cAMP对大鼠颅脑损伤后神经功能及脑水肿的影响

目的 探讨蛋白激酶A（PKA）激活物cAMP对颅脑损伤（TBI）大鼠神经功能、脑水肿的影响。方法 选取120只成年雄性SD大鼠随机分为6组（每组20只）:假手术组（暴露硬脑膜而不给予液压打击）;高、中、低剂量cAMP组（TBI后1 h腹腔注射60、40、20 mg/kg PKA激活物8-Bromo-cAMP）;溶媒组（TBI后1 h腹腔注射cAMP溶媒二甲基亚砜10 μl）;模型组（液压打击处理）。TBI后48 h,采用神经损伤严重程度评分（NSS）评估神经功能,干湿重法测定脑含水量,免疫印迹法检查海马细胞外信号调节激酶1/2（ERK1/2）、非磷酸化缝隙连接蛋白43（NP-Cx43）、谷氨酸转运蛋白-1（GLT-1）及钠钾ATP酶的表达,高效液相色谱法检测海马谷氨酸（Glu）的含量。结果 TBI后,大鼠NSS明显增高（P<0.05）,脑含水量明显增加（P<0.05）,海马ERK1/2表达水平明显增加（P<0.05）,海马Glu含量明显增加（P<0.05）,而NP-Cx43、GLT-1、钠钾ATP酶表达水平明显降低（P<0.05）;cAMP干预后,显著逆转这些反应（P<0.05）,而且呈剂量依赖性。结论 大鼠TBI后,给予cAMP干预,激活PKA,可通过门卫效应抑制ERK1/2,使NP-Cx43、GLT-1及钠钾ATP酶水平明显增高,进一步降低Glu等脑毒性代谢产物、缓解脑水肿,从而改善大鼠神经功能。     

钙敏感受体在创伤性颅脑损伤大鼠神经元凋亡中的作用

目的 探讨钙敏感受体（CaSR）在创伤性颅脑损伤（TBI）大鼠神经元凋亡中的作用.方法 健康成年雄性SD大鼠54只,按随机数字表方法随机分为对照组、TBI组、抑制剂组,每组18只,每组再分为损伤后6、24、72 h3个亚组,每个亚组6只大鼠.TBI组和抑制剂组采用改良自由落体硬脑膜撞击法建立TBI模型,抑制剂组在模型建立前连续2d尾静脉注射CaSR阻滞剂NPS2390（1次/d,每次10 μmol/kg）,对照组只开骨窗不予打击.采用改良神经行为学评分（mNSS）评估各组大鼠的神经行为,实时定量PCR法检测损伤脑组织CaSR、Caspase-3 mRNA的表达,Westem blot法检测CaSR、Caspase-3蛋白的表达,TUNEL法检测皮质神经元的凋亡.结果 建模后6、24、72 h,（1）神经行为学评分显示,TBI组与对照组和抑制剂组比较,各时间点mNSS评分均增高,差异均有统计学意义（均P〈0.01）,而抑制剂组各时间点评分均高于对照组（均P〈0.01）.（2）TBI组和抑制剂组不同时间点CaSR、Caspase-3的mRNA和其蛋白的表达,均为24 h达高峰（均P〈0.01）.与对照组和抑制剂组比较,TBI组各时间点CaSR mRNA及其蛋白的表达均增高（均P〈0.01）,Caspase-3的蛋白表达仅在24 h高于对照组和抑制剂组（P〈0.05）.（3）TUNEL法检测结果显示,TBI模型制作后24 h凋亡细胞达到峰值.各时间点TBI组比对照组和抑制剂组神经元凋亡细胞指数均增高（均P〈0.01）,而抑制剂组与对照组比较,各时间点凋亡细胞指数仍高（均P〈0.01）.（4）CaSR、Caspase-3蛋白的表达均与细胞凋亡指数存在正相关（r =0.300,P 〈0.05;r =0.371,P〈0.01）,CaSR蛋白的表达与Caspase-3蛋白的表达存在正相关（r=0.434,P〈0.01）.结论 大鼠TBI后,CaSR在抑制神经元凋亡中起着重要的作用.     

