不同方法建立卵巢癌紫杉醇耐药细胞株对临床用药方案的启发

目的：用不同的诱导耐药方法培养紫杉醇耐药细胞株A2780／Taxol，A2780／（DDP＋Taxol），A2780／Taxol-1，以进一步探讨卵巢癌耐药机理，为临床逆转耐药研究提供模型依据。方法：采用逐步增加药物浓度和大剂量冲击两种方法处理细胞，直至细胞能在2．5μg·ml^-1紫杉醇中稳定生长。用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法测定其耐药性及紫杉醇对各组细胞的抑制率，并在冻存3个月后再次检测耐药性。结果：MTT法检测A2780，A2780／DDP细胞对紫杉醇的药物半数抑制浓度（IC50）分别为（0．23±0．04）μg·ml^-1和（0．26±0．02）μg·ml^-1，采用逐步增加药物浓度诱导法历经九个月时间建立A2780的紫杉醇耐药细胞株A2780/Taxol-l，对紫杉醇的Ic50为（6．63±0．31）μg·ml^-1，耐药倍数为28．83。采用大剂量冲击法以A2780和A2780／DDP为对象建立各自的紫杉醇耐药细胞株A2780/Taxol、A2780／（DDP＋Taxol），检测大剂量冲击法建立的A2780／Taxol，A2780／（DDP＋Taxol）耐药性，发现它们对紫杉醇的耐药倍数分别为19．65，17．96，两者比较无统计学差异（P〉0．05），而两种方法建立的紫杉醇耐药细胞株A2780／Taxol、A2780／Taxol-1的耐药性有统计学差异（P〈0．05）。同时检测A2780／DDP和A2780／（DDP＋Taxol）对顺铂的IC50差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：通过逐步诱导法建立的耐药细胞株比通过大剂量冲击法建立的耐药细胞株耐药性稳定，耐药性显著增高，提示临床用药中应足剂量用药。紫杉醇与顺铂无交叉耐药。在A2780／DDP细胞基础上使用紫杉醇建立双耐药细胞株时，紫杉醇对细胞的顺铂耐药性无影响，不能逆转其顺铂耐药性，所以对顺铂耐药患者多药合用意义不大，单用紫杉醇可能为佳。     

板蓝根高级不饱和脂肪酸对耐药肝癌细胞株BEL-7404/ADM逆转作用实验

目的:板蓝根高级不饱和脂肪酸对肝癌耐药细胞株BEL-7404/ADM耐药逆转作用及机制研究。方法:MTT法观察药物对细胞的生长抑制作用;免疫组化法检测细胞P 糖蛋白(P-gp)和多药耐药相关蛋白(MRP)的表达;采用高效液相色谱法(HPLC)测定细胞内ADM的浓度。结果:耐药肝癌细胞株BEL-7404/ADM对多种化疗药物产生多药耐药性,耐药细胞P-gp和MRP的阳性率显著高于亲本细胞(P<0.01) ;板蓝根高级不饱和脂肪酸在非细胞毒剂量时与ADM合用后能逆转BEL 740 4/ADM对ADM的耐药性;ADM与板蓝根高级不饱和脂肪酸合用时,其细胞内ADM的含量较单独使用明显增高。结论:肝癌细胞株BEL-7404/ADM对多种化疗药物具有多药耐药性,其多药耐药性与P-gp和MRP过量表达有关;板蓝根高级不饱和脂肪酸在非细胞毒剂量时能逆转BEL-7404/ADM对ADM的耐药性,其逆转作用可能与降低P-gp药物外排功能、增加细胞内药物浓度有关     

胡椒碱对乳腺癌阿霉素耐药细胞株 MCF -7/ADM 细胞的逆转作用

目的：探讨胡椒碱对人乳腺癌阿霉素（ADM）耐药细胞株 MCF -7/ ADM 的逆转作用及其机制。方法采用 CCK -8法观察胡椒碱联合阿霉素（ADM）对乳腺癌耐药株 MCF -7/ ADM 细胞生长增殖的影响;应用免疫印迹技术（Western - blot）测定胡椒碱联合 ADM 对MCF -7/ ADM 细胞表面 P -糖蛋白（P - gp）表达的影响。结果60,80,100μmol / L 胡椒碱试验组细胞耐药逆转倍数分别为1.62,2.08,3.78倍,差异有统计学意义（ P ﹤0.05）。胡椒碱能显著抑制 MCF -7/ ADM 细胞膜 P - gp 蛋白的表达,其作用随浓度的增加而增强。结论胡椒碱与 ADM 共同作用于 MCF -7/ ADM 细胞,可使细胞对 ADM 的敏感性增强。胡椒碱具有部分逆转 MCF -7/ ADM 细胞耐药的作用,其逆转作用机制可能与通过下调 P - gp 的表达有关。     

