微小 RNA-141-3p靶向调控含 CUE结构域蛋白 2基因对雨蛙素诱导的大鼠胰腺腺泡细胞损伤的影响

目的探讨微小 RNA-141-3p(miR-141-3p)靶向调控含 CUE结构域蛋白 2(CUEDC2)对雨蛙素诱导的大鼠胰腺腺泡细胞损伤的影响。方法 2018年7月至 2019年12月,从美国 ATCC购买大鼠胰腺腺泡细胞 AR42J。100 nm/L雨蛙素(CAE)刺激大鼠胰腺腺泡细胞 AR42J 6 h建立急性胰腺炎细胞模型。实时荧光定量 PCR(qRT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blotting)检测雨蛙素干预后AR42J细胞中 miR-141-3p和CUEDC2的表达水平。双荧光素酶报告基因实验和蛋白质印迹法验证 miR-141-3p和CUEDC2的靶向关系。利用脂质体转染法将 miR-141-3p抑制物(anti-miR-141-3p)、miRNA抑制物阴性对照(anti-miR-NC)、CUEDC2过表达载体(pcDNA-CUEDC2)、空载体(pcDNA)分别转染 AR42J细胞,经雨蛙素干预处理后,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白质印迹法检测 B细胞淋巴瘤 /白血病 -2(Bcl-2)和Bcl-2相关 X蛋白(Bax)的表达水平,酶联免疫吸附试验(Elisa)试剂盒检测细胞培养上清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素 -6(IL-6)水平。结果雨蛙素干预处理后 AR42J细胞中 miR-141-3p的表达水平显著升高［(2.43±0.24)比(1.00±0.09)］,CUEDC2的表达水平显著降低。 miR-141-3p靶向负性调控 CUEDC2表达。与转 anti-miR-NC和雨蛙素协同处理组比较,转染 anti-miR-141-3p和雨蛙素协同处理组 AR42J细胞凋亡率显著增加［(27.48±2.33)%比(15.64±1.51)%］Bax蛋白的表达显著增加, Bcl-2蛋白的表达显著降低, TNF-α［(136.54±14.58)ng/L比( 226.48±20.54)ng/L］和 IL-6［(115.89±11.65)n,g/L比( 193.47± 18.63)ng/L］的分泌显著降低;与转染 pcDNA和雨蛙素协同处理组比较,转染 pcDNA-CUEDC2和雨蛙素协同处理组 AR42J细胞凋亡率显著增加［(23.87±2.35)%比(14.23±1.44)%］,Bax蛋白的表达显著增加, Bcl-2蛋白的表达显著降低, TNF-α［(158.74±15.32)ng/L(236.87±18.66)ng/L］和IL-6［(135.77±14.97)ng/L比(189.67±17.32)ng/L］的分泌显著降低;转染 si-CUEDC2可逆转转染 anti-miR14比1-3p对雨蛙素诱导的大鼠胰腺腺泡细胞损伤的影响。结论抑制 miR-141-3p通过靶向 CUEDC2可促进急性胰腺炎腺泡细胞的凋亡,抑制 TNF-α和IL-6分泌,从而减轻雨蛙素诱导的大鼠胰腺腺泡细胞损伤。     

黄芩素对miR-183/Kif2a介导乳腺癌细胞增殖和凋亡的机制研究

目的探讨黄芩素对miR-183/Kif2a介导的乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的作用及可能机制。方法噻唑蓝(methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide,MTT)法检测黄芩素对乳腺癌细胞增殖活性的影响,实时荧光定量聚合酶链式反应法检测细胞中miR-183和Kif2a信使RNA的表达,在线靶基因预测软件预测miR-183和Kif2a的靶向关系。转染miR-183抑制剂和pcDNA 3.1-Kif2a,黄芩素处理细胞后,MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞术测定细胞凋亡,蛋白质免疫印记技术(western blot,WB)检测细胞中G1/S-特异性周期蛋白-D1(Cyclin D1)、p21、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(C-Caspase-3)及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9(C-Caspase-9)蛋白表达。结果经黄芩素处理后的乳腺癌细胞增殖能力下降(P<0.05),细胞中miR-183水平升高(P<0.05),Kif2a信使RNA水平降低(P<0.05)。miR-183靶向结合Kif2a并负向调控Kif2a的表达(P<0.05)。miR-183抑制剂或pcDNA 3.1-Kif2a转染可以逆转黄芩素对乳腺癌增殖、凋亡以及C-Caspase-3、C-Caspase-9、Cyclin D1、p21蛋白表达的作用。结论黄芩素通过miR-183/Kif2a调控乳腺癌细胞增殖和凋亡。     

