盐酸青藤碱对实验性结肠炎小鼠TLR4/NF-κB信号通路的影响

摘 要 目的：研究盐酸青藤碱对葡聚糖硫酸钠诱导的实验性结肠炎小鼠的治疗作用。方法: 制备实验性结肠炎小鼠模型,随机分为空白对照组、葡聚糖硫酸钠（DSS）模型对照组、柳氮磺吡啶组及青藤碱低、中、高剂量组（n=6）。空白对照组与DSS模型对照组每天给予生理盐水0.2ml,柳氮磺吡啶组（100 mg·kg-1）,青藤碱低剂量组（30 mg·kg-1）、中剂量组（90 mg·kg-1）、高剂量组（270 mg·kg-1）,连续灌胃10d。评价各组小鼠疾病活动指数（DAI）和组织学损伤评分,Western blotting检测结肠组织中Toll样受体4（TLR4）、髓样分化因子（Myd88）表达,免疫组织化学法检测结肠组织中核转录因子 κB（NF-κB）的表达。结果:DSS模型对照组小鼠DAI和组织损伤评分、结肠组织中TLR4、Myd88、NF-κB表达均显著高于空白对照组（P＜0.01）,柳氮磺吡啶组和青藤碱低、中、高剂量组均能降低DAI和组织损伤评分,降低结肠组织中TLR4、Myd88、NF-κB表达（P＜0.01）,且呈浓度依赖性。柳氮磺吡啶组与青藤碱中、高剂量组间差异无统计学意义（P>0.05）。结论:青藤碱能通过影响实验性结肠炎小鼠TLR4/NF-κB信号通路,降低TLR4、Myd88、NF-κB表达,发挥治疗作用。     

金合欢素对糖尿病肾病大鼠肾损伤及TLR4/NF-κB信号通路的影响

目的 探讨金合欢素对糖尿病肾病（DN）大鼠肾损伤及Toll样受体4（TLR4）/核因子-κB（NF-κB）信号通路的影响。方法 通过高脂高糖饲料喂养及ip链脲佐菌素（STZ）建立DN大鼠模型,将造模成功的大鼠随机分为模型组,金合欢素低、高剂量（40、80 mg ·kg^-1）组,金合欢素（80 mg ·kg^-1）＋脂多糖（LPS,0.1 mg ·kg^-1）组,缬沙坦（20 mg ·kg^-1）组,每组10只,并以正常喂养且不ip STZ的10只大鼠作为对照组。干预结束后,尾静脉取血,检测大鼠空腹血糖含量;收集大鼠24 h尿液,分析尿蛋白含量;腹部主动脉取血,ELISA法检测血清中血肌酐、血尿素氮水平及肿瘤坏死因子-α （TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）水平;分离双肾组织,透射电镜及HE染色检测肾组织损伤情况;Western blotting检测Toll样受体4（TLR4）/核因子-κB（NF-κB）通路相关蛋白表达。结果 与对照组比较,模型组肾组织严重受损,血糖、尿蛋白、血肌酐、血尿素氮、血清TNF-α和IL-6水平、肾组织TLR4和p-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白表达显著增加（P<0.05）;与模型组比较,缬沙坦和金合欢素低、高剂量组肾组织损伤得到缓解,血糖、尿蛋白、血肌酐、血尿素氮、血清TNF-α和IL-6水平、肾组织TLR4和p-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白表达显著降低（P<0.05）;与金合欢素高剂量组相比,金合欢素＋LPS组肾组织损伤加剧,血糖、尿蛋白、血肌酐、血尿素氮、血清TNF-α和IL-6水平、肾组织TLR4和p-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白表达显著增加（P<0.05）。结论 金合欢素通过抑制TLR4/NF-κB信号通路改善DN大鼠肾损伤。     

