超高效液相色谱-质谱法检测妇宁颗粒中阿胶及牛皮源成分

摘要：目的:建立妇宁颗粒中阿胶及掺杂牛皮源成分的专属性检查方法。方法:利用胰蛋白酶对妇宁颗粒中所含的阿胶进行酶解,采用超高效液相色谱-质谱,以阿胶特征分子离子峰m/z 539.8（双电荷）→612.4、m/z 539.8（双电荷）→923.8及牛皮源特征离子对m/z 641.3 （双电荷）→726.2、m/z 641.3 （双电荷）→783.3作为检测离子对,离子化模式为ESI+,以多反应监测模式检测。结果:6批妇宁颗粒样品均检出了阿胶,且均未检出牛皮源成分。结论:该检测方法准确、可靠、专属性强,可用于妇宁颗粒中阿胶及牛皮源成分的检测。     

高效液相色谱串联质谱法同时检测人血浆伊马替尼及代谢物

目的：建立一种同时测定人血浆中伊马替尼及其活性代谢产物N-去甲基伊马替尼的高效液相色谱串联质谱（HPLC-MS/MS）法,并应用于检测胃肠间质瘤患者伊马替尼及代谢物的浓度。方法：血浆样品经甲醇沉淀蛋白后,以含0.1%甲酸的水溶液和甲醇溶液为流动相;采用梯度洗脱,Waters ACQUITY UPLC BEH C₁₈（2.1 mm×50 mm,1.7 μm）色谱柱进行分离,流速为0.3 mL·min^-1;柱温为35℃。ESI离子源,正离子模式,多反应监测,用于定量分析的离子对为m/z494.2→m/z394.3（伊马替尼）、m/z480.3→m/z394.3（N-去甲基伊马替尼）、m/z502.5→m/z394.4（内标,伊马替尼-D₈）。结果：伊马替尼和N-去甲伊马替尼的线性范围均为50~10 000 ng·mL^-1,定量下限为50 ng·mL^-1,伊马替尼及代谢物的准确度分别为97.9%~109.0%,95.5%~103.5%,日内和日间变异系数<10%。结论：本方法简便、准确、灵敏、专属性强,适用于人血浆中伊马替尼及其代谢物浓度的检测。     

超高效液相色谱-三重四极杆质谱法检测孕康颗粒中阿胶的特征肽及掺杂猪皮源成分

摘要：目的:建立孕康颗粒中阿胶的特征肽成分及掺杂猪皮源成分的专属性检测方法。方法:采用胰蛋白酶对孕康颗粒进行酶解,利用超高效液相色谱-三重四极杆质谱（UPLC-QQQ MS）对阿胶的专属性特征肽段及猪皮源成分进行检测。色谱柱:Agilent Zorbax Eclipse-C18柱（2.1 mm×100 mm,1.5μm）;流动相:乙腈（A）-0.1%甲酸溶液（B）,梯度洗脱;流速:0.3 ml·min-1;柱温:40℃。选择阿胶特征分子离子峰m/z 539.8（双电荷）→612.4,923.8及猪皮源特征离子峰m/z 774.5（双电荷）→977.8,1 034.6作为检测离子对,离子化模式为ESI+,进行多反应监测。结果:8批市售孕康颗粒样品中均可检出阿胶的特征肽段,均未检出猪皮源成分。结论:建立的方法专属性强、准确可靠,可用于孕康颗粒中阿胶特征肽成分及掺杂猪皮源成分的检测。     

超高效液相色谱-质谱法同时检测妇科止带胶囊中阿胶、龟甲胶成分

摘要：目的:建立妇科止带胶囊中阿胶、龟甲胶成分的专属性检测方法。方法:利用胰蛋白酶对妇科止带胶囊中阿胶、龟甲胶进行酶解,采用超高效液相色谱-质谱,以阿胶特征分子离子峰m/z 539.8 （双电荷）→612.4、m/z 539.8 （双电荷）→923.8及龟甲胶特征分子离子峰m/z 631.3（双电荷）→546.4、m/z 631.3（双电荷）→921.4作为检测离子对,离子化模式为ESI+,进行多反应监测。结果:10批妇科止带胶囊样品均检出了阿胶及龟甲胶成分。结论:建立的检查方法准确、可靠、专属性强,可用于妇科止带胶囊中阿胶及龟甲胶成分的检测。     