miR-34a通过调控雄激素受体基因抑制前列腺癌细胞系LNCaP增殖

目的:探究miR-34a对雄激素受体(AR)基因的调控作用及对前列腺癌(PCa)LNCaP细胞增殖、凋亡的影响。方法:收集2016年10月至2019年9月本院泌尿外科行前列腺穿刺活检确诊为PCa患者组织标本36例,另取同期行手术治疗切除的良性前列腺增生(BPH)组织标本41例。体外培养LNCaP细胞,分别转染miR-34a mimics(mimics组),miR-34a mimic NC(NC组),设正常生长细胞为空白对照组(BC组),另在mimics组基础上转染AR过表达(AR过表达组)载体及其对照(AR对照组),采用CCK-8试剂盒检测细胞活性,Annexin V-FITC/PI双染色流式细胞凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡率,实时定量PCR(RT-qPCR)检测miR-34a及AR mRNA表达水平,免疫印迹法检测AR蛋白、细胞周期蛋白D1(cyclinD1)及原癌基因产物(c-Mcy)、细胞凋亡相关蛋白(Bcl-2、Bax、capase-3)的表达水平。结果:与BPH组织比较,PCa组织中miR-34a表达水平显著降低(P<0.05),AR mRNA及蛋白表达水平均显著增加(P<0.05);与BC、NC组比较,mimics组LNCap细胞miR-34a表达水平、细胞凋亡率、Bax蛋白表达水平显著增加(P<0.05),AR、Cyclin D1、Bcl-2、Bax蛋白表达水平显著降低(P<0.05),同一时间LNCap细胞活力均显著降低(P<0.05);双荧光素酶实验结果显示,miR-34a与AR可能存在一定的调控关系,过表达AR基因可逆转miR-34a mimics对LNCaP细胞增殖抑制,促进凋亡作用。结论:miR-34a可能通过调控AR抑制前列腺癌LNCaP细胞增殖,促进其凋亡。     

艳山姜总黄酮改善无水乙醇致胃黏膜细胞损伤的作用及机制

目的 探讨艳山姜总黄酮通过微RNA-146a-5p(miR-146a-5p)对无水乙醇诱导的胃黏膜细胞损伤的改善作用及潜在机制。方法 以人胃黏膜细胞GES-1为对象，以无水乙醇诱导建立急性胃溃疡细胞模型，在考察不同质量浓度艳山姜总黄酮对细胞活力影响及筛选作用浓度的基础上，检测细胞中miR-146a-5p的相对表达量，细胞中肿瘤坏死因子受体关联因子6(TRAF6)、核因子κB p65(NF-κB p65)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)蛋白的表达水平，以及细胞上清液中白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、前列腺素E2(PEG2)水平；验证miR-146a-5p与TRAF6的靶向关系，并观察过表达miR-146a-5p、敲减TRAF6对模型细胞上清液中IL-1β、IL-6、PEG2水平的影响，以及敲减miR-146a-5p对艳山姜总黄酮抗胃溃疡作用的影响。结果 与空白组比较，模型组细胞中miR-146a-5p的相对表达量和上清液中PGE2水平均显著降低（P<0.01），细胞中TRAF6、NF-κB p65、TNF-α蛋白的表达水平和上清液中IL-1β、IL-6水平均显著升高（P<...     