阿托伐他汀对颅脑损伤大鼠神经元凋亡的抑制作用

目的 探讨阿托伐他汀对颅脑损伤（TBI）大鼠神经元凋亡的抑制作用及机制。方法 30只SD大鼠随机分为假手术组、模型组和阿托伐汀他组，各10只。采用液压打击法制作TBI模型，阿托伐他汀组连续灌胃阿托伐他汀2周（1 mg/kg/d），假手术组、模型组灌胃等体积生理盐水。给药结束后第2天，参照Zea Longa 5分制标准进行神经功能评分。酶联免疫吸附法检测血清肿瘤坏死因子（TNF-α）、白介素（IL）-6和IL-1β水平；免疫印迹法检测损伤脑组织Toll样受体4（TLR4）、核转录因子（NF）-κB p65、p-IκB、cleaved Caspase-3蛋白表达；末端标记法检测神经元凋亡；HE染色观察脑组织病理变化。结果 与模型组相比，阿托伐他汀组大鼠神经功能缺损评分、细胞凋亡率、血清IL-6、TNF-α和IL-1β水平明显改善（P<0.05），损伤脑组织TLR4、NF-KB p65、p-IκB、cleaved Caspase-3水平明显下调（P<0.05）；HE染色显示脑组织损伤程度明显减轻。结论 阿托伐他汀可能通过抑制TLR4/NF-кB信号通路，抑制TBI大鼠的神经元细胞凋亡，促进神经功能恢复。     

亚低温通过抑制AIF核转位改善大鼠颅脑损伤

目的 探讨亚低温对颅脑损伤（TBI）大鼠脑组织凋亡诱导因子（AIF）核转位的影响。方法 将36只成年雄性SD大鼠随机分为假手术组、TBI组、亚低温组，每组12只。采用控制性皮质撞击建立TBI模型，亚低温组大鼠给予亚低温处理。TBI后24 h，HE染色观察大鼠脑组织病理学变化；免疫组织化学方法检测大鼠脑组AIF的表达部位；免疫印迹法检测损伤脑组织线粒体和细胞核AIF、caspase-3的表达情况。结果 HE染色结果显示，TBI后，损伤侧脑组织可见沿灰白质界面的挫伤和出血，亚低温组挫伤和出血灶明显减轻。免疫印迹法检测结果显示，TBI后，损伤脑组织caspase-3表达量明显增加（P<0.01），细胞核AIF表达量明显增加（P<0.01），而线粒体AIF表达量明显降低（P<0.05）；亚低温组损伤脑组织caspase-3表达量明显下降（P<0.01），细胞核AIF表达量明显下降（P<0.01），而线粒体AIF表达量明显升高（P<0.05）。免疫组织化学染色结果显示，假手术组AIF位于大脑皮质和海马神经元细胞核外；TBI组后，损伤侧皮质及海马区AIF从线粒体转移至细胞核内的阳性细胞数量明显增多（P<0.01）；亚低温组损伤侧皮质及海马区AIF发生核内转移的阳性细胞数量减少（P<0.01）。结论 亚低温可能通过抑制AIF的核转位减轻颅脑损伤后神经细胞凋亡，从而起到神经保护作用。     

白藜芦醇通过激活PI3K/Akt信号通路减轻大鼠脑缺血再灌注损伤

目的 探讨PI3K/Akt信号通路在白藜芦醇减轻大鼠脑缺血再灌注损伤中的作用。方法 将48只成年SD大鼠随机分为假手术组、模型组、白藜芦醇组、LY294002组（Akt抑制剂）,每组12只。利用线栓法制备大鼠脑缺血再灌注损伤模型,造模后24 h进行大鼠神经功能损伤评分和检测脑梗死体积、脑组织髓过氧化物酶（MPO）的活性,免疫印迹法检测脑组织p-Akt、t-Akt的表达水平,ELISA法检测脑组织肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的含量。结果 与假手术组相比,模型组大鼠神经功能损伤评分、脑梗死体积、缺血脑组织MPO活性和TNF-α含量均明显增高（P<0.05）,缺血脑组织p-Akt表达水平也明显增高（P<0.05）;与模型组相比,白藜芦醇显著降低大鼠神经功能损伤评分、脑梗死体积、缺血脑组织MPO活性和TNF-α含量（P<0.05）,也显著降低缺血脑组织p-Akt表达水平（P<0.05）;脑室内注射LY294002,显著抑制白藜芦醇的这些作用（P<0.05）。结论 白藜芦醇通过激活PI3K/Akt信号通路减轻大鼠脑缺血再灌注损伤。     