芪丹复感颗粒对呼吸道病毒感染小鼠TLRs信号通路的影响

目的 探究芪丹复感颗粒对呼吸道病毒感染小鼠肺组织的保护作用及对TLRs信号通路的影响。方法 120只小鼠随机分为对照组,模型组,阳性药组（利巴韦林100 mg·kg^-1）,芪丹复感颗粒低、中、高剂量组（芪丹复感颗粒1,2,4 g·kg^-1）,每组20只,其中12只用于观察死亡情况。除对照组外,其余各组小鼠均通过鼻饲流感病毒PR8建立流感病毒感染模型。通过HE染色观察肺组织形态,ELISA检测小鼠血清和肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid,BALF）中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）和白细胞介素-6（IL-6）的浓度。分别使用Western blot和RT-qPCR检测Toll样受体4/7（TLR4/7）、髓样分化因子（MyD88）、核因子κB（NF-κB）蛋白表达和mRNA水平。结果 建模第7天,模型组小鼠全部死亡,死亡率为100.0%。在建模后第14天阳性药组死亡3只（25.0%）,芪丹复感颗粒低、中、高剂量组分别死亡9只（75.0%）、6只（50.0%）和5只（41.7%）。造模第5天,模型组,阳性药组,低、中、高剂量组的血清和BALF中的TNF-α、IL-6、IL-1β水平以及肺组织中TLR4/7、MyD88、NF-κB蛋白表达和mRNA水平均显著高于对照组（P<0.05）,阳性药组,低、中、高剂量组均显著低于模型组（P<0.05）,中、高剂量组显著低于低剂量组（P<0.05）,而中、高剂量组之间无显著差异。结论 芪丹复感颗粒可以减轻流感病毒造成的肺损伤,可能是通过抑制TLR4/7-MyD88-NF-κB通路的表达抑制炎症因子的释放,从而降低肺损伤。     

安子合剂对抗磷脂抗体阳性流产小鼠TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的影响

目的:研究安子合剂对抗磷脂抗体(APA)阳性流产小鼠Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子88(My D88)/核因子κB(NF-κB)信号通路的影响,探讨其抗APA阳性流产作用机制。方法:将BALB/c小鼠(♀)随机分为空白对照组、模型组、阿司匹林组(阳性对照,0.019 5 g/kg)和安子合剂低、中、高剂量组(37.7、75.4、150.8 g/kg,以生药计),每组10只。除空白对照组外,其余各组小鼠均以人β2-糖蛋白Ⅰ为诱导剂建立APA阳性流产模型。从妊娠第1天起,各给药组小鼠ig相应药物,空白对照组和模型组小鼠ig等体积生理盐水,每天1次,连续9 d。分别采用实时荧光定量聚合酶链反应法和免疫组化法测定胎盘组织TLR4、髓样分化蛋白2(MD2)、My D88、NF-κB m RNA及其蛋白表达水平。结果:与空白对照组比较,模型组小鼠胎盘组织TLR4、MD2、My D88、NF-κB m RNA及其蛋白表达水平均显著升高(P<0.01)。与模型组比较,阿司匹林组和安子合剂低、中剂量组小鼠胎盘组织TLR4、MD2、My D88 m RNA及其蛋白表达水平,安子合剂高剂量组小鼠胎盘组织TLR4蛋白表达水平,以及各给药组小鼠胎盘组织NF-κB蛋白表达水平均显著降低(P<0.05或P<0.01);安子合剂低剂量组小鼠胎盘组织TLR4、MD2 m RNA表达水平和MD2、My D88蛋白表达水平较阿司匹林组更低(P<0.05或P<0.01)。结论:安子合剂可抑制APA阳性流产小鼠TLR4/My D88/NF-κB信号通路转导,这可能是其抗APA阳性流产的作用机制之一。     

基于TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路研究三叶香茶菜含药血清对枯否细胞活化的影响

目的 研究三叶香茶菜含药血清(isodon ternifolius-containing serum，ITS)通过Toll样受体4(TLR4)/核因子κB(NF-κB)/NOD样受体蛋白3(NLRP3)信号通路对脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)诱导的大鼠原代肝枯否细胞(Kupffer cell，KC)活化的影响。方法 分离培养大鼠原代KC，将LPS诱导的大鼠原代KC分为空白对照组、模型对照组、空白血清组、阳性对照组(秋水仙碱含药血清组)、ITS组、TLR4阻断剂组、TLR4阻断剂+ITS组。MTT法检测不同浓度ITS对KC增殖活性的影响；ELISA法检测KC细胞上清液白介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-18(IL-18)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)含量；荧光定量聚合应(PCR)、Western blotting和免疫荧光检测KC中TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路中TLR4、核因子κB抑制蛋白α(IκBα)、半胱肽氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)、NLRP3 mRNA和TLR4、IκBα、磷酸化IκBα(p-IκBα)、Caspase-1、NLRP3、NF-κBp65蛋白表达情况。结果 与模型对照组相比，各药物组KC上清液中IL-1β、IL-18、TNF-α和IL-6含量，以及细胞中TLR4、IκBα、Caspase-1、NLRP3 mRNA和TLR4、IκBα、p-IκBα、Caspase-1、NLRP3、NF-κBp65蛋白的表达均下调或降低(P<0.05或P<0.01)；与TLR4阻断剂组比较，TLR4阻断剂+ITS组上述多数指标的改善更加明显。结论 三叶香茶菜可能通过下调TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路抑制KC活化，减少炎性因子的表达和释放，从而减轻肝脏炎症损伤。     

