运用血清药理学方法探讨滋肾降糖丸对小鼠MSC成骨分化的影响及其机制

目的：运用血清药理学方法研究滋肾降糖丸对小鼠骨髓基质干细胞（MSC）模型成骨分化的作用及其机制。方法：首先空腹6h后的小鼠口服滋肾降糖溶液,剂量为1.5g·kg^-1,随后在0、0.5、1、2和4h不同时间段收集含药血清;随后用茜素红染色和碱性磷酸酶活性检测的方法调查上述含药血清对MSC成骨诱导分化的影响;最后用实时荧光定量PCR的方法进一步调查含药血清对MSC成骨诱导过程中相关关键基因骨形态发生蛋白（BMP2）及成骨特异性转录因子（RunX2）的表达。结果：含药血清可显著促进MSC的成骨分化,以2h后收集的血清效果最强。Q-RT-PCR实验结果显示,2h含药血清显著促进诱导后第3、6dMSC细胞BMP2及RunX2基因的表达。结论：滋肾降糖丸抗骨质疏松的作用可能与上调MSC上BMP2及RunX2的基因表达,从而促进MSC的成骨分化有关。     

高表达miR-25-3p对小鼠骨实质来源间充质干细胞成脂分化的抑制作用

目的 探究miR-25-3p对小鼠骨实质来源间充质干细胞（MSC）成脂分化的影响。方法 (1)取1周龄C57BL/6J小鼠胫骨和股骨分离培养MSC。体外培养扩增至P3代,吉姆萨染色,倒置显微镜镜下观察其形态;用流式细胞术检测其细胞表型;经成脂和成骨诱导液分别诱导分化7和14 d,分别用油红O染色和碱性磷酸酶染色检测其体外成脂和成骨分化能力,并用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测其成脂分化关键转录因子CCAAT增强子结合蛋白α(CEBPα)和过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)以及成骨标志性蛋白骨钙素（OCN）和成骨分化关键转录因子Runx相关转录因子2(Runx2)mRNA表达。(2)合成与MSC成脂分化相关的微RNA(miRNA)即miR-25-3p模拟物,将miR-25-3p模拟物及其对照miRNA分别瞬时转染P3代MSC,用荧光显微镜观察转染细胞Cy3红色荧光强度鉴定细胞转染效率,RT-qPCR检测转染细胞miR-25-3p表达水平。(3)将未转染、转染对照miRNA和转染miR-25-3p模拟物的P3代MSC成脂诱导分化7 d,用油红O染色检测细胞脂滴形成数目,RT...     

滋肾降糖丸对高脂小鼠模型胰岛素敏感性的影响及其机制

目的探讨滋肾降糖丸对胰岛素敏感性的影响及其分子机制。方法建立高脂饲喂的胰岛素抵抗小鼠模型,血生化检测滋肾降糖丸对该模型胰岛素敏感指数的影响,q-PCR检测滋肾降糖丸对该模型肌肉Glut4基因表达的影响。结果滋肾降糖丸显著促进高脂抵抗小鼠模型胰岛素敏感指数,同时显著上调肌肉Glut4 mRNA的表达。结论滋肾降糖丸具有改善胰岛素敏感性的作用,其机制可能与上调肌肉组织中Glut4基因表达有关。     

