人源H5N1亚型禽流感病毒株空斑特性和致病性研究

目的观察不同H5N1亚型禽流感病毒株空斑特性,对比研究不同空斑类型H5N1病毒致病性和复制能力差异。方法将不同稀释度的H5N1亚型禽流感病毒株分别接种于MDCK单层细胞,加盖营养琼脂,合适时间染色,观察不同H5N1亚型禽流感病毒株空斑形成特点,按照DullbeccoR的方法计算病毒PFU数;根据空斑大小进行挑选、纯化、筛选不同类型空斑病毒,测定这些病毒对Balb/c小鼠致病性差异和在MDCK细胞上复制差异。结果野生的人源H5N1禽流感病毒株在空斑形成上都存在不同程度的不均一性,空斑大小、形状差异明显:A/Vietnam/1194/2004(H5N1)以大圆形斑为主,夹杂少量小点状斑。A/Beijing/01/03(H5N1)大多数为中等大小空斑,并有少数针尖状斑。野生A/Vietnam/1194/2004经过分离纯化后,得到的两种空斑类型病毒在致病性和复制能力存在明显差异。结论野生的人源H5N1禽流感病毒株在空斑形成上都存在不同程度的不均一性,从野生病毒株中分离、纯化的大小斑病毒在致病性和复制能力上存在明显差异。     

定量PCR快速检测炭疽芽孢杆菌的实验研究

目的建立一种简便、快速、定量检测炭疽芽孢杆菌的PCR方法。方法采用TaqMan荧光探针技术,针对炭疽芽孢杆菌质粒pXO1、pXO2上的基因设计引物;用炭疽芽孢杆菌（Sterne株）污染环境土壤来模拟实际样本,比较了从土壤中提取DNA的不同方法对检测效果的影响,并与同类进口试剂进行了平行比对。结果以含有检测目的片段的线性质粒为模板,反应体系的灵敏度可达到101拷贝/μl;用Sterne株芽孢悬液污染土壤,检测灵敏度可达2.5×103cfu/g土壤。我们研制的试剂与进口试剂在敏感性和准确性方面一致,且操作简便。结论本研究建立的炭疽芽孢杆菌实时定量PCR检测方法可特异、灵敏地检测土壤标本中可疑目标菌。     

大流行甲型H1N1流感病毒变异株的小鼠感染实验研究

目的对甲型H1N1流感病毒变异株的小鼠感染特征进行观察。方法经过体外鸡胚/MDCK细胞传代和筛选,获得1株甲型H1N1流感病毒变异株（vCA07）;使用不同剂量流感病毒滴鼻感染BALB/c小鼠后,计算半数致死量和半数感染量,观察小鼠感染后的体质量变化、肺部病毒增殖、肺部组织病理变化等。结果与野生型毒株相比,甲型H1N1流感病毒变异株对BALB/c小鼠的致病性显著提高,其可在小鼠肺组织中高效增殖,并导致显著的病理损伤。结论甲型H1N1流感病毒变异株感染特征得以明确,为进一步建立高致病性甲型H1N1流感病毒的小鼠感染模型以及大流行甲型H1N1流感病毒致病机制的研究奠定了基础。     

地衣芽胞杆菌对肠道致病菌的体内拮抗作用研究

目的:探讨地衣芽胞杆菌C01在模型小鼠体内对大肠杆菌、沙门氏菌抑制作用以及对乳杆菌等有益菌的促进作用。方法:用地衣芽胞杆菌C01灌胃肠道感染模型小鼠,采用体外活菌培养,分析粪便菌群数量的变化。结果:C01灌胃治疗组(EPEC C01)中乳杆菌的数量显著高于EPEC灌胃模型组(EPEC N)(P<0.01),肠杆菌数量下降极显著(P<0.01),而(EPEC N)组肠杆菌数显著高于正常对照组(NS)(P<0.05);肠炎沙门氏菌处理后C01灌胃治疗组(SL C01)和处理后肠炎沙门氏模型组(SL N)比较,乳杆菌、肠球菌和总厌氧菌的变化不明显,但肠杆菌数量下降极显著(P<0.01);形态病理学观察结果显示,C01芽胞杆菌灌胃治疗组肠粘膜病变明显减轻,肠粘膜及绒毛高度明显增加,绒毛轻度水肿,绒毛排列整齐、致密。结论:地衣芽胞杆菌C01在体内对肠炎沙门氏菌和致病性大肠杆菌有较强的抑制作用,能促进乳杆菌等生理性有益菌的增殖,可保护肠粘膜结构的完整性免受病原菌的侵袭。     

