汉防己甲素诱导人肝癌SMMC7721细胞凋亡的机制研究

目的:研究汉防己甲素(Tet)诱导人肝癌SMMC7721细胞凋亡的机制。方法:以4、6、8、10 mg/L Tet培养细胞24、48、72 h后,MTT法测定细胞活力并计算抑制率。6 mg/L Tet培养细胞24、48、72 h后,流式细胞仪检测细胞凋亡率;线粒体膜电位(JC-1)染色工作液染色,荧光显微镜下观察细胞JC-1情况;酶标仪测定半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)活性;Western blot法测定胞浆细胞色素C(Cyto-C)、Caspase-3原酶(Pro-caspase-3)蛋白表达。试验均设空白对照(常规培养基或培养0 h)。结果:4、6、8、10 mg/L Tet培养细胞24、48、72 h后对细胞生长有明显抑制作用,且呈时间、剂量依赖关系。与空白对照比较,6 mg/L Tet培养细胞24、48、72 h后细胞凋亡率升高,细胞JC-1降低,且呈时间依赖关系;6 mg/L Tet培养细胞24、48 h后Caspase-3活性增强;6 mg/L Tet培养细胞24 h后Cyto-C蛋白表达增强,Pro-caspase-3蛋白表达减弱,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 :Tet可诱导SMMC7721细胞凋亡,其机制可能与线粒体凋亡途径的激活有关。     

马蔺子甲素诱导鼻咽癌细胞凋亡的研究

目的:初步探讨马蔺子甲素体外抗鼻咽癌作用和诱导鼻咽癌细胞凋亡作用.方法:细胞毒测定以MTT法,细胞凋亡的测定以流式细胞仪法.结果:马蔺子甲素对多种鼻咽癌细胞株均具有细胞毒作用,对CNE_2、SUNE_1、Fadu细胞的IC50分别为18.8±3.1、22.4±12.0、19.3±6.8μmol/L;马蔺子甲素也能诱导鼻咽癌细胞株CNE_2细胞凋亡.Fadu细胞与58.8、29.4μmol/L浓度马蔺子甲素共同培养48h,其诱导细胞的凋亡率分别为59.3%±4.5%、33.2%±2.3%,半数凋亡浓度为56.3μmol/L,且具有剂量依赖性.结论:马蔺子甲素本身也具有抗鼻咽癌作用及诱导鼻咽癌细胞凋亡的作用.     

汉防己甲素对大鼠肝保护和抗氧化作用的实验研究

目的：研究汉防己甲素对大鼠肝保护与抗氧化作用。方法：选取40只大鼠作为实验对象,随机分为模拟组、溶剂对照组及治疗3组（20 mg/mL,60 mg/mL,100 mg/mL）,每组8只大鼠;模型组每隔3 d给予四氧化碳溶液,溶液浓度为30%,持续给予10 d,给药方法为灌胃;溶剂对照组每日行同等剂量溶剂实验;治疗3组每日给予汉防己甲素并给予四氧化碳溶液;比较汉防己甲素对大鼠肝保护与抗氧化效果。结果：治疗3组大鼠肝损伤程度指标显著优于其他2组,经比较其差异有统计学意义（P〈0.05）;对CAT、GPx、SOD、GST、GSH等抗氧化指标显著优于其他2组,经比较其差异有统计学意义（P〈0.05）;汉防己甲素可有效清除超氧化物离子形成的自由基,且清除能力与药物浓度呈正相关（P〈0.05）。结论：汉防己甲素对大鼠肝保护与抗氧化具有显著作用。     

汉防已甲素对四氧嘧啶糖尿病大鼠高血糖的预防作用

本研究以血糖为检测指标,观察了汉防己甲素对四氧嘧啶糖尿病大鼠高血糖的预防作用。结果表明:①预先给予不同剂量的汉防己甲素,皆可不同程度地防止四氧嘧啶升高血糖的作用,其预防效果随剂量的增加而增强。②预先给予汉防己甲素(100mg/kg)预防组和注射四氧嘧啶后24h给予汉防己甲素(100mg/kg),预防组于注射四氧嘧啶(0天)后第2、3、5、7天的血糖浓度与对照组同天血糖比较均明显降低(P<0.01)。结论:注射四氧嘧啶前后一定时间给予汉防己甲素均可预防四氧嘧啶致高血糖作用的发生。动态观察1周,预防组血糖浓度稳定,无升高趋势。     

