泼尼松对支气管上皮细胞黏蛋白5AC、细胞间黏附分子-1、白细胞介素-6分泌的影响

目的:探讨泼尼松对脂多糖(LPS)诱导的支气管上皮细胞黏蛋白5AC(MUC5AC)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、白细胞介素-6(IL-6)分泌的影响。方法:体外分离鉴定原代支气管上皮细胞,LPS以1μg/m L剂量诱导细胞炎症反应,泼尼松5、10、20、40、50、100μmol/L干预治疗,酶联免疫法(ELISA)检测细胞上清液MUC5AC、ICAM-1、IL-6水平变化,采用定量逆转录PCR(RT-PCR)、免疫印迹(Western-blot)检测MUC5AC、ICAM-1、IL-6 m RNA和蛋白表达情况,免疫荧光法检测核因子κB(NF-κB)核定位,Western-blot检测泼尼松干预治疗前后表皮生长因子受体(EGFR)、细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)活化情况。结果:泼尼松以剂量依赖性降低LPS诱导的支气管上皮细胞内MUC5AC、ICAM-1、IL-6 m RNA水平和蛋白水平,抑制NF-κB、EGFR、ERK1/2活化。结论:泼尼松在体外能抑制MUC5AC、ICAM-1、IL-6的产生,其机制可能与抑制NF-κB、EGFR、ERK1/2的激活有关。     

苯环喹溴铵对脂多糖诱导的人鼻黏膜上皮细胞表达MUC5AC的影响

目的探讨苯环喹溴铵(bencycloquidium bromide,BCQB)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的人鼻黏膜上皮细胞(human nasal epithelial cells,HNECs)表达黏蛋白MUC5AC的影响。方法将体外培养的原代人鼻黏膜上皮细胞分成对照组(C,不予任何处理)、LPS组(LPS,加入LPS1 mg·L~(-1))、BCQB低剂量组(BCQBL,加入LPS 1 mg·L~(-1)及BCQB 10-8mol·L~(-1))、BCQB中剂量组(BCQBM,加入LPS 1 mg·L~(-1)及BCQB 10~(-7)mol·L~(-1))、BCQB高剂量组(BCQBH,加入LPS 1 mg·L~(-1)及BCQB 10~(-6)mol·L~(-1))和异丙托溴铵组(ipratropium bromide,IB,加入LPS 1 mg·L~(-1)及IB 10~(-6)mol·L~(-1))。经含生长因子的无血清培养基37℃,5%CO_2培养24 h后,采用Real-time PCR法检测鼻黏膜上皮细胞中MUC5AC mRNA的表达,Western blot法检测鼻黏膜上皮细胞中MUC5AC蛋白表达,ELISA法检测上清液中MUC5AC蛋白表达。结果 LPS组与对照组相比,MUC5AC mRNA和蛋白表达明显升高(均P<0.01),BCQB各剂量组与LPS组相比,MUC5AC mRNA和蛋白表达明显降低(P<0.01,P<0.05),且高剂量组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 BCQB能够抑制LPS诱导的人鼻黏膜上皮细胞黏蛋白MUC5AC表达,提示其可能成为鼻腔黏液高分泌性疾病治疗新药。     

气道局部治疗对气道黏液高分泌干预作用的对比研究

目的探讨常用局部治疗性药物对慢性气道黏液高分泌作用的机制和特点。方法用超声雾化吸入中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)复制慢性支气管炎动物模型,分别吸入糖皮质激素布地奈德(budesonide)、胆碱M受体阻断剂异丙托溴铵以及两者配伍联用进行干预,用酶联免疫吸附试验(ELISA)及斑点印迹法分别检测大鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中黏蛋白(MUC)的含量和MUC5ACmRNA表达水平。结果NE能显著增加气道MUC和MUC5ACmRNA的表达(P<0.01);普米克令舒和异丙托溴铵均可降低MUC和MUC5ACmRNA的表达(P<0.05),两者联用可增强抑制黏蛋白的效应(P<0.01)。结论NE是慢性气道黏液高分泌发生的重要因素;布地奈德和异丙托溴铵可抑制MUC基因及转录水平的表达,且两者联用有协同效应。     

