灵芪胶囊对小鼠Lewis肺癌移植瘤的抑制作用 及对相关血管生成因子表达的影响

［摘要］目的通过建立小鼠Lewis肺癌移植瘤模型，探讨灵芪胶囊对移植瘤生长、转移及其相关血管生成因子的作用。方法以Lewis肺癌荷瘤小鼠为研究对象，检测灵芪胶囊对转移瘤和肺转移灶的抑制率。应用S P免疫组织化学方法，检测灵芪胶囊对荷瘤小鼠血管生成因子碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）、环氧化酶（COX） 2表达的影响。用分光光度计测量灵芪胶囊对荷瘤小鼠血清中诱生型一氧化氮合酶（iNOS）含量的影响。结果灵芪胶囊对Lewis肺癌荷瘤小鼠表现出明显抑瘤作用，其高、中、低剂量抑瘤率分别为35.64%，29.23%，21.03%，并与复方环磷酰胺合用有明显的增效减毒作用。同时，灵芪胶囊可有效抑制肺癌转移，能够下调血管生长因子bFGF和COX 2的表达，并降低血清中的iNOS含量而抑制肺癌血管生成，从而发挥抗转移作用。结论灵芪胶囊具有抑制小鼠Lewis肺癌移植瘤生长和转移的作用，其作用机制可能与下调COX 2和血管生成因子的表达及降低血清中的iNOS含量有关。     

灵芪胶囊对H22荷瘤小鼠外周血IL-6含量的影响

目的:观察灵芪胶囊对H_(22)荷瘤小鼠肿瘤的抑制作用,分析其抗肿瘤作用机制。方法:实验用昆明种小鼠接种H_(22)瘤株,经口灌胃灵芪胶囊和复方环磷酰胺11d后,取瘤体称重,计算抑瘤率,并计算免疫器官指数;采用双抗夹心ELISA法检测H_(22)荷瘤小鼠外周血IL-6含量。结果:灵芪胶囊在明显抑制肿瘤生长的同时不降低体重,在一定剂量下对荷瘤小鼠的免疫器官指数无明显影响,并能够明显抑制荷瘤小鼠外周血IL-6异常增高。结论:灵芪胶囊对H_(22)荷瘤小鼠有明显抑瘤作用,通过改善荷瘤小鼠异常的免疫状态。达到治疗肿瘤的目的。     

灵芪胶囊对H22荷瘤小鼠p53和bcl-2蛋白表达的影响

目的：探讨灵芪胶囊对H22荷瘤小鼠的抑瘤作用及其抑瘤作用机制。方法：采用体内实验法,于无菌条件下抽取传代7d、生长良好的H22荷瘤小鼠腹水,无菌0．9％氯化钠溶液1：3稀释（约含瘤细胞2×10^6／ml）,按0．2ml／7,接种于消毒后的小鼠右前肢腋部皮下,制成肿瘤模型,灌胃给药灵芪胶囊11d后,称取小鼠体重,脱椎处死小鼠,取脾脏及胸腺称重并计算胸腺指数和脾脏指数。用免疫组化法检测各组凋亡相关基因突变型p53和bcl-2基因的表达。结果：灵芪胶囊在明显抑制肿瘤生长的同时不降低体重,在一定剂量对荷瘤动物的免疫器官指数无明显影响;灵芪胶囊三个剂量组突变型p53基因和bcl-2基N的表达均低于模型组。结论：灵芪胶囊对H22荷瘤小鼠有明显抑瘤作用,其机制可能与抑制突变型p53基N和bcl-2基因表达有关。     