苦参醇A对高糖诱导人视网膜血管内皮细胞增殖凋亡的影响研究

摘要：目的:探讨苦参醇A（KA）对高糖诱导人视网膜血管内皮细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法:体外培养人视网膜血管内皮细胞,使用高糖诱导细胞,分别加入不同剂量的KA处理细胞;采用CCK-8检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡率;采用qRT-PCR检测LncRNA DLX6-AS1、miR-145-5p的表达量;双荧光素酶报告实验与RIP实验验证DLX6-AS1、miR-145-5p的靶向关系;分别将si-DLX6-AS1、pc DNA-DLX6-AS1转染至高糖诱导的细胞中,采用上述方法检测细胞增殖及凋亡能力。结果:高糖诱导细胞可降低细胞活力、增高凋亡率（P<0.05）,DLX6-AS1的表达水平显著升高（P<0.05）,miR-145-5p的表达水平显著降低（P<0.05）,而KA可明显逆转高糖对细胞增殖、凋亡及DLX6-AS1、miR-145-5p表达的作用（P<0.05）,且呈剂量依赖性;双荧光素酶报告实验与RIP实验证实DLX6-AS1能够靶向结合miR-145-5p;转染si-DLX6-AS1后细胞活力升高（P<0.05）,凋亡率降低（P<0.05）,而转染pc DNA-DLX6-AS1能够明显减弱KA对高糖诱导视网膜血管内皮细胞增殖、凋亡的作用。结论:苦参醇A可能通过调控DLX6-AS1/miR-145-5p分子轴从而促进高糖诱导的人视网膜血管内皮细胞增殖及抑制细胞凋亡。     

miR-208a促进非小细胞肺癌A549细胞增殖、侵袭和迁移的功能和机制研究

目的　探讨miR-208a对非小细胞肺癌A549细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其机制。方法　（1）分别用miR-208a mimic、NC mimic、miR-208a inhibitor和NC inhibitor转染A549细胞。采用荧光定量PCR（qPCR）检测A549细胞中miR-208a过表达和干扰效率;采用CCK-8实验、Transwell实验和划痕实验检测miR-208a对A549细胞增殖、侵袭和迁移的影响。利用生物信息学网站PicTar、miRanda、Targetscan和miRDB预测与miR-208a结合的下游靶基因;构建蛋白酪氨酸磷酸酶受体G（PTPRG）的3′UTR野生型和突变型双荧光素报告酶基因载体,和miR-208a共转染到HEK-293T细胞后观察荧光素酶活性变化。（2）取对数生长期的A549细胞,设置阴性对照组（si-NC组）、PTPRG敲低组（si-PTPRG组）和PTPRG敲低组＋miR-208a干扰组（si-PTPRG＋miR-208a inhibitor组）,采用CCK-8、Transwell实验和划痕实验检测PTPRG对A549增殖、侵袭和迁移的影响,qPCR和Western blot检测3组细胞PTPRG的mRNA和蛋白表达变化。结果　（1）miR-208a mimic组miR-208a基因表达水平、细胞增殖、细胞侵袭和细胞迁移率均高于NC mimic组（P＜0.05）;miR-208a inhibitor组的miR-208a基因表达水平、细胞增殖、细胞侵袭和细胞迁移率均低于NC inhibitor组（P＜0.05）。生物信息学分析显示PTPRG是miR-208a的靶基因,双荧光素报告酶实验结果显示miR-208a过表达能够降低PTPRG 3′UTR野生型的荧光素酶活性,而敲低miR-208a能够增加PTPRG 3′UTR野生型的荧光素酶活性,miR-208a能够与PTPRG的3′UTR序列结合。（2）与si-NC组相比,si-PTPRG组细胞增殖、细胞侵袭和细胞迁移能力明显增高,PTPRG基因和蛋白表达水平下降（P＜0.05）;而与si-PTPRG组相比,si-PTPRG＋miR-208a inhibitor组细胞增殖、细胞侵袭和细胞迁移能力下降,PTPRG基因和蛋白表达水平升高（P＜0.05）。结论　miR-208a可能通过靶向调控PTPRG来促进A549细胞的增殖、侵袭和迁移。     