EB和CVA患者诱导痰黏蛋白水平分析及其差异机制

目的观察诱导痰黏蛋白水平在嗜酸粒细胞性支气管炎和咳嗽变异性哮喘患者中的差异,分析其与炎症介质和痰细胞学的相关性。方法收集我院在2016年10月~2017年4月门诊诊治的20例EB和20例CVA患者,设为EB组和CVA组,另选取同期健康体检者20例,设为对照组,分析三组对象痰上清黏蛋白MUC5AC、MUC5B、LTC4、PGE2及诱导痰细胞学分类,采用Pearson线性相关分析三者之间的相关性。结果 (1)CVA组MUC5AC水平明显高于EB组和对照组[(25.7±8.6)μg/m L vs(16.4±6.9)μg/m L vs(13.7±5.2)μg/m L],MUC5B水平明显低于EB组和对照组[(1.3±0.7)μg/m L vs(2.7±0.4)μg/m L vs(2.4±0.5)μg/m L,差异有统计学意义(P0.05);(2)EB组PGE2水平及CVA组LTC4水平明显高于其他两组,差异有统计学意义(P0.05);(3)Pearson相关性分析得出:MUC5AC水平与Eos、LTC4呈正相关(r=0.771,0.864,P0.01);MUC5B水平与PGE2呈正相关(r=0.692,P0.05)。结论 EB和CVA患者诱导痰黏蛋白水平存在明显差异,炎症因子比例失衡与嗜酸粒细胞比例不同可能是引起EB缺乏黏液高分泌的机制。     

芹黄素对香烟提取物诱导人支气管上皮NCI-H292细胞黏蛋白5AC高表达的抑制作用

目的:研究芹黄素对香烟提取物诱导人支气管上皮细胞(NCI-H292细胞)黏蛋白5AC(MUC5AC)高表达的抑制作用。方法:以香烟提取物(50 mg/ml)培养人支气管上皮NCI-H292细胞6 h以复制细胞黏蛋白高表达模型。NCI-H292细胞随机均分为正常对照(常规培养液)组、模型(常规培养液)组、芹黄素对照(芹黄素作用于正常细胞,10μg/ml)组、芹黄素(芹黄素作用于模型细胞,10μg/ml)组、二甲基硫脲(DMTU)对照(DMTU作用于正常细胞,100 ng/ml)组、DMTU(DMTU作用于模型细胞,100 ng/ml)组。各对照组均以相应药物培养细胞30 min,模型组与用药组均以相应药物培养细胞30 min后再以香烟提取物(50 mg/ml)培养6 h。检测细胞氧化应激活性氧(ROS)含量;采用Western blot法检测磷酸化表皮生长因子受体(p-EGFR)、磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK)蛋白表达水平;采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)法检测MUC5AC m RNA表达水平;采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测MUC5AC蛋白表达水平。结果:与正常对照组比较,模型组细胞ROS含量增加,p-EGFR、p-ERK蛋白表达增强,MUC5AC m RNA、蛋白表达增强,差异有统计学意义(P<0.01);与模型组比较,芹黄素组与DMTU组细胞ROS含量减少,p-EGFR、p-ERK蛋白表达减弱,MUC5AC m RNA、蛋白表达减弱,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:芹黄素可抑制NCI-H292细胞ROS的生成、EGFR和ERK的磷酸化,进而抑制气道MUC5AC m RNA和蛋白的过表达。     

泰利霉素经NF-κB途径抑制铜绿假单胞菌诱导MUC5AC表达

目的研究大环内酯类抗生素泰利霉素（TEL）对铜绿假单胞菌（PA）诱导气道上皮细胞表达产黏蛋白MUC5AC的影响,并探讨其可能的分子机制。方法体外培养NCI—H292细胞,用10mg／LTEL孵育6h预处理细胞,随后加人不同浓度PA孵育3-9h,分别采用ELISA和实时定量PCR检测MUC5AC蛋白和mRNA的表达情况,ELISA检测NCI—H292细胞内核因子KB（NF-κB）的DNA结合活性。结果NCI—H292细胞经PA感染后6h后,MUC5AC分泌水平随PA浓度的增高而增加。此外,PA感染3h后即可检测出MUC5ACmRNA的表达,6h后达到高峰。NCI—H292细胞经TEL处理后,能显著抑制PA诱导的MUC5ACmRNA表达。PA感染NCI—H292细胞后,能促进NF-κBp50／p65亚基核转位,呈一定的时间依赖性,TEL处理后,NF-κB转录活性显著降低。结论TEL能抑制PA诱导的黏蛋白表达,其机制可能与抑制NF-κBDNA结合活性有关。     