汉防己甲素聚乳酸微球小鼠肺靶向研究

目的 :研究汉防己甲素聚乳酸微球的肺靶向性。方法 :分别对小鼠尾静脉注射汉防己甲素聚乳酸微球和汉防己甲素注射剂 ,以反相高效液相色谱法测定并比较小鼠各组织中汉防己甲素的浓度。结果 :汉防己甲素在血浆中检测浓度范围为0 .519～17 000μg/ml(r=0. 9996) ,加样回收率为97 .32 % ,相对标准差平均值为4 .46 % ;应用汉防己甲素聚乳酸微球后汉防己甲素在小鼠各组织中浓度明显高于汉防己甲素注射剂 ;汉防己甲素在小鼠肺中浓度明显高于其它组织。结论 :汉防己甲素聚乳酸微球具有明显的肺靶向性。     

分枝石蕊多糖诱导人白血病K562细胞凋亡

目的：研究分枝石蕊多糖（CFP-1）是否能诱导K562细胞凋亡。方法：抑制细胞增殖的测定采用MTT法;用荧光显微镜和透射电镜观察细胞的形态学变化;采用琼脂糖凝胶电泳法观测DNA碎片;用流式细胞仪检测凋亡细胞数。结果：CFP-1（50-800mg/L）明显抑制K562细胞增殖,并且呈浓度依赖性,K562细胞与CFP-1300mg/L共同培养5d后,观察到典型的凋亡形态变化,电泳呈现梯形条带。结论：CFP-1诱导人白血病K562细胞凋亡。     

汉防己甲素逆转人肝癌耐药细胞株多药耐药性的研究

目的研究汉防己甲素对人肝癌多药耐药细胞株Hep-3B／ADM耐药性的逆转作用及其机制。方法通过阿霉素（ADM）浓度梯度递增诱导法，建立人肝癌多药耐药细胞株Hep-3B／ADM。MTT法检测细胞对化学疗法药物的敏感性；流式细胞仪检测细胞表面多药耐药基因表达产物P-170及分析细胞内若丹明123染剂相对荧光强度。结果汉防己甲素（0．10～1．00μmol／L）可逆转肝癌耐药细胞的耐药性；汉防己甲素明显降低细胞表面P-170的表达。结论汉防己甲素具有增强阿霉素对Hep-3B／ADM细胞的毒性作用，其作用机制与逆转多药耐药基因有关。     

