酸性环境对辐射所致细胞凋亡和细胞周期进程的影响

目的 :研究酸性环境对不同剂量照射后细胞凋亡和细胞周期进程的影响及其可能的机制。方法 :1处于指数生长期的 HL6 0人白血病早幼粒细胞在不同 p H孵育 30 m in后 ,用 4～ 2 0 Gyγ线照射 ,剂量率1Gy/ m in。2 TU NEL法检测试剂盒染色 ,光镜计数凋亡细胞数。 3样品中 DNA提取后凝胶电泳 ,用溴化乙啶染色。 4应用 Western印迹分析 ADP-核糖聚合酶 (PAPR)裂解物。 5在培养基中加入蛋白酶 Caspase抑制剂 ICE和 CPP32 ,检测DNA片段和 PAPR裂解物。 6分别用碘化丙啶和 5 -溴脱氧尿苷染色 ,流式细胞仪检测细胞周期进程和凋亡动力学…     

电离辐射剂量率、照后培养时间和生长因子对人外周血淋巴细胞克隆存活和以凋亡为特征的分裂间期细胞死亡的影响

目的 :通过人外周血淋巴细胞凋亡和增殖细胞死亡观察剂量率、照后恒温培养时间和生长因子对电离辐射诱导的分裂间期细胞死亡的作用。方法 :将健康成人静脉血淋巴细胞在 RPMI 16 40培养基中培养 16 d。开始培养 6 d换半液 ,随后每隔 2 d换液 1次 ,经流式细胞仪检测 96 %～ 97%的细胞处于 G0 期。用高剂量率 (HDR,45 Gy/ h)或低剂量率 (L DR,0 .0 2 4Gy/ h)的 1～3Gy1 3 7　 Csγ射线照射 G0 期淋巴细胞。在 3Gy L DR组开始照射的第 1天 ,同时进行 HDR组照射 (HDR1) ,并在 3Gy L DR组结束照射的第 6天进行另一组 HDR照射 (HDR6…     

AT细胞系辐射敏感性与细胞凋亡的相关研究

目的 探讨AT细胞高辐射敏感性与细胞凋亡之间的联系。方法 以液体闪烁测量法测3H-TdR掺入百分率来观察^60Co γ射线照射对AT5BIVA（AT）和GM0639（GM）细胞增殖的影响;实验于照射后0、24、48和72 h,用细胞流式术动态检测AT和GM细胞的自发凋亡率及^60Co γ射线照射诱发的凋亡率。结果 ^60Co γ射线0～6 Gy照射后,AT和GM两种细胞3H-TdR掺入百分率均呈剂量依赖性降低,且AT细胞降低得比GM细胞快,两种细胞3H-TdR掺入百分率与受照射剂量间可拟合成指数方程：SAT=0.9718e^-0.6855D（R^2=0.9950）、SGM=1.0928e^-0.3731D（R^2=0.9777）;AT细胞的自发凋亡率高于GM细胞;2～6 Gy照后24 h,两种细胞由辐射诱发的凋亡率均随照射剂量增大而升高,且在同一剂量点,前者凋亡率高于后者;2 Gy照射后0～72 h,AT和GM细胞的凋亡率均呈时间依赖性增加,且随照后时间延长两者间差异逐步增大,在72 h达到显著水平。结论 AT细胞高辐射敏感性与其较高的自发及辐射诱发的凋亡密切相关。     

高LET辐射诱导共济失调性毛细血管扩张症患者成淋巴类细胞凋亡的研究

目的 :探讨和比较共济失调性毛细血管扩张症 (A- T)患者和正常人 E- B病毒转化成淋巴类细胞 (L CL )在高传能线密度 (L ET)照射后所致细胞凋亡的特性。方法 :1细胞株 :采用 4种 A- T患者 L CL (ARO、BMA、CSA和 RJO)及 2种正常人 L CL (JAC和 KKB3)株。 2照射条件 :采用 32～ 45 Me V/u(8～ 12 Gy/min)快中子照射 ,并以低 L ET1.36 Gy/min的 X射线照射作比较 ,照射剂量为 1～4Gy。 3在照射后 0～ 48h,采用倒转脉冲电场凝胶电泳(FIGE)及荧光染色两种方法检测 L CL 凋亡。 4应用流式细胞仪测定细胞周期分布。 5 Western…     

