植物乳杆菌代谢产物和Ca2+诱导人舌鳞癌CAL-27细胞凋亡的研究

目的:探讨植物乳酸杆菌发酵乳清蛋白获得的代谢产物以及Ca2+对人舌鳞癌CAL-27细胞生长抑制作用和诱导细胞凋亡作用。方法:植物乳杆菌23201经复原乳清菊糖培养基培养,制备相应的代谢产物1(LPM1)。利用草酸钠溶液沉淀LPM1中的Ca2+获得不含Ca2+的代谢产物(LPM1-F);采用MTT法检测不同浓度的LPM1和LPM1-F对CAL-27细胞体外增殖的抑制作用;通过吖啶橙染色法观察凋亡细胞的形态学变化;采用Annexinv-FITC/PI双染试剂盒检测早期凋亡率。结果:不同浓度LPM1和LPM1-F分别作用CAL-27细胞24h,最大抑制率分别达到(48.81±4.96)%和(56.70±2.33)%;荧光显微镜下观察,凋亡细胞皱缩,凝聚呈新月形或马蹄形,贴壁不良;流式细胞仪结果显示:经LPM1和LPM1-F处理的CAL-27细胞早期凋亡率均高于对照组。结论:植物乳酸杆菌代谢产物体外抑制CAL-27细胞生长,呈剂量的依赖性,并且诱导细胞凋亡,其中Ca2+对人舌鳞癌CAL-27细胞生长和凋亡无影响。     

甲硫氨酸限制对口腔癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响北大核心CSCD

目的探讨甲硫氨酸限制对人口腔鳞状癌细胞CAL-27的增殖、迁移和侵袭的影响。方法采用计数法检测甲硫氨酸限制对口腔癌细胞CAL-27增殖的影响;平板克隆法检测CAL-27细胞克隆形成;流式细胞术结合PI单染法检测CAL-27细胞的周期;Annexin V-PE/7AAD双染法检测CAL-27细胞的凋亡;划痕与Transwell实验检测CAL-27细胞的迁移和侵袭能力;Western blot检测细胞凋亡蛋白Bcl-2和Bax、细胞周期蛋白CDK2和CDK4以及迁移侵袭蛋白N-cadherin和E-cadherin的表达水平的变化。结果甲硫氨酸限制明显抑制口腔癌CAL-27细胞的增殖和克隆形成(P<0.01);甲硫氨酸限制将口腔癌细胞CAL-27阻滞在G_(0)/G_(1)期(P<0.01);甲硫氨酸限制明显诱导口腔癌细胞CAL-27细胞发生凋亡,抑制细胞的迁移和侵袭能力(P<0.01);Western blot结果表明甲硫氨酸限制明显下调口腔癌CAL-27细胞的凋亡蛋白Bcl-2的表达以及周期蛋白CDK2和CDK4的表达,并且明显下调迁移和侵袭蛋白N-cadherin以及上调E-cadherin的表达水平。结论口腔癌细胞CAL-27具有甲硫氨酸依赖性;通过甲硫氨酸限制明显抑制口腔癌细胞CAL-27细胞的增殖、迁移和侵袭,可为甲硫氨酸限制疗法应用于口腔癌的治疗提供理论依据。     

灯盏花素对肝癌细胞HepG2和正常肝细胞LO-2的体外增殖抑制作用

目的 观察灯盏花素对人肝癌细胞HepG2及人正常肝细胞LO-2体外增殖的影响.方法 以不同浓度(0、3.125、6.25、12.5、25、50 mg·L-1)的灯盏花素分别处理HepG2和LO-2细胞,24 h后采用MTT法检测各组细胞生长情况;Hoechst 33258荧光法和流式细胞术观察HepG2和LO-2的凋亡情况.结果 灯盏花素在3.1~50.0 mg·L-1范围内呈浓度依赖性地抑制HepG2细胞的增殖,24 h的IC50为8.4 mg·L-1,并能诱导HepG2细胞凋亡;但对LO-2的增殖影响较小,且几乎无诱导凋亡作用.结论 灯盏花素体外可选择性地抑制肝癌细胞的增殖,可能与其诱导肝癌细胞凋亡有关.     