半夏泻心汤对溃疡性结肠炎大鼠结肠组织中TLRs/NF-κB通路相关因子表达的影响

目的:观察半夏泻心汤对溃疡性结肠炎(UC)大鼠结肠组织中核转录因子κB p65(NF-κB p65)、NF-κB抑制蛋白α(IκB-α)及Toll样受体4(TLR4)表达的影响,探讨其治疗UC的可能机制。方法:将大鼠随机分为正常组(生理盐水)、模型组(生理盐水)、柳氮磺吡啶肠溶片(SASP,阳性对照,0.3 g/kg)和半夏泻心汤低、中、高剂量组(3.9、7.8、11.7 g/kg),每组8只。除正常组外,其余各组大鼠均采用三硝基苯磺酸-乙醇法复制UC模型。成模后,ig给药,每天1次,连续3周。给药结束后,检测各组大鼠结肠组织中NF-κB p65、IκB-α、TLR4 mRNA及蛋白的表达。结果:与正常组比较,其余各组大鼠结肠组织中NF-κB p65、IκB-α、TLR4 mRNA及蛋白表达水平均显著升高(P<0.05)。与模型组比较,各给药组大鼠结肠组织中NF-κB p65、IκB-α、TLR4 mRNA及蛋白表达水平均显著降低(P<0.05);半夏泻心汤具有一定的剂量依赖性,且高剂量组大鼠结肠组织中上述水平的降低程度均高于SASP组(P<0.05)。结论:半夏泻心汤可下调UC大鼠结肠组织中NF-κB p65、IκB-α及TLR4 mRNA及蛋白的表达,这可能是其治疗UC的作用机制之一。     

利伐沙班对下肢动脉硬化闭塞症大鼠血管内皮功能及p38MAPK/NF-κB通路的影响

摘 要 目的：探究利伐沙班对下肢动脉硬化闭塞症（ASO）大鼠血管内皮功能及p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）/核因子κB（NF-κB）通路的影响。方法: 将大鼠分为假手术组、模型组、利伐沙班低剂量组、利伐沙班中剂量组、利伐沙班高剂量组,给药2周后检测各组大鼠血清中一氧化氮（NO）和内皮素（ET-1）含量;检测血清中内皮细胞的数量;检测动脉血管中p38MAPK、p p38MAPK、NF-κB表达情况。结果:与模型组相比,利伐沙班组静脉血中内皮细胞数量减少;利伐沙班组血清中NO显著高于模型组,ET-1显著低于模型组（P<0.05）;利伐沙班组动脉中p p38MAPK的表达量显著低于模型组,NF-κB的表达量显著高于模型组（P<0.05）,呈剂量依赖性。结论:利伐沙班能够改善ASO大鼠血管内皮功能,推测是通过调控p38MAPK / NF-κB通路实现的。     

丁苯酞对糖氧剥夺条件下人脑微血管内皮细胞炎症反应的调节作用

目的 研究丁苯酞调节糖氧剥夺（oxygen-glucose deprivation,OGD）条件下人脑微血管内皮细胞（human brainmicrovascular endothelial cells,HBMEC）炎症反应的机制。方法 采用OGD方法处理HBMEC,将细胞分为对照组、模型组和丁苯酞低、中、高剂量组。其中对照组为正常培养的HBMEC,模型组为OGD处理的细胞,低剂量组为OGD+5 μmol·L^-1的丁苯酞,中剂量组为OGD+10 μmol·L^-1的丁苯酞,高剂量组为OGD+20 μmol·L^-1的丁苯酞。采用流式细胞术检测细胞凋亡水平,CCK-8法检测细胞活力的变化,Western-Blot法检测细胞中HMGB1、TLR4、NF-κB （p-P65）、caspase-1和procaspase-1的表达水平,免疫酶联法检测上清中白细胞介素1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）,白细胞介素6（IL-6）的分泌水平。实时荧光定量PCR检测HMGB1、TLR4、NF-κB（P65）、caspase-1、IL-1β的mRNA表达。结果 OGD处理可以诱导HBMEC活力下调和HBMEC细胞凋亡,且具有时间依赖性,相比对照组具有显著性差异（P<0.05）;而丁苯酞干预后,HBMEC细胞活力比模型组显著上调（P<0.05）,细胞凋亡率比模型组显著下降（P<0.05）。OGD处理可以导致HBMEC中HMGB1-TLR4-NF-κB信号的激活,诱导炎症因子caspase-1、IL-1β的表达上调,相比对照组具有显著性差异（P<0.05）;而丁苯酞干预可以显著下调HMGB1-TLR4-NF-κB信号的表达,下调caspase-1、IL-1β的表达。结论 丁苯酞可能通过抑制HMGB1-TLR4-NF-κB信号的表达调节OGD下HBMEC细胞炎症反应。     