PHI逆转K562/A02细胞阿霉素耐药的机制

目的 探讨异硫氰酸苯乙酯(PHI)逆转K562/A102细胞株阿霉素(ADM)耐药的可能机制.方法 将耐ADM的人慢性粒细胞白血病K562/A02细胞株分别与不同浓度(0,5,10,20,30,40和50μM)的PHI共同孵育后,流式细胞术检测细胞周期、细胞内ADM浓度以及P-糖蛋白1(P-gp1)表达水平;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测PHI作用前后细胞内mdr1 mRNA的转录水平.结果 与对照组相比,联合作用48 h后,随着PHI浓度的增加G2期细胞逐渐减少,G1期细胞明显增多,而S期细胞无明显变化;K562/A02细胞内ADM平均荧光强度均高于对照组,K562/A02细胞mdrl mRNA表达下降和P-gp1表达下调(P＜0.05).结论 PHI逆转K562/A02细胞耐药机制可能与细胞G1期阻滞和P-gp1表达下调有关.     

连接蛋白32及细胞缝隙连接对卵巢癌细胞顺铂耐药性的影响

目的研究连接蛋白32及细胞缝隙连接对卵巢癌细胞顺铂耐药性的影响。方法以A2780为亲代细胞,采用药物浓度递增法构建对顺铂耐药的卵巢癌细胞系(A2780-CDDP),CCK8法测定顺铂对肿瘤细胞的IC50,计算耐药指数(resistance index,RI)。"细胞接种荧光示踪法"检测卵巢癌细胞耐药行程过程中细胞的缝隙连接功能及Cx32的表达情况;调节A2780-CDDP细胞Cx32的表达,观察耐药性的变化;提细胞膜及胞浆蛋白,用Western印迹分别检测Cx32在A2780和A2780-CDDP的表达分布情况。结果本研究建立了顺铂耐药人卵巢癌细胞株A2780-CDDP,亲代细胞IC50为4.7 mg·L~(-1),A2780-CDDP的IC50为33.8 mg·L~(-1),耐药指数为7.2。同时,随着耐药性的增强,Cx32表达量逐渐增加,增强A2780-CDDP细胞中的GJ功能可提高顺铂的细胞毒性。此外,尽管Cx32在A2780-CDDP细胞中表达增加,但它更多地定位于细胞质而不是细胞膜,并且在A2780-CDDP细胞中下调Cx32的表达可以使其对顺铂治疗敏感。结论 Cx32参与顺铂耐药,Cx32在胞质中的定位对卵巢癌顺铂耐药有重要意义。     

川芎嗪脂质体对人白血病细胞株K562多药耐药逆转作用的研究

目的:研究川芎嗪脂质体在体外对肿瘤细胞的细胞毒作用和对多药耐药的逆转作用,并研究脂质体剂型对上述作用的影响.方法:MTT法检测川芎嗪脂质体以及川芎嗪原料对照组、空白脂质体对照组对耐阿霉素的人白血病细胞株(K562/ADM)的细胞毒性和多药耐药逆转作用.结果:川芎嗪脂质体对K562/ADM有明显的细胞毒作用.非细胞毒性剂量(生长率≥95%)为2.0μg·ml-1,该浓度下可显著降低ADM对K562/ADM细胞的IC50(P＜0.01),抗药性逆转为11.2倍.低毒剂量(生长率85～90%)为2.6μg·ml-1,抗药性逆转为178倍.2.0μg·ml-1的川芎嗪原料对照组可显著降低ADM对K562/ADM细胞的IC50(P＜0.01),抗药性逆转为7.9倍;同比稀释的空白脂质体对照组可显著降低ADM对K562/ADM细胞的IC50(P＜0.01),抗药性逆转为4.9倍.结论:川芎嗪脂质体体外对人白血病细胞K562/ADM有明显的细胞毒作用和MDR逆转作用;在一定浓度范围内川芎嗪脂质体的细胞毒性与逆转作用有剂量依赖性;脂质体本身对逆转有增效作用.     

