多重PCR检测方法在儿童流感样病例病原检测中的临床价值（附94例报告）

目的　探讨多重聚合酶链反应（PCR）检测方法在儿童流感样病例病原检测中的临床应用价值,了解儿童流感样病例病原情况。方法　收集2018年11月至2019年2月北京地区94例儿童流感样病例咽拭子标本,采用多重PCR核酸检测技术测定甲型流感病毒（InfA）、 甲型流感病毒H1N1（InfA-H1N1）、 甲型流感病毒H3N2（InfA-H3N2）、 乙型流感病毒（InfB）、 人副流感病毒、 呼吸道合胞病毒（RSV）、 人腺病毒（HADV）、 人鼻病毒（HRV）、 人博卡病毒、 人偏肺病毒（HMPV）、 人冠状病毒（HCoV）和肺炎支原体（MP）、 衣原体13种病原核酸。结果　94例标本中78例（82.98%）可测出病原,其中69例（73.40%）检出1种病原,9例（9.57%）检出2种病原; 94例标本中52例（55.32%）检出流感病原,26例（27.66%）检出非流感病原。单一病原检出由多到少为InfA-H1N1 31例,InfA-H3N2 10例,RSV 9例,HMPV 7例,InfA、 HRV、 HADV各3例,InfB、 HCoV及MP各1例。9例检出2种病原的标本中,6例检出流感分别合并其他病毒（HRV、 HADV、 RSV、 HCoV、 HMPV）,1例检出甲流H1N1和H3N2,2例分别检出RSV、 HRV及HCoV、 HADV。结论　非流感病原微生物引起流感样病例并不少见,多重PCR检测有助于全面了解流感样病例的病原和混合感染情况。     

新型呼吸道病毒在PICU的检出及其临床意义

目的了解新型呼吸道病毒在PICU中的检出情况及感染患儿的临床特点。方法收集我院600例PICU急性呼吸道感染患儿的咽拭子标本600份,87例社区健康体检儿童咽拭子87份作为健康对照。应用多重PCR技术对新型呼吸道病毒进行检测,部分阳性结果进行基因测序,并分析阳性病例的临床资料。结果（1）600例患儿中,新型呼吸道病毒检测阳性114例（19％）,其中人博卡病毒（humanbocavirus,HBoV）48例（8．00％）,C型鼻病毒（humanrhinovirusgroupC,HRV—C）47例（7．83％）,新型甲型流感H1N1病毒13例（2．17％）,人偏肺病毒（humanmetapneumovirs,HMPV）10例（1．67％）,wu多瘤病毒3例（0．50％）。87例健康儿童呼吸道病毒检测均为阴性。（2）114例新型呼吸道病毒检测阳性患儿中,单一感染69例,混合感染45例,其中HBoV混合其他病毒感染22例（45．83％,22／48）,HRV—C混合其他病毒感染14例（29．78％,14／47）,新型甲型流感H1N1病毒混合其他病毒感染4例（4／13）,HMPV混合其他病毒感染9例（9／10）,wu多瘤病毒混合其他病毒感染3例（3／3）。结论PICU中HBoV、HMPV、HRV—C、新型甲型流感H1N1病毒等新型呼吸道病毒具有较高的检出率,可能导致重症感染,应该引起临床重视。     

流感病毒快速检测方法在儿童流感样病例病原诊断中的应用

目的 对一种流感病毒快速检测方法在儿童流感样病例病原诊断中的应用效果进行评估。方法 2010年12月至2011年4月采集流感样病例患儿咽拭子标本350例,使用甲型及乙型流感病毒抗原检测试剂盒（QuickNaviTM-Flu,胶乳免疫层析法）进行抗原检测,并与病毒分离法进行比较。对于抗原检测和病毒分离法结果不相符的标本采用RT-PCR验证。结果 QuickNaviTM-Flu抗原快速检测流感病毒的结果与病毒分离法的一致性好,其检测甲型流感病毒的敏感度为89.9%,特异度为94.4%。经RT-PCR验证,14例抗原检测与病毒分离法结果不相符样本中13例结果为阳性(与抗原检测一致),使得该抗原检测方法的敏感度和特异度升至91.0%和99.6%。抗原检测乙型流感病毒经RT-PCR验证前后的结果一致,敏感度和特异度分别为87.5%和100%。该方法检测出的阳性标本中包括了甲3型、乙型（Victoria和Yamagata系）流感病毒和新发的2009甲型H1N1,并与常见的呼吸道病毒之间无交叉反应。结论 QuickNaviTM-Flu作为流感病毒抗原检测的试剂盒,可一次同时检测出甲型和乙型流感病毒,耗时短,操作简便,具有良好的敏感度和特异度,适用于流感样病例病原的快速诊断。     