熊果酸通过下调环氧化酶2表达调控舌鳞癌细胞增殖与凋亡

目的 研究熊果酸(UA)对舌鳞癌细胞增殖与凋亡的作用及其可能机制.方法 人舌鳞癌细胞Tca8113分别加入UA 0、10、20、40 μmol/L,培养12-72 h,采用MTT法检测细胞增殖,Hoechst 33342染色观察细胞凋亡的形态学变化,Western blot法检测药物作用后细胞中环氧化酶2(COX-2)、B细胞淋巴瘤-白血病2(Bcl-2)、Bcl相关X蛋白(Bax)及半胱天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)的蛋白表达.结果 UA呈剂量依赖性地抑制舌鳞癌细胞Tca8113增殖,诱导舌鳞癌细胞凋亡,下调Tca8113细胞中COX-2蛋白表达,上调Bax/Bcl-2比值及活化的Caspase-3蛋白表达.结论 UA可能通过下调COX-2的表达抑制舌鳞癌细胞增殖,诱导凋亡.     

manumycin诱导舌鳞癌Tca8113细胞凋亡的作用及机制

目的研究manumycin抑制Tca8113细胞的生长和诱导细胞凋亡的作用及机制。方法细胞毒作用以MTT法测定;凋亡细胞形态以Hoechst33258染色后荧光显微镜观察;凋亡率的检测以AnnexinV染色,流式细胞仪检测;细胞内活性氧(ROS)和线粒体跨膜电位(ΔΨm)分别用DCFH-DA和DiOC6荧光探针标记,流式细胞仪检测;蛋白质定量检测以Westernblot法。结果manumycin浓度依赖性抑制Tca8113细胞的生长,IC50为(11.33±0.63)μmol.L-1;manumycin可浓度和时间依赖性诱导Tca8113细胞的凋亡,过氧化物清除剂N-乙酰半胱氨酸能清除manumycin介导的细胞活性氧的增加,抑制线粒体跨膜电位降低及细胞凋亡。结论manumycin体外显著抑制舌鳞癌Tca8113的生长及诱导细胞凋亡,其机制可能通过激活线粒体依赖性凋亡通路有关。     

五味子乙素通过Traf6/TAK1信号通路介导人胃癌细胞凋亡

目的研究五味子乙素介导人胃癌HGC27细胞凋亡发生的作用及对Traf6/TAK1信号通路的影响。方法不同浓度的五味子乙素(12、24、48μg/ml)干预细胞后,采用CCK8法检测HGC27细胞增殖情况,流式细胞术分析五味子乙素诱导HGC27细胞发生凋亡的情况,免疫印迹法分析五味子乙素对HGC27细胞中Bax、Bcl-2、Traf6、TAK1及p-TAK1蛋白表达量的影响。结果与对照组比较,五味子乙素能显著抑制HGC27细胞增殖,诱导细胞凋亡;诱导促凋亡蛋白Bax表达,抑制抗凋亡蛋白Bcl-2蛋白表达;显著抑制Traf6、p-TAK1蛋白表达,且呈浓度依赖性,差异均有统计学意义(P <0. 05)。结论五味子乙素能明显抑制HGC27细胞增殖、诱导凋亡,其作用机制可能与抑制Traf6/TAK1信号通路活化有关。     

木犀草素对膀胱肿瘤T24细胞的影响

目的研究木犀草素对膀胱肿瘤T24细胞体外增殖的抑制和诱导凋亡作用。方法不同浓度木犀草素作用于指数生长期膀胱肿瘤T24细胞后应用MTS比色法检测细胞增殖的抑制作用。通过DNA凝胶电泳检测细胞的凋亡情况。结果浓度为0.01～0.04mg/mL的木犀草素对体外培养的膀胱肿瘤T24细胞有明显的抑制作用。DNA凝胶电泳结果显示:空白对照组没有出现DNA"梯带";其他4组(除木犀草素0.004mg/mL组)均出现不同程度的DNA"梯带",显示出细胞凋亡的特征。结论木犀草素在浓度为0.01～0.04mg/mL时对膀胱肿瘤T24细胞有通过诱导细胞凋亡的方式抑制细胞生长的作用,可能具有治疗膀胱肿瘤的临床价值。     