苦参碱对甲状腺相关性眼病眼眶成纤维细胞增殖的影响

目的 观察苦参碱对甲状腺相关性眼病(TAO)眼眶成纤维细胞增殖的影响.方法 ⑴原代培养TAO患者及正常眼眶成纤维细胞,行细胞免疫荧光检测,确定所培养细胞为眼眶成纤维细胞.⑵将不同浓度梯度的苦参碱(10mg/L、20mg/L、40mg/L、80mg/L、160mg/L、320mg/L)及地塞米松溶液(0.01mg/L、0.1mg/L、1mg/L、10mg/L、100mg/L)分别作用于TAO患者及正常眼眶成纤维细胞,并行CCK8检测了解细胞活力.⑶根据CCK8检测情况选取了浓度为:160mg/L、320mg/L、480mg/L的苦参碱作用于TAO患者及正常眼眶成纤维细胞,并行ELISA检测TGF-β表达情况.⑷TUNEL试验检测经160mg/L、320mg/L、480mg/L的苦参碱作用后的TAO患者及正常眼眶成纤维细胞的凋亡情况.结果 ⑴细胞免疫荧光鉴定了原代分离培养的TAO患者和正常眼眶成纤维细胞的四种特征蛋白,其中Cytokeratin-18、Desmin、S-100三种蛋白均少量表达,Vimentin则大量表达,证明细胞为中胚层来源,鉴定细胞为成纤维细胞.⑵320mg/L的苦参碱对正常眼眶成纤维细胞活力的影响无统计学意义,100mg/L的地塞米松会抑制正常眼眶成纤维细胞活力;320mg/L的苦参碱能抑制TAO患者的眼眶成纤维细胞活力,但其抑制作用要弱于10mg/L及100mg/L的地塞米松.⑶在TAO患者眼眶成纤维细胞中TGF-β的含量高于正常眼眶成纤维细胞,但差异无统计学意义(P=0.49).经不同浓度苦参碱处理的正常眼眶成纤维细胞及TAO患者眼眶成纤维细胞中的TGF-β的表达均稍有下降,并有浓度依赖,但这种表达差异同样无统计学意义.⑷苦参碱对正常眼眶成纤维细胞凋亡作用并不明显;经苦参碱处理后的TAO患者眼眶成纤维细胞凋亡增加,且苦参碱浓度越高、细胞凋亡率越大.结论 本次研究观察到:苦参碱能降低TAO患者眼眶成纤维细胞活力并促进其凋亡,对正常眼眶成纤维细胞却无明显影响.苦参碱作用的具体机制还有待于进一步研究,期待为TAO的治疗提供新的思路.     

苦参碱对甲状腺相关性眼病眼眶成纤维细胞增殖的影响

目的 观察苦参碱对甲状腺相关性眼病(TAO)眼眶成纤维细胞增殖的影响.方法 ⑴原代培养TAO患者及正常眼眶成纤维细胞,行细胞免疫荧光检测,确定所培养细胞为眼眶成纤维细胞.⑵将不同浓度梯度的苦参碱(10mg/L、20mg/L、40mg/L、80mg/L、160mg/L、320mg/L)及地塞米松溶液(0.01mg/L、0.1mg/L、1mg/L、10mg/L、100mg/L)分别作用于TAO患者及正常眼眶成纤维细胞,并行CCK8检测了解细胞活力.⑶根据CCK8检测情况选取了浓度为:160mg/L、320mg/L、480mg/L的苦参碱作用于TAO患者及正常眼眶成纤维细胞,并行ELISA检测TGF-β表达情况.⑷TUNEL试验检测经160mg/L、320mg/L、480mg/L的苦参碱作用后的TAO患者及正常眼眶成纤维细胞的凋亡情况.结果 ⑴细胞免疫荧光鉴定了原代分离培养的TAO患者和正常眼眶成纤维细胞的四种特征蛋白,其中Cytokeratin-18、Desmin、S-100三种蛋白均少量表达,Vimentin则大量表达,证明细胞为中胚层来源,鉴定细胞为成纤维细胞.⑵320mg/L的苦参碱对正常眼眶成纤维细胞活力的影响无统计学意义,100mg/L的地塞米松会抑制正常眼眶成纤维细胞活力;320mg/L的苦参碱能抑制TAO患者的眼眶成纤维细胞活力,但其抑制作用要弱于10mg/L及100mg/L的地塞米松.⑶在TAO患者眼眶成纤维细胞中TGF-β的含量高于正常眼眶成纤维细胞,但差异无统计学意义(P=0.49).经不同浓度苦参碱处理的正常眼眶成纤维细胞及TAO患者眼眶成纤维细胞中的TGF-β的表达均稍有下降,并有浓度依赖,但这种表达差异同样无统计学意义.⑷苦参碱对正常眼眶成纤维细胞凋亡作用并不明显;经苦参碱处理后的TAO患者眼眶成纤维细胞凋亡增加,且苦参碱浓度越高、细胞凋亡率越大.结论 本次研究观察到:苦参碱能降低TAO患者眼眶成纤维细胞活力并促进其凋亡,对正常眼眶成纤维细胞却无明显影响.苦参碱作用的具体机制还有待于进一步研究,期待为TAO的治疗提供新的思路.     