2009 甲型H1N1流感流行期间北京急性呼吸道感染儿童常见呼吸道病毒的研究

目的 了解2009至2010年甲型H1N1流感大流行期间北京地区急性呼吸道感染患儿中,除流感病毒外的其他几种常见呼吸道病毒感染的流行情况。 方法 设计并建立检测包括呼吸道合胞病毒（RSV）A/B亚型,副流感病毒(PIV)1、2、3型,腺病毒(ADV)和人博卡病毒(HBoV)在内的多重实时荧光PCR方法,并应用该方法对2009年6月至2010年2月甲型H1N1流感大流行期间,对首都儿科研究所附属儿童医院就诊的急性呼吸道感染患儿中甲型H1N1流感病毒检测阴性的咽拭子标本进行上述呼吸道病毒的核酸检测。 结果 新建立的多重RT-PCR方法最低可检测的目标基因含量为10~300拷贝数,未见与其他非目标病毒的交叉反应。本研究共检测标本849份,病毒检测总阳性率为39.0%（331份）,5岁以下占87.6%（290/331份）。各病毒的检测阳性率分别为RSV-A亚型1.4%（12份）,RSV-B亚型8.4%（71份）,PIV-1型8.2%（70份）,PIV-2型0.5%（4份）,PIV-3型3.9%（33份）,ADV 13.9%（118份）,HBoV 2.7%（23份）。 RSV检出以B亚型为主（85.5%）,流行高峰在2009年11月至2010年2月。PIV检出以PIV-1型及PIV-3型为主,PIV-1型的流行高峰在2009年7月至2009年10月,PIV-2型及PIV-3型的流行高峰在2009年6～9月。ADV病毒在研究期间均有较高检出率（平均为13.9%）,HBoV的流行高峰在2009年9～12月。 结论 除流感病毒外,ADV、RSV-B及PIV可能也是2009甲型H1N1流感流行期间引起儿童急性呼吸道感染的重要病原。比较以往的资料可见各病原在2009甲型H1N1流感流行期间的流行季节性及检出率基本未受到新型流感病毒的影响。     

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目的了解北京地区门诊儿童急性呼吸道感染的病毒病原学特点。方法 2010年3月至2011年2月在北京儿童医院门诊就诊的急性呼吸道感染患儿540例,每例患儿采集咽拭子标本1份。采用多重PCR试剂检测常见呼吸道病毒核酸,包括呼吸道合胞病毒(RSV)A、B型,鼻病毒(RV),副流感病毒(PIV)1～4型,流感病毒(IFV)甲、乙型,腺病毒(ADV),人偏肺病毒(HMPV),人冠状病毒(HCoV),人博卡病毒(HBoV)及肠道病毒(EV)。结果 540例门诊采集的急性呼吸道感染患儿的咽拭子标本中,306例检出至少1种病毒,总阳性率56.7%。其中33例检出2种病毒,1例检出3种病毒,混合感染率为6.3%。各种病毒中,IFV检出率最高占16.7%,其次是ADV(12.8%),EV(7.8%),PIV(7.2%),。IFV中以甲型IFV为主(占95.6%),PIV中以PIV3型为主(占66.7%),RSV检出以RSVA型为主,占79.3%。结论病毒是引起儿童急性呼吸道感染的重要病原,北京儿童医院急性呼吸道感染的主要病毒病原是IFV、ADV、EV、PIV。     