高效液相色谱-质谱联用法快速测定人血浆中丙戊酸钠浓度

目的：建立有效测定人血浆中丙戊酸钠浓度的高效液相色谱-质谱连用（HPLC-MS/MS）的方法。方法：血浆样本经乙腈沉淀蛋白后,以替米沙坦为内标,采用Agilent ZORBAX300SB-C₁₈柱（2.1 mm×150 mm, 5 μm）色谱柱,乙腈-20 mmol·L^-1乙酸胺（55：45）为流动相,流速0.25 mL·min ^-1,以液相色谱分离,电喷雾离子化串联质谱进行检测,采用多反应监测（MRM）测定丙戊酸钠（m/z 143.0→m/z 143.0）和内标替米沙坦（m/z 513.5→ m/z 469.4）的浓度。结果：校准曲线线性浓度范围从0.2~100 μg·mL^-1,最低定量限为0.2 μg·mL^-1。3个不同浓度（低、中、高）丙戊酸钠提取回收率分别为90.46%,93.18%,95.31%。日内和日间精密度均小于10%和8%。结论：此法简单灵敏,重现性好。已成功应用于丙戊酸钠片在中国健康志愿者的药动学研究。     

LC-MS/MS法测定人血浆中利培酮和9-羟基利培酮的浓度及临床应用

目的：建立简单快速的液相串联质谱法（LC-MS/MS）测定人血浆中利培酮及其代谢物9-羟基利培酮的浓度。方法：血浆样本采用甲醇沉淀蛋白法处理,以地西泮为内标,采用ES Industries Sonoma C₁₈（2）色谱柱（100 mm×2.1 mm,3 μm）分离化合物;流动相包括A-50%甲醇水溶液（含6 mmol·L^-1乙酸铵）、B-0.1%甲酸乙腈溶液;梯度洗脱,总流速0.60 mL·min^-1;进样量10 μL;柱温30℃。采用正离子MRM模式扫描,电喷雾电离,利培酮、9-羟基利培酮及地西泮内标离子通道分别为m/z411.3→m/z191.1、m/z427.2→m/z207.0和m/z285.1→m/z193.1。依据《中国药典》（2015年版）通则中9012"生物样品定量分析方法验证指导原则"对所建方法进行验证。结果：利培酮在0.16~101.40 μg·L^-1的浓度范围内线性关系良好（r>0.999）,9-羟基利培酮在0.40~256.80 μg·L^-1浓度范围内线性关系良好（r>0.999）;在定量下限,低、中、高浓度批内与批间精密度的标准偏差（RSD）均小于10.9%,准确度符合要求;含分析物血浆样品在不同储存条件下结果稳定。该法已成功应用于临床样本治疗药物监测。运用此方法监测分析一千多份临床样本得出总利培酮临床实际测定浓度范围为13.30~93.22 μg·L^-1。结论：本研究建立了测定血浆中利培酮及其代谢物9-羟基利培酮浓度的快速、简便、实用的LC-MS/MS方法。利培酮临床实际测定浓度范围相比于神经精神药理学与药物精神病学协会专家组推荐治疗浓度范围更宽,且多次监测的患者中女性血药浓度相对于男性更趋于稳定。     

高效液相串联质谱法测定小鼠肺组织中美罗培南的含量

目的：采用液相色谱-质谱串联技术（HPLC-MS/MS）,建立测定小鼠肺组织中美罗培南含量的方法,为研究美罗培南在肺内分布的药动学奠定基础。方法：采用Diamonsil C₁₈（150 mm×4.6 mm,5 μm）色谱柱进行分离,流动相为乙腈-0.1%甲酸水,梯度洗脱,流速1.0 mL·min^-1,内标选择厄他培南。电喷雾离子化源（ESI）,正负离子切换,美罗培南为正离子检测模式,内标厄他培南为负离子检测模式。多反应监测（MRM）方式进行定量分析,用于定量分析的离子对分别为美罗培南m/z 384.1→141.2,内标厄他培南m/z 474.4→265.2。结果：小鼠肺组织匀浆中美罗培南在15.625~2 000 ng·mL^-1范围内线性关系良好（r=0.999 7）,平均提取回收率为98.05%~102.54%,日内、日间精密度均小于15%。结论：采用本法测定小鼠肺组织中美罗培南的浓度,灵敏度高,专属性强,可用于肺组织样品中美罗培南快速有效的分析以及美罗培南在肺组织分布的药动学研究。     