川续断皂苷Ⅵ对小鼠骨髓基质细胞ST-2 成脂分化的影响及其机制研究

目的观察川续断皂苷Ⅵ（Asperosaponin Ⅵ,ASAⅥ）对脂肪细胞分化的影响及Wnt 通路的调节。方法以小鼠骨髓基质细胞系ST-2 为研究对象,将其分为对照组、成脂分化组以及4 个不同剂量的ASAⅥ组。其中对照组加入溶媒,成脂分化组加入成脂诱导分化试剂,ASAⅥ组除加入成脂诱导分化试剂外,使用不同浓度（10-7、10-6、10-5、 10-4 mol/L）的ASAⅥ干预细胞。各组细胞处理5 d 后,行油红O 染色,观察脂滴形成情况并计算成脂率进行定量分析;荧光定量PCR（FQ-PCR）检测成脂相关基因PPARγ、FABP4 和Wnt/β-连环素（β-catenin）通路蛋白β-catenin 的 mRNA 表达水平;Wnt 通路抑制剂DKK1 干预诱导成脂分化的ST-2 细胞5 d,FQ-PCR 检测ASAⅥ所调节的 PPARγ、FABP4 和β-catenin mRNA 表达水平。结果与成脂分化组相比,10-5 mol/L 和10-4 mol/L ASAⅥ组中分化的脂肪细胞显著减少,10-5、10-4 mol/L ASAⅥ明显抑制PPARγ、FABP4 的mRNA 表达,但上调β-catenin mRNA 表达。 DKK1 能够逆转ASAⅥ对ST-2 细胞成脂分化的抑制作用,促进PPARγ、FABP4 的mRNA 表达,抑制β-catenin 的 mRNA 表达。结论ASAⅥ能显著抑制ST-2 细胞的成脂分化,这一作用可能是通过Wnt/β-catenin 通路的激活所介导的。     

番石榴叶天然成分抑制3T3-L1细胞成脂分化的研究

目的观察番石榴叶天然成分槲皮素、槲皮素-3-O-(6″-芥子酸)-β-D-吡喃半乳糖苷(Quercetin-3-O-(6″-eru-coyl)-β-D-galactopyranoside,QEG)及槲皮素-3-O-(6″-阿魏酸)-β-D-吡喃半乳糖苷(Quercetin-3-O-(6″-feruloyl)-β-D-ga-lactopyranoside,QFG)对小鼠3T3-L1细胞成脂分化的影响。方法诱导3T3-L1细胞成脂分化,油红O染色法测定脂滴含量,实时定量PCR(Q-PCR)检测丝氨酸蛋白酶脂肪因子adipsin,CCTTA增强子结合蛋白α(C/EBPα)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、雌激素受体α(ERα)和雌激素受体β(ERβ)mRNA表达,Western blot检测C/EBPα和PPARγ的蛋白表达。结果 QFG和槲皮素都能抑制3T3-L1细胞成脂分化,而QEG对此没有作用。QFG能够剂量依赖性地抑制成脂分化,并且降低adipsin、C/EBPα和PPARγmRNA及后两者蛋白表达,而对ERα和ERβmRNA的表达没有影响。结论 QFG抑制细胞成脂分化的能力比槲皮素强,其作用主要是通过抑制C/EBPα和PPARγ的表达而实现的,而且可能与雌激素受体途径无关。     

基于PPARs信号通路探索CB1对脂质代谢的调节作用

目的 研究CB1对PPARs信号通路在高脂饮食诱导肥胖小鼠脂质代谢的调节作用.方法 构建小鼠肥胖模型,观察给予CB1抑制剂利莫那班后小鼠体重、肝脏重量及血清生化指标的变化,并检测CB1、PPARα、PPAR β和PPARγ基因在各组织mRNA水平的表达情况.结果 利莫那班降低了小鼠的体重和肝脏重量(P＜ 0.05);改善了血清生化指标(P＜0.05);各组织中CB1基因mRNA水平的表达降低(P＜ 0.05);PPARα、PPARγ基因在皮下脂肪、内脏脂肪、肝脏组织mRNA水平的表达显著增高(P＜ 0.05);PPAR 3基因在各组织mRNA水平表达情况差异无统计学意义.结论 CB1通过作用于PPARα、PPARγ调节脂质代谢,为临床上脂质代谢紊乱的治疗提供了另一个可靠的理论依据.     