灵芪胶囊对S180荷瘤小鼠外周血TNF—α含量的影响

目的：探讨灵芪胶囊对S180荷瘤小鼠外周血肿瘤坏死因子α（TNF—α）表达的影响。方法：给接种S180肉瘤细胞小鼠分别灌服高、中、低剂量的灵芪胶囊及阳性对照药复方环磷酰胺后,采用ELISA法检测S180荷瘤小鼠外周血TNF-α含量。结果：灵芪胶囊高、中剂量组与复方环磷酰胺模型对照组比较,S180荷瘤小鼠外周血TNF-α含量明显增加（P〈0．05）。结论：灵芪胶囊能够增加荷瘤小鼠外周血TNF-α含量,为其在临床应用提供了一定的实验和理论依据。     

CIK细胞与LAK细胞对Lewis肺癌小鼠的抑瘤作用

目的观察CIK(cytokinc induced Killer)细胞及LAK(1ymphokine activated killer)细胞对Lewis肺癌小鼠的抑瘤作用。方法建立Lewis肺癌小鼠动物模型，静脉输入CIK细胞做抗肿瘤治疗，同时设LAK对照，用同位素法检测经治疗后荷瘤鼠T细胞增殖及NK细胞毒活性。结果CIK细胞对Lewis肺癌小鼠的抗肿瘤作用显著强于LAK细胞。结论CIK细胞对Lewis肺癌小鼠有明显的抗肿瘤作用，并且优于LAK细胞。     

灵芪胶囊体内抑瘤作用及其机制的研究

目的:探讨灵芪胶囊对H_(22)荷瘤小鼠体内肿瘤的抑制作用及其机制。方法:实验用昆明种小鼠接种H_(22)瘤株,灌胃灵芪胶囊和复方环磷酰胺11d后,取瘤体称重,计算抑瘤率。采用双抗夹心ELISA法检测H_(22)荷瘤小鼠外周血IL-1、TNF-α含量。结果:给予灵芪胶囊的小鼠肿瘤明显小于空白对照组,给药后各组小鼠外周血IL-1、TNF-α含量明显升高。结论:灵芪胶囊对H_(22)荷瘤小鼠有明显抑瘤作用,其机制可能是通过调节免疫系统的失衡以及抑制肿瘤细胞增殖而发挥抗肿瘤作用。     

灵芪胶囊抑制鼠S180生长的形态学观察

目的:观察灵芪胶囊对小鼠体内肉瘤S180生长的影响及荷瘤鼠肉瘤组织学变化,分析其抗肿瘤的作用机理,进一步完善其抗肿瘤作用机制.方法:设立正常对照组,肿瘤模型组,灵芪胶囊组和阳性对照组.用小鼠肉瘤S180细胞株建立动物肿瘤模型,灌胃给予S180小鼠灵芪胶囊后,光镜观察肉瘤组织的形态学变化.结果:小鼠肉瘤组织中肉瘤细胞发生不同程度的变性和坏死以及中性粒细胞,淋巴细胞为主的炎细胞浸润变性和坏死.灵芪胶囊可促进肿瘤细胞的凋亡及坏死.并引发相应的炎细胞反应.结论:灵芪胶囊有抑制S180细胞体内生长的作用.     

灵芪胶囊对S180荷瘤小鼠IL-1和IL-6蛋白表达的影响

目的:研究灵芪胶囊对S₁₈₀荷瘤小鼠的抗肿瘤作用,并探讨其可能的作用机制。方法:将S₁₈₀瘤株接种于小鼠右前肢腋部皮下建立动物模型,并采用ELISA法检测小鼠外周血IL-1和IL-6蛋白含量。结果:灵芪胶囊能明显增加S₁₈₀荷瘤小鼠外周血IL-1和IL-6蛋白含量,能改善和增强荷瘤小鼠的免疫功能。结论:灵芪胶囊对S₁₈₀荷瘤小鼠有明显抑瘤作用,其作用机制可能是通过改善小鼠免疫功能而实现的。     

