99Tcm标记RGD环肽二聚体人神经胶质瘤显像及重组人血管内皮细胞抑制素对其影响的实验研究

目的 研究新型含RGD的环肽二聚体探针99Tcm-HYNIC-2聚乙二醇(PEG)4-Dimer { Dimer:E-[c(RGDfK)2]}作为整合素αvβ3受体显像剂的可行性,并观察重组人血管内皮细胞抑制素注射液(恩度)对标记探针在荷瘤裸鼠体内生物学分布及γ显像的影响.方法 选取整合素αvβ3受体表达阳性的人神经胶质瘤细胞株U87MG,免疫荧光检测U87MG经恩度处理后的整合素αvβ3受体表达情况.制备99Tcm-HYNIC-2PEG4-Dimer.建立荷U87MG神经胶质瘤裸鼠模型,并按简单随机法将其分为2组,恩度组给予200μl(1 mg)恩度,对照组给予同等体积的生理盐水,6h后注射99Tcm-HYNIC-2PEG4-Dimer,评价探针在2组荷瘤裸鼠体内的生物学分布.另取荷瘤裸鼠16只,分为恩度处理组和生理盐水组,分别按体质量给予20 mg/kg恩度和同等体积的生理盐水,给药后行γ显像.采用两样本t检验对实验数据进行统计分析.结果 99 Tcm-HYNIC-2PEG4-Dimer的放化纯大于95％.U87MG细胞高表达整合素αvβ3受体,经恩度处理后整合素αvβ3受体表达逐渐减低,恩度质量浓度为400 μg/ml时,表达程度最低.荷瘤裸鼠注射99Tcm-HYNIC-2PEG4-Dimer后90 min,肿瘤组织有较高摄取,给予恩度后肿瘤摄取减低,恩度组和对照组肿瘤摄取分别为(1.50±0.08) ％ID/g和(6.27±0.33) ％ID/g(t=40.23,P＜0.05);γ显像示2组T/NT比值分别为1.02±0.11和2.58±0.36(t=10.25,P＜0.05);免疫组织化学检查结果显示2组整合素αvβ3受体阳性表达率分别为(33.1±2.7)％与(81.5±3.2)％(t=32.60,P＜0.05).结论 99Tcm-HYNIC-2PEG4-Dimer可用于整合素αvβ3受体阳性肿瘤的显像,并可用于监测恩度疗效,有望用于筛选恩度治疗病例.     

^99Tc^m-精氨酸-谷氨酸-苏氨酸在荷人肺癌H1299裸鼠体内分布和显像

目的通过研究^99Tc^m-精氨酸-谷氨酸-苏氨酸（RET）在荷人肺癌H1299裸鼠体内的分布及显像,探讨其用于肺癌显像的可行性。方法采用^99Tc^m-直接法标记RET,再行^99Tc^m-RET与NSCLC细胞H1299的结合实验。荷人肺癌H1299裸鼠尾静脉注射^99Tc^m-RET后,行不同时间（15、30min,1、2．4、8、24、48h组各4只鼠）体内分布实验,分别测定组织放射性摄取（％ID／g）;另取荷瘤鼠3只,注射4．81MBq^99Tc^m-RET后于0．5、1、2、4．5、5、6h行γ显像。结果^99Tc^m-直接标记RET的标记率为（93．15±2．02）％,与H1299细胞的最高结合率为（3．56±0．37）％。荷瘤裸鼠尾静脉注射^99Tc^m-RET后4h肿瘤放射性摄取达（4．96±1．05）％ID／g,肝脏、脾脏有较多放射性摄取[（15．89±1．84）％ID／g和（10．83±1．66）％ID／g];而心脏和血液的放射性摄取较少,相应的T／NT分别为5．70±0．21和12．40±0．11。注射^99Tc^m-RET后4．5～6．0h肿瘤显影清晰。结论^99Tc^m-RET具有亲肺癌的特性,有可能成为一种亲肺癌显像剂。     