金蒲抑瘤片诱导体外培养的人肝癌BEL-7404细胞凋亡的实验研究

目的：探讨金蒲抑瘤片体外对肝癌细胞的诱导凋亡作用。方法：应用MTT法、生长曲线、荧光染色、血清药理学、DNA凝胶电泳等实验技术研究金蒲抑瘤片体外对BEL－7404细胞的增殖抑制和诱导细胞凋亡的作用。结果：金蒲抑瘤片体外对BEL－7404细胞有明显的抑制作用，且这种抑制作用呈浓度依赖性。经体内代谢的含药血清也具有抑制细胞生长的能力。药物作用后的细胞出现荧光染色增强、胞核碎裂、凋亡小体形成等凋亡形态学变化。结论：金蒲抑瘤片及其含药血清，在一定浓度下能诱导BEL－7404细胞凋亡。     

蛇床子素通过PI3K/Akt通路诱导外阴鳞癌SW962细胞凋亡

目的探讨蛇床子素(osthole或osthol)能否通过PI3K/Akt通路诱导细胞凋亡,抑制细胞增殖。方法体外培养外阴鳞癌SW962细胞,加入不同浓度蛇床子素,MTT法检测细胞存活情况,DAPI染色观察细胞形态学变化;流式细胞术检测SW962细胞凋亡情况; Western blot检测Bcl-2、Bax、cleaved caspase-3、PI3K和p-Akt蛋白表达,及蛇床子素和IGF-1共作用下PI3K/Akt通路蛋白的变化。结果 MTT结果显示,蛇床子素呈浓度依赖性地抑制SW962细胞增殖;DAPI染色和流式细胞术结果显示,蛇床子素呈浓度依赖性诱导细胞凋亡。Western blot结果显示,蛇床子素能上调Bax和cleaved caspase-3蛋白表达,下调PI3K、p-Akt和Bcl-2蛋白表达。IGF-1诱导PI3K、p-Akt和Bcl-2蛋白表达增加,蛇床子素逆转IGF-1作用,3种蛋白表达下调。结论蛇床子素通过抑制PI3K/Akt通路,诱导外阴鳞癌SW962细胞凋亡,抑制细胞增殖。     

姜黄素和顺铂联用对雄激素非依赖性前列腺癌细胞PC-3作用

目的:研究姜黄素和顺铂联用抑制雄激素非依赖性前列腺癌细胞株PC-3增殖的影响.方法:MTT比色法检测细胞生长活性,流式细胞仪测定细胞周期时相变化及检测细胞凋亡,透射电镜观察细胞超微结构变化.结果:姜黄素能显著抑制雄激素非依赖性前列腺癌细胞的体外生长,呈时间与剂量依赖性;细胞周期主要阻滞于G2/M期,部分细胞出现凋亡形态学改变.顺铂和不同浓度姜黄素联合可显著抑制PC-3细胞增殖.姜黄素和顺铂在一定程度上均可诱导PC-3细胞凋亡,两种药物联用后,诱导细胞凋亡作用增强.结论:姜黄素可与顺铂协同抑制人前列腺癌细胞株PC-3的增殖.     

雷公藤醇提物对人L02肝细胞增殖和凋亡的作用

目的 研究雷公藤醇提物对人L02肝细胞增殖和凋亡的作用.方法 以0、4、8、16 mg/L的雷公藤醇提物(分别为对照组、4 mg/L组、8 mg/L组、16 mg/L组)干预体外培养的人L02肝细胞48 h后,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测各组肝细胞的生长抑制率,采用膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化吡啶双染流式细胞术检测人L02肝细胞的凋亡率.结果 与对照组比较,4mg/L组的吸光度值降低[(0.90±0.04)比(0.94±0.06),P＜0.05];当雷公藤醇提物浓度为8 mg/L和16 mg/L时,细胞液吸光度值降低均更加明显[(0.76±0.05)、(0.53 ±0.04)比(0.94±0.06),均P＜0.01].与对照组比较,4 mg/L组的细胞凋亡率升高,差异有统计学意义[(9.68±0.45)％比(5.42±0.27)％,P＜0.05];当雷公藤醇提物浓度为8mg/L和16 mg/L时,人L02肝细胞凋亡率升高均更加明显[(30.19±0.31)％、(57.26±0.54)％比(5.42±0.27.)％,均P＜0.01].结论 雷公藤醇提物对人L02肝细胞的增殖有抑制作用,并可诱导其凋亡.     