环状RNA CD151对过敏性鼻炎大鼠鼻黏膜上皮细胞炎症的影响

目的 探究环状RNA CD151（circ CD151）通过调控微小RNA-30a-5p（miR-30a-5p）对过敏性鼻炎大鼠鼻黏膜上皮细胞炎症和黏液产生的影响。方法 将SD大鼠随机分为对照组和模型组,其中对照组大鼠腹腔注射和滴鼻0.9%氯化钠溶液;模型组大鼠腹腔注射和鼻腔滴入卵清白蛋白构建过敏性鼻炎大鼠模型,并制备大鼠鼻黏膜上皮细胞,并将大鼠鼻黏膜上皮细胞分为6组:对照组,模型组,pc-NC组（转染pc-NC）,pc-circ CD151组（转染pccirc CD151）、si-NC（转染si-NC）组和si-circ CD151（转染si-circ CD151）组。用酶联免疫吸附（ELISA）法检测粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）、嗜酸性粒细胞趋化因子（Eotaxin）、干扰素-γ（IFN-γ）、白细胞介素12 （IL-12）以及黏蛋白5AC（MUC5AC）、黏蛋白5B（MUC5B）的含量;用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（qRT-PCR）法检测细胞中miR-30a-5p的表达;用双荧光素酶报告实验验证circ CD151与miR-30a-5p的结合关系。结果 对照组...     

α?硫辛酸对白细胞介素 1β诱导的软骨细胞损伤的保护作用

目的 探讨α-硫辛酸(ALA)调控微小RNA-877(miR-877)/N-myc下游调节基因2(NDRG2)分子轴对白细胞介素1β(IL-1β)诱导的软骨细胞损伤的影响及其机制.方法 本研究于2019年1月至2019年7月在南充市中心医院风湿免疫科实验室完成.分离培养SD大鼠膝关节软骨细胞,按照随机数字表法分为对照(Con)组、IL-1β组、IL-1β+ALA-低剂量(L)组、IL-1β+ALA-中剂量(M)组、IL-1β+ALA-高剂量(H)组、IL-1β+miRNA抑制物阴性对照(anti-miR-NC)组、IL-1β+miR-877抑制物(anti-miR-877)组、IL-1β+空载体质粒(pcDNA)组和IL-1β+NDRG2过表达质粒(pcDNA-NDRG2)组、IL-1β+ALA+miRNA模拟物阴性对照(miR-NC)组和IL-1β+ALA+miR-877组.流式细胞术检测细胞凋亡,酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒检测白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、干扰素γ(IFN-γ)的分泌量,蛋白质印记(western blot)法检测NDRG2蛋白的表达水平,实时定量PCR(qRT-PCR)检测miR-877和NDRG2 mRNA的表达水平.双荧光素酶报告基因实验和western blot检测miR-877和NDRG2的靶向调控关系.结果 与Con组比较,IL-1β组软骨细胞IL-6[(3.27±0.31)比(1.06±0.09)ng/L]、TNF-α、IFN-γ的分泌增加,miR-877[(2.65±0.24)比(1.02±0.09)]表达升高,NDRG2[(0.21±0.03)比(0.69±0.06)]表达降低,细胞凋亡率[(0.69±0.06)比(6.24±0.63)％]升高(均P<0.05);与IL-1β组比较,IL-1β+ALA-L组、IL-1β+ALA-M组、IL-1β+ALA-H组软骨细胞IL-6[(2.91±0.25),(2.33±0.23),(1.65±0.16)比(3.27±0.31)ng/L]、TNF-α、IFN-γ的分泌降低,miR-877[(2.21±0.19),(1.96±0.17),(1.43±0.14)比(2.65±0.24)]的表达降低,NDRG2[(0.34±0.03),(0.46±0.04),(0.58±0.05)比(0.21±0.03)]表达升高,细胞凋亡率[(20.13±2.12),(16.32±1.63),(11.04±1.15)比(27.62±2.43)]％降低,差异有统计学意义(P<0.05);与IL-1β+anti-miR-NC组比较,IL-1β+anti-miR-877组软骨细胞IL-6[(1.38±0.14)比(3.34±0.33)ng/L]、TNF-α、IFN-γ的分泌降低,细胞凋亡率[(12.54±1.25)比(27.14±2.73)]％降低,差异有统计学意义(P<0.05);与IL-1β+pcDNA组比较,IL-1β+pcDNA-NDRG2组软骨细胞IL-6[(1.43±0.15)比(3.47±0.34)ng/L]、TNF-α、IFN-γ的分泌降低,细胞凋亡率[(13.55±1.35)比(28.14±2.83)]％降低,差异有统计学意义(P<0.05);与IL-1β+ALA+miR-NC组相比,IL-1β+ALA+miR-877组软骨细胞IL-6[(3.01±0.29)比(1.42±0.13)ng/L]、TNF-α、IFN-γ的分泌升高,细胞凋亡率[(25.47±2.53)比(11.68±1.87)]％增加,差异有统计学意义(P<0.05).结论 α-硫辛酸能够减轻IL-1β诱导的软骨细胞损伤,其机制与调控miR-877/NDRG2通路有关.     