新型PPARα/γ双重激动剂618H抗2型糖尿病的实验研究*

目的：研究新型PPARα/γ双重激动剂C618H的抗2型糖尿病作用。方法：采用双荧光素酶报告基因系统，确证C618H对PPARα和PPARγ的激动活性；通过前脂肪细胞分化实验和降脂实验，进一步明确C618H的PPARα/γ双重激动作用；灌胃给药，观察C618H对db／db2型糖尿病小鼠的降糖降脂作用；PT—PCR方法研究C618H的作用机制。结果：C618H有较强的PPARα/γ双重激动活性；能够促进前脂肪细胞分化，降低高脂小鼠的血脂水平；对2型糖尿病小鼠有明显的降糖降脂作用；能够增加不同组织中脂蛋白脂酶（LPL）、脂肪组织特异的脂肪酸转运蛋白（aP2）和葡萄糖转运体4（GluT4）mRNA的表达。结论：C618H是PPARα/γ双重激动剂，对2型糖尿病具有较好的降糖降脂作用。     

化浊解毒方含药血清对HSC-T6增殖、凋亡及PPARγmRNA表达的影响

目的:研究化浊解毒方含药血清对体外培养的大鼠肝星状细胞增殖、凋亡及细胞外基质和PPARγmRNA表达的影响,以探讨化浊解毒方治疗肝纤维化的机制。方法:选择健康SD大鼠,每天灌服不同剂量(每L分别含有生药30,60,120 g)的化浊解毒方以及α干扰素(1 000 U.mL-1),按1 mL.(100 g)-1大鼠体质量给药,以制备含药血清;常规培养活化的肝星状细胞(HSC-T6),用不同浓度的含药血清进行干预,用MTT法检测HSC增殖、流式细胞术测HSC凋亡,ELISA法及RT-PCR法分别测细胞上清液中I型及Ⅲ型胶原的含量以及细胞中PPARγmRNA基因的表达。结果:与正常血清组比较,化浊解毒方药含药血清各浓度组均呈现出抑制HSC增殖的作用(P<0.05),以作用48 h最为明显,且呈剂量和时间依赖性。与正常血清对照组比较,化浊解毒方药含药血清各个浓度组在作用48 h后,细胞上清液中的I型及Ⅲ型胶原的含量均降低(P<0.05),并上调PPARγmRNA的表达(P<0.05)。结论:化浊解毒方药能有效治疗肝纤维化可能通过上调PPARγ的表达起到抑制肝星状细胞增殖,促进肝星状细胞凋亡,降低肝星状细胞活性有关。     

川续断皂苷Ⅵ对3T3-L1细胞的增殖和分化影响

目的研究川续断皂苷Ⅵ(asperosaponinⅥ,ASAⅥ)对3T3-L1前脂肪细胞的增殖及成脂分化影响,以进一步了解其药理作用。方法以3T3-L1前脂肪细胞为靶细胞,通过噻唑蓝(MTT)法观察不同浓度川续断皂苷Ⅵ对3T3-L1细胞增殖能力的影响;不同浓度(0、10、25、50μmol·L-1)川续断皂苷Ⅵ干预3T3-L1细胞的成脂诱导分化,油红O染色检测3T3-L1细胞分化程度;试剂盒测定各组培养液中葡萄糖及游离脂肪酸含量;荧光定量PCR(Q-PCR)检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activatedreceptorγ,PPARγ)、CCAAT增强子结合蛋白(CCAAT/enhan-cer-binding proteinα,C/EBPα)mRNA表达水平。结果 MTT法测定表明不同浓度川续断皂苷Ⅵ对3T3-L1细胞增殖能力的影响不同,其中10μmol·L-1浓度组作用24 h后促增殖作用最明显,随着川续断皂苷Ⅵ浓度增加,促增殖效应降低;川续断皂苷Ⅵ能够剂量依赖性的抑制3T3-L1细胞成脂,减少细胞内脂滴聚集,抑制细胞对葡萄糖的吸收利用,减少游离脂肪酸形成,下调成脂过程中PPARγ和C/EBPαmRNA表达。结论川续断皂苷Ⅵ具有促进3T3-L1细胞增殖作用,并通过下调PPARγ和C/EBPα基因抑制3T3-L1细胞成脂分化。     