苏黄止咳胶囊对老年患者动态血压的影响

目的观察苏黄止咳肢囊对老年患者动态血压的影响。方法对80例老年感冒后咳嗽患者于应用苏黄止咳胶囊前、应用后第3天和第7天进行动态血压监测各参数进行对比分析,包括24 h平均收缩压（24hSBP）、24h平均舒张压（24hDBP）、日间平均收缩压 （dSBP）、日间平均舒张压（dDBP）、夜间平均收缩压（nSBP）、夜间平均舒张压（nDBP）和昼夜平均动脉压差值百分率（d-nMAP/dMAP）。结果用药后第3天和第7天动态血压24hSBP,24hDBP,dSBP, dDBP, nSBP,nDBP和d-nMAP/dMAP与用药前的比较无统计学差异 （p〉0.05）。结论苏黄止咳胶囊可以安全用于无高血压、心脏病及肝肾肺疾病的老年感冒后咳嗽患者。     

白藜芦醇对髓系白血病干细胞增殖和凋亡的影响及其与allo-NK细胞的联合杀伤作用

目的探讨白藜芦醇(RES)对髓系白血病干细胞(CD34+CD38-KG1a细胞,以下简写为KG1a细胞)增殖和凋亡的影响,并初步探讨RES增强allo-NK细胞对KG1a细胞杀伤作用的机制。方法免疫磁珠分选法分选人外周血单个核细胞(PBMCs)中的CD16+CD56+CD3-NK细胞(以下简写为NK细胞)。流式细胞术检测细胞表面分子CD34、CD38、CD3、CD15和CD56。MTT法、甲基纤维素克隆形成实验检测RES对KG1a细胞增殖抑制作用。DAPI染色法和流式细胞术检测RES对KG1a细胞凋亡的影响。使用IC50的RES作用KG1a细胞24 h后清洗离心获得RES/KG1a细胞。LDH释放法检测NK细胞对KG1a细胞和RES/KG1a 2种细胞的杀伤能力。流式细胞术检测KG1a细胞和RES/KG1a细胞的表面配体ULBP1、ULBP2、ULBP3、MICA和MICB。结果免疫磁珠分选后,外周血单个核细胞中的NK细胞比例为(90.5±3.2)%;KG1a细胞纯度为(91.2±3.9)%。RES对KG1a细胞的增殖抑制作用具有时间和剂量依赖性,24 h的IC50=24.0μmol·L-1;48 h的IC50=13.7μmol·L-1。RES抑制KG1a细胞的克隆形成能力并诱导细胞凋亡,具有剂量依赖性(P<0.05)。NK细胞对RES/KG1a细胞的杀伤能力比其对KG1a细胞的杀伤能力强(P<0.05)。与KG1a细胞比较,RES/KG1a细胞表面配体ULBP1、ULBP2、ULBP3表达明显上调(P<0.05),MICA和MICB变化不明显。结论 RES能够抑制KG1a细胞增值抑制并诱导细胞凋亡,联合NK细胞对KG1a细胞具有协同杀伤作用,这可能与KG1a细胞表面的ULBP1、ULBP2、ULBP3表达上调相关。     