基于PI3K/Akt通路研究右美托咪定对癫痫持续状态大鼠海马神经元自噬的调节作用

目的 探讨右美托咪定(Dexmedetomidine,Dex)对癫痫持续状态(Status epilepticus,SE)大鼠海马神经元自噬的调节作用及对磷脂酰肌醇-3-羟激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路的影响。方法 采用戊四氮(PTZ)点燃制备SE大鼠模型,随机分为模型组(M组)、Dex低剂量(Dex-L)组、Dex高剂量(Dex-H)组、Dex-H +LY294002(Dex-H+LY)组,另取正常SD大鼠为对照组(NC组),每组各15只; Dex-L组、Dex-H组分别腹腔注射Dex 25、100 μg/kg; Dex-H+LY组脑室注射5 μL PI3K抑制剂LY294002+腹腔注射Dex 100 μg/kg,NC组、M组大鼠腹腔注射等量生理盐水; 观察大鼠行为学表现并进行脑电图描记; 原位末端标记法(TUNEL)检测各组大鼠海马神经元凋亡情况; 免疫印迹(WB)检测各组大鼠海马组织中LC3、PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt蛋白表达水平。结果 NC组大鼠脑电图无异常放电现象,主要以α、β波为主; M组大鼠出现大量阵发性棘波、高幅尖波、棘慢复合波、尖慢复合波等; Dex-L组、Dex-M组大鼠癫痫发作减少或波幅降低; Dex-H+LY组大鼠癫痫样放电较Dex-H组明显增加。与NC组比较,M组大鼠海马神经元凋亡细胞数、海马LC3-Ⅱ蛋白表达显著增加,海马LC3-Ⅰ,p-PI3K/PI3K,p-Akt/Akt蛋白表达水平显著降低(P<0.05); 与M组比较,Dex-L组、Dex-H组大鼠海马神经元凋亡细胞数、海马LC3-Ⅱ蛋白表达依次减少(P<0.05),海马LC3-Ⅰ,p-PI3K/PI3K,p-Akt/Akt蛋白表达水平依次增高(P<0.05); 与Dex-H组比较,Dex-H+LY组大鼠海马神经元凋亡细胞数、海马LC3-Ⅱ蛋白表达显著增加,海马LC3-Ⅰ,p-PI3K/PI3K,p-Akt/Akt蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。结论 Dex可能通过促进PI3K/Akt信号通路激活来抑制SE大鼠海马神经元过度自噬,减轻神经元凋亡,发挥抗惊厥及脑保护作用。     

黄芪甲苷对大鼠蛛网膜下腔出血后迟发性脑血管痉挛的影响

目的 探讨黄芪甲苷对大鼠蛛网膜下腔出血（SAH）后迟发性脑血管痉挛的影响及机制。方法 将40只成年雄性SD大鼠随机分为假手术组、黄芪甲苷组（腹腔注射用0.1%二甲基亚砜助溶的黄芪甲苷溶悬液）、模型组和溶媒组（腹腔注射等体积0.1%二甲基亚砜），每组10只。采用颈内动脉刺破法制作SAH模型。SAH后24 h根据改良Garcia神经功能评分评定大鼠神经功能。SAH后6 d，HE染色测量基底动脉横截面积评估血管痉挛，免疫组化染色检测基底动脉p-Akt表达，免疫荧光染色检测基底动脉C-myc和α-SMA表达。结果 与假手术组相比，模型组和溶媒组改良Garcia神经功能评分明显降低（P<0.05），基底动脉横截面积明显减小（P<0.05），基底动脉α-SMA表达水平明显降低（P<0.05），基底动脉p-Akt和C-myc表达水平明显增加（P<0.05）；而模型组和溶媒组均无统计学差异（P>0.05）。与溶媒组相比，黄芪甲苷组改良Garcia神经功能评分明显提高（P<0.05），基底动脉横截面积明显增加（P<0.05），基底动脉α-SMA表达水平明显增加（P<0.05），基底动脉p-Akt和C-myc表达水平明显降低（P<0.05）。结论 黄芪甲苷可能通过抑制Akt信号通路下调C-myc的表达、促进α-SMA表达，影响SAH大鼠基底动脉血管平滑肌表型转换和增殖，增加基底动脉横截面积，从而缓解基底动脉痉挛。     