炭疽及其主要类属芽胞杆菌表型鉴定方法的研究

芽胞杆菌属种类繁多,在医学上只有炭疽杆菌是人畜共患病原菌,蜡样杆菌可以引起人的食物中毒。因此,实验诊断的对象和需要鉴别的也只是这两种细菌,常视其它芽胞杆菌为杂菌,弃之于不顾。相反枯草杆菌、苏云金杆菌、解淀粉杆菌等在细菌生理、遗传工程、工农业生产上广为利用,并进行了深入的研究。近年B.C.J.G.Knight和H.Proom、L.B.Kenneth等进行了分类学研究,特别是J.Wolf和A.N.Barker提出了鉴定到种的程序表,依此,可使芽胞杆菌的鉴定眉目清楚, 但该表作者基于Smith等的工     

34例甲型H1N1流感危重症合并感染患者的病原菌分布情况分析

目的探讨重症监护病房(ICU)中甲型H1N1流感危重症患者感染的病原菌分布及其耐药情况。方法对兰州大学第一医院ICU 2009年10月27日-2010年2月28日收治的34例甲型H1N1流感患者的院内感染病原菌及其耐药性进行回顾性分析。结果 34例甲型H1N1流感患者治愈24例,死亡10例。检出病原菌的患者共18例,感染率52.9%。感染部位主要为呼吸道,占64.7%,其次是血液和静脉导管,分别占13.2%、9.6%。18例患者共分离出136株病原菌,主要菌株依次为鲍曼不动杆菌(67.6%)、铜绿假单胞菌(9.6%)、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(6.7%)、大肠埃希菌(5.9%)、光滑假丝酵母菌(5.1%)。在检出的鲍曼不动杆菌菌株中,63.0%对除多黏菌素B之外的所有抗生素耐药,其余的均为多重耐药菌;对鲍曼不动杆菌耐药率最低的为米诺环素(48.5%),其次为头孢哌酮/舒巴坦59.3%。鲍曼不动杆菌株数与T细胞亚群CD4+/CD8+比值呈线性相关(r=0.973,P=0.027)。结论本组34例甲型H1N1流感危重症患者主要感染菌株为鲍曼不动杆菌,均为多重耐药或泛耐药菌株,且鲍曼不动杆菌出现株数与患者免疫功能显著相关。     

一株产新型大环内酯抗生素海洋解淀粉芽孢杆菌的分离鉴定

目的 对分离自中国东海30 m深海泥的一株产新型大环内酯抗生素(macrolactin s,MLS)的菌株进行形态、生理生化特性及分子水平的分类学研究.方法 通过细菌培养特征观察,菌株生长条件测定、生理生化指标及全细胞脂肪酸成分分析,并特异性扩增其16S rDNA序列,测序比对及构建系统发育进化树,利用本实验室所建立的抗菌模型评价代谢产物的抗菌活性.结果 该菌株与芽孢杆菌属其他种共享97%～99%的保守序列,其中与解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)的16SrDNA序列保守度高达99.6%.15:1 iso H/13:0 3OH为该菌株的主要脂肪酸组分.结论 该菌株属于芽孢杆菌属,定名为解淀粉芽孢杆菌MS1721株,其所产大环内酯MLS表现出较强的抗菌活性.     

