麻杏石甘汤对重症肺炎大鼠肺组织炎症的影响及其机制

目的探讨麻杏石甘汤( MGD)对重症肺炎大鼠炎症的影响及其机制。方法按照随机数字表法将正常饲养的 80只大鼠分成对照组、模型组、模型 +0.9%氯化钠溶液组、模型 +MGD组,每组 20只。对照组:正常饲养的 20只大鼠;模型组:用 1 mL注射器穿刺气管缓慢滴入 0.3 mL新鲜配制的肺炎克雷伯菌混悬液将剩余 60只大鼠进行重症肺炎模型制备;模型 +0.9%氯化钠溶液组:将 20只模型组大鼠进行等量的 0.9%氯化钠溶液灌胃;模型 +MGD组:将 20只模型组大鼠进行 MGD灌胃。用血气分析检测分析血气指标;酶联免疫吸附试验( ELISA)检测大鼠血清中肿瘤坏死因子 α(TNF-α)、白细胞介素 6(IL-6)、白细胞介素 1β(IL-1β)的含量;蛋白质印迹法检测肺组织中核因子 κB抑制蛋白( IκBα)、 p65、磷酸化 IκBα(p-IκBα)的蛋白表达。结果成功构建肺炎克雷伯菌诱导的重症肺炎大鼠;与模型 +0.9%氯化钠溶液组大鼠相比,模型 +MGD组大鼠动脉血氧分压( PaO₂)［(11.89±0.83)kPa比( 8.89±0.62)kPa,P＜0.05］、血氧饱和度( SaO₂)［(95.95±0.86)%比( 83.05±8.62)%,P＜0.05］显著升高,动脉血二氧化碳分压( PaCO₂)显著降低［(4.02±0.37)kPa比(6.49±0.59)kPa,P＜0.05］肺湿干比［(4.29±0.40)%比( 5.28±0.48%),P＜0.05］、 TNF-α［(103.24±8.42)ng/mL比( 448.06±41.12)ng/mL,P＜0.05］、 IL-6［7±8.11)pg/mL比( 209.51±18.18pg/mL)P＜(85.8,0.05］、 IL-1β［( 218.54±19.33)ng/mL比( 528.31±49.11)ng/mL,P＜0.05］的含量均显著降低;重要的是, IκBα的表达明显上调,［(1.86±0.11)比( 0.25±0.02)P＜0.05］p65［(0.29±0.02)比( 4.10±0.04)P＜0.05］、 p-IκBα［(0.31±0.03)比( 2.94±0.21),P＜0.05］的表达明显下调。结论 MGD,可抑制重,症肺炎大鼠的炎症分泌,其机制,可能与抑制 NF-κB信号通路相关。     

氯沙坦对急性肺损伤小鼠肺部组织及肺树突状细胞结构功能的作用

目的探究氯沙坦对急性肺损伤( ALI)小鼠肺部组织及肺树突状细胞( DC)结构功能的作用。方法 2016年 10月至 2018年 12月取 72只 C57BL/6小鼠,按随机数字表法分为健康对照组、 ALI模型组、氯沙坦干预组各 24只。 ALI模型组:向气管中注射 2 mg/kg的脂多糖( LPS)来构建 ALI模型,行气管注射脂多糖的前 30 min,给予腹腔注射等量的磷酸盐缓冲液( PBS)。氯沙坦干预组:在向气管中注射 2 mg/kg脂多糖之前的 30 min,对其进行腹腔中注射 15 mg/kg的氯沙坦。健康对照组:气管中注射 PBS,量与脂多糖是相等的,在行气管中注射 PBS的前 30 min对其进行腹腔 PBS的注射,注射的量与之前相等。在 PBS或脂多糖注射之后的 6、12、24 h使小鼠死亡,收集其肺部组织。肺部结构切片用苏木素 ?伊红( HE)进行染色,光学显微镜下观测肺部结构病理学变化,评估肺部炎症损伤程度,同时检测肺部湿重和体质量的比例( LW/BW)。用酶联免疫吸附法( ELISA)检测肺部结构匀浆中的白细胞介素( IL)?6水平,用流式细胞术检测肺部单个细胞悬浮液中 DC的比重和 CD80、主要组织相容性复合物( MHC)Ⅱ的表达。结果 ALI模型组小鼠的肺部结构中,肺泡间隙加宽,间质内的血管有明显的充血,出血以及炎性细胞的弥漫性浸润现象。经氯沙坦干预的小组小鼠肺部结构受损程度较轻,肺部损伤评分明显减低( P＜0.05)。 ALI模型组小鼠肺部 LW/BW(0.71±0.04),(0.69±0.05)和( 0.67±0.05)%明显大于健康对照组的同一时间点肺部组织 LW/BW(0.49±0.03),(0.51±0.04)和(0.50±0.03)%,经氯沙坦干预的小组中 LW/BW(0.63±0.04)(0.61±0.03)和( 0.58±0.06)%与 ALI模型组相比较显著减低,但是仍旧明显大于健康对照组。 ALI模型组的肺部结构中 IL?6(2 864±185)(3 568±369)和( 3 018±264)pg/mg显著大于健康对照组( 396±96)(341±72)和( 355±108)pg/mg,氯沙坦干预组( 2 135±193)39±238)和( 1 786±153)pg/mg能够明显降低 ALI小鼠的肺部结中 IL?6水平( P＜0.05)但是其仍旧显著大于健康对P＜0.05)。 ALI模型组肺 DC比例( 3.18±水平,(25,构,照组(0.43),(3.34±0.37)和( 3.48±0.45)%显著升高,能够表达 CD80分子的肺 DC(9.78±2.37(10.56±2.69)和( 12.43±3.07)%显著升高( P＜0.05)经氯沙坦干预过的小鼠表达 CD80分子的肺部 DC与 ALI模型组相比较降低,但其仍旧明显大于健康对照组(P＜0.05)。氯沙坦干预以及 ALI模型组两部分表达的 MHC Ⅱ的 DC比较,差异无统计学意义( P＞0.05)。结论 氯沙坦能够对 ALI产生局部的保护效果,提示其对 ALI发挥抗炎和免疫调控作用可能是通过对肺 DC的成熟抑制来实现的。     