高凋亡敏感性淋巴瘤细胞的电离辐射和caspase-8激活

目的 :研究人淋巴瘤细胞系凋亡蛋白酶 - 8(caspase- 8)对辐射诱导凋亡的作用。方法 :采用线性加速器 6 MV光量子 10 Gy照射 (剂量率4Gy/ m in) 8种人淋巴瘤细胞系。应用荧光显微镜和流式细胞仪定量分析白细胞分化抗原 95 (CD95 )刺激和辐射诱导的细胞凋亡 ,应用 Western印迹法检测 caspase- 8的激活。结果 :1凋亡诱导 :10 Gy照后 2 4和 48h CEM、Molt- 17、Jurkat、DOHH和 K1细胞凋亡发生明显的改变 ,6 98、EHEB和 K42 2细胞中凋亡改变不明显 ;CD95诱导 CEM、Molt- 17和 Jurkat细胞凋亡 ,而其他几种细胞系对 CD95刺激有很高的…     

通过考虑其他死亡模式可能提高微核和细胞凋亡测定与生殖细胞死亡的相关性

目的 :用 10种细胞株评价微核及凋亡细胞和生殖细胞死亡的相关性。方法 :110种细胞株 :单层或悬浮生长 ,每周传代培养 2次。 2照射 :指数生长期细胞培养 2 4h后 ,单次 X线照射 (剂量率 1Gy/ m in) ,各细胞株分别选择不同剂量照射以获得一个可比较的存活水平。 3细胞生存率 :用标准克隆基因细胞生存分析法。 4微核分析 :测定微核形成率。 5细胞凋亡测定 :用光镜检测细胞凋亡率。 6异常细胞测定 :主要检测双核、四核和坏死细胞。 7微核、细胞凋亡和异常细胞 (MAA)分析。 8DNA电泳 :检测细胞凋亡特征性“DNA梯”。结果 :1研究一种死亡模式…     

腺病毒介导p53基因转染增加人胃癌细胞的放射敏感性

目的评价腺病毒介导p53基因(Adp53)转染对人胃癌细胞的凋亡效应和放射增敏作用。方法以重组腺病毒介导p53基因感染4种不同p53状况的人胃癌细胞，用免疫组织化学法和Western blot法检测P53蛋白在胃癌细胞中的表达；用细胞集落形成法检测细胞存活率；用TUNEL法检测细胞凋亡。胃癌细胞感染Adp53后照射4Gy，用流式细胞仪检测细胞周期分布和凋亡；胃癌细胞种植肿瘤内注射Adp53后照射6Gy，以肿瘤相对体积增长曲线观察肿瘤抑制情况。结果1：100效靶比(MOI)Adp53产生细胞高转染率，以及p53基因在4种胃癌细胞中均高表达，并产生G2/M期阻滞、凋亡增加和细胞增殖抑制。如果以凋亡评价放射效应，Adp53转染对4Gy照射4种细胞的凋亡率比值为：W细胞3．0，M细胞3．6，neo细胞2．2，823细胞2．5。体内实验结果显示，Adp53对w细胞肿瘤6Gy照射的抑瘤率比值为1．41，而对M细胞肿瘤为1．91。结论腺病毒介导p53基因转染产生细胞凋亡并提高人胃癌细胞的放射敏感性，这种作用不依赖于细胞内在的p53状况。     

低剂量放疗所致离体外周血单核细胞凋亡呈现不连续剂量依赖性

目的 :观察在抗炎放疗剂量范围内低剂量辐射对外周血单核细胞 ( PBMC)凋亡的诱导及其可能的免疫调节机制。方法 :1标本 :PBMC取自 10名健康志愿者 ( 8男、2女 ,2 6～ 39岁 )。 2照射 :PBMC/ RPMI(标准培养基 )为 1× 10 6 /m l于 37℃照射 ,2 5 0 k V、15 m A,球靶距 40 cm,其中 9份样品以 0 .1～ 3.0 Gy单次照射 ,另 1份在 0 .1～ 1.0 Gy间以 0 .1Gy梯度增加的单次照射 ,剂量率均为 1.15 Gy/ m in,照射后培养12～ 78小时进行流式细胞分析。 3流式细胞仪检测 :用碘化丙锭 ( PI) / Triton染胞核 ,测定凋亡胞核 ;用膜联蛋白 V( Ax …     