一株新型甲型H1N1流感病毒H275Y的奥司他韦耐药变异分析

目的 探讨2009年新型甲型H1N1流感病毒神经氨酸酶(NA)基因的进化规律,分析NA蛋白酶活性位点以及糖基化位点变化情况.方法 从NCBI检索获得110株不同年代、不同地域甲型流感病毒NA基因序列,用MEGA 4.0软件进行基因进化分析,并用NJ法构建进化树;对NA基因核苷酸序列同源性及编码蛋白氨基酸序列进行分析.结果 2009年新型甲型H1N1流感病毒世界各地不同毒株间的NA基因同源性极高,达到99.5%～100%,但与以往甲型H1N1人流感病毒的NA基因差异较大.2009年新型甲型H1N1流感病毒与欧洲A/swine/H1N1的NA基因同源性高,达到89.6%～92.9%,且糖基化位点分布一致,分别在50、58、63、68、88、146、235和386位存在糖基化现象.另外2009年新型甲型H1N1流感病毒与A/chicken/H5N1的NA基因同源性也较高,达到83.6%～85.3%.绝大部分2009年新型甲型H1N1流感病毒的NA蛋白酶活性中心及周围相关位点氨基酸组成保守,仍然表现为R118、D151、R152、R225、E277、R293、R368、Y402、E119、R156、W179、S180,D199、1223、E228、H275、E278、N295和FA25,但丹麦、日本、我国香港及湖南分离到的4株病毒出现H275Y突变.2009年新型甲型H1N1流感病毒NA基因可能来源于欧洲A/swine/H1N1流感病毒,并与A/chicken/H5N1病毒有较近的亲缘关系.结论 2009年新型甲型H1N1流感病毒并非由以往人H1N1流感病毒逐渐进化而来,而是一种新型重排病毒,我国湖南地区发现的一株新型甲型H1N1流感病毒具有H275Y奥司他韦耐药变异.     

鲍曼不动杆菌分布特征及耐药趋势的临床研究

目的了解鲍曼不动杆菌的临床分布及其对常用抗生素的耐药状况,为临床使用抗生素治疗提供依据。方法采用回顾性方法,统计分析273株鲍曼不动杆菌的标本来源、感染科室分布及耐药状况。结果273株鲍曼不动杆菌中,252株来自痰及支气管吸出物（占92.3%）,其次为伤口分泌物12株（占4.4%）。鲍曼不动杆菌的感染科室ICU病房检出率最高,占40.7%,其次为呼吸内科,占16.1%。273株鲍曼不动杆菌中,48株鲍曼不动杆菌呈多重耐药菌株,对头孢哌酮/舒巴坦耐药率最低（10.0%）,氨苄青霉素（97.0%）耐药率最高。慢性肺部疾病和脑血管疾患是鲍曼不动杆菌感染病例的主要基础疾病。结论鲍曼不动杆菌临床分离株多来自于痰及支气管吸出物标本,感染率最高为ICU病房,并对多种抗菌药物的耐药率较高,临床应加强对鲍曼不动杆菌耐药性的监控并防治耐药菌株的传播流行。     

军事医学科学院微生物流行病研究所成功分离甲型H1N1流感病毒

2009年5月30日,军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室的科研人员从一例甲型H1N1流感患者的咽拭子样本中,成功分离出一株甲型H1N1流感病毒,并完成全基因组序列测定。     

长期保存的100株芽胞杆菌的重鉴定

我们研究室从五十年代初期就收集保存了82株炭疽杆菌和18株需氧芽胞杆菌。多年来虽经几次常规鉴定,但只限于每个单一菌种性状的描述和记录,没有进行相互比较和归类。我们试图进一步探讨炭疽杆菌及其主要类属菌的分类学特征,开展分子遗传学和气相色谱法的应用研究,和深化对这一菌属的表型特征的认识。首先对保存的菌种作表型特征的观察,并作比较归类,选出有代表性的菌株用于进一步深入的研究,和有针对性地作好研究用菌种的供应工作。一、材料和方法 (一)菌种鉴定前菌种株号、名称、是强毒菌或菌苗株都按原菌种卡的记录。     