99Tcm标记RGD环肽四聚体在神经胶质瘤裸鼠模型中的显像研究

目的 制备99Tcm标记的含有精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(Arg-Gly-Asp,RGD)序列的环肽四聚体99Tcm-联肼尼克酰胺(HYNIC)-E{E[c(RGDfK)]2}2,评价其在整合素αvβ3表达阳性的荷人神经胶质瘤裸鼠模型的生物分布和显像.方法 以HYNIC为双功能螫合剂,以三羟甲基甘氨酸(tricine)和三苯基膦三磺酸钠(TPfffS)为协同配体,采用两步法制备99Tcm-HYNIC-E{E[c(RGDfK)2}2.通过体外受体竞争结合实验比较e(RGDyK)单体、HYNIC-E[c(RGDfK)2二聚体和HYNIC-E{E[c(RGDfK)]2}2四聚体与整合素αvβ3亲和力.生物分布实验数据显示,99Tcm-HYNIC-E{E[c(RGDtK)]2}2主要经肾排泄;注射后1h,肿瘤对99Tcm-HYNIC-E{E[c(RGDfK)]2}2的摄取为99Tcm-HYNIC-E[c(RG-DfK)]2的2倍,分别为(10.32±0．07)％ID／g和(5.15±O.52)％ID／g,与体外受体竞争结合实验数据相一致;注射后4h,肿瘤对99Tcm-HYNIC-E{E[c(RGDfK)]2}2的摄取仍达(9.35.4±1.35)％ID／g,表明标记物在肿瘤中的滞留时间足够长.r显像结果显示,注射后1h肿瘤清晰可见.注射后4h显像效果更佳.结论 99Tcm-HYNIC-E{E[c(RGDfK)]2}2具有较高的肿瘤摄取和较长的肿瘤滞留时间,可以用于整合素αvβ3表达阳性肿瘤的显像;放射性核素(如90Y)标记的RGD环肽四聚体可用于整合素(αvβ3表达阳性肿瘤的治疗.     

喉和鼻咽鳞状细胞癌整合素αvβ3放射性核素显像实验研究

目的 研究99Tcm标记的聚乙二醇(PEG)4修饰的环状RGD二聚体(99Tcm-3P-RGD2)显像用于检测人喉和鼻咽鳞状细胞癌(简称鳞癌)整合素αvβ3表达的可靠性.方法 对荷人HEP-2喉鳞癌、荷人CNE-1鼻咽鳞癌裸鼠各6只进行99Tcm-3P-RGD2平面显像,采用勾画ROI技术计算T/NT.显像结束后,测量99Tcm-3P-RGD2在荷瘤鼠体内的放射性分布,计算肿瘤与各组织器官的％ID/g.取肿瘤组织,行整合素αvβ3免疫组织化学染色,并参照Fromowitz法进行半定量分析.两组间比较采用独立样本t检验,相关性分析采用线性相关法.结果 荷HEP-2、CNE-1裸鼠2h显像时T/NT 分别为2.08±0.04与1.54±0.10.体内放射性分布示:HEP-2肿瘤2h放射性摄取值为(4.56±0.67)％ID/g,肿瘤与血液、肌肉的T/NT分别为6.37±0.68与4.44±0.42;CNE-1肿瘤2h放射性摄取值为(1.69 ±0.18) ％ID/g,肿瘤与血液、肌肉的T/NT分别为2.49±0.09与1.86±0.07.HEP-2、CNE-1肿瘤αvβ3免疫组织化学染色Fromowitz评分分别为4.97±0.37与2.60±0.36.荷HEP-2裸鼠2h显像时T/NT、％ID/g及免疫组织化学染色Fromowitz评分均显著高于荷CNE-1裸鼠(t值分别为11.83、7.17和11.31,P均＜0.05).2种荷瘤鼠2h显像时T/NT与免疫组织化学染色Fromowitz评分的相关性均较好(HEP-2:r2h =0.97,P＜0.05;CNE-1:r'2h =0.97,P＜0.05).结论 99Tcm-3P-RGD2显像有望成为检测喉和鼻咽鳞癌αvβ3表达的无创和有效方法.     

99Tcm-3P-RGD2用于肺癌整合素αv β3表达水平检测的实验研究

目的 采用99Tcm-3聚乙二醇4-RGD2(3P-RGD2)评估小细胞肺癌和肺腺癌细胞荷瘤鼠动物模型中整合素αvβ3表达水平.方法 按试剂盒说明书制备99Tcm-3P-RGD2.选取H446人小细胞肺癌细胞进行受体竞争抑制实验,检测3P-RGD2与整合素αvβ3的特异亲和性.通过细胞摄取实验检测H446和A549人肺腺癌细胞对99Tcm-3P-RGD2的摄取情况,以流式细胞术和免疫荧光染色测定2种细胞中整合素αvβ3的表达.观察99Tcm-3P-RGD2在H446和A549肺癌荷裸鼠模型(各6只)的microSPECT/CT显像情况.显像后断颈处死裸鼠,取部分肿瘤组织制备单细胞悬液,以流式细胞术检测细胞整合素αvβ3表达;部分组织制成切片,以免疫组织化学法检测肿瘤组织整合素αvβ3的表达.采用配对t检验对实验数据进行统计学分析.结果 99Tcm-3P-RGD2标记率为(97.0±2.0)％,4h时后放化纯仍高达95％.3P-RGD2与整合素αvβ3特异性结合的半数抑制浓度(IC5o)为8.759 nmol/L.H446细胞对99Tcm-3P-RGD2的亲和性高于A549细胞,摄取率均于120 min达峰值,分别为(5.75±0.50)％和(3.35±0.28)％(t=9.324,P＜0.05).H446和A549肺癌细胞均表达整合素αvβ3,且H446高于A549[(18.01±2.83)％和(5.77±0.64)％,t=7.488,P＜0.05].免疫荧光染色示H446细胞整合素信号明显高于A549细胞.MicroSPECT/CT显像示注射99Tcm-3P-RGD2后3 h T/NT达最大值,H446荷瘤鼠T/NT比值为6.39±1.29,高于A549荷瘤鼠(3.62±0.33,t=6.869,P＜0.05).H446和A549肿瘤组织经流式细胞术检测,整合素αvβ3表达水平分别为(22.89±3.63)％和(10.23±1.94)％(t=13.967,P＜0.05).免疫组织化学检测结果示H446和A549肿瘤组织和新生血管内皮细胞均有整合素αvβ3表达.结论 99Tcm-3P-RGD2可用于整合素αvβ3阳性肺癌的显像,并可无创评估不同肺癌组织整合素αvβ3的表达水平.     

