木犀草素抑制JAK2/STAT3信号通路减轻大鼠脑缺血 再灌注损伤作用的研究

目的 观察木犀草素减轻大鼠脑缺血再灌注损伤的作用并探讨其潜在机制。方法 SD大鼠按随机数字 表法分为假手术组、大脑中动脉栓塞（MCAO）组、木犀草素低剂量组（50 mg/kg）、木犀草素高剂量组（100 mg/kg）及尼 莫地平组（15 mg/kg）,灌胃给药,共7 d。采用线栓法建立MCAO大鼠模型,比较神经功能损伤评分、脑组织含水量、 脑梗死体积,测定各组肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素（IL）-6、IL-1β、B细胞淋巴瘤因子2（Bcl-2）、Bcl-2相关 X蛋白（Bax）、半胱氨酸蛋白酶3（Caspase-3）含量及磷酸化Janus蛋白酪氨酸激酶2（p-JAK2）、磷酸化信号转导及转 录激活蛋白3（p-STAT3）蛋白表达等变化情况。结果 与假手术组比较,MCAO组大鼠神经功能损伤评分、脑组织含 水量、脑梗死体积、脑组织TNF-α、IL-6、IL-1β、Bax、Caspase-3含量及JAK2、STAT3蛋白磷酸化水平均明显增加（P＜ 0.05）,而脑组织Bcl-2含量明显降低（P＜0.05）;与MCAO组比较,木犀草素低、高剂量组及尼莫地平组大鼠神经功能 损伤评分、脑组织含水量、脑梗死体积、脑组织TNF-α、IL-6、IL-1β、Bax、Caspase-3含量及JAK2、STAT3蛋白磷酸化 水平均明显降低（P＜0.05）,而脑组织Bcl-2含量明显增加（P＜0.05）。结论 木犀草素具有减轻大鼠脑缺血再灌注 损伤的作用,该作用与抑制JAK2/STAT3信号通路活化,进而减弱炎症反应及减少细胞凋亡有关。     

急性脑梗死后炎症因子的动态变化及其与神经功能的相关性研究

目的 探讨脑梗死后炎症因子水平的变化以及与神经功能评分的关系.方法收集2012年5月-2013年10月治疗的35例脑梗死患者（入院时、发病后3 d、7 d、14 d）和43例健康体检者血液,分析炎症因子水平与神经功能评分（NIHSS评分、Barthel指数）的相关性.结果 观察组患者血清中白介素（IL）-1β、IL-6、肿瘤坏死因子（TNF）-α和γ-干扰素（IFN-γ）在入院时、发病后3 d、7 d、14 d各时点浓度均高于对照组（P＜0.05,P＜0.01）;各炎症因子水平发病24 h内升高,并在卒中后14 d内达到最高水平.入院时血清IL-6水平与入院时NIHSS评分呈正相关,与Barthel指数无相关性;入院时血清IL-1β、IL-6水平与发病14 d的NIHSS评分呈正相关,与Barthel指数呈负相关.结论脑梗死后血清IL-1β、IL-6、TNF-α和IFN-γ等炎症因子均增高,并与入院时和卒中14 d时的神经功能评分相关,血清炎症因子水平可在一定程度上反映早期卒中严重度及预后.     

