喉癌组织Rb、P53、C-myc和HPV基因测定及意义

采用PCR技术检测了33例喉癌及4例正常喉组织Rb、P53、C-myc、HPV基因的异常状况，结果：P53基因突变率为69.69%(23/33)(P＜0.01)，Rb基因突变率为48.48%(16/33)(P＜0.01)，C-myc基因扩增率为58.62%(17/29)(P＜0.01)，HPV阳性率为72.72%(24/33)(P＜0.01)。结合病毒感染和重度吸烟探讨发生喉癌因素的相互关系，研究表明：HPV感染和吸烟与C-myc基因激活和Rb、P53基因突变失活有关，是导致喉癌发生发展的多因素、多基因、多阶段的相互作用。     

喉癌组织Rb、P^53、C—myc和HPV基因测定及意义

采用PCR技术检测了33例喉癌及4例正常喉组织Rb、P^53、C-myc、HPV基因的异常状况，结果：P^53基因突变率为69．69％（23／23）（P＜0．01），Rb基因突变率为48．48％（16／33）（P＜0．01），C－myc基因扩增率58．62％（17／29）（P＜0．01），HPV阳性率为72．72％（24／33）（P＜0．01）。结合病毒感染和重度吸烟探讨发生喉癌因素的相互关系。研究表明：HPV感染和吸烟与C－myc基因激活和Rb、P^53基因突变失活有关，是导致喉癌发生发展的的多因素、多基因、多阶段的相互作用。     

喉癌中P_53基因突变

本文采用ＰＣＲ技术对４例正常喉组织、１０例正常白细胞、３３例喉癌组织，进行Ｐ５３基因的５－６和７－８外显子检测，结果发现喉癌中Ｐ５３基因突变率为６９．６９％（２３／３３）（Ｐ＜０．０１），其中５－６外显子突变率为２４．２４％（８１３３），７８外显子突变率为４５．４５％（１５／３３）。各期喉癌Ｐ５３基因突变率无明显差异（Ｐ＞０．０５）。研究表明Ｐ５３基因的突变是喉癌发生发展过程中的一个重要机制。     

CD44蛋白在人喉癌组织中的表达及临床意义

目的：探讨CD44在人喉癌组织中的表达及其临床意义。方法：采用免疫组织化学Envision法对261例喉不同病变组织标本进行CD44表达检测。结果：人喉癌组织中CD44高表达率为70．9％，明显高于癌前病变（16．7％）及正常喉组织（0％），其差异均有极显著性意义（P＜0．01）；喉癌组织中高分化鳞癌CD44表达明显低于低分化鳞癌（P＜0．01）；Ⅲ-Ⅳ期喉癌病变组织CD44表达明显高于I－Ⅱ期（P＜0．01）；有颈淋巴结转移的喉癌组织CD44表达明显高于无颈淋巴结转移的喉癌组织（P＜0．01）；CD44表达阳性病例3、5年生存率明显低于CD44表达阴性病例（均P＜0．05）。结论：喉癌的发生、发展及患者预后与CD44表达密切相关。     

喉癌中P_（53）蛋白过度表达

为证实喉癌的发生发展与抗癌基因Ｐ＿（５３）有关，采用单克隆抗体免疫荧光技术对２５例喉癌标本进行了Ｐ（５３）基因表达蛋白定量测定，结果显示，２５例喉癌中有１７例荧光染色阳性，即喉癌中Ｐ（５３）蛋白过度表达为６８．０％（１７／２５），与正常组织相比差异显著（Ｐ＜０．０１），吝期喉癌Ｐ（５３）蛋白表达情况无明显差异（Ｐ＞０．０５）。这说明Ｐ（５３）基因异常导致表达蛋白的堆积是喉癌发生发展中的重要机制之一。     

喉癌中染色体9p21区域D9S319座位的杂合性丢失研究

为发现和定位新的抑癌基因提供线索和依据，应用聚合酶链反应检测了５４例喉癌（包括３例原位癌）组织中染色体９ｐ２１区域Ｄ９Ｓ３１９座位的ＤＮＡ微卫星多态标记的杂合性丢失（ｌｏｓｓｏｆｈｅｔｅｒｏｚｙｇｏｓｉｔｙ，ＬＯＨ）。结果：２例可提供信息的原位癌病例中ＬＯＨ频率为２／２，４４例可提供信息的浸润期喉癌病例中ＬＯＨ频率为６６％（２９／４４）。研究表明，在染色体９ｐ２１区域存在与喉癌发生发展密切相关的抑癌基因，该区域抑癌基因失活是喉癌发生发展的早发事件     