黄芪甲苷对2型糖尿病小鼠肾脏增殖细胞核抗原表达的作用

目的 探讨黄芪甲苷(AS-Ⅳ)对2型糖尿病db/db小鼠的肾脏保护作用和对增生细胞核抗原(PCNA)的影响.方法 雄性db/db小鼠,随机分为db/db组和db/db+ AS-Ⅳ组,另以野生型(WT)小鼠作为对照组.AS-Ⅳ予1g·kg-1饲料喂食.第12周,检测各组小鼠体质量、血糖、肾质量、肌酐清除率和24 h尿白蛋白定量.PAS染色和电镜检测各组小鼠肾脏病理.免疫组织化学和Western blot检测肾组织PCNA的蛋白表达水平.结果 第12周时,db/db组小鼠体质量、血糖、肾质量、肌酐清除率明显高于WT组,但db/db+ AS-Ⅳ组与db/db组之间差异无统计学意义.db/db组小鼠24h尿白蛋白水平明显高于WT组,db/db+ AS-Ⅳ组小鼠24h尿白蛋白水平低于db/db组,差异有统计学意义(P＜0.05).db/db组小鼠肾小球面积,肾小管面积,肾小球基底膜厚度和肾小管基底膜厚度均显著高于WT组,db/db+ AS-Ⅳ组上述指标明显低于db/db组(P＜0.05).免疫组织化学和Western blot结果显示db/db组小鼠肾组织PCNA的蛋白表达水平显著高于WT组,AS-Ⅳ可以明显降低PCNA的表达水平,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 AS-Ⅳ可能通过减少2型糖尿病小鼠肾脏内增生细胞核抗原的蛋白表达来延缓糖尿病肾病进程.     