板蓝根水提物对3T3-L1前脂肪细胞增殖和分化的影响

目的探讨板蓝根水提物(water extract of Radix Isatidis,WERI)对3T3-L1前脂肪细胞增殖分化的影响及其作用机制。方法体外培养3T3-L1前脂肪细胞,MTT法和流式细胞技术检测WERI对细胞增殖的影响;鸡尾酒诱导剂诱导3T3-L1前脂肪细胞,油红O染色和比色分析法观察WERI对前脂肪细胞分化及脂肪积累的影响;采用RT-PCR检测脂肪细胞的过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptorγ,PPARγ)及CCAAT/增强子结合蛋白α(CCAAT/enhancer-binding proteinα,C/EBPα)mRNA的表达;Western blot法检测PPARγ及C/EBPα蛋白表达。结果WERI在一定浓度范围内能有效抑制3T3-L1前脂肪细胞增殖,同时细胞周期呈现G_0/G_1向S期阻滞;与空白组相比,用不同浓度的WERI处理后,3T3-L1前脂肪细胞的分化受到明显抑制,且细胞内脂滴生成量明显减少;PCR及Western blot结果显示,WERI还可以抑制脂肪细胞PPARγ和C/EBPα基因及蛋白的表达。结论 WERI具有抑制3T3-L1前脂肪细胞增殖作用,并可通过下调PPARγ和C/EBPαmRNA及蛋白表达来抑制细胞成脂分化。     

牡荆苷对骨髓间充质干细胞成脂分化的影响简

目的 探讨牡荆苷对大鼠骨髓间充质干细胞成脂分化的影响.方法 采用细胞的增殖检测（MTT）法检测骨髓间充质干细胞生存率,油红O染色检测细胞成脂分化,实时荧光定量PCR检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）和CCAAT增强子结合蛋白α（C/EBPα） mRNA表达.结果 牡荆苷浓度在1～50 μmol/L范围内对骨髓间充质干细胞生存率无显著影响;牡荆苷可抑制骨髓间充质干细胞成脂分化及PPARγ和C/EBPαmRNA表达.结论 牡荆苷可抑制骨髓间充质干细胞成脂分化,其作用机制可能与抑制PPARγ和C/EBPα基因表达有关.     

芒果苷滴丸对小鼠实验性肝损伤的保护作用

目的：研究芒果苷滴丸（MDP）对小鼠实验性肝损伤的保护作用及其机制。方法：以MDP对小鼠灌胃给药,对MDP进行最大耐受量（MTD）测定;采用四氯化碳（CCl4）、D-氨基半乳糖盐酸盐（D—GaIN）诱导小鼠急性肝损伤模型;卡介苗（BCG）加脂多糖（LPS）联合诱导小鼠免疫性肝损伤模型。分光光度法检测血清中丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）含量和肝组织匀浆中超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH—Px）含量,苏木精-伊红（HE）染色法对肝脏组织作病理切片法检查。结果：①以MDP对小鼠灌胃给药,其MTD为180g·kg^-1,相当于原药材36g·kg^-1。②MDP能显著降低急性、免疫性肝损伤小鼠血清中ALT、AST含量（P〈0．01）,能降低急性肝损伤小鼠肝匀浆MDA含量（P〈0．01）,升高肝匀浆SOD、GSH—PX活性（P〈0．01）,病理结果表明MDP能减轻免疫性小鼠肝损伤的肝损伤程度。结论：MDP对急性、免疫性肝损伤小鼠具有显著保护作用,其作用机制可能与抗脂质过氧化有关。     