裂变中子诱导小鼠胸腺细胞凋亡的时间效应及其分子机制初探

目的 :以60 Coγ射线为参比射线 ,研究裂变中子诱导小鼠胸腺细胞凋亡的时间效应 ,并初步探讨其分子机制。方法 :用形态学观察、DNA电泳、流式细胞仪 (FCM )分析及二苯胺 (DPA)法检测细胞凋亡 ;用斑点杂交方法检测 p53与bcl 2的基因表达。 结果 :小鼠经裂变中子 2 .5Gy照射后 2～ 2 4h ,在各时间点上均检测到胸腺细胞DNA梯状条带 ,利用光镜与电镜观察到具有典型凋亡特征的胸腺细胞 ;以DPA法、FCM分析与形态观察计数测定的结果 ,绘制时间效应曲线 ,发现胸腺细胞凋亡比例随着照射时间的延长而增加 ,在 6h前上升较快 ,8～ 10h达到峰值 ,12h后开始下降 ,2 4h较 4～ 12h明显降低 (P <0 .0 5) ,但略高于正常水平。γ射线 5.0Gy照射后 ,胸腺细胞凋亡比例随时间的变化规律与之相似 ,但在 6h之前增加较缓 ;此外 ,在照后 2 4h检测不到DNA梯状条带。裂变中子 2 .5Gy照射后 ,小鼠胸腺细胞 p53基因表达水平在 2、4、12、2 4h均比未照射组有显著增加 (P <0 .0 5或P <0 .0 1) ;bcl 2基因表达水平均比未照射组明显降低 (P <0 .0 1)。结论 :裂变中子 2 .5Gy照射小鼠可诱导其胸腺细胞凋亡 ,且与γ射线 5.0Gy照射有类似的时相性 ,但裂变中子诱导的胸腺细胞凋亡比γ射线增加快、持续时间长 ,表明裂变中子对小鼠免疫系统损伤较     

人淋巴细胞的凋亡与适应性反应

目的:检测小剂量辐射或膜氧化剂处理的淋巴细胞对其后的辐射或膜氧化剂引起的细胞凋亡效应,以确定适应性反应是否改变辐射或膜氧化剂引起人淋巴细胞凋亡的敏感性。方法:自供血者静脉取血,分离出单核细胞,在RPMI1640培养液中培养。在37℃用60Coγ射线适应性剂量0.1Gy(剂量率为0.01Gy·min-1)照射,攻击剂量2Gy(剂量率为1.0Gymin-1)照射离开37℃培养的细胞。膜氧化剂诱导适应性实验,以叔丁基过氧化氢加入细胞悬液内,分别在0℃或37℃培养30min,用冰预冷的培养液洗去药物,再培养一定时间。用DNA解螺旋荧光分析(FADU)和末端转移酶反应测定…     

在抗辐射的人胶质瘤细胞中Fas信号转导通路未受损害

目的:肿瘤细胞对放疗的抗辐射性常与凋亡通路障碍有关。因此,探讨了Fas信号转导通路是否在高度耐受辐射的人胶质细胞瘤中诱导细胞凋亡。方法:1将携带有荧光素酶基因和突变型p53cDNA(在175bp位点)的逆转录病毒载体转染至无p53基因突变的胶质瘤细胞株U-87MG中。培养细胞经剂量率为1.2Gy/min的X射线照射后,加入0.01ng/mlFas单抗和10μg/ml环己酰亚胺(抗真菌药),同时加入IL-1β转化酶(ICE)抑制剂或加入神经酰胺孵育5h。2Fas单抗介导的细胞毒性和凋亡实验。3采用流式细胞仪分析凋亡。结果:1经20Gy照射的U-87MG培养细胞数量没有明显增加,…     