微小RNA-182-5p调控焦亡参与肝缺血再灌注损伤

摘要：目的 探讨微小RNA-182-5p（miR-182-5p）靶向调控叉形头转录因子O亚型3a（FoxO3a）调节焦亡对肝 缺血再灌注损伤的影响。方法 建立小鼠肝脏缺血再灌注模型。按随机数字表法将40只小鼠分为5组,每组8只, 分别为假手术（sham）组,缺血再灌注（IR）各组（缺血1.5 h,按再灌注时间分为IR 2 h组、IR 6 h组、IR 12 h组和IR 24 h 组）。细胞实验分组分为两部分,（1）缺氧模型建立,分为 control 组和 IR 组。（2）缺氧/复氧模型建立,分为对照组、 mimic组,inhibitor组和inhibitor+siRNA组。HE染色观察肝组织病理变化;免疫细胞化学染色检测FoxO3a表达分布 情况;荧光实时定量PCR（qRT-PCR）和Western blot 分别从mRNA和蛋白水平检测miR-182-5p、FoxO3a、半胱天冬 酶-1（Caspase1）、白细胞介素（IL）-1β、IL-18 表达情况;分析 miR-182-5p 与 FoxO3a 基因相关性;免疫荧光检测 Caspase1表达情况;ELISA检测IL-1β和IL-18表达情况;CCK-8试剂盒检测细胞活性变化情况。结果 IR处理后小 鼠肝组织损伤增加,再灌注12 h时损伤最重,同时FoxO3a、Caspase1、IL-1β、IL-18表达增加（P＜0.05）,诱导焦亡产 生;IR处理后小鼠肝组织内miR-182-5p表达水平较sham组升高（P＜0.05）。体外培养小鼠肝细胞AML12,IR处理 后miR-182-5p表达上调,FoxO3a表达下调,同时Caspase1表达升高（P＜0.05）。过表达miR-182-5p能降低FoxO3a 表达水平;反之能增加FoxO3a表达量,进而降低Caspase1、IL-1β、IL-18的表达,增加肝细胞活性（P＜0.05）。结论 激活miR-182-5p能加重肝缺血再灌注损伤,而抑制miR-182-5p能减轻肝缺血再灌注损伤,其机制可能与miR-182- 5p通过靶向调控FoxO3a激活肝细胞焦亡、影响Caspase1、IL-1β、IL-18表达有关。     

干扰素调节因子1通过调控细胞焦亡参与小鼠肝脏缺血再灌注损伤

摘要：目的　探讨小鼠肝脏缺血再灌注损伤（LIRI）过程中干扰素调节因子-1（IRF-1）对焦亡的影响。方法　（1）24只C57BL/6正常雄性小鼠按照随机数字表法分为假手术（Sham）组与缺血再灌注（IR）2 h、6 h和12 h组,每组6只。Sham组不进行IR处理,其他3组采用血管夹夹闭肝中叶、左叶脉管（门静脉、动脉与胆道）60 min后分别再灌注2、6、12 h建立LIRI模型。全自动生化仪检测各组血清丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）;酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测血清白细胞介素-1β（IL-1β）水平;HE染色观察肝脏病理改变;免疫组织化学染色检测IRF-1表达情况;TUNEL染色检测肝脏细胞凋亡和焦亡情况;Western blot检测IRF-1、半胱天冬氨酸蛋白酶-1（Caspase-1）、Cleaved-Caspase-1及gasdermin D（GSDMD）蛋白水平;透射电镜检测肝组织细胞形态变化。（2）将小鼠正常肝脏AML12细胞分别进行过表达和沉默IRF-1表达后进行模拟IR处理,分为过表达IRF-1+IR组、空载体+IR组、IRF-1 siRNA+IR组及其对照组（NC+IR组）。Western blot检测4组细胞IRF-1、Caspase-1、Cleaved-Caspase-1和GSDMD蛋白水平;透射电镜检测细胞形态变化;流式细胞术检测细胞焦亡情况;酶标仪检测细胞上清乳酸脱氢酶（LDH）释放量。结果　（1）体内实验结果显示,与Sham组比较,IR6 h组和12 h组血清ALT、AST和IL-1β水平均有明显升高（P＜0.05）,IRF-1、Caspase-1和GSDMD蛋白表达升高（P＜0.05）;同时肝细胞出现肿胀、排列紊乱、空泡、片状坏死和红细胞淤积并伴有核膜损伤和线粒体肿胀。（2）体外AML12细胞过表达IRF-1后Cleaved-Caspase-1和GSDMD的表达增加,而敲低IRF-1表达后Caspase-1和GSDMD表达随之减少（P＜0.05）。沉默IRF-1表达后,与NC+IR组相比,IRF-1 siRNA+IR组细胞质膜和核膜的破坏减轻,细胞焦亡率下降,LDH释放量减少约20%（P＜0.05）。结论　IRF-1可通过调节Caspase-1和GSDMD的表达以及IL-1β的释放导致小鼠LIRI。     