针刺对四氯化碳致大鼠肝纤维化中PPARγ表达的影响

目的观察针刺对四氯化碳致大鼠肝纤维化模型中肝脏过氧化物酶体增殖蛋白激活性受体γ(PPARγ)蛋白与mRNA表达的影响。方法将46只大鼠分为正常对照组(10只)、模型组、非穴位组、针刺组(每组12只)。采用50%CCl4和橄榄油进行肝纤维化造模,3次/周;正常组腹腔注射等量生理盐水,共6周。同时进行针刺(太冲、期门、肝俞,电针刺足三里)治疗2次/周,共6周。造模和治疗结束后,颈总动脉取血,检测大鼠ALT、ALP、AST指标,然后处死大鼠,分离肝组织计算肝指数,并采用Western blot和Real-time PCR方法检测各组大鼠PPARγ蛋白和mRNA的表达。结果与空白组相比较,模型组大鼠肝脏PPARγ蛋白与mRNA表达明显下降(P<0.05),针刺均能上调PPARγ蛋白与mRNA的表达。结论针刺可上调四氯化碳导致肝纤维化大鼠的PPARγ水平,有抑制肝纤维化的作用。     

舒筋健腰丸对骨关节炎大鼠关节软骨和血清中细胞因子的影响

目的研究舒筋健腰丸对骨关节炎大鼠的关节软骨和血清中细胞因子的影响。方法 90只SD大鼠随机编号,分为6组,每组15只：将双醋瑞因组,舒筋健腰丸低剂量组（0.75 g/kg）、中剂量组（1.5 g/kg）和高剂量组（3.0 g/kg）大鼠双膝关节腔均注射4%木瓜蛋白酶溶液0.2 m L,每隔3 d注射1次,连续注射3次即成模型。空白组和模型组给予等体积的生理盐水,4周后取材,检测血清中IL-1β、TNF-α、MMP-1、MMP-13的含量;切取关节,光镜下观察软骨组织。结果舒筋健腰丸各组均能降低大鼠血清中IL-1β、TNF-α、MMP-1、MMP-13的含量,且含量显著低于模型组（P〈0.05）;可显著的减缓骨关节炎所致的关节软骨损伤,促进软骨修复。结论舒筋健腰丸能够抑制血清中IL-1β、TNF-α、MMP-1、MMP-13的升高,达到治疗骨关节炎的作用。     

小檗碱对大鼠骨髓间质干细胞成脂分化的抑制作用(英文)

目的探讨小檗碱对大鼠骨髓间质干细胞成脂分化的影响及其机制。方法经分离纯化的大鼠骨髓间质干细胞,分为正常对照组,成脂分化诱导液(AIM)模型组及AIM+小檗碱0.1,0.3,1和3μmol·L-1组。倒置显微镜下观察细胞的形态特征,油红O染色检测脂肪细胞,以对硝基苯磷酸为底物检测碱性磷酸酶(ALP)活性,MTT法检测细胞存活率,RT-PCR检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ),脂肪酸结合蛋白(aP2)和CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)mRNA表达。结果与正常对照组比较,AIM模型组细胞形成的脂肪细胞明显增加(P<0.01),ALP活性明显降低(P<0.01),PPAR,γaP2和C/EBPαmRNA表达明显增高(P<0.01)。与AIM组比较,AIM+小檗碱显著抑制骨髓间质干细胞成脂分化,小檗碱0.1,0.3,1和3μmol·L-1显著升高ALP活性,分别增加26%,54%,81%和122%;小檗碱3μmol·L-1显著下调PPARγmRNA(0.91±0.10vs1.34±0.06),(P<0.01),aP2 mRNA(1.05±0.10vs1.53±0.09)(P<0.01)和C/EBPαmRNA表达(1.24±0.06vs1.54±0.09)(P<0.01)。小檗碱对骨髓间质干细胞增殖无显著影响。结论小檗碱能够抑制骨髓间质干细胞成脂分化,该作用可能与其下调PPARγmRNA,aP2 mRNA和C/EBPαmRNA表达有关。     

(−)-Catechin promotes adipocyte differentiation in human bone marrow mesenchymal stem cells through PPARγ transactivation