米非司酮在抑制卵巢癌细胞紫杉醇耐药产生的作用

目的：探讨米非司酮在抑制卵巢癌细胞株skov3、A2780对紫杉醇耐药产生的作用。方法在紫杉醇诱导卵巢癌细胞株skov3、A2780的过程中,使用不同浓度米非司酮,应用免疫组化方法比较受不同浓度米非司酮作用的各组细胞株的P糖蛋白(p-glyco-protein, P-gp)的表达,同时检测各细胞的生长曲线。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测各组细胞的半数致死浓度(IC50);采用罗丹明123(Rh123)为荧光探针,使用流式细胞仪比较各株细胞的胞内Rh123含量。结果紫杉醇诱导卵巢癌耐药的过程中使用米非司酮,诱导后卵巢癌细胞株skov3、A2780中P-gp含量有所下降。结论米非司酮可抑制卵巢癌细胞紫杉醇耐药的产生。     

红霉素逆转人肝癌细胞BEL-7402多药耐药性的研究

目的研究红霉素(ERY)对BEL-7402细胞(人肝癌细胞)多药耐药性的逆转作用.方法将BEL-7402细胞连续培养在含阿霉素(ADM)的培养液中诱导耐药细胞株BEL-7402/ADM,用cell-ELASA法检测细胞膜表面P-gp的表达,细胞毒试验采用MTT法,用荧光分光光度法测定细胞内ADM浓度.结果 BEL- 7402/ADM细胞表面P-gp高度表达,除对ADM耐药外,对长春新碱(VCR)和丝裂霉素(MMC)也有不同程度的交叉耐药;ERY可增强ADM、VCR、MMC对BEL-7402/ADM细胞的增殖抑制作用, 可增加BEL-7402/ADM细胞内ADM的浓度而对细胞膜表面P-gp的表达没有影响.结论 ERY通过竞争性地饱和BEL-7402/ADM细胞表面P-gp通道,使细胞内药物外排减少、浓度增加,从而发挥对BEL-7402/ADM细胞多药耐药性的逆转作用.     

三氧化二砷逆转乳腺癌细胞株MCF-7/ADM多药耐药的研究

目的探讨三氧化二砷(As2O3)体外逆转人乳腺癌细胞多药耐药性的作用及机制。方法采用MTT法检测As2O3的细胞毒作用和处理前后耐药细胞对化疗药物的敏感性,用流式细胞仪检测细胞内阿霉素浓度,通过RT-RCR检测MDR1基因的表达。结果 As2O3在0.25mg/L以下剂量时对MCF-7和MCF-7/ADM耐药细胞株的抑制率均小于15%,半数抑制率(IC50)分别为1.01m/L和1.28mg/L,无细胞毒剂量0.2mg/L的As2O3能部分逆转MCF-7/ADM细胞对阿霉素的耐药性。同时无细胞毒剂量0.2mg/L的As2O3能使MCF-7/ADM细胞内阿霉素浓度明显增加,MDR1表达下降。结论 As2O3具有体外部分逆转人乳腺癌细胞多药耐药性的作用,可能与增加细胞内药物积累、下调MDR1表达有关。     

黄芩素增强细胞缝隙链接的功能进而增加卵巢癌耐药细胞对顺铂的敏感性

目的研究黄芩素对卵巢癌耐药细胞A2780/CDDP的细胞缝隙连接功能和A2780/CDDP对顺铂敏感性的影响。方法 CCK-8法检测黄芩素对A2780/CDDP细胞对顺铂的IC50的影响;"Parachute assay"检测黄芩素对A2780/CDDP细胞gap junction功能的影响以及改变A2780/CDDP细胞中Connexin43蛋白表达水平之后gap junction功能的变化;Western印迹检测黄芩素对A2780/CDDP细胞中Connexin43蛋白表达水平的影响。结果在黄芩素的作用下,A2780/CDDP细胞对顺铂的IC50由34.77μg·L~(-1)下降至19.52μg·L~(-1),A2780/CDDP细胞对顺铂的耐药指数由5.7下降至3.2;黄芩素时间依赖性地增强A2780/CDDP细胞的gap junction功能;A2780/CDDP细胞中过表达Connexin43蛋白可增强其gap junction功能,而下调Connexin43蛋白的表达量可减弱gap junction的功能;黄芩素可时间依赖性地上调A2780/CDDP细胞中Connexin43蛋白的表达水平。结论黄芩素可通过上调卵巢癌A2780/CDDP细胞中Connexin43蛋白的表达水平,增强gap junction功能,进而增强A2780/CDDP细胞对顺铂的敏感性。     

黄瓜花叶病介体蚜虫种群空间格局动态分析

本文采用聚集指标、聚集指标的模糊聚类分析和空间格局的回归分析等方法,对黄瓜花叶病传毒介体——瓜蚜自然种群动态进行分析,春秋两季瓜蚜种群均为聚集分布;秋季瓜蚜种群空间格局聚集性可划分为前、中、后三种类型;春季瓜蚜分为前、后两种类型。     