山楂多糖提取物上调 miR-146a-5p抑制 Wnt/β-catenin信号通路影响胃癌细胞增殖和凋亡

目的 探讨山楂多糖提取物对胃癌细胞增殖和凋亡的影响及机制.方法 用浓度分别为200、400、800μg/mL的山楂多糖提取物处理AGS细胞,作为不同浓度山楂多糖提取物组;正常培养的细胞作为对照(NC)组;用800μg/mL的甘露醇处理作等渗对照,记为800μg/mL甘露醇组.将miR-NC、miR-146a-5p转染至AGS细胞中记为miR-NC组、miR-146a-5p组;将anti-miR-NC、anti-miR-146a-5p转染至AGS细胞中再用浓度为800μg/mL的山楂多糖提取物处理,记为anti-miR-NC+山楂多糖提取物组、anti-miR-146a-5p+山楂多糖提取物组.四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞增殖率;流式细胞术检测细胞凋亡;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-146a-5p表达水平.结果 与对照组(100.10±10.02)％相比,200、400、800μg/mL山楂多糖提取物组胃癌细胞AGS的增殖率(85.12±8.51)％、(68.22±6.82)％和(42.11±4.21)％降低(F=31.314,P<0.05).不同浓度山楂多糖提取物处理的胃癌细胞AGS中细胞增殖率降低,细胞凋亡率升高,miR-146a-5p表达水平升高(P<0.05).高表达miR-146a-5p,细胞增殖率降低,细胞凋亡率升高(P<0.05).低表达miR-146a-5p部分逆转了山楂多糖提取物对胃癌细胞AGS增殖和凋亡的影响.山楂多糖提取物处理的胃癌细胞AGS中β-catenin表达水平降低,低表达miR-146a-5p逆转了山楂多糖提取物对β-catenin表达的抑制作用.结论 山楂多糖提取物可抑制胃癌细胞AGS增殖,促进细胞凋亡,其机制可能与miR-146a-5p和Wnt/β-catenin信号通路有关.     

miR-4324对卵巢癌细胞增殖及凋亡的影响

目的 研究miR-4324对卵巢癌细胞增殖及凋亡的影响.方法 TGCA筛选差异基因(GSE119055);q-PCR检测miR-4324在人卵巢癌细胞株SKOV3及卵巢上皮细胞株IOSE80的表达差异;CCK8检测转染后卵巢癌SKOV3细胞增殖情况,流式检测细胞凋亡和细胞周期(48h),q-PCR检测miR-4324的表达,Western blot检测PNCA、Caspase-3和P27的表达.结果 miR-4324在卵巢癌细胞较正常细胞中表达量低.miR-4324 mimic和miR-4324 inhibitor转染后人卵巢癌细胞株SKOV3,inhibitor组较mimic组显著降低.miR-4324抑制了卵巢癌细胞的增殖,改变了卵巢癌细胞的细胞周期,促进SKOV3细胞的凋亡,抑制miR-4324后PNCA表达量升高,caspase-3表达量降低,P27表达量降低.结论 miR-4324在卵巢癌细胞中低表达.抑制卵巢癌细胞的增殖,促进细胞凋亡及影响细胞周期,可能成为卵巢癌治疗的潜在靶点.     