马蔺子甲素诱导鼻咽癌细胞凋亡的研究

目的:初步探讨马蔺子甲素体外抗鼻咽癌作用和诱导鼻咽癌细胞凋亡作用.方法:细胞毒测定以MTT法,细胞凋亡的测定以流式细胞仪法.结果:马蔺子甲素对多种鼻咽癌细胞株均具有细胞毒作用,对CNE_2、SUNE_1、Fadu细胞的IC50分别为18.8±3.1、22.4±12.0、19.3±6.8μmol/L;马蔺子甲素也能诱导鼻咽癌细胞株CNE_2细胞凋亡.Fadu细胞与58.8、29.4μmol/L浓度马蔺子甲素共同培养48h,其诱导细胞的凋亡率分别为59.3%±4.5%、33.2%±2.3%,半数凋亡浓度为56.3μmol/L,且具有剂量依赖性.结论:马蔺子甲素本身也具有抗鼻咽癌作用及诱导鼻咽癌细胞凋亡的作用.     

木犀草素对膀胱肿瘤T24细胞的影响

目的研究木犀草素对膀胱肿瘤T24细胞体外增殖的抑制和诱导凋亡作用。方法不同浓度木犀草素作用于指数生长期膀胱肿瘤T24细胞后应用MTS比色法检测细胞增殖的抑制作用。通过DNA凝胶电泳检测细胞的凋亡情况。结果浓度为0.01～0.04mg/mL的木犀草素对体外培养的膀胱肿瘤T24细胞有明显的抑制作用。DNA凝胶电泳结果显示:空白对照组没有出现DNA"梯带";其他4组(除木犀草素0.004mg/mL组)均出现不同程度的DNA"梯带",显示出细胞凋亡的特征。结论木犀草素在浓度为0.01～0.04mg/mL时对膀胱肿瘤T24细胞有通过诱导细胞凋亡的方式抑制细胞生长的作用,可能具有治疗膀胱肿瘤的临床价值。     

苏木水提物诱导HL-60细胞凋亡的研究

目的　以HL 6 0细胞为靶细胞 ,观察不同浓度苏木水提物 (AELS)对靶细胞诱导凋亡作用。方法　台盼蓝拒染法检测细胞活性 ,光镜观察细胞形态学变化 ,琼脂糖凝胶电泳法检测凋亡细胞的特征性DNA降解 ,并与阳性对照药Vp16 (etoposide,依托泊苷 )对比。 结果　研究显示 ,40mg/LVp16 ,15 0、30 0mg/L浓度的苏木水提物作用 16h均可诱导靶细胞发生凋亡。光镜下可见到细胞体积缩小 ,染色质浓缩及凋亡小体形成。DNA凝胶电泳显示特征性DNA阶梯图。结论　苏木水提物在一定浓度下可诱导HL 6 0细胞凋亡。提示诱导癌细胞凋亡是其具有抗肿瘤活性的机制之一。     

黄樟素氧化物对去除成纤维细胞生长因子所诱导的血管内皮细胞凋亡及生长的影响

目的:研究黄樟素氧化物对去除成纤维细胞生长因子(FGF)诱导的血管内皮细胞凋亡及生长的影响.方法:光学显微镜观察细胞形态学变化;MTT法测定细胞生长;DNA电泳和荧光显微技术检测DNA断裂;流式细胞术测定细胞周期分布.结果:黄樟素氧化物5-25mg/L处理去除FGF的血管内皮细胞24h,细胞铺展和生长被促进,细胞脱壁和DNA片段化被抑制,黄樟素氧化物10mg/L对细胞周期分布无明显影响.黄樟素氧化物50-100 mg/L促进血管内皮细胞的脱壁和DNA片段化,黄樟素氧化物100mg/L将细胞周期阻断于G_2-M期.结论:黄樟素氧化物在10mg/L时抑制血管内皮细胞凋亡,而在100mg/L时促进其凋亡,该药物对血管内皮细胞生长和凋亡有重要影响.     