喉癌P_（53）蛋白表达的临床意义

以免疫组化方法，用单克隆抗体ＤＯ－７检测了３８例喉鳞癌和２９例喉部良性病变组织中的突变型Ｐ＿（５３）蛋白的表达情况。结果显示：①６６％（２５／３８）的喉鳞场中检出突变型Ｐ＿（５３）蛋白，喉良性病变突变型Ｐ＿（５３）蛋白的阳性率仅为７％（２／２９）。突变型Ｐ＿（５３）蛋白在喉癌中的高比率表达与喉癌的发生有关。以该蛋白是否表达作为喉癌的诊断和鉴别诊断的辅助依据，具有一定价值。②在部分喉鳞场的癌旁呈不典型增生的上皮中，也可见突变型Ｐ＿（５３）蛋白的表达。癌旁组织中已发生Ｐ＿（５３）基因突变的细胞可能是肿瘤复发的根源或先兆。③突变型Ｐ＿（５３）蛋白阴性的喉癌患者５年生存率比阳性患者高。其表达具有一定预后意义。     

内皮素-1在喉癌组织中的表达

目的：研究内皮素-1（ET-1）在喉癌组织中的表达及其意义。方法：采用免疫组织化学SP法检测30例喉癌组织、20例喉良性病变组织及10例喉正常黏膜中ET-1的表达，结合喉癌临床分期进行统计学分析。结果：ET-1在3种组织中的阳性表达均差异有统计学意义（均P〈0．05），其中在喉癌组织中表达最高，喉正常组织中表达最低。ET-1在喉癌各临床分期标本中的表达均差异有统计学意义（均P〈0．05），分期越晚，表达越高。结论：ET-1在喉癌中呈高表达，对喉癌的发生、发展可能发挥重要作用。     

人喉组织中PD4和CD44以及PCNA蛋白的检测及临床意义

目的:检测支原体单克隆抗体PD4、黏附分子CD44和增殖细胞核抗原PCNA蛋白在人喉癌组织中的表达,探讨其在人喉癌发生、发展及预后中的作用.方法:采用免疫组织化学Envision法检测214例喉不同病变组织标本(喉癌140例,喉癌前病变25例,声带息肉36例和癌周正常喉组织13例)中PD4、CD44及PCNA蛋白的表达.结果:①PD4、CD44、PCNA在人喉癌组织中表达阳性率分别为45.71%(64/140)、64.29%(90/140)、77.86%(109/140),明显高于喉其他不同病变组织(P<0.01);②PD4、CD44阳性表达率在中晚期(Ⅲ-Ⅳ期)喉癌组织中均显著高于早期(Ⅰ-Ⅱ期) 喉癌组织,在伴颈淋巴结转移的喉癌组中阳性表达率均显著高于无颈淋巴结转移的喉癌组,喉癌术后3年或5年存活病例表达阳性率明显低于未存活病例(P<0.01或P<0.05);③PD4、CD44、PCNA在人喉癌组织中联合表达阳性率为27.86%(39/140),显著高于喉其他不同病变组织中联合表达阳性率(5.41%,P<0.01).结论:PD4、CD44及PCNA在喉癌组织中的高表达与人喉癌的发生、发展及预后有一定的相关性.     

抑癌基因PTEN在喉癌中的表达及临床意义

目的：研究抑癌基因PTEN在喉癌组织中的表达及其临床意义。方法：应用免疫组织化学SP法，检测PTEN在68例喉鳞状细胞癌组织（喉癌组）及33例癌旁正常黏膜组织（对照组）中的表达。结果：①喉癌组PTEN蛋白阳性表达率为61．8％（42／68），对照组为100．0％（33／33），喉癌组PTEN蛋白阳性表达率显著低于对照组（P＜0．01）。②PTEN蛋白阳性表达与喉癌临床病理特征的关系：高、中分化组与低分化组之间PTEN蛋白阳性表达率比较（79．3％：48．7％）差异有统计学意义（P〈0．01）；淋巴结转移者PTEN蛋白阳性表达率（55．0％）显著低于无淋巴转移者（71．4％）（P＜0．05）；根据临床病理分期，Ⅰ加Ⅱ期与Ⅲ加Ⅳ期之间PTEN蛋白阳性表达率（76．0％：53．5％）差异有统计学意义（P＜0．05）；随临床分期增加、喉癌分化程度降低及淋巴结的转移，PTEN蛋白阳性表达率逐渐降低。另外，PTEN蛋白阳性表达与患者年龄、性别、肿瘤组织大小及部位无关（P〉0．05）。结论：抑癌基因PTEN在喉癌的发生及发展中起重要作用，对其蛋白的检测可作为判定喉癌发生及侵袭转移能力的一项客观指标。     