敲减microRNA-27a通过Wnt/β-catenin信号通路抑制肾细胞癌增殖和转移

目的探究miR-27a在肾细胞癌(RCC)增殖与转移中的作用及其机制。方法RT-qPCR检测RCC癌组织、癌旁组织、RCC细胞(Caki-1、786-O和ACHN)和正常肾小管上皮细胞(HK2)中miR-27a表达。将miR-27a inhibitor转入786-O和ACHN细胞,CCK-8实验检测细胞增殖;集落形成实验检测细胞集落形成;伤口愈合实验和Transwell实验分别检测细胞迁移与侵袭;Western blot和免疫荧光检测β-catenin表达。采用LiCl(Wnt/β-catenin信号激动剂)处理已转染miR-27a inhibitor的ACHN细胞后,检测细胞增殖、侵袭与迁移。结果RCC癌组织中miR-27a表达量明显高于癌旁组织,并随分期进展而增加。与HK2细胞相比,RCC细胞中miR-27a表达均升高。转染miR-27a inhibitor后,786-O和ACHN细胞的集落形成、细胞增殖、侵袭和迁移能力均明显降低。miR-27a inhibitor降低ACHN细胞中β-catenin的表达,LiCl能促进已转染miR-27a inhibitor的ACHN细胞的增殖、迁移与侵袭能力。结论miR-27a在RCC癌组织及RCC细胞中高表达,敲减miR-27a通过Wnt/β-catenin信号通路抑制RCC细胞增殖和转移。     

miR-27a对两种结肠癌细胞增殖和侵袭能力的影响

目的探讨microRNA-27a(miR-27a)对2种结肠癌细胞增殖和侵袭能力的影响。方法应用miR-27a反义寡核苷酸(antisense oligonucleotides,ASO)在体外转染结肠癌细胞系SW620和HCT116,设置转染无义序列组作为对照组。RT-PCR检测细胞miR-27a表达;MTT法检测细胞增殖;Transwell小室侵袭实验检测细胞侵袭能力;Western blot检测转染细胞FOXO1蛋白表达。结果与对照组相比,转染miR-27a ASO后结肠癌细胞系SW620和HCT116的miR-27a表达水平均明显降低(P<0.001),增殖能力和侵袭能力均受到明显抑制(P<0.01),FOXO1蛋白表达均明显增高(P<0.05)。结论抑制miR-27a表达可显著降低结肠癌细胞系SW620和HCT116的增殖能力和侵袭能力,而调控下游FOXO1蛋白表达可能是miR-27a参与结肠癌细胞增殖和侵袭的主要机制。     

MiR-92b-3p ameliorates inflammation and autophagy by targeting TRAF3 and suppressing MKK3-p38 pathway in caerulein-induced AR42J cells

Acute pancreatitis (AP) is an inflammatory disease with high morbidity and mortality. Dysregulation of microRNAs (miRNAs) was involved in human diseases, including AP. However, the effects of miR-92b-3p on AP process and its mechanism remain not been fully clarified. The expression levels of miR-92b-3p and tumor necrosis factor receptor-associated factor-3 (TRAF3) were measured by quantitative real-time polymerase chain reaction (qRT-PCR). The protein levels of TRAF3, tumor necrosis factor α (TNF-α) TNF-α, interleukin-6 (IL-6), phosphorylated mitogen-activated protein kinase kinase 3 (p-MKK3), MKK3, p38 and phosphorylated p38 (p-p38) were detected by western blot. The concentration of TNF-α and IL-6 in the medium was measured using ELISA kits. The possible binding sites of miR-92b-3p and TRAF3 were predicted by TargetScan and verified by dual-luciferase reporter assay and RNA immunoprecipitation (RIP) assay. The expression level of miR-92b-3p was decreased and TRAF3 expression was increased in AR42J cells stimulated with caerulein. Moreover, the protein levels of pro-inflammatory cytokines (TNF-α and IL-6) were markedly elevated, and the expression levels of autophagy-related markers Beclin1 as well as the ratio of LC3-II/I were obviously increased in AR42J cells treated with caerulein. In addition, overexpression of miR-92b-3p or knockdown of TRAF3 significantly suppressed the release of pro-inflammatory cytokines and autophagy in caerulein-induced AR42J cells. Furthermore, TRAF3 was a direct target of miR-92b-3p and its upregulation reversed the effects of miR-92b-3p overexpression on inflammatory response and autophagy. Besides, overexpression of miR-92b-3p inhibited the activation of the MKK3-p38 pathway by affecting TRAF3 expression. In conclusion, miR-92b-3p attenuated inflammatory response and autophagy by downregulating TRAF3 and suppressing MKK3-p38 pathway in caerulein-induced AR42J cells, providing a novel avenue for treatment of AP.     