细胞焦亡在糖尿病大血管并发症中作用的研究进展

细胞焦亡是一种炎症性细胞程序死亡模式。体内外研究表明,细胞焦亡主要通过激活炎性小体、活化天冬氨酸特异蛋白酶-1/4/5/11 (caspase-1/4/5/11)、切割gasdermin家族成员D (gasdermin D, GSDMD)、释放白细胞介素-18 (interleukin-18, IL-18)和IL-1β等炎性细胞因子参与糖尿病大血管并发症的发生发展。近几年,细胞焦亡通过炎症的级联反应导致的全身慢性炎症对糖尿病大血管并发症的影响受到人们的持续关注。本文对细胞焦亡在糖尿病大血管并发症中的研究和相关药物进行阐述,为临床治疗糖尿病大血管并发症提供新思路。     

Nrf2调控AIM2炎症小体在大鼠脑缺血再灌注 损伤中的作用

目的 探讨核因子E2相关因子2（Nrf2）对脑缺血再灌注损伤的影响及对黑色素瘤缺乏因子2（AIM2）炎症 小体的调控作用。方法 将108只雄性SD大鼠按随机数字表法分为假手术组（Sham组）、脑缺血再灌注模型组（I/R 组）、Nrf2抑制剂鸦胆子苦醇（Bru）干预组（Bru组），每组再按随机数字表法进一步分为脑缺血再灌注后8、24、72 h组， 共9组，每组12只。I/R组和Bru组采用线栓法建立大脑中动脉栓塞（MCAO）模型。于相应时间点对各组行神经功能 缺损评分；采用2，3，5-氯化三苯基四氮唑（TTC）染色测定脑梗死面积；HE染色检测脑组织病理损伤；荧光定量PCR 法检测缺血侧脑组织中AIM2 mRNA表达；Western blot法检测缺血区脑组织中AIM2、Nrf2蛋白的表达；酶联免疫吸 附试验法检测缺血区脑组织中凋亡相关斑点样蛋白（ASC）、半胱氨酸蛋白酶（Caspase）-1、白细胞介素（IL）-1β和IL-18 的表达。结果 与Sham组比较，I/R组各时间点神经功能缺损评分升高，脑组织病理损伤显著加重，AIM2 mRNA以 及Nrf2、AIM2、ASC、Caspase-1、IL-1β、IL-18蛋白表达水平升高（P＜0.05）。与I/R组比较，Bru组各时间点神经功能 缺损评分升高，脑组织病理损伤更重，Nrf2蛋白表达水平降低，AIM2 mRNA和蛋白，ASC、Caspase-1、IL-1β、IL-18蛋 白表达水平升高（P＜0.05）。结论 Nrf2在脑缺血再灌注损伤中具有内源性神经保护作用，其机制可能与Nrf2可负 性调控AIM2炎症小体，减少炎性细胞因子的释放有关。     

尿激酶超选择性动脉内溶栓用于急性脑梗死对患者血清 IL-8、PPARγ水平的影响

目的：探讨尿激酶超选择性动脉内溶栓用于急性脑梗死对患者血清IL-8、PPARγ水平的影响。方法将208例急性脑梗死患者随机分为观察组和对照组各104例。观察组行尿激酶超选择性动脉内溶栓治疗。对照组行常规神经内科治疗。比较2组患者在治疗前后血清IL-8、PPARγ的水平。结果治疗前2组血清IL-8、PPARγ水平差异无统计学意义（ P＞0．05）。治疗后2组IL-8水平均低于治疗前,且观察组低于对照组,差异均有统计学意义（P＜0．05）。观察组治疗后PPARγ水平低于治疗前,且低于对照组（P均＜0．05）。对照组治疗前后PPARγ水平差异无统计学意义（P＞0．05）。结论尿激酶超选择性动脉内溶栓对急性脑梗死患者的治疗能有效的降低血清IL-8、PPARγ水平。     

GSDMD介导的细胞焦亡在呼吸系统疾病中研究进展

细胞焦亡是一类新发现的程序性细胞死亡方式,由炎性半胱氨酸蛋白酶介导发生快速细胞膜破裂、细胞崩解,并释放细胞内容物和IL-18、IL-1β等大量炎性因子参与细胞死亡。GSDMD蛋白是细胞焦亡的最终执行蛋白,通过介导经典、非经典细胞焦亡途径发挥作用。在多种呼吸系统疾病中,均发现有GSDMD表达水平升高,提示GSDMD介导的细胞焦亡,可能成为呼吸系统疾病的潜在诊疗靶点,本文章就GSDMD介导的细胞焦亡在呼吸系统疾病中作用的研究进展进行综述。     