99Tcm标记新型RGD环肽在神经胶质瘤动物模型的实验研究

目的 评价引入2个聚乙二醇（PEG4）对精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸（RGD）环肽二聚体（Dimer：E[c（RGDfK）]2）体外受体结合亲和力和体内药代动力学特征的影响,以及99Tcm标记2PEG4-Dimer用于整合素αvβ3阳性肿瘤显像的前景.方法 用免疫组织化学实验测定U87MG人神经胶质瘤细胞以及肿瘤组织中整合素αvβ3的表达.通过U87MG细胞受体竞争结合实验测定RGD环肽单体c（RGDyK）、联肼尼克酰胺（HYNIC）-Dimer和HYNIC-2PEG4-Dimer对125I-c（RGDyK）的半数抑制浓度（IC50）.采用无亚锡一步法制备99Tcm-HYNIC-Dimer和99Tcm-HYNIC-2PEG4-Dimer,评价＂TcmHYNIC-2PEG4-Dimer在荷U87MG瘤裸鼠的生物分布并进行γ显像.采用非配对t检验法对实验数据进行分析.结果 U87MG细胞和荷瘤裸鼠肿瘤组织中高表达整合素αvβ3.HYNIC-2PEG4-Dimer比c（RGDyK）和HYNIC-Dimer有更高的整合素αvβ3亲和力（IC50分别是0.8,27和2.4 nmol/L）.99Tcm-HYNIC-Dimer和99Tcm-HYNIC-2PEG4-Dimer的99Tcm标记率均＞95%,经Sep-Pek C18柱纯化后其放化纯＞99%.生物分布实验显示,2种标记物均主要经肾排泄,在注射后2h,肿瘤对99Tcm-HYNIC-2PEG4-Dimer的摄取为99Tcm-HYNIC-Dimer的2.7倍[（5.71±0.96）%ID/g和（2.10±0.50）%ID/g],t=4.80,P＜0.05,与体外受体竞争结合实验数据相一致.γ显像结果显示,注射99Tcm-HYNIC-2PEG4-Dimer后0.5 h肿瘤即清晰可见,随时间延长,体内放射性本底明显减低,显像对比度增高.结论 99Tcm-HYNIC-2PEG4-Dimer有希望用于整合素αvβ3阳性肿瘤显像.     

荷瘤裸鼠整合素αv β3受体显像的实验研究

目的探讨99Tcm标记精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸（RGD）小分子多肽（GY11）作为肿瘤显像剂的可能性.方法利用SnCl2直接还原法进行GY11的^99Tcm标记.建立荷人黑色素瘤A375、肺癌H460和宫颈癌HeLa BALB/c裸鼠肿瘤模型,分别进行体内分布和肿瘤显像研究.结果GY11的^99Tcm标记率为80%.黑色素瘤A375荷瘤裸鼠体内分布显示,^99Tcm-GY11主要经肾脏快速从血液中清除,注射后2 h肿瘤摄取量为3.13%ID/g,肿瘤/血和肿瘤/骨骼肌比值随时间的推移而增加,注射后1和6 h比值分别为3.0、4.3和8.1、15.1.对于黑色素瘤A375和肺癌H460荷瘤裸鼠,^99Tcm-GY11静脉注射后2 h肿瘤均能清楚显示,24 h后显像更清晰;2 h后宫颈癌HeLa肿瘤能显影,但6 h后肿瘤放射性基本清除.结论^99Tcm-GY11有望成为肿瘤αvβ3受体显像剂.     