川芎嗪对小鼠Lewis肺癌的治疗作用

目的:研究中药川芎嗪(TMP)对实体肿瘤的疗效及其可能的作用机理。方法:本研究运用Lewis肺癌小鼠模型,观察TMP对小鼠Lewis肺癌的疗效、免疫功能、生存质量及不良反应的影响。结果:TMP治疗小鼠Lewis肺癌能抑制肿瘤的生长,稳定病灶,提高荷瘤小鼠的生存质量,改善免疫功能。结论:TMP对小鼠Lewis肺癌有明显疗效,其作用机理与其本身对Lewis肺癌实体瘤有抑制作用和提高荷瘤小鼠免疫功能有关。     

抗癌胶囊对实验性肿瘤的治疗及对化疗减毒作用研究

目的：研究抗癌胶囊对小鼠移植肿瘤S180，H22，Lewis的抑瘤作用及对化疗药所致小鼠免疫功能抑制的保护作用。方法：按照抗癌药物筛选规程进行体内抑瘤实验：采用氟尿嘧啶（FU）制备免疫功能低下模型，测定抗癌胶囊对小鼠白细胞计数、免疫器官重量、腹腔巨噬细胞吞噬功能和NK细胞的影响。结果：抗癌胶囊对小鼠移植肿瘤S180，H22，Lewis均有不同的抑瘤作用，其中高剂量组抑瘤效果最佳，并对小鼠体重生长无明显影响。抗癌胶囊还有明显拮抗FU所致白细胞下降，胸腺、脾脏萎缩，腹腔巨噬细胞功能降低和NK细胞减少等毒副作用。结论：抗癌胶囊具有明显的抗肿瘤作用。     

托盘根乙醇提取物的抗肿瘤抗转移作用研究

目的：观察托盘根乙醇提取物（ERC）对肿瘤生长的影响。方法：用MTT法观察ERC体外对人肿瘤SPC－A－1细胞的影响，体内抑瘤实验观察ERC对Lewis肿瘤的作用。结果：ERC体外明显抑制SPC－A－1细胞的生长，体内明显抑制Lewis癌块增大，减少Lewis肺转移结节数，增强小鼠对Lewis肺癌的相伴免疫反应。结论：ERC对肺癌细胞系有明显抗肿瘤作用。     

基于M2与OK-432的肿瘤细胞裂解物致敏的树突状细胞疫苗抗小鼠Lewis肺癌作用研究

目的：建立增强肺癌细胞裂解物（L）致敏的树突状细胞（D）疫苗（L-D）免疫临床治疗肺癌效果的方法。方法：以来源于热休克蛋白70第407~426的两段重复序列（M）和OK-432（O）为佐剂刺激Lewis肺癌细胞裂解物,制备了树突状细胞疫苗LMO-D。结果：与L-D相比, LMO-D显著增加CD11c、CD40、CD80、CD86、MHC-Ⅰ和Ⅱ等细胞表面抗原的表达;LMO-D免疫荷瘤小鼠后,显著增强Th1类细胞因子肿瘤坏死因子α和干扰素γ,而不增强Th2类细胞因子白介素-5的表达;T淋巴细胞增殖诱导显著和淋巴细胞毒反应;此外LMO-D显著降低荷瘤小鼠瘤重与体积,延长了荷瘤小鼠的生存期。结论：LMO-D可通过诱导显著的T细胞免疫反应有效抑制肿瘤生长。     

Tail spontaneous metastatic mouse model: comparison of metastatic potential of orthotopic and heterotopic models imaged by GFP and RFP protein

Studies over the past decade have clearly shown that s.c. implant of primary and cultured tumor cells rarely leads to the occurrence of metastatic disease. Orthotopic transplantation of cell suspensions, surgical orthotopic implantation (SOI) of cancer tissue fragments resulted in metastases in many cancer types reaching 100% successful rate. We compared two metastatic models - heterotopic model of Lewis lung cancer and orthotopic B16 mouse melanoma. Both models were syngeneic with high metastatic ratio in C57BL/6 mice after transplantation of cancer cells, by injection into subcutaneous region of mice tail and without surgical intervention. The conclusion is that the localisation of cancer cell injection is a crucial condition for metastatic potential. The site with 100% haematogenous and lymph metastasis rate, after simple injection of cancer cells only, has been defined in mice, without dependence on the genetically predisposition and tumor cell line.     