大黄素上调微小 RNA-206减轻缺氧诱导的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞损伤

目的 探讨大黄素对缺氧诱导的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤PC12细胞氧化应激、炎症和凋亡的作用机制.方法 2018年6月至2019年6月,用神经生长因子(NGF)处理构建缺氧PC12细胞;大黄素Emodin(2、4、6μg/mL)处理缺氧PC12细胞,筛选最适浓度4μg/mL;用脂质体法将微小RNA阴性对照(miR-con)、微小RNA-206(miR-206)、4μg/mL Emodin+抗-miR-con(anti-miR-con)、4μg/mL Emodin+抗-miR-206(anti-miR-206)转染至缺氧PC12细胞;流式细胞术、蛋白免疫印迹(Western blotting)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测细胞的凋亡、裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Cleaved-caspase-3)蛋白表达、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、活性氧(ROS)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、人白细胞介素-1β(IL-1β)、miR-206的含量.结果 与缺氧PC12细胞(37.25±3.75)％相比,大黄素呈浓度依赖性抑制缺氧诱导的PC12细胞凋亡[(30.13±3.15)％、(13.43±1.35)％、(10.36±1.03)％];与缺氧PC12细胞相比,大黄素(4μg/mL)治疗后,细胞氧化应激因子MDA[(1.01±0.10)nmol/mg比(2.56±0.26)nmol/mg]、ROS[(186.28±18.75)比(400.25±40.07)]的表达均明显降低,SOD[(11.75±1.18)U/mg比(2.43±0.24)U/mg]的表达明显升高,炎性因子TNF-α[(4.89±0.50)ng/g比(28.76±2.88)ng/g]、IL-1β[(8.22±0.82)ng/g比(15.72±1.58)ng/g]的表达明显降低,miR-206的表达也出现明显升高(P<0.05).与hypoxia+miR-con组相比,过表达miR-206后,缺氧诱导PC12细胞中MDA[(2.58±0.27)nmol/mg比(1.01±0.10)nmol/mg]、ROS[(196.32±19.65)比(405.76±40.53)]、TNF-α[(4.56±0.50)ng/g比(28.01±2.75)ng/g]、IL-1β[(8.76±0.88)ng/g比(15.50±1.58)ng/g]的表达均显著降低,SOD[(12.04±0.12)U/mg比(2.55±2.56)U/mg]的表达显著升高,细胞凋亡率[(8.96±0.90)％比(36.25±3.63)％]显著降低,而抑制miR-206能够减弱大黄素对缺氧PC12细胞的保护作用.结论 大黄素可抑制缺氧诱导的PC12细胞凋亡,减轻细胞的氧化应激和炎性反应,其机制可能与上调miR-206相关,将可为大黄素的临床应用提供理论支持.     

丙酸氟替卡松对鼻黏膜上皮细胞表达的天然免疫分子的免疫调节作用

目的检测丙酸氟替卡松对人鼻黏膜上皮细胞表达天然免疫分子的影响。方法 采用丙酸氟替卡松和/或聚肌胞苷酸(Polyinosinic:polycytidylic acid,Poly I:C)、细菌脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)等刺激离体培养的鼻黏膜上皮细胞后,通过实时定量PCR检测Toll样受体(Toll like receptor,TLR)的表达,采用酶联免疫吸附试验检测细胞培养上清中血清淀粉样蛋白A(Serum amyloidA,SAA)、骨桥蛋白(Osteopontin,OPN)等的表达水平。结果丙酸氟替卡松单独刺激能够增加鼻黏膜上皮细胞表达TLR-3 mRNA(7.5倍)和TLR-4 mRNA(4.5倍),Poly I:C单独刺激能够增加鼻黏膜上皮细胞表达TLR-3 mRNA 28.5倍,LPS单独刺激能够增加鼻黏膜上皮细胞表达TLR-4 mRNA 18.4倍,丙酸氟替卡松刺激后细胞培养上清中SAA和OPN水平也出现显著增加。丙酸氟替卡松和Poly I:C以及LPS对增加细胞培养上清中SAA和OPN水平具有协调效应。结论丙酸氟替卡松能够增强鼻黏膜上皮细胞的天然免疫反应。     