超高效液相色谱-串联质谱法同时测定食蟹猴血浆中地高辛、安非他酮及活性代谢物浓度和药动学评价

目的：建立同时测定食蟹猴体内地高辛、安非他酮及其活性代谢物血浆浓度的方法，并评价药动学特征。方法：以乙腈沉淀蛋白处理血浆样品。色谱柱Agilent Zorbax SB-C8（4.6×100 mm 3.5 μm）；流动相为甲醇-水（含5 mmol·L^-1甲酸铵，pH 3.6），梯度洗脱；质谱条件为电喷雾离子源，正离子模式，扫描方式为多反应离子监测，m/z 798.4→651.3（地高辛）；m/z 240.2→184.0（安非他酮）；m/z 256.3→238.0（羟基安非他酮）；m/z 242.2→168.1（赤式/苏式羟化安非他酮）；m/z 172.2→128.2（甲硝唑，内标）。食蟹猴3只，♂，体质量2~4 kg，0.1 mg·5 mL^-1·kg^-1地高辛和1.5 mg·5 mL^-1·kg^-1盐酸安非他酮静滴给药。给药前后0.08，0.25，0.5，1，1.5，2，4，6，8，12，24，48 h采血。测定地高辛、安非他酮及其活性代谢物浓度。结果：血浆标准曲线在0.25~100 ng·mL^-1（地高辛），0.2~1 000 ng·mL^-1（安非他酮/羟基安非他酮），0.2~50 ng·mL^-1（赤式/苏式羟化安非他酮），定量范围内线性良好（r≥0.995）。批内批间精密度均小于13.7%，绝对回收率为83.8%~104.2%，基质效应小于10.6%。地高辛、安非他酮、羟基安非他酮、赤式、苏式羟化安非他酮药动学参数C_max分别为（29.32±7.31）、（254.00±68.23）、（22.43±7.56）、（1.53±0.27）、（3.96±0.42） ng·mL^-1，T_max分别为（0.14±0.10）、（0.08±0）、（1.50±0.00）、（1.17±0.29）、（4.06±1.46） h，AUC_0-48h分别为（123.87±9.59）、（550.68±17.43）、（160.47±62.92）、（9.26±3.65）、（24.43±5.28） ng·h·mL^-1，半衰期分别为（21.26±3.77）、（5.54±1.76）、（3.96±1.21）、（5.58±2.40）、（4.06±1.46） h。结论：和已报道的方法比较，建立的分析方法灵敏、准确，样品处理简便、快速，适用于药动学研究以及地高辛-安非他酮药物相互作用的评价，也能为临床个体化用药实践提供方法学参考。     

液相色谱-串联质谱法测定大鼠血浆中舒巴坦的浓度及其药动学研究

目的：建立测定大鼠血浆中舒巴坦血药浓度的液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）法,探讨美罗培南、亚胺培南对舒巴坦在大鼠体内的药动学影响。方法：将18只SD大鼠随机分为舒巴坦组、美罗培南+舒巴坦组和亚胺培南+舒巴坦组,分别静脉注射给药,按规定时间点采血,血浆样品经乙酸乙酯萃取,LC-MS/MS法测定血药浓度;采用负离子模式,多重反应监测（multiple reaction monitoring,MRM）,定量离子对为m/z 232.3→m/z 139.9（舒巴坦）和m/z 423.4→m/z 207.1（头孢呋辛,内标）。经DAS 2.0.1计算药动学参数,并进行统计学比较。结果：舒巴坦在0.250~200 μg·mL^-1范围内线性关系良好,方法学符合要求。药动学试验结果表明,合用美罗培南或亚胺培南后,舒巴坦在大鼠体内的主要药动学参数t_max、C_max、AUC、MRT、t_1/2z、CL_z和V_z与单用舒巴坦相比,无显著性差异。结论：和已报道的方法比较,本研究所建方法具有快速、高效,生物样品用量小的特点,适用于舒巴坦在大鼠体内药动学的研究;美罗培南、亚胺培南对舒巴坦在大鼠体内的药动学过程无明显影响,提示评价此类药物相互作用还需同时考虑药效学等方法。     