原花青素通过抑制 Toll样受体 4/核因子 -κB信号通路对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的 探究原花青素通过抑制Toll样受体4(TLR4)/核因子-κB(NF-κB)信号通路对大鼠脑缺血再灌注(ischemia-reper-fusion,I/R)损伤的保护作用.方法 选取60只雄性SD大鼠,采用随机数字表法分为对照组、模型组、原花青素低剂量组(80 mg/kg)和原花青素高剂量组(160 mg/kg),每组15只;除对照组外,其他各组大鼠使用改良线栓法制成I/R模型,原花青素低剂量组和原花青素高剂量组分别使用80 mg/kg和160 mg/kg的原花青素灌胃处理,连续处理1周.比较各组大鼠脑含水量;采用神经行为学评估比较各组大鼠神经功能缺损评分;使用试剂盒检测各组大鼠超氧化物歧化酶(SOD)、活性氧和谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)水平;采用蛋白质印迹法检测TLR4/NF-κB信号通路和凋亡蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、胱天蛋白酶3(Caspase-3)表达水平;采用苏木素染色观察神经细胞凋亡率.结果 与对照组比较,模型组大鼠神经功能缺损评分、脑含水量、活性氧含量水平、TLR4蛋白、NF-κB蛋白、Bax蛋白和Caspase-3蛋白表达、神经细胞凋亡率升高,SOD含量水平、GPX含量水平、Bcl-2蛋白降低(P<0.05),其中TLR4蛋白和NF-κB蛋白分别为(1.80±0.20)和(1.85±0.21),显著低于对照组的(0.45±0.04)和(0.51±0.04);相比模型组,使用原花青素处理各组大鼠神经功能评分、脑含水量、活性氧含量水平、TLR4蛋白、NF-κB蛋白、Bax蛋白和Caspase-3蛋白表达、神经细胞凋亡率降低,且原花青素高剂量组低于原花青素低剂量组(P<0.05),其中原花青素高剂量组TLR4蛋白和NF-κB蛋白分别为(0.59±0.06)和(0.64±0.06),显著低于原花青素低剂量组的(1.00±0.10)和(0.98±0.09);与模型组比较,使用原花青素处理各组大鼠SOD含量水平、GPX含量水平、Bcl-2蛋白升高,且原花青素高剂量组高于原花青素低剂量组(P<0.05).结论 原花青素过抑制TLR4/NF-κB信号通路调控下游凋亡蛋白的表达抑制I/R后大鼠脑细胞的凋亡,缓解脑组织损伤.     

红景天苷对急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征大鼠的保护作用

摘 要 目的：探讨红景天苷注射液对急性肺损伤（ALI）/急性呼吸窘迫综合征（ARDS）大鼠的保护作用。方法: 50只大鼠随机分为5组：正常对照组,模型对照组,红景天苷高、中、低（8.0,4.0,2.0 mg·kg^-1 ）剂量组,每组10只。采用油酸0.1 ml·kg^-1 经尾静脉注射制备ALI/ARDS模型。腹腔注射给药,qd,连续给药3 d。模型制备成功后24 h经颈动脉采集血样1.0 ml行血气分析。给药第3天检测肺湿干质量比、动脉氧分压、HE染色肺组织病理,并采用ELISE法检测大鼠血液中高迁移率族蛋白 1（HMGB1）和角蛋白 14（KRT 14）的表达。结果:红景天苷各剂量组的HMGB1和KRT 14表达均低于模型对照组,中、高剂量组与模型对照组相比差异有统计学意义（P<0.05）;红景天苷的剂量与药效呈正相关,中、高剂量组与低剂量相比差异有统计学意义（P<0.05）。红景天苷各剂量组的动脉氧分压高于模型对照组,肺湿干质量比低于模型对照组,中、高剂量组与模型对照组相比差异有统计学意义（P<0.05）;红景天苷的剂量与药效呈正相关,中、高剂量组与低剂量相比差异有统计学意义（P<0.05）。红景天苷各剂量组的肺组织病理与模型对照组相比有所改善。结论:红景天苷能减轻ALI/ARDS大鼠血液中炎症因子HMGB1和KRT 14的表达,减轻肺水肿,提高氧分压,对ALI/ARDS大鼠具有明显的治疗作用。     