PI3K／Akt信号通路对神经元机械性损伤诱导的自噬调节作用

目的研究机械性神经元损伤后自噬的发生情况以及磷脂酰肌醇3激酶（P13K）／蛋白激酶B（Akt,即PKB）信号通路对其发挥的调节作用。方法小鼠皮层神经元原代培养2W后,采用机械性神经元损伤模型,通过蛋白印迹法（Westernblot）定量分析损伤后不同时间点自噬相关分子微管相关蛋白轻链3（LC3）I／II、Beclin-1和Akt蛋白磷酸化的表达情况;使用不同浓度的P13K抑制剂LY294002预处理神经元1h后给予机械性损伤,通过Westernblot来研究自噬相关分子LC3I／Ⅱ和Beclin-1的表达情况。结果自噬相关分子LC311于机械性神经元损伤后3h表达开始逐渐增加,而Beclin-1无明显变化;p-Akt的表达于损伤后3h达到高峰,此后逐渐恢复到正常水平;用P13K抑制剂LY294002预处理神经元,可以使损伤后神经元的自噬相关分子LC3lI和Beclin-1的表达上调。结论机械性神经元损伤可以诱导自噬发生,且PI3K／Akt信号通路在其中可能发挥调节作用。     

环磷酸腺苷反应元件结合蛋白与认知功能障碍相关疾病研究进展

目的 基于磷酯酰激醇 3- 激酶 / 蛋白激酶 B（PI3K/Akt）通路探讨氯吡格雷对脑缺血再 灌注损伤大鼠的神经保护作用。方法 建立脑缺血再灌注大鼠模型，随机分为模型组、氯吡格雷组、 LY294002（PI3K 抑制剂）组、氯吡格雷 +LY294002 组，每组 12 只，另取 12 只 SD 大鼠设为假手术组。分组 处理后，所有大鼠进行神经功能缺损评分并尾静脉取血，处死大鼠，HE 染色检测各组大鼠神经元病理 情况；三苯基氯化四氮唑（TTC）染色检测各组大鼠脑组织梗死面积；ELISA 检测血清中中枢神经特异性 蛋白（S100β）、神经元特异性烯醇化酶（NSE）、白细胞介素 -6（IL-6）、肿瘤坏死因子 -α（TNF-α）水平；蛋 白免疫印迹法检测脑组织中 PI3K/Akt 通路蛋白表达情况。结果 与假手术组相比，模型组大鼠脑组织 神经元出现坏死、核收缩变小等病理变化，神经功能缺损评分、脑梗死面积、血清中 S100β、NSE、IL-6 及 TNF-α 水平均明显升高（P＜ 0.05），脑组织中 p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt 明显降低（P＜ 0.05）；与模型组相 比，氯吡格雷组大鼠神经元病理损伤减轻，神经功能缺损评分、脑梗死面积、血清中 S100β、NSE、IL-6 及 TNF-α 水平均降低（P＜ 0.05），脑组织中 p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt 升高（P＜ 0.05）；LY294002 组大鼠神 经元病理损伤加重，神经功能缺损评分、脑梗死面积、血清中 S100β、NSE、IL-6 及 TNF-α水平均升高 （P＜ 0.05），脑组织中 p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt 降低（P＜ 0.05）。与 LY294002 组相比，氯吡格雷 +LY294002 组大鼠神经元病理损伤减轻，神经功能缺损评分、脑梗死面积、血清中 S100β、NSE、IL-6 及 TNF-α 水 平均降低（P＜ 0.05），脑组织中 p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt 升高（P＜ 0.05）。与氯吡格雷组相比，氯吡格雷 + LY294002 组大鼠神经元病理损伤加重，神经功能缺损评分、脑梗死面积、血清中 S100β、NSE、IL-6 及 TNF-α 水平均升高（P＜ 0.05），脑组织中 p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt 降低（P＜ 0.05）。结论 氯吡格雷可通 过激活 PI3K/Akt 通路减轻大鼠脑缺血再灌注损伤，保护脑组织。     

