基于高通量测序技术对人参花及其易混淆品鉴定研究

目的 利用高通量测序技术对人参花及其易混淆品进行鉴定，并利用ITS2测序技术验证高通量测序技术对物种鉴定的准确性。方法 对人参花掺伪样品扩增产物进行高通量测序，使用cutadapt、PEAR、PRINSEQ、Usearch、RDP classifier、SINTAX软件获得分类单元(operational taxonomic unit，OTU)序列，舍弃菌类、unclassified等非绿色植物序列；为避免假阳性情况发生，删除序列数<100条或碱基数<200 bp的OTU序列。对人参花、西洋参花、三七花的ITS2扩增产物进行测序，利用MEGA 11.0对人参花、西洋参花、三七花的ITS2、OTU、GenBank上下载的碱基序列构建邻接法系统聚类树、遗传距离、种间信息位点及对ITS2、OTU碱基序列分别进行Blast分析来验证高通量测序技术对物种鉴定的准确性。通过构建ITS2及OTU碱基序列二级结构对人参花、西洋参花、三七花进行比对分析，根据物种间二级结构的不同对物种进行鉴定。结果 高通量测序共得到54 653条有效序列，人参花、三七花、西洋参花的序列号分别为OTU1、OTU2、OTU3及对应的有效序列分别为31 325，857，442条。通过对各物种的ITS2及OTU碱基序列进行Blast检索，均支持各个物种。人参花与西洋参花、三七花种间遗传距离分别为0.010，0.033，人参花与西洋参花、三七花分别有2，7个信息位点；邻接法系统聚类树显示各个物种均独立聚为一支，其中人参花与西洋参花聚为一大支与三七花并列。人参花与西洋参花二级结构一致，但与三七花在臂Ⅳ及臂Ⅳ与臂Ⅰ之间有A、B、C 3处不同。结论 基于高通量测序技术能够准确鉴定人参花、西洋参花、三七花，对掺伪样品亦具有较强的鉴别能力，为市售人参花样品鉴定提供一定思路。     

人参、西洋参和三七的药效比较

目的保证临床准确合理用药。方法对来源于五加科人参属近缘植物人参、西洋参和三七的化学成分和药理作用进行综合比较。结果3种药材在化学成分上既有相似性又有差异性。因而其药理作用也表现出一定的相似性和区别。结论人参和西洋参均以滋补强壮作用见长,但人参大补元气,西洋参偏于养阴生津,三七虽然也具有一定的补益作用,但在临床上主要表现为活血止血。     

基于EST-SSR的金银花分子鉴别方法研究

利用简单有效的方法鉴定药用植物种及其变种一直是中药材鉴定首先要解决的问题。金银花是临床常用大宗中药材之一,源自忍冬科植物忍冬(Lonicera japonica Thunb.)的花蕾。为了有效利用金银花EST序列开发功能性分子标记,本文通过生物信息学手段对本实验室保存的忍冬及其变种红白忍冬(L.japonica var.chinensis Thunb.)EST序列进行分析,共获得3 705条忍冬EST-SSRs,且平均每4.05 kb检出一个SSR(simple sequence repeat);2 818条红白忍冬EST-SSRs,平均每7.49 kb检出一个SSR。分析结果表明金银花及其变种红白忍冬主要SSR重复为二核苷酸,其次为三核苷酸,主要重复基序类型为AG/TC和GAG/TCT。通过同源比对,在忍冬及其变种中共筛选出87对重复次数具有差异的EST-SSR。选出15对碱基数差异大于6的EST-SSR进行验证,结果表明其中的13对引物在52份金银花类药用植物中具有有效扩增产物,且引物jp.ssr4、jp.ssr64及jp.ssr65可用于忍冬及其变种、山银花原植物的鉴别。     

珍稀铁皮石斛SSR标记的开发及种质纯度鉴定

本研究利用磁珠富集法开发了60对铁皮石斛的SSR引物,从中筛选出15对多态性位点丰富、带型清晰、重复性好的引物。利用筛选出的SSR引物对铁皮石斛野生居群材料进行了遗传分析,共鉴定出等位变异92个,平均每个SSR位点等位变异数为6.1个;表观杂合度(HO)范围是0.60～0.85,平均值为0.72;期望杂合度(HE)范围是0.49～0.85,平均值为0.74。平均每个SSR位点多态信息含量(PIC)为0.702,变化范围为0.437～0.829。利用15对SSR引物对20种石斛试验材料进行跨种扩增,检测出有13对SSR引物具有种间通用性。此外,还利用所筛选的4对SSR引物检测了集约化种植过程中的铁皮石斛组培苗的种质纯度,结果显示:所开发的SSR标记可用于铁皮石斛组培苗的品种纯度鉴别。     