罗格列酮对内毒素诱导气道MUC5AC表达的调控

目的探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）激动剂罗格列酮对内毒素所致大鼠气道MUCSAC表达的影响及其机制。方法将36只雄性SD大鼠随机分为生理盐水对照组（A组）、罗格列酮对照组（B组）、脂多糖组（LPS组）（C组）、以及低、中、高剂量罗格列酮组（D组、E组和F组）。采用酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测支气管肺泡灌洗液（BALF）中肿瘤坏死因子-α（TNF—α）、白细胞介素-1β（IL-1β）和IL-10浓度。免疫组化染色及实时荧光定量逆转录-PCR检测气道肺组织MUC5AC蛋白及mRNA表达。结果与生理盐水对照组比较,LPS组BALF中TNF-α、IL-1β和IL-10浓度,以及气道肺组织MUC5AC蛋白和mRNA表达增加（P〈0．01）;TNF-α、IL-1β与MUC5AC mRNA表达呈正相关（r分别为0．851,0．803。P〈0．05）;IL-10浓度与MUC5AC mRNA表达呈负相关（r为-0．812,P〈0．05）。给予低、中、高剂量罗格列酮干预后,D组、E组和F组BALF中TNF—α浓度及MUC5AC蛋白、mRNA表达均逐渐降低,IL-10水平逐渐升高,各组间差异有统计学意义（P均〈0．05）。结论罗格列酮对内毒素诱导的气道黏液高分泌有拮抗作用,其具体机制可能与调节炎症反应,下调气道MUC5AC转录有关。     

辅助性T细胞9在类风湿关节炎发病中的作用探讨

目的 探讨Th9细胞及相关细胞因子在类风湿关节炎(RA)中表达的改变及可能的机制.方法 采集20例健康人(HC)和20例RA患者(RA组)的外周血,用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血清白细胞介素(IL)-9、IL-4、转化生长因子(TGF)-β和干扰素(IFN)-γ水平;流式细胞术检测Th9细胞数;实时定量PCR检测IL-9 mRNA、转录因子PU.1 mRNA,分析这些指标可能的相互关系.结果 RA组患者外周血中CD4+ IL-9+T细胞、CD4+ PU.1 +T细胞、CD4+ IL-9+ PU.1 +T细胞均缺如.细胞因子检测:IL-9水平在HC组为(1.24±0.44)×10-9 g/L,RA组为(1.33 ±0.53)×10-9 g/L(P =0.558);IL-4水平在HC组为(8.59±4.07) ×10-9 g/L,RA组为(5.95±5.73) ×10-9 g/L(P =0.101);TGF-β水平在HC组为(1238±329) μg/L,RA组(712±254) μg/L,(P=0.00);IFN-γ水平在HC组均低于检测水平,RA患者中5例IFN-γ水平升高.HC组IL-9 mRNA表达为(0.24±0.04),RA组为(0.24±0.02) (P =0.764);HC组PU.1 mRNA表达为(0.38 ±0.02),RA组(0.13±0.02) (P =0.000).结论 RA组患者外周血促Th9分化关键细胞因子水平降低.抑制其分化关键细胞因子平有所升高,导致PU.1 mRNA表达受抑,PU.1蛋白无法合成不能支持IL-9mRNA表达.RA患者外周血不存在Th9细胞分化条件,推测循环血Th9细胞可能不参与RA发病机制.     

泰利霉素经 AP-1途径抑制不可分型流感嗜血杆菌诱导的 MUC5AC表达

目的：研究大环内酯类抗生素泰利霉素（telithromycin,TEL）对不可分型流感嗜血杆菌（nontypeable haemophilus influenzae,NTHi）诱导气道上皮细胞表达黏蛋白MUC5AC的影响,并探讨其可能的分子机制。方法：体外培养NCI-H292细胞,用10mg／LTEL孵育6h预处理细胞,随后加入不同浓度NTHi孵育3～9h,分别采用ELISA和实时定量PCR检测MUC5AC蛋白和mRNA的表达情况,ELISA检测NCI-H292细胞内NF-KB和活化蛋白（Activa-torprotein-1,AP-1）DNA结合活性。结果：NT-Hi能明显诱导NCI-H292细胞产生和表达MUC5AC,并能激活NF-IcB和AP-1。而TEL处理后,能明显抑制NTHi诱导的MUC5AC蛋白和mRNA表达,并有效抑制AP-1的DNA结合活性,但对N1a-KB活性无明显影响。结论：TEL能抑制NTHi诱导的黏蛋白表达,其机制可能与抑制AP-1DNA结合活性有关。     