葛根素通过Nrf2-ARE信号通路抵抗氧化应激对创伤性脑损伤的神经保护作用

目的 探讨葛根素对创伤性脑损伤(TBI)模型大鼠的神经保护作用及脑组织红系衍生的核因子相关因子2(Nrf2)一抗氧化反应原件(ARE)信号通路参与的机制。方法 选择健康成年雄性大鼠体重250～300 g构建TBI模型,将大鼠分为4组:创伤组(A组)、假手术组(B组)、葛根素治疗的创伤组(C组)和葛根素治疗的假手术组(D组); 通过采用改良的神经功能缺损评分(mNSS)评价神经功能,脑组织干湿重称量法评价脑水肿,Nissl染色,TUNEL染色评价脑损伤体积和神经元的凋亡,使用酶活试剂盒检测损伤48 h后抗氧化酶SOD,GSH,和GSSG的活性以及氧化应激产物MDA和NO的水平,最后使用western blot和RT-PCR的方法检测Nrf2-ARE信号通路及其下游分子HO-1,NQO1的表达水平。结果 TBI手术后损伤组mNSS评分明显增高(P<0.05),葛根素治疗组能够明显降低mNSS评分(P<0.05)。TBI手术后损伤组脑水肿加重及神经元凋亡增加(P<0.05),葛根素治疗组能够明显挽救脑水肿及神经元凋亡(P<0.05)。TBI手术12 h后损伤组脑内抗氧化酶SOD,GSH,和GSSG的活性增加及氧化应激产物MDA和NO的水平升高(P<0.05),葛根素治疗组能够明显降低抗氧化酶SOD,GSH,和GSSG的活性以及氧化应激产物MDA和NO的水平(P<0.05)。western blot和RT-PCR显示葛根素不改变Nrf2的翻译和表达,但是RT-PCR显示葛根素能够明显促进Nrf2-ARE信号通路下游分子HO-1,NQO1的表达。结论 葛根素可能通过Nrf2-ARE信号通路抵抗氧化应激对创伤性脑损伤发挥神经保护作用。     

白藜芦醇对大鼠脑缺血再灌注损伤的作用

目的探讨白藜芦醇(Res)预处理对脑缺血再灌注大鼠神经功能损伤的作用及其机制。方法将80只成年雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、Res组、Res+PI3K抑制剂组,每组20只。以线栓法建立大脑中动脉阻塞后缺血再灌注模型。造模前6 d,Res组和Res+PI3K抑制剂组腹腔注射Res(15μg/g,1次/d),假手术组和模型组腹腔注射等体积生理盐水;造模前30 min,Res组和Res+PI3K抑制剂组先腹腔注射Res(15μg/g),然后,Res+PI3K组用微量注射器向右侧脑室注射PI3K抑制剂3-MA 5μl(50μg),假手术组和模型组右侧脑室注射等体积生理盐水。造模后24 h处死大鼠采用TTC染色法评估大鼠脑梗死面积,取材前行神经功能评分;以尼氏染色以及透射电镜观察神经细胞尼氏体和自噬体数量;通过Q-PCR法检测脑组织自噬基因mRNA水平,免疫印迹法检测脑组织PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白及磷酸化表达水平。结果与假手术组相比,模型组神经功能评分明显增高(P<0.05),脑梗死体积明显增大(P<0.05),损伤脑组织尼氏体明显减少(P<0.05),自噬相关基因Beclin1 mRNA水平明显升高(P<0.05),PI3K、mTOR和Akt蛋白表达水平无显著变化(P>0.05),而各自蛋白磷酸化水平均显著降低(P<0.05)。相比于模型组,Res组上述变化明显改善(P<0.05),而PI3K抑制剂明显抑制Res的作用(P<0.05)。结论Res能有效减轻缺血再灌注模型大鼠脑组织造成的神经功能损伤,可能与抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路促进细胞自噬有关。     

门冬氨酸钾减轻大鼠可控性皮质打击伤引起的脑损伤

目的 门冬氨酸钾（potassium aspartate,PA）作为一种电解质补充剂,在临床上广泛使用。以往的研 究发现门冬氨酸钾在脑缺血/再灌注大鼠中对细胞凋亡有神经保护的作用。本研究将探讨门冬氨酸 钾对创伤性脑损伤（traumatic brain injury,TBI）是否有保护作用。 方法 T BI通过大鼠可控性皮质打击伤（controlled c ortical i mpact,CCI）产生。门冬氨酸钾组或溶剂对 照组在CCI发生后30 min以腹腔注射给予生理盐水或62.5 mg/kg剂量的PA,观察脑血流灌注量,改良 神经功能缺损评分（modified Neurological Severity Score,mNSS）和皮质损伤体积,并检测脑水肿以及 脑组织三磷腺苷（adenosine triphosphate,ATP）、乳酸含量和钠钾ATP酶活性。 结果 在CCI引起的大鼠皮质损伤中,与溶剂对照组相比,急性给予62.5 mg/kg剂量的PA治疗可以明 显改善神经功能缺损（P＜0.05),降低皮质损伤体积（P＜0.01）,减轻脑水肿（P＜0.05）。此外,与溶 剂对照组相比,门冬氨酸钾治疗组显著减少ATP缺失（P＜0.01）,降低乳酸含量（P＜0.05）,并增加 钠钾ATP酶的活性（P＜0.05）。 结论 PA能通过增加ATP含量和钠钾ATP酶的活性并降低脑水肿,对TBI具有神经保护作用。这为PA 在临床脑损伤时的应用提供了实验证据。     