HPLC法测定人参、西洋参和三七不同部位中人参皂苷的含量

目的:为了探讨人参、西洋参和三七中人参皂苷的资源含量,以确保人参、西洋参和三七中人参皂苷资源充分被利用,为开发以人参皂苷为主的创新药物提供科学数据。方法:采用高效液相色谱法对人参、西洋参和三七不同部位中人参皂苷的含量进行测定。色谱条件为:Agilent 1100 Series 高效液相色谱仪;色谱柱为德国 Nucleosil-C_(18)(4.6 mm×150 mm,5μm);流动相为水-乙腈梯度洗脱,流速1.5 mL·min~(-1);A为水,B为乙腈;梯度洗脱程序为:0～16 min,56%B;16～20 min,56%→100%B;20～38 min,100%B;38～45 min,100%→56%B;45～60 min,56%B;60～70 min,56%B。所有组分均70 min 内出完。检测波长203 nm,柱温35℃,灵敏度为0.02AUFS。线性关系考察r=0.9994;精密度试验 RSD=0.26%,平均回收率为99.88%,重现性试验 RSD=2.0%,分离度为R=3.042。结果:人参须根含有较高的人参皂苷 Rb_1(1.082%),人参茎叶则含有较高的人参皂苷 Rc(1.002%)、Re(3.430%)和 Rg_1(1.303%);西洋参根含有较高的人参皂苷 Rb_1(2.213%)和 Re(0.9188%),西洋参芦头中含有较高的人参皂苷 Rb_1(2.840%)和Re(1.224%);三七根含有较高的人参皂苷 Rb_1(2.163%)和 Rg_1(2.633%),三七芦头中含有较高的人参皂苷 Rb_1(4.376%)和 Rg_1(4.145%)。结论:高效液相色谱法分离、分析人参皂苷效果好、准确、迅速、简便,也可作为评价人参属植物质量的有效分析方法。建议对人参、西洋参和三七中含量较高的人参皂苷进行提取分离,直接用于创新药物的开发。     

AFLP法构建人参、西洋参基因组DNA指纹图谱

目的　采用扩增片段长度多态性DNA(AFLP)分子遗传标志技术,分析人参、西洋参基因组DNA多态性。方法　人参、西洋参干燥根基因组DNA,经EcoRI/MseI酶切并与其相应的人工接头连接后,使用选择性引物进行PCR扩增。结果　经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测,成功构建出多态性丰富和重复性好的人参、西洋参DNA指纹图谱。结论　AFLP法有望成为一种独立的切实可行的手段,将在人参、西洋参等药用植物的鉴定、生物进化、系统发育研究及指导道地性药材的科学栽培等方面发挥重要作用。     

人参属植物姜状三七的皂甙成分

我们曾从三七(Panax notoginseng(Burk.)F.H.Chen)根分离到人参二醇和人参三醇,并用称量法和薄层层析法对国产人参属植物的三萜皂甙成分进行比较,讨论了达马烷型皂甙与齐墩果烷型皂甙成分的组成和人参属植物系统分类及地理分布的关系。1979年以来,我们又进而研究云南产各种人参属植物三萜皂甙的分离和结构鉴定,已报告的有三七根,芦头(即剪口),花,叶和果;珠子参(P.japonicus C.A.Meyer var.ma-     

三七-西洋参药物配伍中皂苷类提取工艺优化

摘要：目的:优化三七-西洋参药物配伍中皂苷类成分的提取工艺,分析提取物的HPLC特征图谱。方法:采用正交试验,以浸膏得率、总皂苷含量、三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1为评价指标,研究三七-西洋参药物配伍中皂苷类成分的最佳醇提工艺,分别对三七-西洋参药物配伍的醇提物和水提物中皂苷类成分含量进行分析。结果:三七-西洋参药物配伍的最佳醇提工艺为加12倍量60%乙醇,水浴回流0.5 h,提取3次;醇提物中总皂苷含量较高,三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1含量明显高于水提物;三七-西洋参药物配伍与单味药相比,醇提物中主要皂苷类成分含量具有一定配伍特点;通过对比三七-西洋参药物配伍及单味药材醇提物、水提物的HPLC色谱图,分析归属6个共有峰,3个西洋参特征性成分及1个三七特征性成分,三七-西洋参药物配伍的醇提物较单味药醇提物,共有峰及特征峰峰面积均降低,各提取物中共有皂苷类成分比例各有其特点。结论:优选出的三七-西洋参药物配伍醇提工艺简便易行、重复性良好;建立的含量测定方法稳定可行,为三七-西洋参药物配伍的药效物质分析研究提供一定参考。     