电渗作用对甲硝唑经皮渗透的影响

在Ａｇ／ＡｇＣｌ电极的双室扩散池中测定不同电场对模型药物甲硝唑（１）通过离体大鼠皮肤渗透速率的影响。结果表明，１生理盐水饱和液阳极导入时的透皮速率是被动扩散的２．３倍，阴极导入时药物的透皮速率是其被动扩散的４５％，说明电渗作用明显促进了分子型药物１的经皮渗透；与药物渗透方向相反的电渗流则明显阻碍其经皮渗透     

磷酸丙吡胺缓释片的生物利用度研究

比较了每１２ｈ口服自制磷酸丙吡胺缓释片和对照胶囊各２００ｍｇ后的稳态血药浓度及波动系数（ＦＩ％）。测求稳态时Ｃｍａｘ：ＣｍｉｎＴｍａｘ和血药浓度时间曲线下面积（ＡＵＣ０－１２），结果显示两制剂Ｔｍａｘ、ＦＩ％有极显著差异，Ｃｍｉｎ有显著差异而Ｃｍａｘ、ＡＵＣ０－１２并无显著差异。缓释片具明显的缓释效果，然而生物利用度与胶囊剂相当。     

合浦珠母贝珍珠细胞相容性的初步评价

本文报道了合浦珠母贝珍珠的体外细胞毒性试验结果。将珍珠粉的浸提液加L_(929)细胞培养瓶中,通过细胞相对增殖率(RGR)及细胞形态观察表明,合浦珠母贝珍珠具有较好的细胞相容性,对L_(929)细胞形态无明显影响,但细胞相对增殖率略低于羟基磷灰石陶瓷。     

MECHANISM OF ACTION OF NATRIURETIC FRACTION OF URINE

The nature of calcium dependence of natriuretic fraction (NF)-induced contractions in the rat smooth muscle anococcygeus and a possible correlation between the effect of NF on sodium transport and its natriuretic potency was investigated. NF and noradrenaline-induced contractions were partially dependent on external calcium concentration. Ouabain and potassium (K) free solution (KoPSS)-induced contractions were totally dependent on external calcium and were more effectively inhibited by calcium antagonists than those of NF and noradrenaline suggesting pharmacomechanical coupling as the mode of calcium dependence of NF. Like other agonists which contract by pharmacomechanical coupling, NF stimulated sodium transport (86rubidium uptake) in dog saphenous vein. Such stimulation correlated positively (r = 0.495, n = 17, P less than 0.05) with the natriuretic potency of NF. NF, like noradrenaline, contracts smooth muscle by pharmacomechanical coupling and NF-induced natriuresis is associated with stimulation of the sodium pump.     

绞股蓝总甙微丸溶出度及稳定性研究

采用包衣造粒工艺制成绞股蓝总甙微丸，并将此微丸装入硬胶囊制成胶囊剂。用不同的溶出介质对其体外溶出进行了研究，并对其稳定性进行了考察。     

卡马西平多晶型的研究

红外吸收图谱与中国药典图谱不符合的卡马西平（Ａ晶），可通过用较高浓度乙醇使其转为Ｂ晶而符合规定，经￣（１３）ＣＮＭＲ、ＭＳ、Ｘ线衍射分拆，证实该两种晶体为同质异晶。     

抗血吸虫病药鹤草酚类似物的合成

鹤草酚(Agrimophol)(Ⅰ)是从植物仙鹤草(Agrimonia pilosa Ledeb)根芽中分离出来的一种驱绦虫有效成分,王根法等发现它有抗血吸虫作用,但减虫率不高,胃肠道反应也较重。鹤草酚是间苯三酚的衍生物,分子中有角甲基,人工合成较复杂。我们企图改变其化学结构,使成为结构简单而又易于制备并有抗血吸虫活性而毒性低于鹤草酚的类似物。文     

中国人参茎叶皂甙对大鼠行为的影响

人参茎叶皂甙５０ｍｇ／ｋｇ灌胃给大白鼠，每天１次，连续７天，于末次给药后１ｈ，采用主动回避反应；被动回避反应；分辨学习等训练方法对受试物进行研究，结果表明人参茎叶皂甙对正常大鼠学习、记忆过程仅有微弱易化作用。通过探索行为研究表明，人参茎叶皂甙明显增加每个训练日大白鼠第１分钟探索活动次数并加速探索活动的适应。对电休克大鼠短期记忆障碍有明显改善作用。     

鲎试剂检测自制200批注射剂热原的结果分析

通过使用鲎试剂对青岛医学院附属医院制剂室自制的２００批注射剂进行热原检测的结果进行分析，认为鲎试验法操作简便，快速灵敏度高，结果可靠，故应用鲎试验法检测注射剂热原是非常适宜的。