱;SAH3组血管内弹力膜皱折,SAH2组血管改变介于SAH1和SAH3组之间.基底动脉管腔面积SAH2组[(0.10±0.01)mm2]、SAH3组[(0.16±0.02)mm2]较SAH0组[(0.07±0.02)mm2]明显增大,基底动脉收缩系数SAH2组(1.22±0.06)、SAH3组(1.15±0.03)较SAH0组(1.31±0.09)明显减小,海马神经元密度SAH3组[(126.8±5.7)个/mml较SAH0组[(99.3±9.6)个/mm]明显增大,差异均有统计学意义(p<0.05).结论 在SAH后24h,单次静脉注射EPO不仅可以逆转家兔基底动脉痉挛,还可以减轻其脑神经细胞损伤.     

血红素氧合酶-1在大鼠蛛网膜下腔出血后脑血管中的表达

目的探讨蛛网膜下腔出血(SAH)后脑血管中血红素氧合酶-1(HO-1)的表达变化及其与迟发性脑血管痉挛(DCV)之间的关系。方法采用大鼠枕大池二次注血法建立SAH后DCV模型,用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测基底动脉HO-1mRNA表达的变化。结果注水对照组3、5、7d基底动脉内径周长分别为(996.20±43.25)μm、(1019.05±58.16)μm和(965.25±49.98)μm,血管壁厚分别为(9.82±0.57)μm、(9.65±0.65)μm和(10.11±0.48)μm;SAH组3、5、7d基底动脉内径周长分别为(705.65±66.57)μm、(738.70±42.19)μm和(665.31±49.85)μm,血管壁厚分别为(14.41±0.51)μm、(13.25±0.63)μm和(17.43±0.55)μm。注水对照组不同时相基底动脉中无HO-1mRNA表达;SAH组注血后3、5、7d,HO-1mRNA的相对表达量分别为0.61±0.042、0.55±0.039和0.48±0.052,以注血后3d表达水平最高。结论SAH后大鼠基底动脉有HO-1mRNA的低表达,但其不能拮抗SAH后DCV的发生。     

蛛网膜下腔出血后脑血管的病理研究

目的　研究蛛网膜下腔出血 (SAH)后脑血管痉挛的病理变化。　　方法　将 6例SAH死亡病例 ,与同期同年龄段 2 0例癌症及 40例脑出血作对照 ,着重对脑内外动脉进行病理观察及形态定量分析。　　结果　 1 病理检查发现 ,被凝血块包埋的动脉有内膜肿胀 ,内膜下基质增多 ,内弹力板多皱折 ,平滑肌细胞变性 ,肌细胞或肌层坏死等改变。 2 SAH组与对照组、脑出血组与对照组比较 ,脑内外动脉的管腔变小、管壁增厚 ,差异有显著意义 (P <0 0 1 ) ,而SAH组与脑出血组比较 ,仅被凝血块包埋的小动脉管腔明显减小 ,管壁明显增厚 (P <0 0 1 )。　　结论　本研究结果提示SAH后 ,被蛛网膜下腔凝血块包埋的脑动脉发生较明显的血管痉挛 ,痉挛血管既有收缩性变化 ,又存在器质性改变     

大鼠蛛网膜下腔出血后迟发性脑血管痉挛和血管壁增殖关系的实验研究

目的探讨大鼠蛛网膜下腔出血(SAH)后迟发性脑血管痉挛(DCV)的发生和血管壁增殖之间的关系。方法SD大鼠78只,随机分为SAH组(A组,36只)、生理盐水组(B组,36只)和正常对照组(C组,6只)。A组采用枕大池二次注血法建立SAH模型,B组同法注射等量生理盐水。A、B组分别在首次注血(或生理盐水)后4、7、10、13、16、20d取基底动脉(BA)行HE染色后测量其内径周长、血管壁厚度,观察血管结构改变;免疫组化染色后检测BA增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达。结果B、C组BA血管结构正常、无DCV发生,A组第4天出现DCV,第7天达到高峰,高峰期持续至第10天,后逐渐缓解,20d基本恢复正常;A组除20d外,各时相有不同程度的内膜增厚皱折、平滑肌层增厚等改变。PCNA在B组及C组BA中无表达,A组各时相均有表达,第7天有较强表达(P<0.05)。结论SAH后DCV的发生和严重程度与血管壁增殖程度密切相关。     