紫草素对荷肝癌裸小鼠移植瘤生长的抑制作用及机制

目的 研究紫草素抑制荷肝癌裸小鼠移植瘤生长的作用及其机制。方法 通过皮下注射肝癌细胞制备荷肝癌裸小鼠模型;设模型组,紫草素低、中、高剂量组和顺铂组,每组12只,分别隔天一次给予0.9%氯化钠溶液,紫草素0.5 mg/kg、1 mg/kg、2 mg/kg和顺铂2 mg/kg,共给药6次。观察动物生存状态和移植瘤组织生长状态,称量瘤重并计算抑瘤率;HE染色法进行肿瘤组织形态检查,TUNEL法进行细胞凋亡检查,免疫组织化学法观察肿瘤组织凋亡相关蛋白表达。结果 与模型组比较,紫草素各组裸小鼠食欲和精神状态都明显好转,瘤体积小、活动度低、硬度低,移植瘤组织出现片状坏死病变、移植瘤组织细胞凋亡数量明显增多,凋亡指数显著升高［(22.93±5.40)、(39.86±8.25)、(60.74±9.61)比(2.64±1.09),P＜0.05］;瘤体质量显著减轻［(1.32±0.21) g、(1.18±0.17) g、(0.83±0.12) g比(1.69±0.14) g,P＜0.05］、抑瘤率显著升高［(21.89±3.75)%、(30.18±4.92)%、(50.89±6.43)%比(0.00±0.00)%,P＜0.01］;肿瘤组织中凋亡相关蛋白［半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase?3)、bcl?2相关X蛋白质(Bax、bcl?2)］中的caspase?3表达显著上调［(0.16±0.05)、(0.21±0.04)、(0.27±0.06)比(0.05±0.02),P＜0.05］、Bax表达显著上调［(0.54±0.10)、(0.63±0.15)、(0.81±0.21)比(0.29±0.05),P＜0.01］,其中紫草素中、高剂量组bcl?2显著下调［(0.37±0.05)、(0.30±0.05)比(0.50±0.07),P＜0.05］,Bax/bcl?2比值显著升高［(1.17±0.25)、(1.70±0.39)、(2.71±0.68)比(0.59±0.20),P＜0.05］。结论 紫草素具有抑制荷肝癌裸小鼠移植瘤生长的作用,可能与其调节凋亡相关蛋白表达而促进细胞凋亡、诱导肿瘤组织坏死有关。     

地佐辛复合右美托咪定在清醒患者纤维支气管镜气管插管术中的应用

目的 探讨地佐辛复合右美托咪定在重症医学科清醒患者纤维支气管镜气管插管术中的镇痛镇静效果及安全性.方法 将本科2015年1月至2016年12月180例需行气管插管机械通气的清醒患者采用随机数字表法分为A、B、C三组,各60例.A组静脉泵注咪达唑仑0.1 mg/kg;B组静脉泵注地佐辛0.1 mg/kg+咪达唑仑0.05 mg/kg;C组静脉泵注地佐辛0.1 mg/kg+右美托咪定1μg/kg.观察并比较插管前(T1)、插管时(T2)、插管后10 min(T3)患者心率(HR)、呼吸频率(RR)、平均动脉压(MAP)、指端血氧饱和度(SpO2)以及插管过程中患者躁动情况(MAAS评分)、气管插管后10 min患者的镇静效果(Ramsay评分)、转入时疾病严重程度评分(APACHEⅡ评分).结果 3组T3时间点HR均较T1时间点显著下降[A组:(99.0±5.2)次/min比(101.2±7.6)次/min,P＜0.05;B组:(97.3±6.1)次/min比(103.0±9.5)次/min,P＜0.05;C组:(94.4±7.2)次/min比(100.0±8.8)次/min,P＜0.05].3组RR在T2时间点均较同组T1时间点显著下降[A组:(27.1±2.6)次/min比(28.5±3.6)次/min,P＜0.05;B组:(26.3±2.8)次/min比(28.1±3.3)次/min,P＜0.05;C组:(25.1±3.5)次/min比(27.6±3.1)次/min,P＜0.05].B组T3时间点MAP较同组T1、T2时间点下降[(71.2±8.8) mmHg(1 mmHg=0.133 kPa)比(74.3±8.0) mmHg,P＜0.05;(71.2±8.8) mmHg比(74.3±8.8) mmHg,P＜0.05].C组T2时间点MAP较同组T1、T3时间点下降[(68.4±8.1) mmHg比(73.2±6.3),P＜0.05;(68.4±8.1) mmHg比(72.8±7.6) mmHg,P＜0.05].T1时间点,3组HR、RR、MAP差异无统计学意义(均P＞0.05).T2时间点,C组MAP较A、B两组显著下降[(68.4±8.1)mmHg比(73.6±8.6),P＜0.05;(68.4±8.1) mmHg比(74.3±8.8) mmHg,P＜0.05].T3时间点,C组HR较A、B两组显著下降[(94.4±7.2)次/min比(99.0±5.2)次/min,P＜0.05;(94.4±7.2)次/min比(97.3±6.1)次/min,P＜0.05].插管过程中B、C两组MAAS评分均显著低于A组[(3.2±1.0)比(3.9±1.0),P＜ 0.05;(3.0±1.0)比(3.9±1.0),P＜0.05],但B、C组间差异无统计学意义(P＞0.05).气管插管后10 min,A组Ramsay评分显著低于B、C两组[(2.4±0.9)比(2.7±0.9),P＜0.05;(2.4±0.9)比(2.8±0.9),P＜0.05],但B、C两组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论地佐辛复合咪达唑仑或右美托咪定较单纯使用咪达唑仑可显著改善清醒患者气管插管的耐受性并提高镇静效果;地佐辛复合右美托咪定用于清醒患者气管插管镇痛镇静效果确切.     