人参皂甙分离鉴定的研究

用标准提取法——双向TLC和分光光度法测定了各种人参及其产品中人参皂甙的含量。鉴定了北美参的根叶、野生西洋参的根、人参香烟、人参安瓿剂以及不同地理环境所产的西伯利亚人参中的人参皂甙,给出了大量未曾发表过的数据。原料和方法所用植物原料和产品来源详见表Ⅰ。西洋参、朝鲜参和三七中的皂甙用方法Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ提取。方法Ⅰ:将样品2克置150毫升锥形瓶中,加水40毫升,振摇30分钟后再加水80毫升继继振摇30分钟,过滤,弃去23～24毫升初滤液,然后收集滤液40毫升并用等体积水     

西洋参花蕾中非皂苷类化学成分

目的研究西洋参花蕾中非皂苷类化学成分。方法应用大孔树脂柱色谱、正相硅胶柱色谱等手段对西洋参花蕾中非皂苷类成分进行分离纯化,并通过1H-NMR、13C-NMR、ESI-MS、HMBC、HMQC等波谱数据鉴定化合物结构。结果分离得到了3个核苷类化合物和1个木脂素类化合物,分别鉴定为脱氧尿苷(2′-deoxyuridine,1)、脱氧胸苷(2′-deoxythymidine,2)、阿糖腺苷(vidarabine,3)和松脂素(pinoresinol,4)。结论化合物1-4均为首次从人参属植物中分离得到。     

中药材分子鉴别新方法:锚定引物扩增多态性DNA的研究

为了寻找稳定性好、可操作性强的分子鉴定新方法，在充分吸取RAPD优势的基础上，对其引物和退火温度进行了改进。本文以人参、西洋参为例进行了方法的探索和各种验证，并推广应用到天花粉以及白芷类药材的鉴别。结果显示引物Pg-q36F得到人参、西洋参及其9种伪品的多态性条带。对于人参、西洋参的鉴别结果与文献鉴别方法结果一致，并且具有更高的稳定性。引物TkS1-64F得到了天花粉及其11种伪品的多态性条带，引物AfS1-100F得到白芷及其3种伪品的多态性条带，均能准确鉴别各种药材。实验结果证明本方法具有简单易行、稳定性和重复性好、提供的信息量大等优点，是一种极具前途的中药材分子鉴定新方法，被命名为锚定引物扩增多态性DNA(anchored primer amplification polymorphism DNA，APAPD)。     

高效液相色谱法对不同种人参属药用植物的指纹图谱分析

目的建立高效液相指纹图谱方法用于区分人参属不同商品药材包括三七，圆参（种植国产人参和种植高丽参），野山参，红参以及三种不同化学分型的西洋参，保证人参属药材的安全，正确使用。方法采用Zorbax Extend C18（250mm×4．6mm，5μm）色谱柱，乙腈和10mmol·L^-1 KH2PO4水溶液为洗脱溶剂，建立人参属药材的液相指纹图谱方法。结果根据人参属不同商品药材液相指纹图谱的整体和一些特殊成分的差异，可以区分人参属不同商品药材。结论高效液相色谱指纹图谱方法简单，有效，可重复，可以用于人参属不同商品药材的常规鉴别。     

用全自动分析方法开发系统优化的HPLC法检测总状升麻提取物中的羟基肉桂酸衍生物

基因组DNA分析方法适于对植物的各个部位进行鉴定且不受种植条件的影响。因此该分析方法常用于准确地鉴定草药来源。然而DNA具有热不稳定性，超过75℃即遭破坏。因此，若植物提取物在90℃以上（2h）制成制剂，大部分DNA改变或被损害，因此以分子生物技术如PCR以及微量样品鉴定植物药制剂中的原植物极为困难。为鉴定在植物药制剂中的人参属植物，作者以韩国人参DNA片断序列359bp为模版，设计了人参特异性标志基因的引物（SIM2），使用温度梯度PCR法对40种植物药制剂中包括与人参属于同一类的7种五加科植物进行了检测。     

人参皂苷Rb_3的生物学活性研究进展

人参皂苷Rb_3存在于人参、西洋参和三七等五加科植物中,其具有广泛的生物学活性,本文从人参皂苷Rb_3的脑保护、内皮细胞保护、心血管保护、抗抑郁和抗糖尿病等方面进行综述,希望能为探索人参皂苷Rb_3潜在的药理作用提供帮助。     