脑缺血再灌注损伤大鼠Beclin-1与Bcl-xL、Caspase-2的表达及Cystatin C干预作用的影响

目的探讨大鼠脑缺血再灌注后自噬蛋白Beclin-1与凋亡蛋白Bcl-xL、Caspase-2表达的变化以及Cystatin C对其的干预作用。方法 Sprague-Dawley大鼠雄性60只随机分成假手术组(sham)、模型组(model)、Cystatin C低(low)、中(middle)、高(high)浓度组,每组12只。用线栓法制备大鼠右侧局灶性脑缺血2 h再灌注24 h模型。各组大鼠进行神经损伤严重程度评分(mNSS),Western Blot检测损伤区脑皮质组织中凋亡相关蛋白Bcl-xL、Caspase-2的表达;免疫荧光法检测Beclin-1蛋白表达的平均荧光强度;TUNEL法观察神经细胞的凋亡指数(AI)。结果与模型组相比,Cystatin C低、中浓度组中Bcl-xL的表达较模型组明显升高(P0.05),Caspase-2的表达降低(P0.05);而Cystatin C高浓度组Bcl-xL表达明显降低,Caspase-2的表达则显著上升(P0.05);Cystatin C低、中、高浓度组Beclin-1的表达逐渐升高(P0.05)。结论应用低、中浓度的Cystatin C干预脑缺血再灌注损伤大鼠后,自噬的增强能够促进Bcl-xL的表达,抑制Caspase-2的表达;而高浓度的Cystatin C使Caspase-2的表达增强,Bcl-xL的表达降低。     

肢体缺血预处理对脑缺血再灌注损伤大鼠自噬的影响

目的探讨肢体缺血预处理对脑缺血再灌注损伤大鼠自噬的影响。方法将60只Wistar大鼠随机分为假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(I/R组)、肢体缺血预处理组(LIPC组)、3-甲基嘌呤组(3-MA组),每组15只。制作脑缺血再灌注、肢体缺血预处理及3-MA干预大鼠模型,在脑缺血2 h再灌注24 h后进行神经功能缺陷评分和脑梗死体积测定,HE染色观察细胞形态学改变,Western Bloting法检测自噬相关蛋白Beclin-1、Cathepsin B的表达。结果与I/R组比较,LIPC组神经功能缺陷评分降低(P<0.05),脑梗体积明显减小(P<0.05),细胞损伤、坏死减轻(P<0.05),Beclin-1、Cathepsin B的蛋白表达明显减弱(P<0.05)。结论 LIPC对缺血再灌注损伤大脑具有保护作用,其机制可能与减弱自噬水平有关。     

抑制CKLF1促进大鼠脑缺血后神经功能恢复

目的 探讨抑制CKLF1对局灶性脑缺血大鼠神经保护作用及其相关机制。方法 110只成年SD大鼠按数字随机表法随机分为假手术组、模型组、低剂量CKLF1抗体组、中剂量CKLF1抗体组、高剂量CKLF1抗体组,每组22只。采用大脑中动脉线栓法制作局灶性缺血再灌注模型。术后24 h,采用Longa评分法评定大鼠神经功能;采用Nissl染色检测海马神经元存活率;免疫组化染色检测海马组织LC3-Ⅱ表达;实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹法检测海马组织caspase-3 mRNA和蛋白表达水平。结果 抑制CKLF1显著改善大鼠神经功能Longa评分（P<0.05）,显著增加海马神经元存活率（P<0.05）,显著降低海马组织LC3-Ⅱ、caspase-3表达水平（P<0.05）,而且均呈剂量依赖性。结论 抑制CKLF1表达对局灶性脑缺血大鼠具有神经保护作用,可能与调控自噬或凋亡有关。     

Quercetin attenuates neuronal autophagy and apoptosis in rat traumatic brain injury model via activation of PI3K/Akt signaling pathway

Objective: Neuronal autophagy and apoptosis play an irreplaceable role in brain injury pathogenesis and may represent a hopeful target for treatment. Previous studies have demonstrated that administration of quercetin-attenuated brain damage in a variety of brain injury models including traumatic brain injury (TBI). However, whether PI3K/Akt signaling pathway mediates the neuroprotection of quercetin following TBI is not well clarified. We sought to propose a hypothesis that quercetin could attenuate neuronal autophagy and apoptosis via enhancing PI3K/Akt signaling.