2009年新型甲型H1N1流感病毒血凝素基因进化及变异特征分析

目的 了解自2009年3月新型甲型H1N1流感流行以来,其主要免疫原件基因-HA基因的进化及氨基酸变异特性.方法 从NCBI下载2009年新型甲型H1N1流感病毒以及北美地区、欧洲地区、亚洲地区以往流行的甲型H1N1流感病毒HA基因序列,利用MEGA 4.0软件对所选序列进行基因进化系统发育树分析;对2009年新型甲型H1N1流感病毒HA基因的核苷酸同源性及氨基酸特异性进行分析,并与北美地区、欧洲地区、亚洲地区分离株进行比较.结果 2009年新型甲型HlNl流感病毒HA基因与2006-2007年美国A/swine/H1N1流感病毒同源性最高,核苷酸序列差异为0%～0.8%;与美国各州1930-2007年分离的A/swine/H1N1流感病毒具有明显的时间上的进化关系;与欧洲及亚洲地区A/swine/H1N1流感病毒进化无关.其重要的抗原性位点与A/human/H1N1流感病毒及流感疫苗株存在较大差异.全球流行半年多以来该病毒株没有发生明显变异.结论 2009年新型甲型H1N1流感病毒HA基因是北美A/swine/H1N1流感病毒长期进化的结果,目前尚未发现明显抗原位点的变异.     

鲍曼不动杆菌bauA与basD基因缺失株的构建及其生物学功能研究

目的 构建鲍曼不动杆菌bauA与basD基因缺失株,研究铁载体相关基因对鲍曼不动杆菌生存及致病性的影响.方法 构建pMO130-TelR-bauA(Up/Down)及pMO130-TelR-basD(Up/Down)质粒,通过同源重组获得基因缺失株;通过基因缺失株生长曲线测定、运动能力比较、生物膜的形成及胞内存活能力测...     

人禽流感HSN1病毒HA1蛋白抗原表位及主要免疫功能区特征的研究

目的 确定人禽流感H5N1病毒HA1蛋白的单克隆抗体(McAb)抗识别表位及主要免疫功能区.方法 将16条人禽流感H5N1病毒HA1基因重叠片段克隆入真核表达载体pDisplay,构建表达HA1蛋白的重叠肽段重组质粒,转染HeLa细胞后制备细胞抗原片.利用灭活的H5N1病毒免疫BALB/C小鼠,制备病毒特异单克隆抗体(单抗)和多克隆抗体(多抗),采用间接免疫荧光法分析单抗、多抗与HA1肽段的反应性.确定HA1蛋白的单抗识别表位及主要免疫功能区.结果 成功克隆、表达了16条不同长度的H5N1肽段,并制备、获得30株分泌抗H5N1型禽流感病毒McAb的杂交瘤细胞株,其中18株为抗HA的单抗,18株中有6株单抗具有中和病毒活性.利用表达的H5N1肽段对单抗识别表位进行分析,初步确定3B5、3D1、3132、M6、M3等18株McAb识别表位区域分别位于氨基酸残基aa133-143、aa155-165、aa166-196、aa166-176、aa34-66及aa296-328之间,其中3B5、3D1、3B2、M6等McAb识别表位为序列依赖型表位,M3和M7等具有中和活性的McAb识别表位为构象性中和表位.结论 利用制备的H5N1病毒特异性McAb和表达的病毒HA1蛋白重叠肽抗原,初步确定了18株抗HA McAb的识别表位和HA1蛋白的主要免疫功能区,为进一步研究开发新型疫苗提供了重要理论依据.     

鼻咽腺样体肥大的MR及CT诊断

目的:探讨腺样体肥大的CT及MR诊断价值及腺样体-鼻咽腔比率(A/N比值)对判断腺样体肥大程度的应用。方法:分析139例腺样体肥大患者的CT及MR表现,其中作CT矢状面图像重组或MR矢状面扫描的42例。重点观察病变部位的形态改变、邻近解剖关系及其并发症,并对其矢状面图像进行A/N比值测定。结果:腺样体肥大的CT及MR表现为鼻咽顶后壁中央弥漫性的软组织增生,呈团块状、山丘样突出或不规则增厚,咽旁间隙及颈动脉鞘区均无浸润表现,邻近骨质无异常改变。腺样体肥大指数A/N比值≥0.71有33例,0.70≥A/N比值≥0.61有7例,A/N比值≤0.60有2例。结论:CT和MR的横断面图像及矢状面图像的A/N比值的测定能准确地诊断腺样体肥大,明确并发症,并能准确量化肥大程度。     