新型αvβ3和Neuropilin-1双靶点正电子成像探针18F-FAl-NOTA-RGD-ATWLPPR用于脑胶质瘤的PET显像研究

目的构建可靶向αvβ3和血管内皮生长因子受体Neuropilin-1（NRP-1）双受体的正电子成像探针,并验证双靶点融合肽探针较之单靶点探针的优越性。方法采用18F-氟化铝（18F-FAl）配合物的方法实现分子探针的18F标记。在人神经胶质瘤U87MG细胞中,检测αvβ3和NRP-1的表达水平,测定分子探针精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸（RGD）-丙氨酸-苏氨酸-色氨酸-亮氨酸-脯氨酸-脯氨酸-精氨酸（ATWLPPR）与αvβ3/NRP-1的受体-配体亲和力。在U87MG荷瘤裸鼠模型中,测定18F标记RGD-ATWLPPR的体内肿瘤micro-PET显像特性,并且与其对应单体进行比较分析。采用方差分析和t检验对结果进行统计学分析。结果αvβ3及NRP-1在U87MG肿瘤细胞、肿瘤组织及肿瘤新生血管中均有较高水平的表达。受体-配体亲和力测定的实验结果显示,18F-FAl-NOTA-RGD-ATWLPPR双靶点融合肽与αvβ3及NRP-1的亲和力并未明显优于其单体,但融合肽在U87MG细胞中的摄取高于相应的单体肽。Micro-PET显像结果显示,融合肽较其单体肽RGD[（4.86±0.48）% ID/g vs.（3.33±0.15）% ID/g,t=10.21,P < 0.05]和ATWLPPR[（4.86±0.48）% ID/g vs.（2.28±0.41）% ID/g,t=32.16,P < 0.05]表现出了更好的显像效果,且融合肽在αvβ3、NRP-1任一受体被未标记“冷”肽阻断的情况下仍能获得肿瘤的阳性显像结果。结论18F-FAl-NOTA-RGD-ATWLPPR可以灵敏地对整合素αvβ3和NRP-1中任何一个受体高表达的肿瘤进行显像,并且较其单体具有更高的肿瘤摄取,但该融合肽的受体-配体亲和力还有待进一步提高。     

^99Tc^m-TP5-3 microSPECT/CT探测乳腺癌化疗后细胞凋亡的实验研究

目的 合成新型凋亡显像剂^99Tc^m-半胱氨酸-膜联蛋白V（TP5-3）,研究其在小鼠体内生物分布和药代动力学特点,探讨^99Tc^m-TP5-3 microSPECT/CT检测乳腺癌单次化疗后肿瘤早期细胞凋亡的可行性.方法 以直接还原法对TP5-3进行^99Tc^m标记,HPLC检测产物的标记率;进行正常小鼠体内^99Tc^m-TP5-3的生物分布及药代动力学研究.建立荷MDA-MB-231人乳腺癌裸鼠模型,取10只分为2组,化疗组单次腹腔内注射紫杉醇（每只40 mg/kg）,对照组注射等体积生理盐水,48 h后由尾静脉注射37 MBq ^99Tc^m-TP5-3,进行microSPECT/CT图像采集,显像后立即处死、取材,比较2组肿瘤的放射性摄取（％ID/g）、T/NT（NT取肌肉）;采用流式细胞术和病理学检测肿瘤凋亡细胞.采用单因素方差分析、两样本t检验和直线相关分析数据.结果^99Tc^m-TP5-3标记率＞95％,室温放置4h放化纯仍保持在（96.0±1.5）％,稳定性好.正常小鼠注射显像剂后30 min肾脏放射性摄取最高[（8.48±1.07） ％ID/g],其他脏器分布较少;血液清除快,注射后4h血液放射性摄取[（2.07±0.35） ％ID/g]较注射后5 min[（13.74±4.21） ％ID/g]减少了85％（F=11.310,P＜0.05）;显像剂主要浓聚于肾、肝和胃,经肾脏排泄.化疗后99^Tc^m-TP5-3 microSPECT/CT显像示化疗组T/NT为4.21±0.06,对照组T/NT仅1.57±0.67（f=12.820,P＜0.05）;化疗后生物分布实验示,化疗组肿瘤放射性摄取明显高于对照组,分别为（4.82±0.54） ％ID/g和（1.44±0.38） ％ID/g（t=0.679,P＜0.05）.肿瘤放射性摄取与流式细胞仪测定的凋亡细胞百分比呈正相关（r=0.985,P＜0.05）.HE染色示化疗后肿瘤组织有大量凋亡细胞,而对照组仅有少量.结论 ^99Tc^m-TP5-3标记方法简单,生物分布理想,具备优良的药代动力学特性;^99Tc^m-TP5-3 microSPECT/CT可用于早期检测荷乳腺癌裸鼠模型化疗后的肿瘤细胞凋亡水平.     