高效液相色谱-串联质谱法测定人血清中替加环素的浓度

目的：建立人血清中替加环素浓度的高效液相色谱-串联质谱法（HPLC-MS/MS）测定方法。方法：以[叔丁基-d9]替加环素为内标,将待测血清样品经氢氧化钠碱化后,加乙酸乙酯-二氯甲烷（4∶1,V/V）提取,上清液经真空干燥,得到的残渣经流动相复溶后进样。进样液经Agilent Eclipse plus C₈（4.6 mm×100 mm,5 μm）色谱柱分离,甲醇-水（30∶70,V/V,含0.005 mol·L^-1甲酸铵和0.25%甲酸）为流动相,流速0.5 mL·min^-1,进行洗脱,采用电喷雾电离源（ESI）,以多反应监测（MRM）方式进行正离子检测。用于定量分析的离子分别为替加环素m/z586.4→513.3和[叔丁基-d9]替加环素m/z595.4→514.3。结果：血清中替加环素的浓度与峰面积比在10~2 000 ng·mL^-1范围内线性关系良好,定量下限为10 ng·mL^-1,提取回收率大于70.04%,日内日间精密度小于4.54%。结论：该法简单、灵敏、快速,分离效果良好,可用于人体血药浓度测定和PK/PD研究。     

复方阿胶浆治疗化疗周期血红蛋白降低的临床观察

目的 探讨复方阿胶浆在减轻癌症化疗周期血红蛋白降低的应用价值.方法 随机选取两组治疗方案基本相同的肿瘤患者,治疗组(n=25)从化疗第1天开始服用复方阿胶浆2支/次,每日2次,连用15天.对照组(n=25)不加用复方阿胶浆.两组受试者在2个和4个周期的化疗后检测血红蛋白水平.结果 治疗组和对照组在2程化疗后血红蛋白为(118.44±5.36)g/LVs(108.92±6.84) g/L,4程化疗后为(108.76±6.72)g/L Vs(99.08±7.82)g/L,组间差异有统计学意义(P＜0.05).结论 复方阿胶浆对治疗化疗周期血红蛋白降低有较好的疗效.     

胶束电动毛细管电泳法同时测定麻杏止咳糖浆中的6种防腐剂

目的建立胶束电动毛细管色谱二极管阵列检测法(MEKC-DAD)同时测定不同厂家的麻杏止咳糖浆中苯甲酸、山梨酸、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯等6种防腐剂的含量。方法采用胶束电动毛细管分离模式,用未涂渍的标准熔融石英毛细管柱(75μm×64 cm,有效长度56 cm)为分离通道;背景电解质溶液:15 mmol·L^-1硼砂-60 mmol·L^-1硼酸-50 mmol·L^-1 SDS;检测波长195 nm;运行电压:15 kV;运行温度:20℃;压力进样:50 mbar,5 s。结果各化合物的浓度与峰面积的线性关系良好(r≥0.9993);精密度、稳定性试验的RSD<2.0%;加样回收率范围为98.7%~101.2%(n=9)。5家企业共10批样品均未检出山梨酸和对羟基苯甲酸酯类;5家企业样品的苯甲酸含量与处方相符。结论本方法可用于麻杏止咳糖浆中防腐剂的检测,为其生产工艺和质量控制提供有意义的实验数据和参考依据。     

当归养血膏微生物限度检查法验证

目的：建立当归养血膏微生物限度检查方法。方法：按中国药典2005年版的规定,对3个批次当归养血膏进行了微生物限度检查方法验证。结果：当归养血膏对5株阳性代表菌株有不同程度的抑菌活性。结论：当归养血膏微生物限度检查极为必要,根据方法验证实验结果建议采用薄膜过滤法进行本品的微生物限度检查。     

阿胶糕中驴皮源成分的质量控制研究

目的 建立阿胶糕中驴皮源成分的检测方法,考察不同企业的产品质量,为产品品质控制提供参考.方法 采用蛋白质组学技术,以驴皮特征性肽段为检测指标,超高效液相色谱-串联质谱测定.流动相为0.1％甲酸水溶液和0.1％甲酸乙腈溶液,流速0.3 mL·min-1,梯度洗脱,多反应监测(MRM),同位素内标法定量.结果 驴皮特征性肽...     

凯氏定氮法测定小儿智力糖浆中总氮含量

目的：测定小儿智力糖浆总氮含量。方法：采用常量凯氏定氮法进行方法学考察。并测定10批小儿智力糖浆总氮含量。结果：测定方法的精密度、重复性良好,平均加样回收率为99．1％,关系标准差（RSD）为0．66％;10批样品含测结果平均为2．84mg/ml,初步拟定小儿智力糖浆每毫升含总氮量不得少于2．0mg。结论：该方法可以作为控制小儿智力糖浆含氮量稳定可靠的方法,从而对本品中动物药进行质量控制。     