氦-氖激光照射联合重组人白介素 ?2、伐昔洛韦治疗生殖器疱疹 40例观察

目的探讨氦 ?氖激光照射联合重组人白介素 ?2(IL?2)、常规抗病毒治疗治疗生殖器疱疹的疗效。方法选取 2018年 6 —12月深圳市龙岗区第三人民医院收治的生殖器疱疹病人共 80例,以随机数字表法分组,基础组 40例,口服盐酸伐昔洛伟 +皮下注射重组人 IL?2治疗。联合组 40例,在上述治疗基础上,增加氦 ?氖激光照射病灶。对比两组病人止痛时间、止疱时间、结痂时间、脱痂时间,临床疗效,治疗前后血清白细胞介素 2(IL?2)、干扰素 ?γ(IFN?γ)、白细胞介素 4(IL?4)水平变化与不良反应。结果联合组病人止痛时间(1.62±0.33)d、止疱时间(1.35±0.27)d、结痂时间(3.02±0.61)d、脱痂时间(4.59±0.92)d均短于基础组(P＜0.05);两组临床疗效分布差异显著(P＜0.05),联合组总有效 97.50%(39/40)高于基础组(P＜0.05);治疗后两组 IL? 2、IFN?γ水平均提高(P＜0.05)联合组 IL?2(4.39±0.88)μg/L、IFN?γ(3.57±0.72)μg/L均更高(P＜0.05),治疗后两组 IL?4水平均降低(P＜0.05)联合组 IL?4(21.1,8±4.33)μg/L更低(P＜0.05);不良反应发生率相近(P＞0.05)。结论在生殖器疱疹病人中实施氦 ?氖激光照射,联合重组人 IL?2、常规抗病毒治疗可促进病人康复,增强疗效,提高病人的 IL?2、IFN?γ水平,降低 IL?4水平且安全性良好。     

儿茶素微囊剂对小鼠的免疫调节作用

目的:研究儿茶素微囊剂对小鼠的免疫调节作用。方法:环磷酰胺诱导小鼠免疫功能低下,予儿茶素微囊剂,观察小鼠耳片肿胀度、半数溶血值(HC50 )、碳粒廓清指数K、吞噬指数α等有关免疫指标的变化。结果: 儿茶素微囊剂高剂量组(500mg·kg-1·d-1 )小鼠的耳肿胀度为(36±7 )mg与生理盐水组(20±3)mg比较差异有非常显著意义(P<0. 05),碳粒廓清指数K和吞噬指数α分别提高为0. 053 3±0. 002 5, 7. 08±0. 03,与生理盐水组(0. 041 2±0. 002 8, 6. 16±0. 19 )相比差异有非常显著意义(P<0. 01 );环磷酰胺+儿茶素高剂量组小鼠耳片肿胀度为(19±3 )mg,与环磷酰胺组(9±4)mg比较差异有非常显著意义(P<0. 01 ),HC50增高至(223±15)与环磷酰胺组(193±18)比较差异有非常显著意义(P<0. 05 ),碳粒廓清指数K、吞噬指数α分别为0. 034 8±0. 002 8, 6. 01±0. 11,与环磷酰胺组(0. 024±0. 004, 5. 1±0. 6 )相比有一定的提高(P<0. 01 )。结论:儿茶素微囊剂对正常及免疫功能低下小鼠的细胞免疫和体液免疫均具有增强作用。     

茶碱类药物对哮喘小鼠肺组织AGR2和Muc5ac蛋白表达的影响

目的观察氨茶碱、多索茶碱对支气管哮喘(简称哮喘)小鼠肺组织中AGR2蛋白和Muc5ac蛋白表达的影响,探讨茶碱类药物在哮喘气道黏液过度分泌中的作用. 方法32只雌性小鼠随机分为哮喘组、正常对照组、氨茶碱组和多索茶碱组,每组8只. 免疫组织化学法分别检测4组小鼠肺组织AGR2和Muc5ac蛋白的表达. 收集支气管肺泡灌洗液(BALF),酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测其中白细胞介素(IL) 13的水平. 结果哮喘小鼠肺组织中AGR2蛋白(0.544±0.039)和Muc5ac蛋白(0.556±0.045)的表达,较正常对照组(0.388±0.053,0.188±0.086)均明显升高(P＜0.01). 多索茶碱组AGR2蛋白(0.491±0.029,P＜0.05)和Muc5ac蛋白(0.446±0.044,P＜0.01)的表达水平与哮喘组比较明显下降. 结论多索茶碱可能通过下调哮喘小鼠AGR2、Muc5ac蛋白的表达,缓解哮喘气道黏液过度分泌.     