2005年苏州地区呼吸道感染儿童中流感病毒的检测与分析

目的对2005年苏州地区呼吸道感染儿童中流感病毒进行流行季节的监测和分析。方法用直接免疫荧光法（DFA）结合胶体金免疫技术对患儿鼻咽分泌物进行流感病毒A、B型抗原检测（DFA同时也检测呼吸道合胞病毒RSV等病毒抗原）;用一步法逆转录聚合酶链（RT-PCR）反应对上述两法同时检出流感病毒A型者标本进行亚型鉴定;同时对确诊流感患儿血清用酶联免疫吸附法（ELISA）进行肺炎支原体（MP）抗体滴度测定。结果746例标本共检出流感病毒58株,其中A型47株（H1亚型28株、H3亚型19株）,B型11株（1株为A与B混合）,总阳性检出率7.77%,与2001年（16.75%）比较,差异有统计学意义（P〈0.01）;流感病毒与RSV等混合感染率为18.97%、与MP混合感染率为27.59%;2005年流感病毒检出率女童高于男童（P〈0.05）,高发年龄集中于3～7岁。结论2005年苏州地区儿童流感发病较稳定,10月份后优势株由H3亚型转为H1亚型;流感病毒易出现与MP、RSV混合感染现象;2005年苏州地区流感儿童发病以3岁以上女童占明显优势,与往年无明显性别差异。     

儿童甲型H1N1流感病毒肺炎的胸部影像学特征

<正>2009年3月墨西哥暴发甲型HIN1流感疫情,随后出现了全球大流行。此次疫情的病原为变异后的新型甲型H1N1流感病毒,人类普遍易感[1-2]。甲型H1N1流感是一种急性呼吸系统传染病,多数病例临床表现温和,少数病例病情进展迅速,可出现病毒性肺炎,合并呼吸衰竭、多脏器功能损伤,严重者可导致死亡。据文献报道,甲型H1N1流感病毒性肺炎患者中71%为严重肺炎,发生年龄为5～59岁[3],     

225例支气管哮喘急性发作患儿呼吸道病原体检出及临床特征分析

目的 分析支气管哮喘急性发作患儿的呼吸道病原体检出情况及临床特征。方法 收集2017年8月至2019年8月门诊及住院支气管哮喘急性发作的225例 < 14岁患儿的鼻咽拭子，采用荧光定量PCR法检测12种病原体，包括呼吸道合胞病毒（RSV）、人鼻病毒（HRV）、流感病毒A（IFVA）、流感病毒B（IFVB）、副流感病毒1~3型（PIV1~3）、人偏肺病毒（HMPV）、腺病毒（ADV）9种病毒，以及百日咳杆菌（BP）、肺炎衣原体（CP）、肺炎支原体（MP）。结果 病毒总检出阳性率为46.2%（104/225），共检出7种病毒，依次为HRV（19.6%，44/225）、ADV（16.0%，36/225）、IFVB（5.8%，13/225）、RSV（4.9%，11/225）、IFVA（3.6%，8/225）、PIV3（1.8%，4/225）、HMPV（0.4%，1/225）。所有病原体中BP检出率最高，为28.4%（64/225），MP检出率为16.4%（37/225），CP检出率为0.4%（1/225）。哮喘轻度发作组BP检出率高于重度发作组（P < 0.05）；重度发作组RSV和MP检出率高于轻度发作组（P < 0.05）。单纯BP感染、单纯病毒感染、单纯MP感染3组间阵发性咳嗽、痉挛样咳嗽、发热、肺部啰音的患儿比例及肺部影像阳性检出率的比较差异有统计学意义（P < 0.05）。结论 支气管哮喘急性发作患儿常见的呼吸道病原体为BP、HRV、MP；呼吸道病毒感染是儿童哮喘急性发作的重要病原体。不同病原体引起哮喘急性发作的临床特征及严重程度有一定差异。     

甲型H1N1流感重症患儿继发性免疫功能低下

<正>2009年,我国多个地区均有甲型H1N1流感病毒感染病例的报告,此次流感为一种新型呼吸道传染病,其病原为新型甲型H1N1流感病毒。流行病学观察已经提示,在流感大流行期间或大流行间期,儿童受大流感袭击的可能性最大,而在社区中流感     

人感染甲型H1N1流感病毒的研究进展

2009年4月以来,包括墨西哥、美国和加拿大在内的许多国家发生了人感染甲型H1N1流感病毒疫情,WHO已于2009年4月29日将此次流感流行的预警级别不断提升至5级。现已基本明确,引起此次流感疫情的甲型H1N1流感病毒是猪流感病毒（swine influenza virus,SIV）的一种新型变异株。     