超高效液相色谱-三重四极杆质谱法检测复方阿胶补血颗粒中的阿胶

摘 要 目的：建立复方阿胶补血颗粒中阿胶的专属性检测方法。方法: 采用胰蛋白酶对复方阿胶补血颗粒处方中阿胶成分进行酶解,利用超高效液相色谱 三重四极杆质谱对阿胶特征分子离子峰进行检测。结果: 10批市售样品中均可检出阿胶的特征分子离子峰。结论:所建立的方法经方法学验证,该方法专属性强,可用于复方阿胶补血颗粒中阿胶的检测,为含阿胶药材的中成药的质量控制及标准研究提供参考。     

银翘解毒丸质量评价方法研究

目的建立银翘解毒丸指纹图谱及多成分同时定量分析法,为其质量控制及评价提供技术支持。方法采用高效液相色谱-二极管阵列(HPLC-DAD)法建立指纹图谱,并同时测定绿原酸、连翘酯苷A、牛蒡苷3个指标性成分的含量,对26批银翘解毒丸进行分析;采用高效液相色谱-蒸发光散射(HPLC-ELSD)法初步筛查山银花替代金银花非法投料情况。结果银翘解毒丸指纹图谱中标定了15个共有峰,相似度为0.709~0.997;聚类分析结果显示,指纹图谱相似度为0.85以下的样品为质量存疑。26批样品中有5批质量存疑;2批绿原酸及牛蒡苷的含量极低,3批连翘酯苷A的含量极低,质量分析结果与指纹图谱结果具有一致性。26批样品中,山银花阳性检出3批,阳性检出率为11.54%。结论该方法准确、可靠,可检测不按标准投料、非法投料等问题,可用于银翘解毒丸的质量控制及评价。     

阿胶中总铬含量测定方法研究

目的建立阿胶中总铬含量测定方法,控制阿胶产品质量,保障阿胶用药安全性。方法使用微波消解系统消解处理样品,以HNO3为消化剂,消化温度为180℃,消化时间为10min,以石墨炉原子吸收分光光度法测定阿胶中铬元素的含量。结果线性范围为0~40.0μg.L-1,回归方程相关系数r=0.9991,方法的检出限为2.6×10-4μg.mL-1,平均回收率为98.4%(n=9)。结论本法检测阿胶中总铬的含量,方法灵敏、准确、可靠,对控制阿胶质量有实际意义。     

中国药典2015年版中诺氟沙星胶囊有关物质测定方法的改进研究

目的 考察中国药典2015年版中诺氟沙星胶囊有关物质测定方法的质量可控性,并对现行方法进行改进。方法 分别采用中国药典2015年版和EP9.3版的方法对浙江省各地区抽样的57批诺氟沙星胶囊的有关物质进行检查,对结果进行比较研究;并对中国药典2015年版方法的合理性进行探讨。结果 57批抽样样品按EP9.3版有关物质测定方法检查,结果有5批样品检出杂质E超出限度（0.15%）,1批杂质K为限度边缘（0.15%）,而根据中国药典2015年版方法检查结果,57批样品全部合格。现行的中国药典2015年版诺氟沙星胶囊有关物质测定方法专属性不强,杂质E被包含在主峰之中难于检出;现行标准有关物质测定方法中不同品牌的C₁₈色谱柱以及流动相条件对测定结果影响较大,选择Waters Sunfire C₁₈色谱柱,调整流动相的比例和梯度条件可以使杂质E与诺氟沙星主峰很好地分离,样品的测定结果也与EP9.3方法的测定结果一致,能达到控制杂质E、杂质K以及其他杂质的目的。结论 目前浙江省市场上的诺氟沙星胶囊中杂质E有超标的情况,但根据中国药典2015年版的现行有关物质测定方法难以检出,难以有效控制药品的质量,需修订提高。     

山药饮片中外源性有害物质残留情况分析

目的：了解山药饮片中外源性有害物质的残留状况。方法：依据《中华人民共和国药典》和探索性研究方法对不同来源的山药饮片中的二氧化硫残留量、脱硫剂、重金属及有害元素、农药残留进行分析和评价。结果：168批样品中检出11批二氧化硫残留量超标,检出1批使用了脱硫剂;37批样品中检出2批汞元素超标;38批样品中检出5批含有国家禁用和限用农药残留（涕灭威砜、3-羟基克百威、甲拌磷砜、氟虫腈、杀虫脒）,检出15批含有植物生长调节剂残留。结论：山药饮片中外源性有害物质以二氧化硫和农药残留为主,需要进一步加强生产监管,建议完善现行质量标准对农药残留进行限量控制。