呼吸机相关性肺炎中鲍曼不动杆菌耐药性的动态分析

目的分析呼吸机相关性肺炎（VAP）病原菌鲍曼不动杆菌的分布特点及耐药性,以指导临床合理用药。方法对明确行气管插管或气管切开机械通气〉48h的66例患者的气管内抽吸物（ETA）进行细菌定量培养及抗菌药物敏感性测定。结果回顾性分析66例VAP患者ETA培养出病原菌152株,鲍曼不动杆菌55株（36.2%）;鲍曼不动杆菌首选抗菌药物是头孢哌酮舒巴坦和亚胺培南;鲍曼不动杆菌对常见抗菌药物的耐药率呈上升趋势,并呈多药耐药;头孢哌酮舒巴坦耐药率最低为54.5%,对亚胺培南耐药率达74.5%,且呈上升趋势。结论动态监测鲍曼不动杆菌的耐药性变化,有助于临床合理应用抗菌药物。     

炭疽及其主要类属芽胞杆菌分类鉴定方法

本文记述了用表型、遗传型和热裂解气相色谱法对炭疽杆菌及其主要类属菌的鉴定结果。只依表型特征,可以明确地把炭疽杆菌区分出来。按遗传型鉴定可显示炭疽杆菌和蜡样杆菌较近的亲缘性,炭疽杆菌典型株与蜡样杆菌虽有差别,但非典型株与之差别则不显著。气相色谱法目测指纹图的特征峰,蜡样杆菌和枯草杆菌截然不同;但炭疽杆菌的峰型典型株近似蜡样杆菌,多数非典型株与枯草杆菌不易区分。     

338株鲍曼不动杆菌感染分布特征及耐药性分析

目的了解我院鲍曼不动杆菌的感染分布及其耐药性情况,指导临床抗生素的合理选择。方法对我院2010年1月～2010年12月从临床患者标本中分离的338株鲍曼不动杆菌进行耐药性分析,并用WHONET软件进行数据处理。结果分离的鲍曼不动杆菌主要分布在重症监护病房135株（39.94%）,其次是呼吸内科65株（19.23%）;痰标本中分离的鲍曼不动杆菌最多,为236株（68.82%）。鲍曼不动杆菌对头孢哌酮/舒巴坦、多黏菌素敏感,其次对亚胺培南、美洛培南较敏感。对临床常用的头孢三代和氟喹诺酮类抗菌药物的耐药率大于45.0%。结论我院临床医师应掌握鲍曼不动杆菌的耐药情况,合理使用敏感抗生素,控制多重耐药株的流行,加强医院感染控制。     

我院2006年革兰阴性杆菌感染的耐药性分析

 目的 了解我院临床分离的革兰阴性杆菌分布及耐药性特征,指导临床合理使用抗菌药.方法 用纸片扩散法对各类感染标本中分离的革兰阴性杆菌共744株进行药敏试验,并用表型确证试验进行ESBLs的检测.结果 我院分离的革兰阴性杆菌主要为大肠埃希菌(39.0%)、铜绿假单胞菌(21.5%)、肺炎克雷伯菌(17.3%).这些菌株对12种抗生素的敏感率各不相同,亚胺培南仍是对革兰阴性杆菌抗菌作用最强的一类抗生素,头孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦也有较好的抗菌活性.产酶菌株对抗菌药物的敏感率显著降低.结论 我院分离的革兰阴性杆菌耐药性强且多重耐药,临床实验室应加强对ESBLs的检测,了解各菌种的耐药特点,以指导临床合理使用抗菌药物并严密监控新的耐药菌的产生.     

炭疽芽孢杆菌芽孢适配子的结构与亲和性分析

为了对炭疽芽孢杆菌疫苗株A．16R芽孢的适配子进行亲和性分析,体外构建了78个碱基的随机DNA库,以炭疽芽孢杆菌疫苗株A．16R芽孢为靶标,用SELEX技术进行了15轮的筛,针室的适配子库进行克隆,测序,用Macaw2.05和DNAsisv2.5软件对每一适配子的保守序列和二级结构进行分析,并用生物素－链酶亲和素－辣根酶系统检测,根据OD值的高低判定亲和力的大小,对每一适配子进行亲和力测定。结果表明,适配子的亲和力高低不一,OD值最高为1．2,最低为0．25,二级结构分析结果显示,茎环和茎等二级结构可是适配子与芽孢结合的基础;其一级结构提示有AGGGG,CCCCG,GGCTT、ACACT等保守序,上述分类与OD值的高低分布基本吻合。