长链非编码前列腺癌相关转录因子 6靶向微小 RNA-139-3p对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨长链非编码RNA(LncRNA)前列腺癌相关转录因子6(PCAT6)对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响和分子机制.方法 实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测20例骨肉瘤组织和与其对应的癌旁组织中PCAT6和微小RNA-139-3p(miR-139-3p)的表达水平.双荧光素酶报告基因实验和RT-qPCR验证PCAT6对miR-139-3p的靶向调控关系.将PCAT6小干扰RNA(si-PCAT6)、miR-139-3p模拟物(miR-139-3p mimics)分别转染骨肉瘤细胞SAOS2,细胞计数试剂盒(CCK-8)检测SAOS2细胞增殖活力,流式细胞术检测SAOS2细胞凋亡,蛋白质印迹法检测B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、细胞周期素D1(Cyclin D1)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和P21、的表达水平.将si-PCAT6和miR-139-3p抑制物(anti-miR-139-3p)共转染至SAOS2细胞,采用上述方法检测细胞增殖、迁移侵袭能力以及凋亡变化.结果 与瘤旁组织相比,骨肉瘤组织中PCAT6的表达水平[(2.76±0.27)比(1.01±0.09)]显著升高,miR-139-3p的表达水平[(0.51±0.05)比(1.00±0.08)]显著降低(P<0.05).miR-139-3p是PCAT6的靶基因,PCAT6靶向负性调控miR-139-3p表达.抑制PCAT6表达或过表达miR-139-3p均可下调SAOS2细胞CyclinD1和Bcl-2蛋白表达,上调p21和Bax蛋白表达,降低细胞活力,促进细胞凋亡(P<0.05).抑制miR-139-3p表达可逆转si-PCAT6对骨肉瘤SAOS2细胞增殖抑制和凋亡的影响(P<0.05).结论 lncRNA PCAT6在骨肉瘤组织中表达上调,抑制miR-139-3p通过靶向miR-139-3p抑制骨肉瘤细胞增殖,诱导骨肉瘤细胞凋亡.     

微小 RNA-216b-5p对骨肉瘤 MG63细胞功能的影响及其与高迁移率族蛋白 B1的靶向关系

目的 探讨微小RNA-216b-5p(miR-216b-5p)对骨肉瘤MG63细胞增殖、侵袭和凋亡的影响及其与高迁移率族蛋白B1(HMGB1)的靶向关系.方法 将体外培养的MG63细胞分为mimics-NC组、miR-216b-5p mimics组、inhibitor-NC组和miR-216b-5p inhibitor组,采用实时荧光定量PCR检测miR-216b-5p的表达,MTT法、Transwell小室和流式细胞仪分别检测细胞增殖、侵袭和凋亡能力.采用双荧光素酶报告基因实验检测miR-216b-5p和HMGB1的靶向关系,蛋白质印迹法(Western blot-ting)检测HMGB1蛋白的表达.结果 与mimics-NC组相比,miR-216b-5p mimics组细胞中miR-216b-5p的表达水平[(5.36±0.54)比(1.00±0.11)]和细胞凋亡率[(20.36±3.15)％比(8.58±1.22)％]明显升高,而细胞增殖活力、侵袭能力和细胞中HMGB1蛋白的表达水平均明显降低(P<0.05);miR-216b-5p inhibitor组细胞中miR-216b-5p的表达水平[(0.24±0.03)比(0.96±0.08)]和细胞凋亡率[(2.05±0.38)比(9.27±1.16)]较inhibitor-NC组明显降低,而细胞增殖活力、侵袭能力和HMGB1蛋白的表达水平较inhibitor-NC组均明显升高(P<0.05).双荧光素酶报告基因实验证实HMGB1是miR-216b-5p的靶基因.结论 miR-216b-5p可能通过靶向调控HMGB1表达,抑制骨肉瘤MG63细胞增殖、侵袭并诱导细胞凋亡.     