吡拉西坦/加兰他敏对阿尔茨海默病模型大鼠的改善作用及其机制研究

目的:探讨吡拉西坦/加兰他敏对阿尔茨海默病模型大鼠的改善作用及其机制。方法:取大鼠随机均分为假手术组、模型组、吡拉西坦(15mg·mL-1)组、加兰他敏(0.14mg·mL-1)组及其2药联用高、中、低剂量(吡拉西坦/加兰他敏:30/0.28、15/0.14、7.5/0.07mg·mL-1)组,再设立正常对照组,每组10只;除假手术组外其余大鼠用基底核注射海人藻酸建立阿尔茨海默病模型,假手术组注射等容积的磷酸盐缓冲液,造模成功后第2天各组给予相应药物(10mL·kg-1·d-1),每天1次,连续给药14d,给药第9天行大鼠跳台实验测定主动回避次数;于第14天给药1h后处死大鼠,测定脑组织中乙酰胆碱(Ach)及其酯酶(AchE)的浓度,并在光镜下观察大鼠海马结构的变化。结果:与模型组比较,联用组大鼠主动回避次数明显增加、Ach浓度明显升高、AchE浓度明显下降(P<0.05或P<0.01),且作用优于2药单用组;其中联用高、中剂量组大鼠海马区颗粒细胞排列整齐,未见明显异常。结论:吡拉西坦/加兰他敏对阿尔茨海默病模型大鼠的改善作用明显优于2药单用。     

粉防已甲素、乙素对L7712和S180细胞DNA、RNA和蛋白质合成的抑制作用

粉防已甲素和乙素对L7712和S180癌细胞DNA合成的ID_(50)分别为2.6,3.5和27.5,24.5mg/L;它们对L7712细胞DNA合成的抑制是由DNA复制模板受到损伤而引起的。它们对两种癌细胞DNA和RNA的合成有很强的抑制作用,对蛋白质合成的抑制作用较弱。两种药物对癌细胞抑制程度和作用方式相似。     

丹皮酚与顺铂联用对人骨肉瘤细胞MG-63增殖、凋亡及PI3K/Akt/mTOR信号通路的影响

目的:研究丹皮酚与顺铂联用对人骨肉瘤细胞MG-63增殖、凋亡的影响及可能的作用机制。方法:取对数生长期MG-63细胞,分为空白对照组、顺铂组(4μmol/L)、丹皮酚组(50 mg/L)和低、中、高浓度联用组(50、100、200 mg/L丹皮酚+4μmol/L顺铂)。采用CCK-8法检测经药物作用24、48、72 h时的细胞增殖率,采用膜联蛋白Ⅴ-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶双染法检测经药物作用24 h时的细胞凋亡率;采用实时荧光定量聚合酶链式反应法检测经药物作用24 h时细胞中PI3KCA、Akt、mTOR、P-gp、PTEN mRNA的相对表达量。结果:与空白对照组比较,各药物组细胞各时间点的细胞增殖率和细胞中PI3KCA、Akt、mTOR mRNA的相对表达量均显著降低,细胞凋亡率和细胞中P-gp、PTEN mRNA的相对表达量均显著升高(P<0.05或P<0.01)。与顺铂组和丹皮酚组比较,高浓度联用组细胞各时间点的细胞增殖率和细胞中PI3KCA、Akt、mTOR mRNA的相对表达量均显著降低,细胞凋亡率和细胞中P-gp、PTEN mRNA表达量均显著升高(P<0.01),中、低浓度联用组上述部分指标差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论:丹皮酚与顺铂联用可抑制MG-63细胞增殖,促进其凋亡;这种作用可能与下调PI3KCA、Akt、mTOR mRNA表达,上调P-gp、PTEN mRNA表达有关。     