雷公藤甲素对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞线粒体自噬、NLRP3炎症小体活化和细胞焦亡的影响

目的 探究雷公藤甲素对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞（FLSs）线粒体自噬、NOD样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体活化和细胞焦亡的影响。方法 将FLSs细胞和类风湿关节炎FLSs细胞进行传代培养。将类风湿性关节炎FLSs细胞采用0、10、20、40 ng/mL雷公藤甲素进行处理。采用蛋白质印迹法（Western blotting）检测线粒体自噬相关蛋白LC3B、p62、PHB2、NLRP3的蛋白表达。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测炎症因子白细胞介素（IL）-1β和IL-18的水平。采用流式细胞术检测细胞焦亡情况,并采用Western blotting法检测焦亡相关蛋白GSDMD和GSDMD-N表达。结果 采用10、20、40ng/mL雷公藤甲素处理类风湿关节炎FLSs后,雷公藤甲素各剂量组均能显著减弱类风湿关节炎FLSs细胞的线粒体自噬相关蛋白LC3B的表达,上调p62和PHB2的表达;NLRP3表达水平均显著降低,IL-1β和IL-18水平显著降低;细胞焦亡率显著降低;GSDMD蛋白表达显著上升,GSDMD-N蛋白表达下降（P<0.05、0.01、0.001）,且呈剂量...     

IVF/ICSI助孕后早期流产患者蜕膜组织焦亡相关因子表达水平的研究

目的 探讨体外受精（IVF）/卵胞浆内单精子注射（ICSI）助孕妊娠后早期流产患者蜕膜组织中焦亡相关因子的表达及作用。方法 选取行IVF/ICSI助孕妊娠后早期流产患者102例（研究组），同期因意外妊娠行人工流产术的患者100例（对照组），收集蜕膜组织。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法及Western blot法检测蜕膜组织中焦亡相关因子Nod样受体蛋白3(NLRP3)、白细胞介素（IL）-1β、胱天蛋白酶1(Caspase1)、gasdermin D(GSDMD)mRNA及蛋白表达，TUNEL法检测蜕膜组织中细胞焦亡情况，Pearson法分析蜕膜组织中细胞焦亡率与NLRP3、IL-1β、Caspase1、GSDMD蛋白水平的相关性。结果 与对照组相比，研究组蜕膜组织中NLRP3、IL-1β、Caspase1、GSDMD mRNA及蛋白水平、蜕膜组织中细胞焦亡率升高（P<0.05）；研究组患者蜕膜组织中细胞焦亡率与NLRP3、IL-1β、Caspase1、GSDMD蛋白表达水平均呈正相关（r分别为0.429、0.474、0.498、0.540，均P<0.05）。结论 ...     

The mechanism of Arhalofenate in alleviating hyperuricemia―Activating PPARγ thereby reducing caspase-1 activity

Hyperuricemia (HUA) is an important risk factor for renal diseases and contributes to gout. Arhalofenate (Arha) has been proved to have uricosuric activity as an inhibitor of URAT1, organic anion transporter 4 (OAT4) and OAT10. However, the effects of Arha on HUA remain unknown. The objective of this study was to investigate whether Arha could alleviate HUA and uncovered the underlying mechanism in vitro. HK-2 cells were exposed to uric acid (UA) to simulate HUA in vitro. Then cells were treated with Arha, caspase-1 inhibitor Belnacasan (Beln), caspase-11 inhibitor Wedelolactone (Wede) and PPARγ inhibitor Mifobate, respectively. The alteration of cell proliferation, inflammation, pyroptosis and expression of related proteins were detected. Results showed that UA exposure inhibited cell viability and increased IL-1β and IL-18 generation in a concentration dependent manner. Meanwhile, UA activated the cleavage of gasdermin D (GSDMD), enhanced the protein expression of URAT1, OAT4, TLR4, caspase-1, and caspase-11 and reduced PPARγ expression. While the presence of Arha or Beln enhanced cell viability and inhibited cleavage of GSDMD. Wede slightly increased cell viability but failed to prevent GSDMD cleavage. The expression of related proteins except caspase-11was also recovered by Arha. Beln and Wede partially rescued related proteins level except PPARγ compared with model group. Besides, the co-treatment of Mifobate blunted the effects of Arha on cell viability and expression of GSDMD, TLR4, and caspase-1. In conclusion, Arha inhibited UA transport as well as preventing inflammation and pyroptosis via activating PPARγ thereby blocking caspase-1 activation of HUA in vitro.     