新型肺癌分子探针^18F-氟丙酰-Lladtthhrpwt的合成及其小动物PET显像

目的制备^18F-氟丙酰．Lladtthhrpwt（18F-FP-ZS-6）,并观察其在荷人肺腺癌NCI-H1299裸鼠体内分布。方法利用噬菌体随机展示肽库筛选实验得到多肽Lladtthhrpwt（zs-6）,基于氟多功能化学合成模块PET．MF-2V-IT-I合成常用辅助基团18F-2-氟丙酸对硝基苯酯（NFP）,再与多肽zs-6反应得到18F．FP-ZS-6。将纯化后的18F-FP-ZS-6通过尾静脉注入荷人肺腺癌NCI-H1299裸鼠体内,进行microPET显像。结果成功制备18F-FP-ZS-6。其衰减校正后总产率为（5-2）％（n=3）,放化纯〉95％。Micr0PET显示18F-FP-ZS-6在荷瘤裸鼠肿瘤与腹部呈高摄取,在注射后5、15、25、35、45、55、65、75和85min时,肿瘤摄取值分别为0．329、0．350、0．405、0．433、0．420、0．415、0．402、0．403、0．390％ID／g;在注射后35min达最高,随后缓慢减少。结论成功制备18F-FP-ZS-6,其在荷人肺腺癌裸鼠肿瘤中有-定聚集．有可能作为人肺腺癌显像剂。     

99Tcm-RGD环肽二聚体的制备及其体内外评价

目的评价^99Tc^m标记的精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸（RGD）环肽二聚体E[c（RGDfK）]：的体内外特性及其用于整合素α，B，阳性肿瘤显像的可行性。方法以三羟甲基甘氨酸（tricine）和三苯基膦三磺酸钠（TPPTS）作为协同配体，以联肼尼克酰胺（HYNIC）作为双功能连接剂，采用无亚锡一步法制备^99Tc^m-HYNIC—E[c（RGDfK）]：，通过U87人神经胶质瘤细胞测定其半数抑制浓度（IC50），观察其体外与整合素α，B，受体的结合解离动力学、细胞内化及外化，评价其在荷人神经胶质瘤裸鼠的生物分布。结果^99Tc^m-HYNIC-E[c（RGDfK）]，的标记率〉95％，经Sep-PekC18柱纯化后其放化纯〉99％。与RGD环肽单体C（RGDyK）相比，HYNIC偶联的E[C（RGDfK）]：二聚体具有更高的整合素α，β3亲和力，IC50分别为80．0和9．07nmol／L。细胞实验显示，^99Tc^m-HYNIC—E[C（RGDfK）]：与整合素α，β，结合较快，并迅速被受体介导内化。生物分布实验显示，^99Tc^m -HYNIC—E[C（RGDfK）]：主要经肾脏排泄，在注射后0．5和4h，标记物在肿瘤的每克组织百分注射剂量率（％ID／g）分别为（2．46±0．66）和（3．10±0．35）％ID／g，标记物在肿瘤中的滞留时间足够长。1显像示注射后1h肿瘤清晰可见，注射后4h显像效果更佳。结论^99 Tc^mHYNIC-E[C（RGDfK）]：是一种有前景的用于整合素α，β3，阳性肿瘤显像的显像剂。     

肿瘤阳性显像剂5-18F-fluorouracil的标记与动物实验

目的 探讨^18F-fluorouracil（FU）作为肿瘤阳性显像剂的可能性。方法 标记与合成了^18F-FU,研究其在正常与荷瘤裸鼠中的生物分布,进行正常与荷瘤兔的PET显像。HPLC及其他质控分析结果均证实^18F-FU动物实验与临床应用的可行性,生物分布及显像研究表明它在肿瘤组织中有较多的摄取。结论 ^18F-FU是一种有潜力的肿瘤阳性显像剂。     

脂质体介导^99Tc^m-EGFR mRNA反义肽核酸在荷SKOV3卵巢癌裸鼠体内的分布及显像

目的 评价脂质体介导对^99Tc^m-表皮生长因子受体（EGFR） mRNA反义PNA体外靶细胞摄取、荷瘤裸鼠体内特异显像及生物学分布的影响.方法 利用碱基互补配对原则将带有短肽螯合功能的EGFRmRNA反义PNA与部分互补寡核苷酸杂交,再以配体交换法对反义探针进行^99Tc^m标记,然后以脂质体包裹反义探针,用HPLC法鉴定标记物的标记率.分析脂质体介导及非脂质体介导^99Tc^m-EGFR mRNA反义PNA在体外人卵巢癌SKOV3细胞中的摄取率及滞留率的差别,同时分析两者在荷SKOV3卵巢癌裸鼠模型体内生物学分布及显像情况的差异.数据分析采用两样本t检验（或t＇检验）及Wilcoxon秩和检验.结果 脂质体介导及非脂质体介导^99Tc^m-EGFR mRNA反义PNA6h内标记率均在95％以上.两者在注射后1、2、4、6、12及24 h后的细胞摄取率分别为（28.90±1.12）％、（32.76±1.20）％、（38.20±3.11）％、（41.23±1.60）％、（46.63±1.55）％和（46.78±2.14）％,（3.51±0.39）％、（3.90±0.40）％、（4.69±0.18）％、（5.91±0.26）％、（5.30±0.22）％和（5.39±0.17）％,差异有统计学意义（t＇=47.11～58.67,Z=2.80,均P＜0.05）,两者滞留率差异亦有统计学意义（t＇=7.25～11.55,Z=2.80,均P＜0.05）.注射两探针后1h荷瘤裸鼠肿瘤部位均可显像,但脂质体介导使肿瘤显像更为清楚,肿瘤摄取高峰T/NT由3.95上升至5.02,并明显增加注药后各时间点T/NT（t=3.96,t＇=12.65～ 14.69,Z=2.83～5.29,均P＜0.05）.分子探针主要分布在肿瘤、肾脏及肝脏组织中.肿瘤摄取量随时间逐渐增加,1h时非介导组为（1.49±0.09） ％ID/g,介导后为（2.15±0.21） ％ID/g;6 h时分别为（3.90±0.65） ％ID/g和（5.00±0.10） ％ID/g;脂质体介导后可增加注药后各个时间点的肿瘤/肌肉（t=11.24,t＇=3.96～ 11.94,均P＜0.05）.结论 脂质体介导可以明显促进^99Tc^m-EGFR mRNA反义PNA进入细胞,并提高对EGFR高表达肿瘤的显像效?     