罗格列酮对大鼠肺纤维化细胞模型干预治疗的疗效观察

目的采用转化生长因子（TGF-β1）诱导大鼠肺成纤维细胞,给予罗格列酮干预,明确其对大鼠肺纤维化的影响。方法以组织贴块法培养肺成纤维细胞,分为0.4%血清对照组（空白对照组）、TGF-β1模型组（模型组）、TGF-β1＋不同浓度罗格列酮干预组（干预组）,分别检测大鼠肺纤维化细胞代谢活性及Ⅰ、Ⅲ型胶原合成情况。结果不同浓度罗格列酮干预组OD值与模型组比较都有所下降（P〈0.05）,其中罗格列酮浓度在10μmol/L时OD值与模型组比较下降最为明显,不同罗格列酮浓度组间OD值差异无显著性（P〉0.05）。10μmol/L罗格列酮干预组与模型组相比较,Ⅰ型、Ⅲ型胶原表达下降,差异具有显著性（P〈0.05）。结论罗格列酮可以抑制TGF-β1诱导的大鼠肺成纤维细胞增殖和Ⅰ型、Ⅲ型胶原的合成。     

茶多酚对内毒素抑制人牙周膜成纤维细胞增殖的影响

目的 观察茶多酚对脂多糖(LPS)诱导下人牙周膜成纤维细胞(HPDLFs)增殖的影响.方法 采用组织块培养法培养原代HPDLFs并传代、免疫组化检测,取第5代细胞用于实验.将LPS及茶多酚分组,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法分别于24、48、72 h检测HPDLFs增殖活力.结果 免疫组化染色结果显示,所培养细胞的波形丝蛋白染色呈阳性表现,阳性部位位于胞质,角蛋白染色呈阴性表现.各浓度LPS组在24、48、72 h的光密度(OD)值(4 mg/L LPS组:0.323±0.007、0.345±0.010、0.437±0.007;20 mg/L LPS组:0.270±0.004、0.283±0.009、0.367±0.007; 100 mg/L LPS组:0.175±0.006、0.187±0.006、0.248±0.005;500 mg/L LPS组:0.088±0.004、0.091±0.006、0.153±0.009)与同时段空白对照组(0.306±0.008、0.333±0.007、0.399±0.007)组间比较差异均有统计学意义(均P＜0.05).100 mg/L LPS组和各浓度茶多酚组在24、48、72 h的OD值(100 mg/L LPS组:0.216±0.010、0.260±0.010、0.352±0.012; 100 mg/L LPS组+0.125 g/L茶多酚组:0.300±0.010、0.408±0.013、0.490±0.014;100 mg/L LPS组+0.25 g/L茶多酚组:0.333±0.012、0.416±0.010、0.532±0.012;100 mg/L LPS组+0.5 g/L茶多酚组:0.390±0.012、0.485±0.011、0.642±0.013;100 mg/L LPS组+1 g/L茶多酚组:0.368±0.010、0.481±0.006、0.621±0.007)与同时段空白对照组(0.450±0.012、0.528±0.011、0.687±0.010)组间比较,差异均有统计学意义(均P＜0.05);各浓度茶多酚组在24、48、72 h的OD值均低于同时段100 mg/L LPS组(均P＜0.05).结论 LPS抑制HPDLFs的增殖,茶多酚明显促进LPS诱导下HPDLFs的增殖,这提示茶多酚可应用于牙周炎的预防及治疗.     

粉防己碱、甲基莲心碱和蝙蝠葛碱增强长春新碱诱导人乳腺癌MCF-7多药耐药细胞凋亡

目的　观察粉防己碱、甲基莲心碱和蝙蝠葛碱与长春新碱合用对多药耐药肿瘤细胞诱导凋亡的作用。方法　采用荧光染料Hoechst 33342和碘化丙锭联染技术、流式细胞术和琼脂糖凝胶电泳技术 ,检测长春新碱及其与上述单体合用诱导耐药株瘤细胞MCF 7/Dox的凋亡程度。结果　单用长春新碱可引起约 10 %细胞凋亡 ,而长春新碱与粉防己碱、甲基莲心碱或蝙蝠葛碱合用明显地增加细胞凋亡的百分率 ,其中粉防己碱的作用最强。联合用药的细胞凋亡数显著地大于单用长春新碱的作用。结论　粉防己碱、甲基莲心碱和蝙蝠葛碱均有明显的增强长春新碱诱导人乳腺癌MCF 7多药耐药细胞的凋亡作用