PPARγ配体罗格列酮及其激动剂GW9662对脂肪细胞因子表达的影响

目的：脂肪组织是一个内分泌器官已逐渐得到了肯定,它能分泌多种信号分子如：脂联素和抵抗素。过氧化物酶体增殖物激活受体（peroxisome pro-liferator activated receptorγ,PPARγ）在脂肪组织高水平表达,胰岛素增敏剂-噻唑烷二酮类药物是它的选择性激动剂,噻唑烷二酮类药物如罗格列酮的胰岛素增敏作用部分是通过激活PPARγ调节脂联素（胰岛素增敏分子）和抵抗素（涉及胰岛素抵抗）表达介导的。但现在不同研究发现PPARγ激动剂对抵抗素的表达调控方向存在矛盾,我们的问题是当抵抗素表达增加的情况下脂联素的表达还能否上调。方法：用3T3-L1细胞株作为研究模型,分别用溶媒对照、罗格列酮（10μmol/L）、GW9662（5μmol/L）或罗格列酮＋GW9662作用细胞,然后检测脂联素和抵抗素 mRNA表达变化情况。结果：与对照组相比,罗格列酮分别增加脂联素和抵抗素 mRNA水平1.77和1.66倍,其差异具有统计学意义（P〈0.05） ;重要的是GW9662也增加脂联素水平（1.57倍,P〈0.05）但对抵抗素无影响。罗格列酮和GW9662两者合用时,仍上调adiponectin mRNA水平（对照组的1.87倍,P〈0.05） ,抵抗素的增加与罗格列酮单用比弱下降（对照组的1.31倍,P〈0.05）。结论：本研究为PPARγ激动剂（罗格列酮）和拮抗剂（GW9662）都上调脂联素的转录提供了新的证据,两者合用时GW9662不阻断罗格列酮诱导的脂联素上调作用。综合这些数据提示噻唑烷二酮类药上调脂联素的机制可能不依赖于PPARγ。并且, GW9662在增加脂联素水平的同时不上调抵抗素水平的特性进一步支持PPARγ拮抗剂用于临床治疗胰岛素抵抗的可能性。降低抵抗素表达可能不是罗格列酮胰岛素增敏作用的重要机制。我们的结果为将来研究噻唑烷二酮类药物对人脂肪细胞因子表达在剂量和时间上提供了一定的基础。     

吡格列酮对HepG2细胞增殖和凋亡的影响及机制研究

目的观察吡格列酮对体外培养的HepG2细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其是否通过PPARγ依赖途径发挥上述药理作用。方法将不同浓度的吡格列酮作用于体外培养HepG2细胞,以MTT比色法检测HepG2细胞增殖情况,以3H-TdR参入实验检测细胞DNA合成速率,采用RT-PCR和Western blot检测PPARγmRNA和蛋白的表达,以流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期;同时观察PPARγ特异性拮抗剂GW9662和(或)瞬时转染pSG5-PPARγ真核表达质粒对吡格列酮细胞增殖作用的影响;并将PPARγ小干扰RNA(pGCsi-PPARγ)表达质粒稳定转染HepG2细胞,观察PPARγ沉默后吡格列酮对HepG2细胞增殖作用的影响。结果吡格列酮作用于HepG2细胞后,导致HepG2细胞的增殖受到抑制、DNA合成速率减慢,并诱导细胞凋亡,呈一定的剂量依赖关系;在此过程中,G0/G1期细胞比例明显增加,S期细胞比例明显减少,但PPARγmRNA和蛋白的表达没有变化;GW9662部分拮抗吡格列酮的增殖抑制作用,但转染pSG5-PPARγ真核表达质粒可以逆转GW9662的作用;吡格列酮在高浓度(20μmol.L-1)时对pGCsi-PPARγ表达质粒稳定转染的HepG2细胞仍表现出增殖抑制作用。结论吡格列酮能够抑制HepG2细胞的增殖并诱导凋亡,具有潜在的抗瘤作用,这种作用与其诱导细胞G0/G1期的停滞有关,PPARγ依赖和非依赖途径参与上述过程。     