海参岩藻聚糖硫酸酯抑制小鼠肿瘤生长和转移及其作用机制的研究

目的探讨海参岩藻聚糖硫酸酯(sea cucumber fu-coidan,SC-FUC)对小鼠肿瘤生长和转移的抑制作用及其机制。方法建立C57 BL/6J小鼠Lewis肺癌自发性肺转移模型,连续腹腔注射给药21 d,剥离原位肿瘤和双侧肺,分别称瘤重和计数肺表面转移灶结节数;采用RT-PCR法检测肿瘤组织中缺氧诱导因子(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、乙酰肝素酶(heparanase,HPA)和基质金属蛋白酶-2/9(matrix metalloproteinase-2/9,MMP-2/9)mRNA的表达。结果 SC-FUC可以抑制荷瘤小鼠肿瘤的生长,其平均抑制率为45.5%,并可以减少肺表面转移灶结节数(P<0.01),平均抑制率为66.0%。SC-FUC可以降低荷瘤小鼠肿瘤组织中HIF-1α、VEGF、HPA、MMP-2/9 mRNA的表达(P<0.05,P<0.01)。结论 SC-FUC能抑制肿瘤细胞在小鼠体内的生长和转移,其机制可能与抑制肿瘤血管新生,降低肿瘤细胞的迁移能力有关。     

Expression of matrix metalloproteinase,tissue inhibitors of metalloproteinase and adhesion molecules in silicotic mice with lung tumor metastasis

The number of metastatic foci in silicotic mice is approximately 1.5-fold that in normal mice and in mice treated with TiO2 as inert particles. Expression of matrix metalloproteinases (MMPs) tissue inhibitors of metalloproteinases (TIMPs) and selectins was investigated in silicotic mice with lung tumor metastasis. Expression of MMP-9 and P-selectin mRNA, but not MMP-2 and E-selectin, increased significantly, showing decreases of the ratio of expression in TIMPs/MMP-9 in tumor-bearing silicotic mice compared with the tumor-bearing normal mice and mice treated with TiO2. Pretreatment with anti-P-selectin antibody inhibited number of metastatic foci significantly in silicotic mice, while pretreatment of animals with anti MMP-9 antibody showed slight decrease of metastatic foci. This evidence indicated that up-regulation of P-selectin expression contributed to enhanced rate of tumor metastasis in lung with silicosis.     

银杏外种皮提取物对C_(57)BL/6J小鼠Lewis肺癌转移的抑制作用及其机制

目的研究银杏外种皮提取物(GBEE)对小鼠Lewis肺癌转移的抑制作用及其作用机制。方法制备C57BL/6J小鼠Lewis肺癌转移模型,随机分为正常对照、模型对照、替加氟80 mg·kg-1(阳性对照)和GBEE 50,100和200 mg·kg-1治疗组。正常和模型对照组ig给予等体积生理盐水,给药组分别ig给予相应药物,每天1次,连续15 d。给药结束后第2天剥瘤称取瘤质量,计算抑瘤率;摘取肺组织,Bouin's液固定后于解剖显微镜下计数肺表面转移灶,计算肺癌转移率和抗转移率;放射免疫法测定血清Ⅳ型胶原(ColⅣ)和透明质酸(HA)的含量;免疫组织化学法检测移植瘤细胞CD44和nm23-H1蛋白的表达。结果 GBEE 50,100和200 mg·kg-1对C57BL/6J小鼠Lewis肺癌移植瘤生长具有明显的抑制作用(P<0.05,P<0.01),移植瘤瘤质量分别为2.6±0.4,2.3±0.4和(2.3±0.6)g,抑瘤率分别为21.3%,32.2%和29.6%。模型对照组小鼠Lewis肺癌转移率为70%,GBEE 50,100和200 mg·kg-1治疗组肺癌转移率分别为50%,30%和40%。与模型对照组比较,GBEE 100 mg·kg-1治疗组小鼠肺癌转移灶明显减少(P<0.01),抗转移率为87.5%;50和200 mg·kg-1无明显影响。与模型对照组比较,GBEE 50,100和200 mg·kg-1可明显降低小鼠血清中ColⅣ和HA含量(P<0.01),抑制小鼠Lewis肺癌移植瘤细胞CD44蛋白表达,并促进nm23-H1蛋白表达(P<0.05,P<0.01)。结论 GBEE对Lewis肺癌转移模型小鼠具有抗肿瘤转移作用,其机制可能与增加肿瘤转移抑制基因nm23-H1表达、抑制肿瘤细胞黏附分子CD44表达并降低血清ColⅣ和HA含量有关。     