儿童急性呼吸道感染病毒感染特点分析

目的分析儿童急性呼吸道感染患儿腺病毒(AdV)感染特点。方法 2009年5月至2009年6月北京儿童医院门诊急性呼吸道感染患儿共492例,入选患儿在就诊当日采集咽拭子标本1份,采用逆转录(RT)-PCR方法进行常见呼吸道病毒核酸检测,包括呼吸道合胞病毒(RSV),鼻病毒(RV),副流感病毒(PIV)1-4型,流感病毒甲型及乙型(IFA、IFB),腺病毒(AdV),肠道病毒(EV),人冠状病毒(HCoV),人偏肺病毒(HMPV)及人博卡病毒(HBoV)。AdV核酸扩增阳性片段进行克隆测序,对序列进行Blast和进化分析以对AdV进行分型。结果 492例急性呼吸道感染患儿的咽拭子标本中,165例检出至少1种病毒,总阳性检出率为33.5%。其中53份检出AdV,检出率为10.8%,在所有检出病毒中阳性率最高。53份AdV阳性标本中共检出3个亚组,7个血清型,以3型(23/53)为主,其次是7(8/53)型和1型(7/53)。结论 2009年春季北京地区AdV有多个血清型流行,以3型为主。AdV仍然是儿童呼吸道感染的重要病原。     

225例支气管哮喘急性发作患儿呼吸道病原体检出及临床特征分析

目的 分析支气管哮喘急性发作患儿的呼吸道病原体检出情况及临床特征。方法 收集2017年8月至2019年8月门诊及住院支气管哮喘急性发作的225例 < 14岁患儿的鼻咽拭子,采用荧光定量PCR法检测12种病原体,包括呼吸道合胞病毒（RSV）、人鼻病毒（HRV）、流感病毒A（IFVA）、流感病毒B（IFVB）、副流感病毒1~3型（PIV1~3）、人偏肺病毒（HMPV）、腺病毒（ADV）9种病毒,以及百日咳杆菌（BP）、肺炎衣原体（CP）、肺炎支原体（MP）。结果 病毒总检出阳性率为46.2%（104/225）,共检出7种病毒,依次为HRV（19.6%,44/225）、ADV（16.0%,36/225）、IFVB（5.8%,13/225）、RSV（4.9%,11/225）、IFVA（3.6%,8/225）、PIV3（1.8%,4/225）、HMPV（0.4%,1/225）。所有病原体中BP检出率最高,为28.4%（64/225）,MP检出率为16.4%（37/225）,CP检出率为0.4%（1/225）。哮喘轻度发作组BP检出率高于重度发作组（P < 0.05）;重度发作组RSV和MP检出率高于轻度发作组（P < 0.05）。单纯BP感染、单纯病毒感染、单纯MP感染3组间阵发性咳嗽、痉挛样咳嗽、发热、肺部啰音的患儿比例及肺部影像阳性检出率的比较差异有统计学意义（P < 0.05）。结论 支气管哮喘急性发作患儿常见的呼吸道病原体为BP、HRV、MP;呼吸道病毒感染是儿童哮喘急性发作的重要病原体。不同病原体引起哮喘急性发作的临床特征及严重程度有一定差异。     

哮喘高危婴幼儿喘息发作期病毒病原及过敏原检测分析

目的分析哮喘高危婴幼儿喘息发作期病毒病原学、过敏原分布，为喘息患儿的早期诊断与干预治疗提供帮助。方法选取2016年4月至2017年8月因喘息性支气管炎和喘息性支气管肺炎住院的135例哮喘高危婴幼儿为研究对象。采用荧光探针PCR法检测患儿鼻咽部抽吸物标本甲型流感病毒（Flu-A）、呼吸道合胞病毒（RSV）、腺病毒（ADV）、副流感病毒（PinF）、人鼻病毒（HRV）、人偏肺病毒（hMPV）、博卡病毒（HBoV）感染情况；采用ImmunoCAP技术检测患儿吸入性变应原、食物性变应原及总IgE浓度。结果 135例患儿中，鼻咽部抽吸物标本病毒检出阳性率为49.6%，各病毒检出阳性率由高到低依次为HRV 25.2%、HBoV 9.6%、RSV 8.1%、PinF 5.9%、Flu-A 3.7%、ADV 1.5%、hMPV 0.7%。HRV在1~3岁年龄组检出率高于<1岁组（P < 0.05）。过敏原筛查试验阳性率为59.3%，吸入性过敏原阳性率为44%，食物性过敏原阳性率为89%；吸入性过敏原中阳性率由高到低依次为尘螨77%、霉菌37%、花粉26%、动物皮屑9%；食物性过敏原中阳性率由高到低依次为鸡蛋白73%、牛奶68%。<1岁组吸入性过敏原阳性率大于1~3岁组（P < 0.05）；1~3岁组T-IgE水平明显高于<1岁组（P < 0.05）。病毒检出组吸入性过敏原阳性率大于病毒未检出组（P < 0.05）。第2次喘息患儿吸入性、食物性过敏原阳性率及T-IgE水平均高于第1次喘息患儿（P < 0.05）；吸入性过敏原尘螨、霉菌在第2次喘息患儿中阳性率高于第1次喘息患儿（P < 0.05）。结论早期HRV感染和吸入性过敏原阳性与哮喘高危婴幼儿喘息发生密切相关。     