大鼠蛛网膜下腔出血后迟发性脑血管痉挛和rHSG表达相关性的实验研究

目的 探讨大鼠蛛网膜下腔出血(SAH)后迟发性脑血管痉挛(DCV)和大鼠增殖抑制基因(rHSG)表达之间的关系.方法 SD大鼠156只,随机分为SAH组(A组)、生理盐水组(B组)和正常对照组(C组).A组采用枕大池二次注血法诱发;B组同法注射等量生理盐水.A、B组分别在4、7、10、13、16、20d取基底动脉(BA)行HE染色后测量其内径周长、血管壁厚度,观察血管结构改变;免疫组化检测BA rHSG蛋白;RT-PCR法检测BA中rHSG mRNA.结果 B、C组BA血管结构正常,无DCV发生;A组第4天出现DCV,第7天达到高峰,高峰期持续至第10天.后逐渐缓解,20d趋于正常.A组除20d外,各时相BA有不同程度的内膜增厚皱折、平滑肌层增厚等增殖性改变.与B组及C组相比,A组4～16d rHSG蛋白及rHSG mRNA表达均降低(P<0.05),第7天显著降低(P<0.05).结论 SAH后DCV的发生和严重程度与血管壁增生程度及rHSG低表达密切相关.     

氯高铁血红素诱导血红素氧合酶-1抗脑血管痉挛实验研究

目的探讨氯高铁血红素诱导血红素氧合酶-1(HO-1)的表达变化和迟发性脑血管痉挛(DCV)之间的关系。方法采用大鼠枕大池二次注血法建立蛛网膜下腔出血(SAH)后DCV模型,对照组注入等体积(0.3 ml)的生理盐水,氯高铁血红素诱导组每日通过腹腔注射氯高铁血红素(30 mg/kg)。监测各组基底动脉血管内径周长和血管壁厚,用逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)检测基底动脉HO-1 mRNA表达变化。结果对照组不同时相基底动脉中无HO-1 mRNA的表达,SAH后大鼠基底动脉有HO-1 mRNA的低表达,氯高铁血红素诱导组HO-1的表达增高,并能减轻DCV的发生。结论 HO-1表达增高能够拮抗SAH后DCV的发生。     

内源性血红素氧合酶-1在脑血管痉挛中作用机制的实验研究

目的探讨内源性血红素氧合酶(HO-1)在迟发性脑血管痉挛(DCV)中的作用。方法 SD大鼠108只,随机分为生理盐水组(A组)、蛛网膜下腔出血(SAH)组(B组)、和SAH+氯高铁血红素(Hemin)组(C组)。采用枕大池二次注血法建立SAH模型,于注血后3d、5d、7d,取基底动脉(BA)测量其内径周长、血管壁厚度,观察血管结构改变,免疫组化染色检测BA中HO-1蛋白表达,RT-PCR检测BA中HO-1 mRNA的表达水平。结果A组BA血管结构正常,未发生DCV;B组第3天有DCV、第7天达到高峰;C组大鼠BA痉挛情况较B组明显缓解(P<0.01)。免疫组化显示A组大鼠BA上无HO-1蛋白表达;B组大鼠BA上HO-1蛋白低表达;C组大鼠BA上HO-1蛋白高表达,B、C两组比较有显著性差异(P<0.01)。RT-PCR显示A组大鼠BA无HO-1 mRNA的表达;B组大鼠BA上HO-1 mRNA低表达;C组大鼠BA HO-1mRNA高表达;B、C两组比较有显著性差异(P<0.01)。结论 HO-1诱导剂hemin可诱导HO-1过度表达并防止SAH后DCV的发生。     

丹红注射液对大鼠蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛的影响

目的 探讨丹红注射液对大鼠蛛网膜下腔出血（SAH）后脑血管痉挛（CVS）的防治作用。方法 将84只健康成年SD 大鼠随机分成4 组:正常组（n=12）、生理盐水组（n=24）、SAH组（n=24）和丹红组（n=24）;后3组根据造模后取材时间,各分为造模后3 d和7 d两亚组,每亚组12只大鼠。采用枕大池二次注血法建立大鼠SAH 模型。丹红组在造模后每天给予一次丹红注射液腹腔注射治疗。按上述时间点灌注固定后取大鼠脑桥段基底动脉,行HE染色,400倍光镜下观察,并测量基底动脉内径、血管壁厚度。结果 造模后3 d、7 d,生理盐水组基底动脉内径、管壁厚度与正常组均无明显变化（P>0.05）。造模后3 d,与生理盐水组相比,SAH组和丹红组基底动脉内径明显缩小,管壁厚度明显增加（P<0.05）;但SAH组和丹红组之间无统计学差异（P>0.05）。造模7 d后,SAH组基底动脉内径近一步缩小（P<0.05）,管壁厚度进一步增加（P<0.05）;而丹红组基底动脉内径较SAH组明显增加（P<0.05）,管壁厚度明显变薄（P<0.05）。结论 丹红注射液对大鼠SAH后CVS有一定的缓解作用。     