三七根茎的化学成分分析

目的分析五加科植物三七根茎中的化学成分。方法本研究先采用硅胶柱、大孔吸附树脂柱、RP-18柱、RP-8柱对三七根茎中的化合物进行分离纯化,再依据光谱数据及理化性质完成结构的分析和鉴定。结果从三七根茎中共分离出5个化合物,分别是三七皂苷、原人参二醇、原人参三醇、人参环氧炔醇、胡萝卜苷。结论三七根茎中化学成分的研究和分析,可以为其药理作用的研究提供有效的理论依据。     

论三七的功效

三七为五加科植物三七 Ｐａｎａｘ ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇ（ ＢｕｒＫ）Ｆ．Ｈ．Ｃｈｅｎ的干燥根,与常用滋补品人参、西洋参为同科属植物。它始载于明代《本草纲目》,至今已有４００多年的药用历史。下面就三七在药典中尚未收载的药用价值予以浅述。１补益强壮作用 三七素有血参（《医林纂要·药性》）、人参三七（《纲目拾遗》）、参三七（《外科证治》）之称,早在《本草新编冲即己述其“止血兼补虚”功效,《本草纲目拾遗》是这样记述的“人参补气第一,三七补血第一,味同而功亦等,故称人参三七,为药品中之最珍贵者”,还将三七的…     

中药三七化学成分的 HPLC/ESI-MS分析

目的建立分析中药三七的HPLC-UV-MS方法, 鉴定三七的化学成分.方法色谱柱: Phenomenex Luna C18 柱 (250 mm×4.6 mm ID, 5 μm); 流动相:0.005%甲酸水溶液(A) 和0.005%甲酸乙腈溶液(B), 梯度洗脱;紫外检测波长范围:195-400 nm; 采用正负离子检测模式.结果三七成分获得了良好的分离与检测.通过与对照品的保留时间、正负离子质谱比较, 鉴定了14个成分, 根据正负离子质谱数据和文献, 分析推断了41个成分, 其中, 野三七皂苷-H、野三七皂苷-E、竹节参皂苷-L5、丙二酰基人参皂苷-Rg1、以及三七皂苷-J、-A、-R1、-G、-R2和人参皂苷-Rh3的异构体为首次在三七中发现.结论本方法灵敏度高、分离度好, 适合三七成分的鉴定.本结果有助于进一步对三七进行活性成分研究及质量控制.     

人参皂苷对电压门控离子通道的影响

离子通道是细胞膜和细胞器膜等生物膜上一类允许离子通透的蛋白质。许多离子通道,如大多数钠通道、钾通道、钙通道和部分氯通道受电压门控调节,这些电压门控离子通道具有广泛的生理功能。人参皂苷是中药人参、西洋参和三七等五加科人参属植物的主要活性成分,包括Ra1,Ra2,Rb1,Rb2,Rb3,Rc,Rd,Rg3和Rh2等原人参二醇,以及Re,Rf,Rg1,Rg2和Rh1等原人参三醇等。本文综述了人参皂苷多种成分对各种电压门控钠通道、钾通道、钙通道和氯通道的不同作用特点及可能的机制,提示人参皂苷多种成分不仅能直接作用于电压门控离子通道,还可以通过G蛋白和一氧化氮等信号通路途径,间接影响电压门控离子通道功能。     

近年来皂甙研究的新进展

近年来对皂甙研究较多的植物主要多以五加科、葫芦科、豆科、无患子科、伞形科、蔷薇科等植物为主。对五加科植物的研究,主要集中在对人参属和常春藤属植物上。对人参的皂甙的进一步研究,导致对亚洲产各种人参属植物如中国云南产竹节人参(昭参)、三七人参及珠     

当归、人参、西洋参与三七分部位使用的探讨

本研究近期对当归、人参、西洋参及三七进行了研究,发现古代本草及国家、省级或其他地区中药标准对于当归的功效与药用部位对应性上存在较大差异,对于人参等药材不同部位的使用情况在历版药典或者古代本草及其他地区标准的记载存在较大的不同。历代对于当归的记载体现以下三个方面的不同:一是对当归药用部位划分上有所不同;二是对相同部位当归的功效记载也不同;三是有的本草或中药标准未分部位记载当归功效;历代本草对人参、西洋参及三七的加工也存在较大的不同。本研究揭示了当归分部位使用历来就存在争议,还需更进一步的深入研究,对人参、西洋参及三七应该更加合理的加以利用。