~(60)Coγ射线照射诱导人卵巢癌细胞凋亡及细胞周期的改变

目的　探讨6 0 Coγ射线照射对人卵巢癌细胞株A2 780及其顺铂耐药株A2 780 CP体外生长、凋亡及细胞周期的影响。方法　采用四甲基偶唑蓝 (MTT)比色法分析不同辐照剂量 (1～10Gy)对A2 780及A2 780 CP两种细胞株体外生长的影响 ,用流式细胞术 (FCM)比较两者辐照后凋亡及细胞周期的变化。结果　 (1) 1～ 10Gy6 0 Coγ射线照射引起A2 780细胞株明显的生长抑制和凋亡 ,而A2 780 CP细胞则表现出明显的辐照抗性 .(2 ) 6Gy6 0 Coγ射线照射后 6～ 48hA2 780细胞呈现G1 期细胞阻滞和S期细胞比例下降 ,A2 780 CP细胞则呈G1 期细胞比例减少和S期细胞比例增加。结论卵巢癌耐药细胞具有辐射抗性和特征性的细胞周期变化 ,流式细胞术测定辐照诱导肿瘤细胞凋亡及细胞周期的变化可预测恶性肿瘤细胞的辐射敏感性。     

Toll样受体4对肿瘤细胞放射敏感性的影响

目的 观察Toll样受体4(TLR4)对肿瘤细胞放射敏感性的影响.方法 将体外培养的RAW264.7、Lewis、MFC、Hepal-6、B16和NIH3T3细胞各分为假照组和5 Gy照射组,采用流式细胞术检测照射24 h后TLR4表达变化,从中筛选出照射后高表达和低表达TLR4的细胞,将其各自分为TAK242阻滞组、LPS刺激组和空白对照组,采用CCK-8试剂盒检测其增殖活性,用克隆形成实验计算其细胞存活分数,用Annexin V凋亡试剂盒检测其凋亡率,用流式细胞术观察细胞周期进程的变化.结果 5 Gy照射24 h后Lewis细胞TLR4表达水平明显高于照射前(t=-8.68,P＜0.01),MFC细胞则相反,照射后TLR4表达水平明显低于照射前(t=25.80,P＜0.01),而RAW264.7、Hepa1-6、B16细胞的TLR4表达水平比照射前有升高趋势,但无明显差异.5 Gy照射后Lewis和MFC细胞的增殖活性均明显降低(t=57.62、-6.23,P＜0.01),而用TAK242阻滞TLR4后Leiws细胞增殖活性更加降低(t=5.96,P＜0.01),但MFC细胞增殖活性反而明显升高(t=4.16,P＜0.01).5 Gy照射后Lewis和MFC细胞的存活分数均明显降低(t=13.37、19.24,P＜0.01),用TAK242阻滞TLR4后Leiws和MFC细胞存活分数更加降低(t=4.90、4.42,P＜0.05).5 Gy照射后Lewis细胞的凋亡率明显高于假照组(t=-167.85,P＜0.01),阻断TLR4后明显高于单纯照射组(t=-4.73,P＜0.01).照射后MFC细胞的凋亡率升高(t=-26.45,P＜0.01),阻断和激动TLR4其凋亡率均显著低于单纯照射组(t=8.87、-3.05,P＜0.05).Lewis和MFC细胞受照后G0/G1期、S期细胞明显降低(t=8.68、14.80、20.31、4.48,P＜0.01),G2/M期细胞上升(t=-37.48、-13.06,P＜0.01).两种细胞的TAK242阻断组和LPS刺激组各周期进程均无明显变化.结论 Lewis细胞的TLR4高表达与其受照后的增殖活性和凋亡率变化有关,而与其周期进程无关,TLR4影响肿瘤细胞的放射敏感性.     