miR-26a通过Notch信号通路对NSCLC细胞增殖、凋亡的影响

目的探讨miR-26a通过Notch信号通路对NSCLC细胞增殖、凋亡的影响。方法将NSCLC细胞分为Fz组(未处理)、Fm组(转染miR-26a模拟物)、Fi组(转染miR-26a抑制物)。RT-PCR检测Notch、miR-26a水平,Western blotting检测Notch蛋白表达,Transwell实验检测细胞侵袭,TUNEL检测细胞调亡,免疫组化检测Notch阳性表达。结果RT-PCR结果显示,三组细胞中,Notch mRNA水平为Fi组>Fz组>Fm组,miR-26a水平为Fi组Fz组>Fm组(P<0.05)。Transwell侵袭实验发现显微镜下三组细胞计数为Fi组>Fz组>Fm组,细胞侵袭能力Fi组>Fz组>Fm组(P<0.05)。TUNEL检测发现细胞凋亡水平为Fi组Fz组>Fm组。结论miR-26a抑制剂可通过调控Notch蛋白表达诱导NSCLC细胞凋亡。     

hsacirc0054345靶向miR-206对TGF-β1诱导的大鼠肝星状细胞增殖、活化及凋亡的影响

目的探讨环状RNA0054345(hsacirc0054345)是否通过靶向微小RNA-206(miR-206)调控转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的大鼠肝星状细胞增殖、活化及凋亡。方法体外培养大鼠肝星状细胞HSC-T6,使用TGF-β1处理细胞建立模型,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测hsacirc0054345、miR-206的表达量;实验分组为:对照组、TGF-β1组、TGF-β1+si-con组、TGF-β1+si-circ0054345组、TGF-β1+si-circ0054345+anti-miR-con组、TGF-β1+si-circ0054345+anti-miR-206组。甲基噻唑基四唑(MTT)检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告实验验证hsacirc0054345、miR-206的靶向关系;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测α平滑肌动蛋白(α-SMA)、I型胶原蛋白(ColⅠ)、基质金属蛋白酶组织抑制剂1(TIMP-1)、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)的表达量。结果与对照组比较,TGF-β1组hsacirc0054345的表达水平明显升高(P<0.05),miR-206的表达水平明显降低(P<0.05),细胞存活率明显升高(P<0.05),细胞凋亡率明显降低(P<0.05),α-SMA、ColⅠ、TIMP-1和Bcl-2蛋白水平明显升高(P<0.05),Bax蛋白水平明显降低(P<0.05);与TGF-β1+si-con组比较,TGF-β1+si-circ0054345组细胞存活率明显降低(P<0.05),细胞凋亡率明显升高(P<0.05),α-SMA、ColⅠ、TIMP-1和Bcl-2蛋白水平明显降低(P<0.05),Bax蛋白水平明显升高(P<0.05);双荧光素酶报告实验证实hsacirc0054345可靶向结合miR-206;与TGF-β1+si-circ0054345+anti-miR-con组比较,TGF-β1+si-circ0054345+anti-miR-206组细胞存活率明显升高(P<0.05),α-SMA、ColⅠ和TIMP-1/Bcl-2蛋白水平明显升高(P<0.05),细胞凋亡率明显降低(P<0.05),Bax蛋白水平明显降低(P<0.05)。结论抑制hsacirc0054345表达可能通过靶向上调miR-206的表达从而抑制TGF-β1诱导的大鼠肝星状细胞增殖、活化及诱导细胞凋亡。     