PPARγ dependence of cyclosporine-isoprenaline renovascular interaction: roles of nitric oxide synthase and heme oxygenase

We previously showed that cyclosporine (CSA) impairs renal vasodilations caused by β-adrenoceptor activation. This study investigated whether the peroxisome proliferator-activated receptor gamma (PPARγ) and related nitric oxide synthase (NOS)/heme oxygenase (HO) signaling mediates the CSA-β-adrenoceptor interaction. The vasodilatory response elicited by a bolus injection of isoprenaline (1 μmole) in phenylephrine-preconstricted perfused kidneys of rats was reduced after prior infusion of zinc protoporphyrin IX (ZnPP, HO inhibitor) or GW9662 (PPARγ antagonist), suggesting the involvement of PPARγ and HO-derived CO in the isoprenaline response. In contrast, the inhibition of NOS activity by N-nitro-l-arginine methyl ester had no effect on isoprenaline responses. CSA (5 μM) significantly attenuated isoprenaline vasodilations, an effect that was abolished in the presence of GW9662 and accentuated by ZnPP. Also, supplementation with the PPARγ agonist pioglitazone or with l-arginine or hemin, substrates for NOS and HO, respectively, eliminated the unfavorable effect of CSA on isoprenaline vasodilations. The protection conferred by pioglitazone against CSA-evoked attenuation of isoprenaline vasodilations was maintained in N-nitro-l-arginine methyl ester-treated kidneys and disappeared after treatment with ZnPP or GW9662. In conclusion, the activation of the HO/CO/PPARγ cascade is probably the cellular mechanism that underlies the beneficial effect of pioglitazone on the CSA-isoprenaline interaction. Further, the facilitation of the HO/CO or NOS/NO pathway seems to offset this harmful effect of CSA.     

PPARγ activation ameliorates postoperative cognitive decline probably through suppressing hippocampal neuroinflammation in aged mice

Neuroinflammation plays a key role in many neurodegenerative disorders, including postoperative cognitive decline (POCD). Growing evidence has demonstrated that activation of the peroxisome proliferator-activated receptor-γ (PPARγ) attenuates the inflammatory response and improves cognitive dysfunction associated with many neuropsychiatric disorders. We hypothesize that down-regulation of PPARγ is linked to neuroinflammation and the subsequent cognitive deficits observed in an animal model of POCD. In the present study, the POCD animal model was established by performing an exploratory laparotomy under isoflurane anesthesia in 20-month-old male C57BL/6 mice. Behavioral tests, inflammatory biomarkers, including tumor necrosis factor-α (TNF-α), interleukin-6 (IL-6), interleukin-1β, ionized calcium-binding adaptor molecule-1 (IBA1)-positive cells, as well as glial fibrillary acidic protein (GFAP)-positive cells and brain-derived neurotrophic factor (BDNF), were measured. Herein, we showed that surgery induced profound impairment in cognition that was associated with significant decreases in PPARγ and BDNF expression, and significant increases in IL-1β, IBA1-positive cells, and GFAP-positive cells in the hippocampus. As expected, the PPARγ agonist pioglitazone attenuated the surgery-induced inflammatory changes and rescued the associated cognitive impairment. However, these beneficial effects were abolished by the PPARγ specific antagonist GW9662, suggesting a pivotal role of the PPARγ pathway in the pathogenesis of POCD. Taken together, our results provide evidence that down-regulation of PPARγ may be involved in neuroinflammation and subsequent POCD, and suggest that activation of PPARγ by pioglitazone may represent a new way to prevent or treat POCD.     