在有或无蛋白质合成的抑制剂情况下辐射诱导新生期肾和睾丸的细胞凋亡及基因表达

目的:分析辐射诱导细胞凋亡的发生、凋亡相关基因bcl-2和p53的表达以及新生期大鼠肾和睾丸受照后细胞增殖水平。方法:1选用杂交Sprague-Dawley雄性大鼠,4～5日龄,12h∶12h光暗条件饲养,光照时间从6:00～18:00;实验分为假照组、照射组、环己酰亚胺(CHX,蛋白合成抑制剂)处理组和照射加CHX处理组。2用X射线5Gy全身照射,剂量率为5.4Gy/min。3照射或假照射前1h给予大鼠腹膜内注射CHX(1.5mg/kg)以确定新蛋白质合成在凋亡诱导中的作用。4用形态学(光镜和电镜)和DNA凝胶电泳法测定照射后2、4、6、8和24h时肾和睾丸的细胞凋亡水平。5用3H-腺…     

辐射诱导大鼠宫内发育期胎脑细胞凋亡和p53基因表达

目的 :阐述 p5 3基因在低剂量辐射诱导胎脑神经皮质细胞凋亡中的作用 ,以揭示发育期胎脑对辐射超敏感的分子机制。方法 :每组 3～ 5只 Wistar R/ Cnb大鼠在受孕 15或 17d给予单一剂量 (10、2 0或 40 c Gy,6 7m Gy/ s) X射线全身照射 ,照后 4、2 4或 48h深麻孕鼠 ,迅速取仔鼠置冰上 ,断头取脑 ,依据组别随机取脑组织 ,立即用 4%三聚甲醛固定或冻存于液氮中 ,采用凝胶电泳分离核小体间 DNA片段 (L addeing)和原位 DNA末端标记 (TUNEL 反应 )方法分析细胞凋亡 ,采用免疫细胞化学、Wastern和 Northern印迹方法分别检测p5 3蛋白和 m RN…     

用染色体畸变研究AT细胞系辐射敏感性和适应性反应

目的探讨毛细血管扩张运动共济失调症(ataxiatelangiectasia,AT)细胞系的辐射敏感性和对低剂量辐射能否诱导细胞遗传学适应性反应。方法用2cGy60Coγ射线预先照射进入G1期的AT5B1VA(AT)细胞和GM0639(GM)细胞,培养6h后再照射1.0Gy或3.0Gy60Coγ射线,分析染色体畸变。结果G1期的GM细胞在预照射2cGy60Coγ射线的诱导剂量后能非常显著地降低随后照射1.0Gy或3.0Gy60Coγ射线诱发的染色体畸变率,染色体畸变的观察值非常显著地低于预期值(P<0.001),而对AT细胞则没有观察到这种现象,染色体畸变的观察值与预期值差异无统计学意义(P>0.05);另外,1.0Gy或3.0Gy60Coγ射线诱发AT细胞的各种畸变率(包括着丝粒畸变、无着丝粒畸变和染色单体型畸变)均显著地高于GM细胞(P<0.001)。结论低剂量电离辐射不能诱导AT细胞产生细胞遗传学适应性反应;AT细胞对电离辐射诱发染色体畸变高度敏感,可能是由于不能正确修复DNA双链断裂的结果。     

外周血淋巴细胞复合染色体畸变作为高LETα粒子照射的潜在生物标志

目的 :测定高传能线密度 (L ET) α粒子照射后诱导外周血淋巴细胞复合染色体畸变和传递至二次、三次分裂细胞的份额。研究复合染色体畸变作为既往照射的生物标志的可用性。方法 :将 4名自愿供血者外周血中分离的淋巴细胞在RPMl 16 40培养基中培养。用 2 3 8Pu源的高 L ETα粒子(12 1ke V;0 .5 Gy)或低 L ET X射线 (2 5 0 k V;3Gy)照射培养细胞。收获照射后一次、二次和三次分裂细胞 ,用荧光原位杂交 (FISH)和二脒苯基吲哚 (DAPI) / Hoechst332 5 8多色染色技术分析各次分裂细胞的染色体畸变。用 1、2和 5号全染色体探针和着丝粒…     