上胸段硬膜外阻滞与尼莫地平减轻兔脑血管痉挛作用的比较

目的比较上胸段硬膜外阻滞（HTEB）减轻兔蛛网膜下腔出血（SAH）后脑血管痉挛（CVS）的作用是否优于尼莫地平。方法切开置管法制备HTEB模型的新西兰兔60只,按随机数字表法随机分成4组（n=15）：假手术组、对照组）、HTEB治疗组和尼莫地平治疗组。＂枕大池二次注血法＂（0.5ml/kg）制成兔SAH模型,1、7和14d后用经颅多普勒检测基底动脉平均血流速度（Vm）。处死后取基底动脉,光镜下观察其形态学变化。结果与假手术组相比,对照组、HTEB治疗组和尼莫地平组的基底动脉Vm均明显升高（P〈0.01）;但HTEB治疗组和尼莫地平组的基底动脉Vm明显低于对照组（P〈0.05）,而两治疗组差异无统计学意义（P〉0.05）。光镜下,对照组基底动脉管壁增厚、管腔变窄;两治疗组管壁增厚不明显,管腔仍有狭小,较对照组明显改善;两治疗组之间血管壁变化无明显差异。结论 HTEB减轻兔SAH后CVS的程度与尼莫地平相当。     

上胸段硬膜外阻滞对兔蛛网膜下腔出血后急性期脑血管痉挛的预防作用

目的建立兔的上胸段硬膜外阻滞（HTEB）模型和蛛网膜下腔出血（SAH）模型，探讨HTEB对SAH后脑血管痉挛（CVS）的预防作用。方法用切开置管法制备HTEB模型的新西兰兔30只，随机分为3组（n=10）：正常组、对照组（单纯SAH）和实验组（HTEB＋SAH）。采用枕大池穿刺一次注血法（0．5ml／kg）制成兔SAH模型。1d后用经颅多普勒检测兔基底动脉血流速度（Vm）。处死后取基底动脉，光镜下观察其形态学变化。结果与正常组相比，对照组和实验组的基底动脉Vm均明显升高（P〈0．05或〈0．01）；但实验组的基底动脉Vm则明显低于对照组（P〈0．05）。在光镜下，对照组基底动脉管壁收缩、管腔变窄，实验组变化程度轻于对照组。结论HTEB可以减轻兔SAH后急性CVS的程度。     

盐酸法舒地尔对蛛网膜下腔出血后血管痉挛的实验研究

目的通过建立大鼠蛛网膜下腔出血（SAH）模型,探讨盐酸法舒地尔对蛛网膜下腔出血后血管痉挛的缓解作用和神经保护作用,并与尼莫地平对比,观察疗效。方法通过枕大池二次注血法建立大鼠SAH模型,观察基底动脉和海马神经元形态变化,测量基底动脉管径和管壁厚度,计算海马CA1区神经元密度,检测基底动脉内皮型一氧化氮合成酶（eNOS）的表达。结果各组模型大鼠的基底动脉均出现血管痉挛,海马CA1区正常神经元数目明显减少,多数神经元发生变性,基底动脉的eNOS表达明显减弱。但注射法舒地尔组与其他模型组相比能较大程度的缓解以上变化,具有统计学差异（P〈0.05）,且优于尼莫地平。结论法舒地尔可以有效缓解SAH后的迟发性脑血管痉挛,具有神经保护作用,其缓解迟发性脑血管痉挛作用和神经保护作用与动脉壁产生的一氧化氮（NO）有关。     

基底动脉中Caspase3、8的表达与蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛的关系

目的探讨天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3、8(Caspase3、8)在蛛网膜下腔出血(SAH)后在基底动脉中的表达及其与脑血管痉挛的关系。方法新西兰大白兔36只,随机分成对照组(n=6)和实验组(n=30),后者再随机分为SAH后1、3、5、7、10d等5个亚组,每亚组各6只。采用枕大池二次注血法建立SAH模型,应用免疫组化和末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP原位切口末端标记法分别检测基底动脉内皮细胞Caspase3、8表达和凋亡。结果凋亡细胞在实验组SAH后第1天出现,第7天凋亡水平达到最高。实验组Caspase3、8表达水平明显高于与对照组(P<0.05)。Caspase3、8的表达在SAH后第1天就可观察致到,第5天和第7天出现强烈表达,第l0天表达明显减弱。结论本结果提示在兔脑血管痉挛的基底动脉中存在细胞凋亡;Caspase3、8可能参与了SAH后脑血管痉挛的发生和发展。