齐墩果酸调节HMGB1/TLR4/NF-κB介导的炎症通路减轻蛛网膜下腔出血后的早期脑损伤

目的探讨齐墩果酸对大鼠蛛网膜下腔出血模型HMGB1/TLR4/NF-κB炎症通路的影响。方法将72只成年雄性SD大鼠随机分成3组(假手术组、SAH模型组、齐墩果酸20 mg/kg给药组)。采用颈内动脉穿刺法建立大鼠SAH模型,造模1 h后给予齐墩果酸,剂量为20 mg/kg。大鼠SAH模型建立24 h后进行神经功能学评分;检测脑水含量及脑伊文思蓝浸出率;并利用Western blot方法检测脑组织中HMGB1、TLR4、IκBα和p65蛋白的表达量。结果齐墩果酸(20 mg/kg)能够显著增加神经功能评分并且明显降低脑含水量和伊文思蓝渗透率(P<0.01)。齐墩果酸给药可有效降低HMGB1的表达和释放(P<0.01),抑制TLR4的表达、IκBα降解及p65入核(P<0.01)。结论齐墩果酸能够抑制HMGB1/TLR4/NF-κB炎症通路,减轻蛛网膜下腔出血后的炎症反应,改善脑损伤。     

基于IKK2/NF-κB信号通路探讨虫草素对大鼠创伤性脑损伤后神经元的保护作用

摘 要 目的：基于IκB激酶2/核因子κB（IKK2/NF-κB）信号通路探讨虫草素对大鼠创伤性脑损伤后神经元的保护作用。 方法: 将120只SD大鼠分为6组：正常对照组、模型组、阳性对照组（盐酸纳美芬,20.0 mg·kg-1）、虫草素低、中、高剂量组（20.0,40.0,80.0 mg·kg-1）,每组20只。除正常对照组外,其余各组建立大鼠创伤性脑损伤模型,盐酸纳美芬组及虫草素各剂量组灌胃给予相应药物,1次/d,持续1周,正常对照组及模型组给与等体积生理盐水。实验结束后,测定大鼠认知功能,制作海马病理切片,测定海马组织IKK2、NF-κB mRNA及蛋白水平,测定白细胞介素 4（IL 4）、白细胞介素 6（IL 6）、肿瘤坏死因子 α（TNF α）水平。 结果: 与正常对照组比较,模型组逃避潜伏期、IKK2、NF-κB mRNA及蛋白表达水平、IL 4、IL 6、TNF α水平显著升高（P<0.05）,经过原平台位置的次数、原平台象限停留的时间显著降低（P<0.05）;正常对照组海马区神经元细胞完整,结构正常,染色清晰,核呈卵圆形位于中央;模型组海马区可见大量坏死神经元,且细胞脱失现象明显,细胞核固缩;虫草素低、中剂量组坏死神经元细胞减少,但神经元疏松紊乱,细胞核固缩,脱失现象明显;盐酸纳美芬组、虫草素高剂量组海马区见少量坏死神经元细胞,且神经元细胞结构较为完整,神经元细胞核呈卵圆形位于中央,分布均匀。与模型组比较,盐酸纳美芬组、虫草素各剂量组逃避潜伏期、IKK2、NF-κB mRNA及蛋白表达水平、IL 4、IL 6、TNF α水平显著降低（P<0.05）,经过原平台位置的次数、原平台象限停留的时间显著升高（P<0.05）,且虫草素各剂量组呈明显的剂量 效应关系（P<0.05）。虫草素低、中剂量各检测指标与盐酸纳美芬组比较,差异有统计学意义（P<0.05）。结论: 虫草素能减轻大鼠创伤性脑损伤后海马神经元的损伤,其机制可能与虫草素可通过抑制IKK2、NF-κB mRNA及蛋白的表达进而抑制炎性因子IL 4、IL 6、TNF α的表达有关。     