动脉损伤后辐射致大鼠平滑肌增殖的抑制:在体和离体的时间特性

目的 :探讨电离辐射对损伤动脉作用的时间和剂量特性及其作用机制。方法 :1在麻醉的条件下 ,暴露大鼠两侧颈动脉 ,用胶囊导管造成颈外动脉损伤 ,于损伤前或后各 5 d内不同间隔时间用 1 37　 Csγ射线局部照射右侧颈动脉 1～ 10 Gy(8Gy/ m in) ,左侧颈动脉不照射做为对照。损伤后 2 0 d制作动脉组织切片 ,苏木精和伊红 (HE)染色 ,用影像分析仪测量新生内膜。2培养的大鼠主动脉平滑肌细胞在血清刺激生长前或后不同间隔时间照射 2 .5～ 10 Gy,用集落形成法检测细胞存活 ;用溴脱氧尿苷 (Brd U )掺入细胞核分析细胞周期动力学 ;用Western印迹…     

不同照射方式对结直肠癌CL187细胞的抑制作用和分子机制初探

目的 研究单次、分次和125Ⅰ粒子持续低剂量率照射对结直肠癌CL187细胞生物学效应的影响.方法 实验分高剂量率单次照射组(400 cGy/min,单次组)、分次照射组(2 Gy/次/d,400 cGy/min,分次组)和125Ⅰ粒子持续低剂量率照射组(2.77 cGy/h,125Ⅰ组).3组细胞照射0、2、4和8 Gy后,24和48 h进行细胞计数和锥虫蓝染色,比较细胞总数和细胞存活率的差异.利用克隆形成实验比较3组细胞增殖能力的差异.通过流式细胞仪检测细胞凋亡.蛋白免疫印迹法分析PHLPP2、PTEN和Bax蛋白表达的变化.结果 与单次组和分次组相比,125Ⅰ组细胞总数减少(t=34.28和29.48,P＜0.05)、存活细胞比例减少(t=-12.38和-14.61,P＜0.05),细胞克隆形成能力下降,相对生物学效应是1.41.照射后48 h细胞凋亡检测发现125Ⅰ组细胞凋亡比例增加(t=-15.08和-11.99,P＜0.05).蛋白免疫印迹法检测发现125Ⅰ组Bax表达量升高,PHLPP2和PTEN的表达量3组间差异无统计学意义.结论 单次、分次和持续低剂量率照射后细胞PHLPP2蛋白表达水平均升高,但剂量率的高低并不影响其表达水平.不同方式照射后,凋亡相关蛋白Bax的表达水平上升,125Ⅰ组升高更加明显,125Ⅰ持续低剂量粒子照射可能通过影响凋亡相关蛋白Bax的表达水平实现对结直肠癌CL187细胞的杀伤作用.     

β射线内照射抑制血管内皮细胞和平滑肌细胞增殖的研究

目的 探讨β射线对血管内皮细胞和平滑肌细胞的细胞效应。方法 培养人脐静脉内皮细胞和牛主动脉平滑肌细胞,接受0、1.25、2.5、5.0、10、20、40 Gy β射线后,以四唑盐(MTT)比色实验评价剂量-效应关系,用划痕实验研究β射线对两种细胞增殖的影响。血管内皮细胞经0、2.5、5.0、10、20 Gy照射后,进行透射电镜超微结构观察和使用流式细胞仪进行DNA倍体及凋亡率分析。结果 血管内皮细胞在照射后2、24 h,在1.25～40 Gy其增殖呈剂量依赖性抑制;在照射后48、72 h,其剂量依赖性抑制在10 Gy时处于平台期。血管平滑肌细胞在照射后2、24和48 h,其增殖抑制在10Gy时处于平台期;在照射后72h,其增殖抑制在5 Gy时处于平台期。在照射后72 h,吸收剂量为5 Gy时,血管平滑肌细胞和内皮细胞的抑制率分别为27.9％和19.0％(P=0.016);吸收剂量为10 Gy时,血管平滑肌细胞和内皮细胞的抑制率分别为33.7％和20.9％(P=0.002)。划痕实验示吸收剂量为5Gy时血管内皮细胞几乎完全充填裂隙,而平滑肌细胞较少充填裂隙;10 Gy照射后,内皮细胞充填裂隙数量减少,而平滑肌细胞几乎未充填裂隙。透射电镜未发现典型的凋亡征象,流式细胞仪检查各实验组和对照组的凋亡率均<4.4％。DNA倍体分析发现对照组G_2/M期细胞数百分比为13.09％,各照射组依次为16.