Methods: All rats were randomly arranged into four groups as follows: sham group (n = 25), TBI group (n = 25), TBI + quercetin group (n = 25), TBI + quercetin + LY294002 group (n = 25). Quercetin (Sigma, USA, dissolved in 0.9% saline solution) was administered intraperitoneally at a dose of 50 mg/kg at 30 min, 12 h, and 24 h after TBI. The neurological impairment and spatial cognitive function was assessed by the neurologic severity score and Morris water maze, respectively. Immunohistochemistry staining and western blotting was used to evaluate the expression of LC3, p-Akt, caspase-3, Bcl-2, and Bax.

Results: Quercetin treatment significantly attenuated TBI-induced neurological impairment (1–3 days, p < 0.05) and improved cognitive function (5–8 days, p < 0.05). Double immunolabeling demonstrated that quercetin significantly reduced the LC3-positive cells co-labeled with NeuN, whereas significantly enhanced p-Akt-positive cells co-labeled with NeuN. Furthermore, quercetin treatment reduced the expression of LC3、caspase-3 and Bax levels induced following TBI (p < 0.05), and increased the expression of p-Akt and Bcl-2 at 48 h (p < 0.05).

Conclusion: In conclusion, our observations indicate that post-injury treatment with quercetin could inhibit neuronal autophagy and apoptosis in the hippocampus in a rat model of TBI. The neuroprotective effects of quercetin may be related to modulation of PI3K/Akt signaling pathway.     

骨髓间充质干细胞立体定向移植治疗大鼠脑缺血损伤的实验研究

目的观察立体定向移植骨髓间充质干细胞(BMSC)治疗MCAO大鼠的效果并探讨其可能机制。方法用改良线拴法制作大脑中动脉闭塞(MCAO)模型。60只模型大鼠随机分为移植组(A组)、磷酸盐缓冲液溶液组(B组)与假手术组(C组)。在模型建立后7 d,通过立体定向方式将1×106个BMSCs移植入A组大鼠损伤侧纹状体,B组大鼠以同样方式在同样部位移植等体积的磷酸盐缓冲液,C组完成立体定向过程,但无液体注入。应用改良大鼠神经功能缺损评分(m NSS评分)、水迷宫测试观察大鼠神经功能恢复状况,并取大鼠脑组织行免疫组织化学染色。结果 A组m NSS评分优于B组、C组(P0.05);A组逃避潜伏期明显缩短(P0.05);跨越平台次数明显增多(P0.05)。A组大鼠在脑损伤中心及周围区,可见Brdu单染阳性细胞及Brdu+BDNF、Brdu+GFAP、Brdu+v WF、Brdu+VEGF双染阳性细胞。结论立体定向移植BMSCs可以显著改善MCAO大鼠神经功能恢复。     

银杏叶提取物对大鼠创伤后脑细胞的保护作用

目的探讨银杏内酯对创伤性脑损伤（TBI）后神经细胞及其功能的保护作用。方法按自由落体撞击法造成TBI模型，通过木条平衡实验评价伤后大鼠的神经功能恢复情况，并在伤后不同时间点观察病理改变，同时检测脑组织中丙二醛（MDA）、NO和水含量的改变。结果与假损伤组比，伤后第一天大鼠脑组织内MDA和NO的含量显著升高（P〈0.01），不同时间点脑组织的含水量显著增加（P〈0.01），伤后1周内大鼠完成木条平衡作业的能力明显受损（P〈0.05）。经银杏内酯治疗后，TBI大鼠神经功能明显改善，病理改变减轻，脑组织含水量及MDA、NO的含量明显降低。结论银杏内酯可以促进颅脑损伤后神经功能的恢复，可能与早期抗氧化应激、降低NO的产生、减轻脑水肿、保护脑组织有关。