海参皂苷Echinoside A和ds-Echinoside A抑制小鼠Lewis肺癌生长和转移作用

目的探讨海参皂苷Echinoside A(EA)和ds-Echinoside A(DSEA)对小鼠肿瘤生长和自发肺转移的抑制作用及机制。方法建立C57BL/6J小鼠Lewis肺癌自发性肺转移模型,连续腹腔注射给药21 d,剥离原位肿瘤和双侧肺,分别称瘤重和计数肺表面转移灶结节数;采用RT-PCR法检测肿瘤组织中半胱氨酸蛋白水解酶3(Cysteine-requiring Aspartate Protease,Caspase 3)、基质金属蛋白酶-2/9(matrix metalloproteinase-2/9,MMP-2/9)、金属蛋白酶组织抑制剂-1/2(tissue inhibitor of metalloproteinase-1/2,TIMP-1/2)、乙酰肝素酶(heparanase,HPA)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)mRNA的表达。结果 EA和DSEA均能抑制Lewis肺癌小鼠移植瘤的生长,并显著抑制减少肺表面转移灶结节数。EA和DSEA可以显著提高荷瘤小鼠肿瘤组织中Caspase 3和TIMP-1/2mRNA的表达,降低MMP-2/9、HPA和VEGF mR-NA的表达(P<0.05,P<0.01)。结论 EA和DSEA能显著抑制小鼠Lewis肺癌生长和自发性肺转移,其机制可能与诱导肿瘤细胞凋亡,调节细胞外基质(extracellular matrix,ECM)降解相关基因的表达、抑制VEGF的释放,从而抑制肿瘤细胞的转移和血管新生有关。     

Cancer chemotherapy by liposomal 6-[12-(dimethylamino)ethyl]aminol-3-hydroxy-7H-indeno[2,1-clquinolin-7-one dihydrochloride (TAS-103), a novel anti-cancer agent

A novel anti-tumor agent, 6-[[2-(dimethylamino)ethyl]amino]-3-hydroxy-7H-indeno[2,1-c]quinolin-7-one dihydrochloride (TAS-103), effectively inhibits both topoisomerase I and II activities. To enhance anti-tumor efficacy and to reduce the side effects of the agent, liposomalization of TAS-103 was performed. TAS-103 was effectively entrapped in liposomes by a remote-loading method, and was stable at 4 degrees C and in the presence of 50% serum. To evaluate the anti-tumor efficacy of liposomal TAS-103, the growth inhibition against Lewis lung carcinoma cells in vitro and the therapeutic efficacy against solid tumor-bearing mice in vivo were examined. Liposomal TAS-103 showed strong cytotoxic effect against Lewis lung carcinoma cells in a dose dependent manner and effectively suppressed solid tumor growth accompanying longer survival time of tumor-bearing mice in comparison with the mice treated with free TAS-103. These results suggest that liposomal TAS-103 is useful for cancer therapy.