抗骨髓炎片对家兔慢性骨髓炎的改善作用研究

目的 观察抗骨髓炎片（KST）对家兔慢性骨髓炎（CO）的改善作用。方法 将金黄色葡萄球菌注入家兔右胫骨骨髓腔内建立CO模型,将CO家兔分为模型组、庆大霉素（60 mg/kg）组及KST高、低剂量（480、240 mg/kg）组,另设假手术组,ig给药。术后第2、4、6周对右胫骨行X-线检查并做诊断分型,采血进行白细胞计数,取血清检测C-反应蛋白（CRP）含量,术后第6周取右胫骨检测核因子κB（NF-κB）的阳性表达。结果 KST高、低剂量组术后第2、4、6周的X-片诊断分型与模型组比较均显著改善,有统计学意义（P<0.05、0.01）;与模型组比较,KST高、低剂量组的白细胞计数、血清CRP含量、胫骨组织NF-κB表达在第2、4、6周均显著降低（P<0.05、0.01）。结论 KST对CO家兔具有保护作用,其机制可能与抑制致病菌、缓解炎症反应、下调炎性反应调控因子NF-κB等环节有关。     

乌司他丁对溃疡性结肠炎大鼠结肠炎症及TLR4/NF-κB信号通路的影响

目的 观察乌司他丁对溃疡性结肠炎的作用,以及对Toll样受体4（TLR4）/核因子-κB（NF-κB）信号通路的干预作用,以探讨其可能的作用机制。方法 采用三硝基苯磺酸灌肠法制备溃疡性结肠炎大鼠模型。SD大鼠80只随机分成空白组、模型组、乌司他丁组（乌司他丁50 000 U·kg^-1·d^-1腹腔注射）、激素组（泼尼松片6 mg·kg^-1·d^-1灌胃给药）,每组20只。造模7 d后处死,检测各组大鼠结肠黏膜大体评分（CMDI评分）和病理组织学评分变化;ELISA法检测各组大鼠血清TNF-α水平;免疫组化法观察大鼠结肠组织TLR4及NF-κB蛋白的表达。结果 模型组大鼠结肠大体形态损伤及病理组织学评分均高于空白组（P均<0.01）,大鼠造模成功;与模型组比较,乌司他丁组CMDI评分及病理组织学评分均减低（P均<0.05）,与激素组比较,乌司他丁组CMDI评分及病理组织学评分则无差异。模型组大鼠的血清TNF-α与空白组比较,水平明显上升（P<0.01）;而乌司他丁组与模型组比较,大鼠血清TNF-α水平则明显下降（P<0.05）,乌司他丁组与激素组比较则无明显差别。与空白组比较,模型组大鼠肠黏膜中TLR4、NF-κB均呈明显高表达（P<0.01）,乌司他丁组TLR4、NF-κB表达较模型组则明显下降（P均<0.05）,而乌司他丁组中NF-κB的表达则又低于激素组（P<0.05）,TLR4的表达则与激素组无明显差异。结论 乌司他丁能减轻溃疡性结肠炎大鼠肠道炎症反应,具有治疗作用;其机制可能与通过下调TLR4及NF-κB的表达,减少炎症因子TNF-α的释放有关。     

商陆皂苷甲抑制TLR4/NF-κB信号通路改善大鼠动脉粥样硬化的作用研究

目的 研究商陆皂苷甲（EsA）对动脉粥样硬化（AS）大鼠的作用及机制。方法 将SD雄性大鼠随机分为对照组、模型组、辛伐他汀片（SIMT,10mg·kg^-1,阳性对照）组和EsA高、低剂量（10、2.5mg·kg^-1）组,每组6只。对照组给予普通饲料,其余各组以高脂饲料联合ip7×10⁵U·kg^-1维生素D₃（在第3天注射）制备AS模型。造模的同时ip给药,每天1次。采用全自动生化分析仪检测各组大鼠血清总胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）和高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）水平;ELISA法检测血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）和白细胞介素-1β（IL-1β）水平;HE染色法观察胸主动脉病理变化;Western blotting法检测胸主动脉Toll样受体4（TLR4）和髓样分化因子88（MyD88）蛋白表达;免疫组化法检测胸主动脉核因子κB（NF-κB） p65阳性细胞表达。结果 与对照组比较,模型组大鼠血清中TC、TG、LDL-C、TNF-α、IL-6和IL-1β水平显著升高（P＜0.01）,HDL-C水平显著降低（P＜0.01）;胸主动脉血管内皮损伤严重,可见明显蓝色钙状斑块;胸主动脉TLR4和MyD88蛋白表达以及NF-κB p65阳性细胞表达显著升高（P＜0.01）。与模型组比较,EsA高、低剂量组大鼠血清血脂和炎性因子水平明显改善（P＜0.05、0.01）;胸主动脉血管内皮大致恢复正常,蓝色钙状斑块减少;胸主动脉TLR4和MyD88蛋白表达以及NF-κB p65阳性细胞表达显著降低（P＜0.05、0.01）。结论 EsA可能通过抑制TLR4/NF-κB信号通路对大鼠AS发挥改善作用。     