1,25(OH)_2D_3对NOD小鼠1型糖尿病的免疫干预及其机制研究

目的观察1,25(OH)2D3对雌性非肥胖糖尿病(NOD)小鼠糖尿病发病率、胰岛炎的影响,以及外周免疫器官脾脏T淋巴细胞亚群的变化,血清细胞因子干扰素γ(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)及一氧化氮(NO)的水平,从而更好地揭示1,25(OH)2D3的免疫调节机制。方法离乳(21 d龄)的雌性NOD小鼠(80只)随机分为两组:第1组给予1,25(OH)2D3(5μg/kg)隔日1次腹腔注射,共7周,作为实验组。第2组给予等量花生油作为对照组(40只),给药时间、方法同前。10周龄时腹腔注射环磷酰胺以加速糖尿病。加速1周后各取15只通过酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测IFN-γI、L-4水平,生化比色法检测NO水平,流式细胞仪分析脾组织T细胞亚群的变化。其余继续观察。小鼠在被确诊糖尿病或环磷酰胺加速后1个月处死,观察胰腺病理变化、糖尿病发病率及血钙水平。结果实验组发病率(12%)明显低于对照组(56%),P<0.01;实验组胰岛炎症分数较对照组明显降低P<0.01,炎症程度也明显减轻;实验组血清IL-4较对照组明显升高[(52±9)ng/Lvs(33±3)ng/L],P<0.01;IFN-γ、NO较对照组显著降低[(71±16)ng/Lvs(141±11)ng/L,(78±28)ng/Lvs(118±19)ng/L],P均<0.01;脾脏淋巴细胞经流式细胞仪测定,结果显示实验组T细胞CD4+、CD8+亚群较对照组显著升高,CD4+亚群为47±6与35±4(P<0.01),CD8+亚群为11.6±3.6与7.8±1.5(P<0.05),而CD4+/CD8+亚群分别为4.3±0.9与4.6±0.9(P>0.05),两组差异无统计学意义;实验组血钙较对照组稍高,但NOD小鼠可以很好耐受。结论1,25(OH)2D3可以预防环磷酰胺加速的NOD小鼠糖尿病的发生,并可减轻胰岛炎。其机制:①可能与增加Th2型细胞因子的全身表达,降低Th1型细胞因子的全身表达,从而调节Th1/Th2型细胞因子比例失衡有关。②可能与增加抑制性T细胞数目,促进CD4+T细胞由Th1向Th2亚群转化有关。该实验同时证实了NO在糖尿病的发生机制中起一定作用。     

雄性大鼠盆神经损伤神经源性膀胱动物模型的建立

目的建立盆神经损伤后神经源性膀胱的大鼠模型,研究引起神经源性膀胱的相关因素。方法将 16只雄性 SD大鼠采用随机数字表法分为神经损伤组和假手术组,每组 8只,神经损伤组损伤双侧盆神经,假手术组仅显露神经但不做处理。 4周后行膀胱功能检测,并留取膀胱组织行 Masson染色及 VAChT阳性神经纤维免疫荧光染色。结果术后 4周,神经损伤组大鼠膀胱质量( 123.6±16.8)mg较假手术组( 87.2±11.2)mg显著增加( P＜0.05)。神经损伤组大鼠膀胱最大容量( 3.45±0.45)mL较假手术组( 1.46±0.11)mL显著增加( P＜0.05)。神经损伤组大鼠膀胱逼尿肌收缩力明显下降,最大排尿压峰值为( 12.1±6.5) mmHg,明显低于假手术组( 42.9±10.5)mmHg(P＜0.05)。 Masson染色示神经损伤组大鼠膀胱壁组织中平滑肌含量减少,胶原纤维增生明显,其胶原占比( 19.75±5.46)%显著高于假手术组( 9.95±3.25)%,(P＜0.05)。免疫荧光结果显示神经损伤组膀胱壁内 VAChT阳性神经纤维占比( 7.46±1.68)%较假手术组( 12.67±3.24)%显著减少( P＜0.05)。结论损伤大鼠双侧盆神经可成功建立神经源性膀胱动物模型,表现为膀胱逼尿肌纤维化, VAChT阳性神经纤维减少及排尿功能受损。