L-氨基酸氧化酶对人肺腺癌A549细胞增殖、凋亡的影响研究

目的:探讨L-氨基酸氧化酶(LAAO)对人肺腺癌A549细胞增殖、凋亡的影响,为临床上寻找新的肺癌治疗方法提供参考。方法:将A549细胞制成浓度为5×104个/mL的细胞悬液,根据LAAO干预浓度的不同,将其分为4组:2.41、4.82、9.64、19.28mg·mL-1干预组,各组均干预24、48、72h。镜下观察各组细胞形态学改变,采用MTT法检测细胞增殖抑制率,原位末端标记法检测细胞凋亡指数,另设立阴性对照组进行比较。结果:LAAO对A549细胞增殖的抑制率随时间延长和浓度增加而增加(P<0.05),凋亡指数随时间延长和浓度增加而增加(P<0.05)。结论:LAAO可抑制A549细胞增殖,诱导其凋亡,且呈时间、剂量依赖性。     

油菜花粉脂溶性提取物对人前列腺癌细胞PC-3的体外生长抑制研究

目的探讨油菜花粉脂溶性提取物(BPE)对体外培养的人前列腺癌细胞PC-3的杀伤效应。方法光镜观察用药前后PC-3细胞形态,透射电镜观察细胞凋亡的形态变化;流式细胞术检测BPE对PC-3细胞凋亡的影响;反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测bax/bcl-2基因表达。结果 BPE对PC-3细胞增殖有抑制作用,PC-3细胞随着BPE浓度的增高其活细胞数下降,呈负相关。透射电镜下可见:核结构破坏,染色质稀疏,有些凝聚成团。随着时间的延长,细胞凋亡率上升,BPE与多西他赛能一同促进PC-3细胞发生凋亡。BPE的作用效应不是通过bax/bcl-2基因。结论 BPE可抑制人前列腺癌细胞PC-3的增殖,诱导细胞的凋亡。     

地塞米松对卵巢癌SKOV-3细胞的影响

目的研究地塞米松对体外培养条件下的卵巢癌细胞SKOV-3细胞增殖的影响及诱导其凋亡的情况。方法取对数生长期的SKOV-3细胞（细胞数为5×10^4／mL）分别接种于不同细胞培养板上,试验组每孔加入200μL不同浓度的地塞米松,空白对照组加入等体积PRMI-1640培养液孵育,采用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测吸光度（A490值）并计算SKOV-3细胞增殖抑制率;PI染色细胞后上流式细胞仪检测各个时间点的细胞凋亡率。结果MTT法检测结果显示,SKOV-3细胞增殖抑制率随着地塞米松浓度和作用时间的增加均明显增大,以40μmol／L浓度的试验组培养48h的抑制率最高,达（45．25±3．12）％。流式细胞仪检测显示。地塞米松处理后可引起G0／G1期细胞明显增加（P〈0．05）,且SKOV-3细胞凋亡率随着地塞米松浓度增加有升高趋势。结论地塞米松能诱导卵巢癌SKOV-3细胞凋亡。     

螺内酯诱导人急性白血病细胞Jurkat凋亡的作用研究

目的研究螺内酯对人急性白血病细胞Jurkat体外增殖的抑制及诱导凋亡的作用。方法将终浓度分别是10、50及100μmol/L的螺内酯加入Jurkat细胞的培养体系中,24 h内每隔4 h通过MTT法分析Jurkat细胞的增殖抑制率,Annexin V/PI流式细胞术法分析Jurkat细胞的早期凋亡率。结果螺内酯与Jurkat细胞共同培养12 h后,螺内酯能显著增加对细胞的增殖抑制作用,并且与药物浓度成正相关,各浓度组的抑制率随着培养时间的延长而升高,与药物干预时间成正相关;螺内酯处理Jurkat细胞24 h,各浓度组诱导细胞凋亡率分别为:10μmol/L组(11.2±0.35)%、50μmol/L组(29.8±1.27)%及100μmol/L(56.5±1.41)%,各个浓度组诱导细胞凋亡率与药物浓度成正相关。结论螺内酯对人T淋巴细胞白血病Jurkat细胞具有抑制增殖和诱导凋亡的作用,提示该药可能具有潜在抑瘤作用。     