丹参酮ⅡA对EA.hy926细胞TLR4/NF-κB炎症信号通路的影响

目的观察丹参酮ⅡA对脂多糖(LPS)诱导人脐静脉细胞融合细胞EA.hy926 TLR4/NF-κB炎症信号通路的影响,探讨丹参酮ⅡA抗动脉粥样硬化(AS)的作用机制。方法体外培养人脐静脉细胞融合细胞EA.hy926;观察丹参酮ⅡA低、中、高剂量组对LPS刺激EA.hy926细胞的保护作用,RT-PCR和Western bolt法检测TLR4、NF-κB、TNF-αmRNA和蛋白表达。结果 LPS刺激组TLR4、NF-κB和TNF-αmRNA和蛋白表达较正常组明显增加(P<0.05)。与LPS刺激组相比,丹参酮ⅡA低剂量组TLR4、NF-κB、TNF-αmRNA及蛋白表达无明显差异,而丹参酮ⅡA中、高剂量组TLR4、NF-κB和TNF-αmRNA及蛋白质表达明显降低(P<0.05)。结论丹参酮ⅡA抗AS的作用机制之一是通过干预TLR4/NF-κB信号通路来实现的。     

愈疡胶囊对细菌感染皮炎模型大鼠的抗炎作用及对TLR/NF-κB通路的影响

目的:研究愈疡胶囊对细菌感染皮炎模型大鼠的抗炎作用及对Toll样受体/核因子κB(TLR/NF-κB)通路的影响。方法:采用肉汤稀释法测定愈疡胶囊对金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)。将50只大鼠随机分为模型组、阳性对照组(阿莫西林克拉维酸钾,以阿莫西林计120 mg/kg)和愈疡胶囊高、中、低剂量组(根据MIC设定),每组10只。以金黄色葡萄球菌感染大鼠烧伤皮肤构建细菌感染皮炎模型。造模成功24 h后,各药物组大鼠灌胃相应药物,模型组大鼠灌胃等体积生理盐水,每日1次,连续7 d。计算给药第1、3、5、7天各组大鼠皮肤愈合率并记录创面结痂、脱痂、愈合情况;使用酶联免疫吸附试验法检测皮肤组织中白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、IL-10、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、羟脯氨酸(HYP)、胶原蛋白Ⅰ(ColⅠ)、ColⅢ的含量;使用苏木精-伊红染色法观察皮肤组织形态学变化,并使用透射电子显微镜观察超微结构;采用Western blotting法检测皮肤组织中Toll样受体2(TLR2)、TLR4与磷酸化-NF-κB-p65(p-NF-κB p65)蛋白表达水平。结果:愈疡胶囊的MIC与MBC分别为25 mg/mL和50 mg/mL,愈疡胶囊高、中、低剂量组分别设为600、300、150 mg/kg。与模型组比较,愈疡胶囊高、中剂量组大鼠给药3 d后伤处皮肤出现结痂,给药5~7 d后部分大鼠伤处出现脱痂;阳性对照组和愈疡胶囊高、中剂量组大鼠各时间点的皮肤愈合率均显著升高,IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α含量和病理评分以及TLR2、TLR4、p-NF-κB p65蛋白表达水平均显著降低(P<0.05或P<0.01),皮肤组织炎细胞浸润等病理改变好转;阳性对照组和愈疡胶囊高剂量组大鼠的HYP、ColⅠ、ColⅢ含量均显著升高(P<0.05或P<0.01)。而阳性对照组和愈疡胶囊高、中剂量组上述指标差异大多无统计学意义(P>0.05)。结论:愈疡胶囊可促进细菌感染皮炎模型大鼠皮肤愈合,具有一定的抗炎作用,其机制可能与抑制TLR/NF-κB信号通路、减少炎症反应有关。     