68Ga-DOTA-NOC胰腺癌生长抑素受体靶向显像的实验研究

目的 研究68 Ga-1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸-1-萘丙氨酸-奥曲肽(DOTA-NOC)在小鼠体内的生物分布,并进行荷胰腺癌小鼠的68Ga-DOTA-NOC SSTR靶向显像.方法 37 MBq 68GaCl2加入20μl羟乙基哌嗪乙硫磺酸(HEPES,0.1 mmol/L)溶液和10～50 μg DOTA-NOC,于95℃水浴加热15 min制备68Ga-DOTA-NOC.采用HPLC法分析68 Ga-DOTA-NOC的标记率及体外稳定性.予正常BALB/c小鼠尾静脉注射68Ga-DOTA-NOC 3.7 MBq,分别在5、15、30、60和120 min后解剖分离小鼠脏器,测放射性生物分布(％ID/g)情况.将人CFPAC-1胰腺癌细胞与68Ga-DOTANOC共同孵育后,测定放射性计数并计算摄取率.建立CFPAC-1荷瘤裸鼠模型,行microPET显像,勾画ROI,获得肿瘤及主要脏器TAC,计算T/NT(NT为对侧肌肉).用流式细胞术检测CFPAC-1细胞及瘤体SSTR表达水平,采用直线相关分析对SSTR表达率与T/NT行相关性研究.结果 68 Ga-DOTA-NOC标记率为(98.8±1.0)％,无需纯化.正常小鼠体内68Ga-DOTA-NOC肾摄取最多,5 min为(11.20±0.32) ％ID/g,随时间延长减少,60 min为(4.11±0.21)％ID/g,胰腺、肺、胃相对摄取较高,脑几乎无摄取.人CFPAC-1细胞可特异性摄取68Ga-DOTA-NOC.荷瘤鼠microPET显像示CFPAC-1肿瘤部位呈异常放射性摄取,T/NT在120 min达3.2±0.2.CFPAC-1细胞和肿瘤组织SSTR1、2、4、5表达量分别为(96.83±1.23)％、(99.73±0.98)％、(90.42±0.63)％和(92.96±0.71)％,SSTR2、5的表达水平与T/NT均呈正相关(r=0.71、0.80,均P＜0.05).结论 68 Ga-DOTA-NOC易标记,生物分布理想,可靶向结合SSTR阳性的CFPAC-1肿瘤组织.68Ga-DOTA-NOC是新型SSTR靶向显像剂,有利于胰腺肿瘤的早期诊断并为生长抑素介导靶向治疗提供依据.     