Green tea intake has been shown to confer various health benefits to patients suffering from metabolic disorders. Here, we studied the effect of several major green tea polyphenols on adipocyte differentiation in human bone marrow mesenchymal stem cells (hBM-MSCs) and compared it to the effect of representative antidiabetic drugs. (−)-Catechin was the most potent of the eight green tea polyphenols evaluated in promoting adipocyte differentiation in hBM-MSCs, and this effect was dose-dependent. (−)-Catechin increased the mRNA levels of various adipogenic markers, such as adiponectin, peroxisome proliferator-activated receptor gamma (PPARγ), FABP4, and LPL, as measured during adipocyte differentiation in hBM-MSCs. In addition, (−)-catechin upregulated the secretion of adiponectin in hBM-MSC culture. Using a reporter gene assay and a competitive ligand binding study, (−)-catechin also significantly activated PPARγ in a dose-dependent fashion; however, (+)-catechin, the enantiomer of (−)-catechin, was not effective as a PPARγ agonist, which seems to imply that the effect of (−)-catechin on PPARγ is stereospecific. In conclusion, our data suggest that (−)-catechin promotes adipocyte differentiation and increased sensitivity to insulin in part by direct activation of PPARγ, which could be at the basis of the observed pharmacological benefits of green tea intake in reducing the risk of type 2 diabetes.     

补心丸对糖尿病伴抑郁焦虑症患者抑郁症状的影响

目的:观察补心丸对糖尿病伴抑郁焦虑症患者抑郁症状的影响。方法:45例糖尿病伴抑郁焦虑症患者按随机数字表法分为试验组(25例)和观察组(20例)。试验组给予补心丸9 g,口服,tid;观察组患者给氟伏沙明d1-325 mg,d4-650 mg,d775 mg,每晚饭后服用,qd。两组患者疗程均为30 d。另选择20名健康志愿者作为对照组。观察两组患者治疗前后汉密尔顿抑郁量表(HAMD-17)评分、汉密尔顿焦虑量表(HAMA)评分、匹兹堡睡眠质量指数(PSQI)、简易智力状态检查表(MMSE)评分、血清褪黑素水平及不良反应发生情况,并与对照组进行比较。结果:治疗前两组患者HAMD-17评分、HAMA评分、PSQI、血清褪黑素水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05),但HAMD-17评分、HAMA评分、PSQI均显著高于对照组,血清褪黑素水平显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后两组患者HAMD-17评分、HAMA评分、PSQI均显著低于同组治疗前,血清褪黑素水平显著高于同组治疗前,差异有统计学意义(P<0.05),但三组间比较除血清褪黑素水平显著高于对照组外(P<0.05),HAMD-17评分、HAMA评分、PSQI、MMSE评分比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。试验组患者不良反应发生率显著低于观察组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:补心丸可显著增加糖尿病伴抑郁焦虑症患者血清褪黑素水平,改善患者的抑郁症状,且安全性较好。     

辛夷鼻炎丸治疗变应性鼻炎的疗效观察

目的:观察辛夷鼻炎丸治疗变应性鼻炎的疗效。方法:按照2∶1的比例选择2家医院2007年6月～2008年2月符合纳入标准的变应性鼻炎病例92例,其中1例属于脱落病例,将其余91例随机分为治疗组(61例)和对照组(30例)。治疗组口服辛夷鼻炎丸3 g,tid;对照组予以通窍鼻炎颗粒,2 g,tid。疗程均为4周。评价治疗后各项症状体征改变情况、起效时间及安全性。结果:治疗4周后,治疗组控显率为70.49%,有效率为93.44%;对照组控显率为73.33%,有效率为90.00%,2组比较差异无统计学意义(P>0.05)。治疗组及对照组均未见不良事件,对血常规、肝肾功能指标未见不良影响。结论:辛夷鼻炎丸治疗变应性鼻炎的疗效与通窍鼻炎颗粒相当,2组治疗后的症状改善情况均优于治疗前,治疗组鼻部检查积分差值优于通窍鼻炎颗粒,且安全性好。