吡格列酮对脂多糖诱导的星形胶质细胞炎性细胞因子释放的影响

目的研究吡格列酮对脂多糖(LPS)诱导的星形胶质细胞炎症介质释放的抑制作用及其信号传导通路。方法神经胶质酸性蛋白(glial fibrillary acid protein,GFAP)免疫荧光染色法鉴定星形胶质细胞纯度。ELISA方法检测IL-1β、IL-6和TNF-α蛋白表达量的变化。Griess法测定培养细胞上清液中一氧化氮(NO)含量。结果星形胶质细胞经GFAP免疫荧光鉴定,其阳性率可达95%以上。LPS组能明显增加星形胶质细胞分泌IL-1β、IL-6、TNF-α及NO。吡格列酮能明显抑制LPS引起的这些作用,并呈一定浓度依赖性。过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的特异性阻断剂GW9662能明显对抗吡格列酮对LPS引起的IL-1β、IL-6、TNF-α及NO增加的抑制作用。与LPS组相比,JNK特异性阻断剂SP600125(5μmol·L-1)亦能有效对抗LPS诱导星形胶质细胞IL-1β、IL-6、TNF-α及NO分泌的增加;特异性iNOS抑制剂SMT可明显抑制LPS引起的NO分泌增加。结论吡格列酮能明显改善LPS诱导的大鼠皮层星形胶质细胞的损伤,这种作用可能与激活PPARγ、抑制JNK信号传导通路有关。     

替米沙坦上调3T3-L1脂肪细胞脂联素表达的机制

目的探讨过氧化物酶体增殖物活化受体γ(PPARγ)在替米沙坦调节脂肪细胞脂联素表达中的作用。方法体外培养3T3-L1脂肪细胞,采用替米沙坦(10μmol/L)和/或PPARγ阻断剂GW9662(30μmol/L)干预3T3-L1脂肪细胞,采用实时定量RT-PCR和Westernblot方法检测3T3-L1脂肪细胞的脂联素表达水平。结果与空白对照组相比,经GW9662干预后3T3-L1脂肪细胞脂联素mRNA表达水平明显降低(P<0.05);替米沙坦组脂联素mRNA和蛋白表达水平明显增加(P<0.05);替米沙坦+GW9662组(替米沙坦+GW组)脂联素mRNA和蛋白表达水平有增高趋势,但与空白组相比无统计学差异(P>0.05)。结论 PPARγ活性在替米沙坦上调3T3-L1脂肪细胞脂联素表达过程中可能起着一定程度的作用。     

基于NLRP3/GSDMD信号通路研究人参皂苷Rb1对高糖诱导的胰岛β细胞焦亡的影响

目的: 研究人参皂苷Rb1(GRb1)抑制高糖诱导的胰岛β细胞焦亡及对NLRP3/GSDMD信号通路的调节机制。方法: 高糖(50 mmol·L^-1)诱导大鼠胰岛细胞瘤细胞(rat insulinoma cells, INS-1)焦亡模型,并构建NLRP3过表达质粒转染INS-1细胞,采用倒置显微镜观察GRb1对细胞形态变化的影响;采用ELISA法检测GRb1对细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)、白细胞介素-1β(IL-1β)、胰岛素水平的影响;采用Western blot法和qRT-PCR法检测GRb1对INS-1细胞中核苷酸结合域样受体蛋白3(nucleotide binding domain like receptor protein 3, NLRP3)和切割蛋白D(gasdermin D, GSDMD)表达的影响。结果: 在高糖环境下,GRb1可减轻INS-1细胞形态学改变,显著增加INS-1细胞胰岛素分泌,降低细胞上清液中IL-1β、LDH水平(P＜0.05),且呈剂量依赖性;GRb1呈剂量依赖性抑制高糖诱导的INS-1细胞中GSDMD及上游调节因子NLRP3的表达(P＜0.05);过表达NLRP3后可显著逆转高糖环境下GRb1对INS-1细胞的部分保护性作用(P＜0.05)。结论: GRb1能够改善高糖诱导的INS-1细胞焦亡,减轻炎症反应,其机制可能与抑制NLRP3/GSDMD信号通路有关,从而防治糖尿病及其并发症的发生。