P-糖蛋白对荷瘤裸鼠体内摄取18F-FDG的影响

目的 研究Bcap37及Bcap37/MDR1荷瘤裸鼠在依克立达(GH20918)干预前后的18F-FDG摄取变化,在活体内评价P-gp对18F-FDG摄取的影响.方法 分别用人乳腺癌Bcap37细胞及转MDR1基因的Bcap37(Bcap37/MDR1)细胞建立荷瘤裸鼠模型.荷瘤裸鼠培F-FDG microPET动态采集:10只荷瘤裸鼠(Bcap37及Bcap37/MDR1荷瘤裸鼠各5只)经尾静脉给予7.4 MBq 18F-FDG,给药后立即采集,共采集90 min,得到各个时间段的动态显像图,绘制ROI的TAC.隔日相同采集及处理方法,尾静脉给予含GF120918(按体质量2.0 mg/kg)的18F-FDG 7.4 MBq,获得GF120918干预后肿瘤组织18F-FDG摄取的TAC,观察GF120918干预前后TAC的变化.另取10只荷瘤裸鼠(Bcap37及Bcap37/MDR1荷瘤裸鼠各5只),行18F-FDG microPET静态显像,并比较GF120918干预前后肿瘤组织的SUV mean的变化.数据分析采用两样本t检验.结果 Bcap37荷瘤裸鼠肿瘤组织在GF120918干预前后的TAC差异元统计学意义,GF120918可明显增加Bcap37/MDR1荷瘤裸鼠肿瘤组织平台期18F-FDG的摄取水平.荷瘤裸鼠静态microPET显像示,GF120918干预前后Bcap37及Bcap37/MDR1荷瘤裸鼠肿瘤组织的SUVmean分别为1.028±0.045、1.052±0.028和0.712±0.031、1.015±0.043,前者干预前后的SUVmean差异无统计学意义(t=1.792,P＞0.05),后者干预前后的SUVmean差异有统计学意义(t=3.365,P＜0.05).在无GF120918存在情况下,Bcap37荷瘤裸鼠肿瘤组织的18 F-FDG摄取要高于Bcap37/MDR1荷瘤裸鼠(t=3.952,P＜0.05);在给予GF120918后,两者间18F-FDG摄取水平差异无统计学意义(t=1.835,P＞0.05).结论 18F-FDG是P-gp的底物之一,18F-FDG联合GF120918可能是一种有效、无创检测肿瘤MDR的方法.     

18F—FB—RGD的自动化制备及其生物学评价

目的研究18F标记RGD多肽的自动化合成方法,并探讨标记物在荷瘤鼠体内的生物学分布情况。方法在研究了自动化制备N-琥珀酰亚胺-4-18F-氟苯甲酸酯（18F—SFB）的基础上,通过向18F—SFB乙腈溶液中加入RGD多肽、无水DMSO和无水N,N-二异丙基乙胺（DIPEA）,充分反应得到18F-氟苯甲酰基（FB）-C（RGDyK）,即18F—FB—RGD的粗产品,经HPLC系统梯度分离和固相萃取得到纯品18F—FB—RGD,研究其在荷瘤鼠体内的生物学分布和竞争实验。结果18F—FB—RGD的标记率为（33．6±3．5）％,合成时间约为110min,放化纯大于98％。荷瘤小鼠注射18F—FB—RGD后30,60,90和120min,肿瘤摄取放射眭分别为（3．43±0．15）、（2．61±0．14）、（211±0．13）、（1．79±O．18）％ID／g,肿瘤／肌肉放射性比值为4．26±0．69至5．80±0,78。用RGD阻断后,肿瘤摄取放射性明显下降,阻断后60min,阻断组放射性摄取[（0．46±0．21）％ID／g]为非阻断性组[（2．87±0．59）％ID／g]的1／6。结论18F—FB—RGD是一种有希望的肿瘤显像剂,用国产模块可自动化合成。     

^99Tc^m标记RGD环肽在荷肺腺癌裸鼠中的显像研究

目的制备^99Tc^m标记的含RGD序列的^99Tc^m-联肼尼克酰胺（HYNIC）-c（RGDfK）环肽单体,评价其在整合素表达阳性的肺腺癌严重联合免疫缺陷（SCID）小鼠肿瘤模型中的生物学分布,并进行显像研究。方法（1）以HYNIC为双功能螯合剂,以三羟甲基甘氨酸（tricine）和乙二胺二乙酸为协同配体,采用二步法制备^99Tc^m标记HYNIC—c（RGDfK）,进行细胞结合实验,测定标记物生物学活性;（2）将荷A549肺腺癌模型小鼠分为7组[第7组作为竞争性抑制组,注射显像剂前0．5h先注射HYNIC-c（CRDGfk）100μg],每组5只,经尾静脉注射7．4MBq的^99Tc^m-HYNIC-c（RGDfK）,于注射后0．5,1,2,4,8,12h处死,计算荷A549肺腺癌小鼠模型各脏器％ID／g,同时采用ROI技术研究^99Tc^m-HYNIC—c（RGDfK）在小鼠体内的生物学分布,计算不同时间点的T／NT比值（NT选取肌肉）;（3）取6只荷瘤裸鼠,其中3只为竞争性抑制组,经尾静脉注射7．4MBq的^99Tc^m-HYNIC—c（RGDfK）,于注射后0．5,1,2,4,8,12h进行静态1显像。结果^99Tc^m-HYNIC—c（RGDfK）的标记率〉90％,放化纯〉95％。^99Tc^m-HYNIC—c（RGDfK）与A549肺腺癌细胞特异性结合率最高为36．14％,体内分布实验显示^99Tc^m-HYNIC—c（RGDfK）在肾的摄取率始终高于20％ID／g,注射后0．5h肿瘤％ID／g为10．52±1．48,8h为17．26±2．81,12h为8．93±0．90,竞争性抑制组注射后0．5h为2．29±0．85。通过ROI技术测得T／NT在8h达6．87。注射后1h肿瘤可显影,4～8h显影更清晰。结论^99Tc^m标记HYNIC—c（RGDfK）易于制备,具有良好的靶向性。     