甲型H1N1流感大流行的机遇与挑战

自2009年4月北美首次发现甲型H1N1流感病毒以来,该新型猪源病毒已播散至全球,引起21世纪首次流感大流行,对人类健康产生巨大威胁[1-2].与季节性流感不同,本次甲型H1N1流感大流行是由一种整合了古典猪流感、欧亚猪流感、禽流感和人季节性H3N2流感病毒基因的新型四源重组毒株引起.免疫系统包括先天性免疫和获得性免疫系统,在构建了人体对流感病毒的防御体系的同时,也参与了流感病毒的致病机制.     

沈阳地区30例流行性感冒的病原学研究

目的确定１９９５年冬至１９９６年春沈阳地区发生的严重流行性感冒的病原。方法作者用逆转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ），对门诊上呼吸道感染病人咽拭子标本进行了４８小时短期培养后流感病毒基因检测。结果甲型流感病毒阳性率为６０％，确定为甲型流感病毒引起的流感流行。此病毒为一种在鸡胚尿囊腔不生长，不凝集鸡红细胞的“Ｏ”相甲型流感病毒。结论ＲＴＰＣＲ法检测咽拭子中流感病毒基因，为特异、敏感、快速、简便的诊断流感病毒感染的方法     

2009甲型H1N1流感研究进展

2009年3月在墨西哥出现了一种新型甲型H1N1流感病毒,这是一个四源重排的A型流感病毒:来源于猪流感病毒、禽流感病毒及人流感病毒.其临床特点与季节性流感相似,但重症病例可发生在无基础疾病的青壮年人,这与季节性流感不同,其高危人群为患有基础疾病者、孕妇及肥胖者.尽管已经出现了耐药毒株,但奥司他韦治疗仍然有效.该文主要对2009年流行的甲型H1N1流感病毒的基因特点、临床表现及治疗的最新进展进行综述.     

昆明地区2457例小儿急性下呼吸道感染病原学研究

目的 了解昆明地区不同年龄组小儿急性下呼吸道感染（ALRI）患儿细菌、呼吸道病毒感染病原谱及病原流行病学特点。方法 对昆明地区2457例ALRI住院患儿，抽取鼻咽分泌物培养检测细菌病原；应用直接免疫荧光法进行呼吸道合胞病毒（RSV）、腺病毒（ADV）、流感病毒（IFA、B型）、副流感病毒（PIV1、2、3型）七种病毒抗原检测。结果 2457例ALRI患儿标本中，检出阳性病原菌506株，阳性率20．6％（506／2457）；检出呼吸道病毒阳性病例587例，阳性率23．9％（587／2457）；新生儿（出生～28d）、婴儿（～1岁）、幼儿（～3岁）、儿童（～18岁）组病原联检阳性率分别为56．6％、46．8％、41．7％、15．3％，呼吸道病原总阳性率44．5％（1093／2457）；阳性病例中混合感染53例（婴儿49例），混合感染率4．8％（53／1093）。各年龄组细菌及病毒感染率比较差异均具有显著性（P〈0．01）。细菌病原中革兰阴性菌占83．0％，前三位依次为大肠埃希杆菌、肺炎克雷白杆菌、阴沟杆菌；病毒病原中RSV占阳性病毒株的86．0％，其他病毒病原呈散在流行，两年中未检出IFA病毒株。昆明地区小儿ALRI细菌感染无明显季节性，呼吸道病毒感染具有明显季节性，高峰流行季节在每年7月至次年2月，流行季节持续近8个月，两年间夏季呼吸道病毒感染率存在差异。结论 昆明地区各年龄组小儿ALRI的主要病原均以革兰阴性菌及RSV感染为主，年龄越小发病率及混合感染率越高；呼吸道病毒病原谱及流行季节存在地区差异。     