IRAK1/TRAF6通路在急性髓系白血病发生发展中的作用机制研究

目的　探讨白细胞介素-1受体相关激酶（IRAK1）/肿瘤坏死因子受体相关因子6（TRAF6）通路影响急性髓系白血病（AML）发生发展的作用机制。方法　选取54例AML患者为研究对象（AML组）,30例于本院治疗的缺铁性贫血患者作为对照组,分离所有受试者骨髓单核细胞;体外常规培养人AML细胞系HL-60、KG-1、U937和人正常单核细胞系THP-1;将HL-60细胞分为空白组（转染Lipofectamine 3000试剂）、阴性对照（NC）组（转染空质粒）、IRAK1短发夹RNA（IRAK1 shRNA）组（转染IRAK1 shRNA）;实时荧光定量PCR（qPCR）法检测单核细胞及不同细胞系各组中IRAK1、TRAF6 mRNA表达水平;CCK-8法检测各组细胞增殖抑制率;流式细胞术检测各组细胞凋亡率;蛋白免疫印迹法检测各组细胞β-连环蛋白（β-catenin）、细胞周期蛋白D1（CyclinD1）、B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）及IRAK1/TRAF6通路蛋白表达水平。结果　与对照组比较,AML组单核细胞中IRAK1、TRAF6 mRNA表达水平显著升高（P＜0.05）。与THP-1细胞比较,KG-1、U937、HL-60细胞中IRAK1、TRAF6 mRNA表达水平显著升高,且HL-60细胞最高（P＜0.05）。与空白组和NC组比较,IRAK1 shRNA组细胞增殖抑制率、凋亡率及Bax蛋白表达显著升高,IRAK1 mRNA、TRAF6 mRNA、β-catenin、CyclinD1、Bcl-2、磷酸化-IRAK1（p-IRAK1）/IRAK1、TRAF6、核因子-кB（NF-кB）蛋白表达显著降低（P＜0.05）。结论　IRAK1/TRAF6通路与AML的发生发展有关,抑制IRAK1/TRAF6通路可抑制人AML细胞系HL-60增殖,促进其凋亡,IRAK1/TRAF6可能是AML治疗的潜在靶点。     

微小 RNA-7-5p靶向调节锌指蛋白核转录因子 4基因抑制口腔鳞状细胞癌细胞增殖和诱导凋亡的体外研究

目的 探讨微小RNA(miR)-7-5p对口腔鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡及锌指蛋白核转录因子4(KLF4)基因表达调控的影响.方法 研究起止时间为2018年3—10月.实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-7-5p在人正常口腔黏膜成纤维细胞hOMF及口腔鳞状细胞癌细胞SCC25、Cal127和Tca8113中的表达量.将miR-7-5p模拟物(miR-7-5p mimics)及阴性对照序列(mimics Control)分别转染至SCC25细胞,分为三组:Control组(未转染的SCC25细胞)、NC组(转染mimics Con-trol的SCC25细胞)、miR-7-5p组(转染miR-7-5p mimics的SCC25细胞).以qRT-PCR检测miR-7-5p在SCC25细胞中的转染效果;MTT法检测miR-7-5p对SCC25细胞增殖的影响;流式细胞术检测miR-7-5p对SCC25细胞凋亡的影响;通过双荧光素酶报告基因实验、qRT-PCR和蛋白质印迹法(Western blotting)检测miR-7-5p对KLF4的靶向关系.结果 miR-7-5p在3种口腔鳞状细胞癌细胞SCC25、Cal127和Tca8113中的表达量[(0.21±0.02)、(0.43±0.04)、(0.48±0.05)]明显低于人正常口腔黏膜成纤维细胞hOMF(1.00±0.09)(P<0.05);转染miR-7-5p mimics能够上调SCC25细胞中miR-7-5p的表达(P<0.05);miR-7-5p过表达能够明显抑制SCC25细胞增殖能力[Control组、NC组72 h吸光度(1.43±0.13)、(1.46±0.15)比miR-7-5p组(0.81±0.09)](P<0.05),并诱导细胞凋亡[Control组、NC组凋亡率(9.48±2.65)％、(10.21±3.02)％比miR-7-5p组(24.41±8.15)％](P<0.05);双荧光素酶报告基因实验结果表明miR-7-5p过表达可抑制KLF4-Wt报告基因载体细胞相对荧光活性;qRT-PCR和Western blotting进一步证实了miR-7-5p能够靶向调节KLF4 mRNA和蛋白表达.结论 miR-7-5p直接靶向调控KLF4基因的表达来抑制口腔鳞状细胞癌SCC25细胞增殖,诱导细胞凋亡.