青蒿琥酯联合甲氨蝶呤对类风湿关节炎滑膜细胞增殖和凋亡的影响

目的观察不同浓度的青蒿琥酯（ART）和甲氨蝶呤（MTX）对类风湿关节炎（RA）滑膜细胞增殖和凋亡的影响。方法收集RA关节液标本25例,体外分离培养滑膜细胞,以生长良好的3～5代滑膜细胞进行试验,调整细胞浓度,分为对照组和不同质量浓度ART组、MTX组。用四甲基偶氮唑盐比色法测定不同质量浓度的MTX和ART单独或联合作用于滑膜细胞对滑膜细胞增殖的影响;用流式细胞术检测不同质量浓度的MTX和ART单独或联合作用于滑膜细胞对滑膜细胞凋亡的影响。结果ART对滑膜细胞的增殖具有显著的抑制作用。ART质量浓度在3.125～50μg/mL范围内均可抑制RA滑膜细胞生长,且抑制作用随质量浓度增大而增强,具有剂量依赖性;ART12.5μg/mL＋MTX20μg/mL组的抑制作用最强,与其他药物组比较,P〈0.05。各药物作用于滑膜细胞24h后,早期凋亡细胞率与对照组比较,有显著差异（P〈0.05）;ART质量浓度在3.125～25μg/mL范围内作用于滑膜细胞24h后,早期凋亡细胞率与未用ART处理的对照组比较,有显著差异（P〈0.05）,并呈剂量依赖性;当ART的质量浓度达到50μg/mL时,早期凋亡细胞率降低,坏死细胞率却升高（P〈0.05）;ART12.5μg/mL＋MTX5μg/mL组的早期凋亡细胞率较其他药物组显著升高（P〈0.05）,而坏死细胞率却较低（P〈0.05）。结论ART和MTX单独或联合作用均可显著抑制RA滑膜细胞的增殖,诱导其凋亡。     

二烯丙基二硫诱导K562细胞凋亡及与G2 / M期阻滞关系研究

目的探讨二烯丙基二硫（DADS）对体外培养的人白血病细胞系K562细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。方法采用细胞计数法、形态学观察、MTT分析法、AO／EB染色、流式细胞术探讨DADS对K562细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。结果1．DADS在10-80mg-L。范围内,对K562细胞的抑制作用呈剂量一时间依赖效应。2．DADS浓度在10-80mg．L-1。时作用K562细胞24h后,凋亡率逐渐升高,差异有统计学意义（p〈0．05或P〈0．01）。3．不同浓度DADS作用于K562细胞24h后,K562细胞阻滞于G2／M期。结论DADS有抑制K562细胞增殖和促进K562细胞凋亡的作用,其作用的可能机制与k562细胞阻滞于G2／M期有关。     

大蒜油联合顺铂诱导人腺样囊性癌细胞株ACC-M凋亡

目的探讨大蒜油联合顺铂对人腺样囊性癌细胞株ACC—M细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响。方法采用不同浓度大蒜油、顺铂、大蒜油联合顺铂分别处理人腺样囊性癌细胞株ACC—M细胞24、48、72h后,MTT法检测肿瘤细胞体外增殖抑制情况;选取2、8、32μg/mL的大蒜油、顺铂、大蒜油联合顺铂处理肿瘤细胞4、8h后,流式细胞术分析肿瘤细胞周期分布和凋亡率。结果8、16、32μg／mL大蒜油及2、4、8、16、32μg／mL顺铂、大蒜油联合顺铂作用24、韶、72h对ACC-M细胞均有明显抑制作用,随浓度及时间增加,抑制率呈上升趋势。联合组用药肿瘤细胞抑制率明显高于单一用药组。流式细胞术结果显示,不同浓度的大蒜油、顺铂、大蒜油联合顺铂作用能使ACC．M细胞发生G2/M期阻滞,诱导细胞凋亡,随浓度增高及作用时间延长,周期分布越明显,凋亡率增高,联合组用药细胞周期阻滞和促凋亡作用明显强于单一用药组,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论不同浓度的大蒜油、顺铂、大蒜油联合顺铂均能有效抑制ACC-M细胞生长．阻滞细胞于G2／M期并诱导肿瘤细胞凋亡,大蒜油联合顺铂对ACC—M细胞生长抑制作用明显强于大蒜油、顺铂单独应用。