丹皮酚对动脉粥样硬化大鼠脂质代谢和核因子-κB的影响

目的：探讨丹皮酚对动脉粥样硬化（AS）大鼠脂质代谢和核因子-κB（NF-κB）的影响。方法：采用高脂饲料喂养和维生素D3腹腔注射的方法建立大鼠AS模型,分为正常组、模型组、辛伐他汀组（10 mg·kg-1）、丹皮酚高剂量组和低剂量组（20,10 mg·kg-1）,每组8只。灌胃给药4周后,各组取血清,测定血脂水平;取主动脉切片,光镜下作病变分级评分,免疫组化法检测NF-κB的表达。结果：丹皮酚高剂量组能改善AS大鼠的主动脉病变,与模型组比较有统计学意义（P〈0.05）;丹皮酚高、低剂量组可明显降低AS大鼠血清三酰甘油（TG）、总胆固醇（TC）和低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）水平（P〈0.05或P〈0.01）;丹皮酚可下调主动脉NF-κB表达,高剂量组IOD值（1.96±0.55）和低剂量组IOD值（2.50±0.80）与模型组（3.65±1.14）比较,差异均有统计学意义（P〈0.05或0.01）。结论：丹皮酚治疗大鼠AS的作用机制与调节脂质代谢、下调主动脉NF-κB的表达有关。     

依普利酮对糖尿病肾病大鼠的保护机制研究

目的 探讨依普利酮对糖尿病肾病（diabetic nephropathy,DN）大鼠的保护机制。方法 DN模型大鼠随机分成模型组、依普利酮组（40 mg·kg^-1）、阳性对照组（缬沙坦,20 mg·kg^-1）,另设正常组。灌胃给药8周。全自动生化分析仪检测24 h尿蛋白、血肌酐及血糖化血红蛋白水平;HE染色行肾组织病理形态学观察;ELISA检测肾组织IL-6、TNF-α和MCP-1水平;qPCR检测TLR4、NF-κB p65 mRNA水平,Western blot法检测肾组织TLR4、NF-κB p65蛋白水平。结果 与模型组比较,依普利酮组大鼠24 h尿蛋白、血肌酐及血糖化血红蛋白水平均明显下降（P<0.05或P<0.01）;肾组织病理变化有不同程度的改善;肾组织IL-6、TNF-α和MCP-1水平均明显下降（P<0.05或P<0.01）,TLR4、NF-κB p65 mRNA水平和TLR4、NF-κB p65蛋白水平明显下降（P<0.01）。结论 依普利酮能有效地改善DN大鼠的炎症水平,机制可能与下调IL-6、TNF-α、MCP-1、TLR4、NF-κB p65水平有关。     

羟氯喹抑制TLR9/MyD88/NF-κB通路减轻系统性红斑狼疮小鼠肾损伤作用

目的 探讨羟氯喹对系统性红斑狼疮小鼠肾损伤的影响,并基于Toll样受体9/髓样分化因子88/核因子-κB(TLR9/MyD88/NF-κB)信号通路探索其潜在机制。方法 采用ip降植烷的方法构建系统性红斑狼疮雌性小鼠模型,设模型组、羟氯喹(ig 80 mg/kg)组、TLR9抑制剂(ODN2088,ip 4 mg/kg)组、羟氯喹+ODN2088组,另设对照组,每组8只。分别1次/d连续给药5周后采集标本,称体质量、肾脏质量并计算肾脏指数(RI),检测24 h尿蛋白量(24 h-UTP)和血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)水平;苏木精-伊红染色法(HE)和Masson染色观察肾组织病变和纤维化程度,进行病理评分和胶原容积分数(CVF);检测肾组织干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-4(IL-4)水平;RT-PCR法和Western blotting法检测肾组织TLR9、MyD88、NF-κB p65 mRNA和蛋白表达。结果 与模型组比较,羟氯喹组、ODN2088组和HCQ+ODN2088组小鼠体质量显著升高,RI、24 h-UTP、血清Scr、BUN水平均显著降低(P<0.05);肾组织病变和纤维化状况均明显改善,肾小球、肾小管病理评分和CVF均显著降低(P<0.05);肾组织IFN-γ、TNF-α、IL-4水平显著降低,IL-2水平显著升高(P<0.05);肾组织TLR9、MyD88、NF-κB p65 mRNA和蛋白表达量均显著降低(P<0.05)。羟氯喹+ODN2088组对系统性红斑狼疮小鼠各检测指标的影响显著优于羟氯喹组和ODN2088组(P<0.05)。结论 羟氯喹对系统性红斑狼疮小鼠肾损伤具有保护作用,其机制可能与抑制TLR9/MyD88/NF-κB信号通路,减轻炎症反应有关。