肺炎支原体肺炎患儿支气管肺泡灌洗液中肺炎支原体耐药基因和13种病原检测结果分析北大核心CSCD

目的:了解肺炎支原体肺炎(MPP)患儿支气管肺泡灌洗液(BALF)中肺炎支原体(MP)耐药基因和13种呼吸道病原的分布情况。方法:回顾性选择2018年1月至2019年1月北京大学第三医院和北京大学第一医院100例MPP患儿的BALF标本,采用荧光定量PCR法检测MP核酸及其耐药基因,采用多重PCR核酸检测技术测定甲型流感病毒、甲型流感病毒H_(1)N_(1)、甲型流感病毒H_(3)N_(2)、乙型流感病毒、人副流感病毒、腺病毒、人博卡病毒、人鼻病毒、肺炎衣原体、人偏肺病毒、MP、人冠状病毒和呼吸道合胞病毒核酸,采用 χ^(2)检验进行分析。 结果:100例BALF标本,荧光定量PCR法检测MP及耐药基因,83例(83.00%)MP阳性,其中78例(93.98%)耐药,均为23S rRNA结构域V区A2063G的点突变。多重PCR法检测13种呼吸道病原,89例(89.00%)阳性。79例(79.00%)检测到MP,其中74例(74.00%)仅检出MP,5例(5.00%)同时检出MP合并其他病原。10例(10.00%)检测出其他病原。0~4岁组病毒检出率高于>4~6岁组( P=0.042)和>6岁组( P=0.002),差异均有统计学意义。 结论:MPP患儿的BALF标本绝大部分可检测到MP,耐药现象严重,以A2063G的点突变为主。少数BALF标本中可检测到其他呼吸道病原和2种或3种病原。     

儿童甲型H1N1流感12例分析

目的 了解儿童甲型H1N1流感的特点.方法 回顾分析2009年5月1日至2009年7月15日复旦大学附属儿科医院发热门诊及病房诊治的12例甲型H1N1流感的流行特征及临床特点;采取患儿鼻咽拭子标本,冰壶保存立即送上海市疾病预防控制中心,采用实时逆转录核酸扩增聚合酶链反应(RT-PCR)进行甲型H1N1流感病毒核酸检测.结果 12例儿童甲型H1N1流感均为输入性病例,5例患儿有明确的甲型H1N1流感患者密切接触史.12例有发热症状,有咳嗽、流涕、食欲不佳症状的各为7例,1例有喘息症状,所有病例均无呕吐和腹泻.11例能准确表述自身感受的患儿中,均无肌肉酸痛,6例有咽痛,3例有腹痛.2例患儿并发肺炎,其中1例患儿病情危重.1例患儿居家隔离对症治疗,11例患儿住院治疗,均参照中国国家卫生部颁布的<甲型HINI流感诊疗方案(2009年试行版第一版)>进行治疗,其中10例息儿接受奥斯他韦抗病毒治疗,未见明显不良反应,所有患儿均痊愈.结论 儿童甲型H1N1流感的症状主要表现为典型的流感症状,大部分患儿临床过程轻微,及时隔离和治疗预后良好,奥斯他韦抗病毒治疗无明显副作用.儿童甲型H1N1流感的流行特征及临床特点尚需要多地区大样本的研究资料.     

三例儿童甲型H1N1流感临床诊断重症病例特点分析

2009年11月至2010年1月,我科收治了3例具有流感样症状的患儿,入院后病情迅速进展,出现肺渗出、实变,呼吸困难,由于疾控中心未能来采集标本进行病原学检测,故未有流感病毒的病原学资料,但结合流行病学特点,2例患儿学校中均有甲型H1N1流感(甲流)确诊病例报道,另1例与甲流患者有过密切接触,均符合甲流诊疗方案(2009年第三版)中临床诊断重症病例的标准[1].