^68Ga—DOTA—cNGR的制备及对荷肺腺癌裸鼠的显像研究

目的制备^68Ga-1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸-环状NGR（DOTA-cNGR）,并评价其在正常小鼠体内的生物分布及对荷肺腺癌裸鼠的靶向显像能力。方法以羟乙基哌嗪乙硫磺酸（HEPES）为缓冲体系（pH值5．0）,水浴合成^68Ga—DOTA—cNGR,HPLC测定标记率及放化纯,观察其在人血清中的稳定性。进行^68Ga—DOTA—cNGR的正常小鼠体内生物分布和荷肺腺癌裸鼠活体microPET显像,对荷肺腺癌裸鼠的瘤组织进行病理及氨肽酶N（APN）的免疫组织化学分析。采用两样本t检验分析数据。结果^68Ga—DOTA—cNGR标记率为（99．8±0．1）％,性状稳定,在人血清中37℃保温2h后放化纯仍〉95％。正常小鼠体内生物分布结果表明,^68Ga—DOTA-cNGR主要经肾排泄,血液清除迅速,肝、胃肠道摄取较少;1h肾、血液、肝、胃、肠的放射性摄取分别为（1．61±0．22）、（0．19±0．07）、（0．25±0．24）、（0．16±0．04）、（0．12±0．05）％ID／g。荷肺腺癌裸鼠microPET显像可见肿瘤部位有放射性浓聚影,1h肿瘤与对侧正常肌肉T／NT高达7．61±0．47,经DOTA—cNGR特异性阻断后降至1．83±0．25,阻断前后差异有统计学意义（t=18．80,P〈0．05）。免疫组织化学检查证实APN特异性聚集于肿瘤新生血管表面。结论^68Ga-DOTA—cNGR易于制备,标记率和放化纯高,在人血清中的稳定性好,具有良好的代谢及肺腺瘤靶向特性,有望用于肺癌显像。     

利用Explora FDG4模块进行^18F-氟乙酸盐自动化合成

目的建立半衰期较长的^18F-氟乙酸盐（FAC）的制备方法。方法基于Siemens公司的Explora FDG4合成模块,增加3个试剂位和2个电磁阀,改编运行程序,以“两锅法”结合Sep—Pak简易分离柱的使用,完成^18F-FAC的自动化合成。对荷W256肝癌大鼠行^18F-FACPET／CT显像。结果该法合成时间为65min,化学收率60％（时间校正）,产品放化纯〉98％。荷瘤大鼠PET显像示,30和120min肿瘤标准摄取值（SUV）分别为1．37和1．20,肿瘤／前肢肌肉放射性比值分别为2．32和2．55。结论用改进的Explora FDG4合成模块可以成功制备放化纯较高的^18F-FAC。^18F-FAC是一种有潜在应用价值的肝癌显像剂。     

PET/CT显像剂18F-氟丙酸在肝癌中的生物学评估

目的 探讨PET/CT显像剂18F-氟丙酸（18F-FPA）对肝细胞肝癌（HCC）的显像效果及其摄取机制。方法 （1）以甲基-2-溴丙酸乙酯为前体合成18F-FPA;（2）通过体外细胞摄取实验测定人肝癌SK-Hep 1细胞不同时间点对18F-FPA的放射性摄取情况;观察不同浓度脂肪酸合成酶抑制剂-奥利司他（Orilistat）、乙酰辅酶A羧化酶抑制剂5-十四烷氧基-2-呋喃甲酸（TOFA）对18F-FPA的摄取抑制情况;（3）对荷人肝癌SK-Hep 1小鼠行18F-FPA microPET/CT显像,并与18F-FDG PET/CT显像进行比较。18F-FPA和18F-FDG在肿瘤中的放射性摄取率比较采用t检验。结果 （1）18F-FPA的合成产率为（45±2）%。（2）细胞摄取实验结果显示,人肝癌SK-Hep 1细胞对18F-FPA的摄取率从5 min的（1.3±0.4）%上升到120 min的（4.6±0.2）%。细胞摄取抑制实验结果显示,随着抑制剂浓度的增高,人肝癌SK-Hep 1细胞对18F-FPA的摄取逐渐降低。当抑制剂奥利司他和TOFA浓度均为400 μmol时,人肝癌SK-Hep 1细胞对18F-FPA的摄取率分别降低了（40.3±4.0）%和（26.0±6.0）%。（3）荷人肝癌SK-Hep 1小鼠18F-FPA microPET/CT显像显示了快速且准确的肿瘤定位,肿瘤/肝脏比值为1.63±0.26;18F-FDG PET/CT显像中的肿瘤/肝脏比值为1.09±0.21。18F-FPA比18F-FDG具有更好的显像效果,差异有统计学意义（t=4.055,P=0.047）。结论18F-FPA可用于肝癌显像,且其摄取与脂肪酸合成有关。