Association between p53 gene mutations and tobacco and alcohol exposure in laryngeal squamous cell carcinoma

OBJECTIVES: To analyze the relationship between p53 gene mutations, tobacco smoke, and alcohol consumption in patients with laryngeal squamous cell carcinoma. DESIGN: We analyzed p53 gene mutations in exons 5 through 8 by polymerase chain reaction-single-strand conformation polymorphism analysis in a cohort of 84 patients with laryngeal squamous cell carcinoma. SETTING: University hospital. RESULTS: p53 gene mutations were detected in 24 (28.6%) cases (95% confidence interval, 19.3%-39.5%), and the GC to TA transversion (33%) was the most common type of mutation (95% confidence interval, 15.6%-55.3%). Most mutations mapped to the p53 DNA-binding domain, which is necessary for the physiological activity of p53 as a tumor suppressor. A statistically significant association was found between p53 mutations and exposure to tobacco smoke (P=.001), which was the only variable significantly associated with p53 mutations in a multivariate model. The association with alcohol consumption was only at a borderline level of significance (P=.065). CONCLUSION: Our data document that a smoking habit is the only independent variable associated with an increased risk of p53 mutations in the laryngeal mucosa.     

肿瘤浸润抑制因子在喉癌复发及转移中的作用

目的 :研究肿瘤浸润抑制因子 (E cadherin)在喉癌复发、转移中的作用 ,以探讨喉癌复发转移的机制。方法 :利用PCR、PCR SSCP等分子生物学方法 ,检测E cadherin基因第 5、7对外显子在喉癌组织中的基因突变。结果 :正常喉组织有E cadherin基因表达 ,无基因突变 ;癌旁组织第 5对外显子突变率为 2 .5 %。第 5、7对外显子在喉复发癌组织中的基因突变率分别为 2 8.5 7%、0 % ;淋巴结转移阳性组分别为 4 7.0 6%、64.71% ,淋巴结转移阴性组分别为 0 %、6.2 5 % ;且基因突变率随肿瘤TNM临床分期而增高。结论 :通过对喉癌组织中E cadherin基因突变的检测 ,可以判断肿瘤复发、转移的倾向性 ;E cadherin基因突变可能是喉癌复发、转移的分子机制之一     

喉鳞癌P_（53）基因突变与癌恶性度的关系

应用结合聚合酶链反应的单链多态性分析（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）及ＤＮＡ序列分析（ＰＣＲ－ＤＮＡＳｅｑｕｅｎｃｉｎｇ）方法，检测６０例喉鳞癌石蜡包埋组织中Ｐ＿（５３）基因第５～第８外显子的突变。发现１９例发生Ｐ＿（５３）基因的点突变或碱基缺失，均引起氨基酸改变；临床ＩＩＩ、ＩＶ期的突变检出率为５０％，远高于Ｉ、ＩＩ期检出率（１２．５％、２２．２％）低分化癌突变检出率为６６．６％，高于中、高分化癌（４０．９％、１３．８％）。结果说明，Ｐ＿（５３）基因突变与喉鳞癌恶性度密切相关。应用上述敏感快速的方法检测Ｐ＿（５３）基因突变对判断喉癌恶性度及估计预后有参考意义。     

喉及下咽鳞状细胞癌的ras基因突变热点的研究

目的 :研究 ras基因 ( N-ras,K-ras,H-ras)第 1 2密码子在喉及下咽癌组织中的突变情况。方法 :采取多聚酶链延伸反应 -限制性片段长度多态性分析 ( polymerase chain reaction-restricted fragmentlength polymorphism,PCR-RFLP)方法 ,对 3 7例喉癌、下咽癌手术标本进行三种 ras基因测定。结果 :三种 ras基因的 1 2位密码子在喉癌及下咽癌组织中的突变率为 3 5.1 % ,其中 N-ras基因的 1 2密码子突变率为 1 6.2 % ( 6/3 7) ,K-ras变突率为 1 3 .5% ( 5/3 7) ,H-ras基因的突变率为 5.4 % ( 2 /3 7)。其突变率与喉癌、下咽癌组织分化类型和分化程度无明显相关性。结论 :ras基因第 1 2密码子是喉癌、下咽癌的突变热点。     

喉鳞状细胞癌蛋白酪氨酸磷酸酶基因第5和第8外显子的突变分析

目的 探讨蛋白酪氨酸磷酸酶(phosphatase and tensin homology deleted on chromosome 10／mutated in multiple advanced cancer1／TGF-β regulated and epithelial cell-enriched phosphatase,PTEN／MMAC1／TEP1,以下简称PTEN)基因突变与喉鳞状细胞癌(简称鳞癌)的关系。方法 应用聚合酶链反应一单链构象多态性(polymerase chain reaction-single-strand conformation polymorphism,PCR-SSCP)分析银染系统和PCR产物直接测序技术,检测喉鳞癌新鲜或冰冻组织中PTEN基因第5、第8外显子的突变情况,对有电泳迁移率改变的进行PCR产物测序。结果 第5、第8外显子的突变均发生在声门上型喉癌,声门型喉癌未发现突变。其中,第5外显子有6例发生突变,突变率15%(6／40)。直接测序发现2例在85密码子第2、3碱基子之间发生了插入A突变,即TT→TAT,2例86密码子第3碱基缺失一个A,从而导致移码突变;1例同时存在以上两种突变,导致错义突变;1例85密码子第2、3碱基之间插入A,同时86密码子第2碱基缺失,即GCA→GA导致无义突变。这6例中有低分化3例,中分化3例,无高分化;淋巴结转移5例占83．3％(5／6),无淋巴结转移1例,占16．7%(1／6)。第8外显子仅有1例发生突变,突变率为2．5％(1／40),直接测序发现276密码子第2碱基A缺失,即AAT→AT．336密码子与337密码子之间插入1个C,该病例虽无淋巴结转移,但病理为低分化。结论 PTEN基因第5外显子中85、86密码子在人喉鳞状细胞癌中突变率较高,该基因突变可能与喉鳞癌淋巴结转移及病理中、低分化有关。     

K-ras基因在人喉鳞状细胞癌细胞株 Hep-2中的表达及其意义

目的：探讨K—ras基因在喉鳞状细胞癌细胞株Hep-2中的表达及其意义，为喉癌的发生与K-ras点突变的相关性研究奠定基础。方法：采用RT—PCR技术检测K—ras基因mRNA在喉癌细胞株Hep-2和胰腺癌细胞株MIAPaCa-2中的表达。结果：人胰腺癌细胞株MIAPaCa-2和人喉鳞状细胞癌细胞株HeP-2中K—ras mRNA表达均为强阳性。结论：人喉鳞状细胞癌细胞株Hep-2中K—ras基因表达阳性，喉癌的发生可能与其点突变引起的激活有关。     

凋亡抑制因子Survivin在喉癌中的表达及其意义

检测凋亡抑制因子Survivin在喉癌组织中的表达及其与喉癌的临床、病理特性之间的关系。方法：取石蜡包埋喉鳞状细胞癌标本33例，声带息肉21例，应用免疫组化SABC法检测Survivin在喉癌和声带息肉组织中的表达。结果：Survivin在喉癌组织中的表达率为63.6%,在声带息肉组织中的表达率为28.6%,二者有统计学差异（P<0.05）。而Survivin的表达与喉癌的临床分期、组织学分级、淋巴结转移和患者年龄、性别等无关。结论：凋亡抑制因子Survivin在喉癌组织中高表达，在声带息肉中低表达，与喉癌的发生、发展密切相关。     

p16基因突变与喉癌生物学行为的相关性

目的 :研究 p16基因突变与喉癌生物学行为及预后的关系。方法 :应用 PCR- SSCP对 2 4例喉癌组织及 10例喉部良性病变组织中 p16基因 (exon2 )进行检测。结果 :喉癌突变检出率为 6 2 .5 % (15 / 2 4) ,而且随着组织分化程度、浸润范围和淋巴结转移的不同而不同 ;喉部良性病变无一例突变。结论 :p16基因突变与喉癌的多种生物学行为有明显关系 (P≤ 0 .0 5 ) ;这种关系有助于判断喉癌的恶性程度及预后。 PCR- SSCP检测喉癌突变 ,具有敏感、简便、重复性好 ,快速而经济等优点 ,是一种适用于临床样本筛选的方法。     

喉乳头状瘤HPV16/18感染与p53蛋白表达的相关性

目的：了解喉乳头状瘤组织内ＨＰＶ１６／１８的感染与抑癌基因ｐ５３变异的关系,以及ＨＰＶ感染在喉乳头状瘤发病中的作用。方法：采用ＰＣＲ和免疫组化技术,检测３５例喉乳头状瘤组织中ＨＰＶ１６／１８ＤＮＡ及ｐ５３蛋白的表达。结果：２４例组织中检出ＨＰＶ１６／１８ＤＮＡ（６８．６％）;１９例ｐ５３蛋白呈过度表达（５４．３％）;在１２例中同时检出ＨＰＶ１６／１８ＤＮＡ和ｐ５３蛋白过度表达（３４．３％）。结论：