Fine PM induce airway MUC5AC expression through the autocrine effect of amphiregulin

Particulate pollution is suspected to contribute to obstructive lung diseases characterized by chronic inflammation, mucus hypersecretion and bronchial remodeling. Our aim was to study the effect of real-world particulate matter (PM) on the expression of a mucin, MUC5AC, focusing on the role of the epidermal growth factor receptor (EGFR) pathway. MUC5AC induction was studied in vivo in mice trachea and in vitro in human bronchial epithelial cells (HBEC) exposed to urban fine PM. Fine PM were able to induce MUC5AC mRNA in mice trachea after 48?h of exposure (50?μg PM/mouse), and MUC5AC mRNA and protein in HBEC after 24?h of exposure (from 5?μg PM/cm²). It was associated with the increased expression of amphiregulin (AREG), an EGFR ligand. Experiments with conditioned media (media from PM-treated cells) demonstrated the involvement of AREG on MUC5AC induction as MUC5AC induction by media from PM-treated cells was prevented in the presence of either EGFR- or AREG-neutralizing antibodies. The effect of an inhibitor of a metalloprotease involved in the AREG shedding confirmed the autocrine loop made by AREG leading to MUC5AC induction by fine PM. We also demonstrated that IL-8 pro-inflammatory cytokine induction was dependent on the same autocrine mechanisms. We demonstrate for the first time that MUC5AC expression and production is increased by short-term exposure to fine PM through an autocrine effect of AREG. Our study provides mechanistic explanations to the exacerbation of obstructive lung diseases induced by particulate pollution characterized by mucus hypersecretion and chronic inflammation.     

红景天苷对脂多糖诱导的支气管上皮细胞损伤的保护作用

目的：探讨红景天苷对脂多糖（LPS）诱导的正常人支气管上皮细胞（NHBE）损伤的保护作用及机制。方法：培养NHBE细胞,调整其细胞的密度为每毫升含有1＆#215;104个,给予不同浓度的红景天苷（3.3、10、30μg·mL-1）作用24 h,MTT检测细胞的活力,观察红景天苷在正常的情况下对人支气管上皮细胞的影响。在此基础上,以终浓度为2μg·mL-1的LPS作用NHBE细胞6 h,诱导其损伤,然后给予红景天苷24 h,MTT检测细胞活力,收集上清液,ELISA试剂盒检测炎症因子IL-6（白介素-6）、IL-1β（白介素-1β）、TNF-α（肿瘤坏死因子-α）的水平,收集细胞,用Western blot方法测定细胞中的蛋白NF-κB（核因子）、MAPK（丝裂原活化蛋白激酶）的表达。结果：在正常条件下,红景天苷对人支气管上皮细胞的活力无影响,没有损伤作用。红景天苷可明显降低培养液中IL-6、IL-1β、TNF-α的水平（P〈0.01）,降低细胞中NF-κB、MAPK的表达（P〈0.01）。结论：红景天苷可以通过降低IL-6、 IL-1β、TNF-α的水平来减轻LPS诱导的NHBE细胞的损伤,减轻炎症反应。     

Interleukin-1beta induces MUC2 and MUC5AC synthesis through cyclooxygenase-2 in NCI-H292 cells

Interleukin-1beta (IL-1beta) has been implicated in the pathogenesis of inflammatory diseases of the airway. In this study, we investigated the regulation of MUC2 and MUC5AC expression and of their regulatory mechanisms through cyclooxygenase-2 (COX-2) and prostaglandin E(2) (PGE(2)). Cells activated by IL-1beta showed increased COX-2, MUC2, and MUC5AC expressions at both the mRNA and protein levels. Mucin production was blocked by the selective COX-2 inhibitor NS398, and PGE(2) directly induced MUC2 and MUC5AC expression at both the mRNA and protein levels in a dose-dependent manner. These results suggest a role for PGE(2) in IL-1beta-induced mucin synthesis in NCI-H292 cells. To investigate the roles of molecules upstream of COX-2 in mucin regulation, we examined the role of mitogen-activated protein kinases (MAPKs). Cells activated by IL-1beta showed increased extracellular signal-regulated kinase (ERK)1/2 and p38 phosphorylation, and IL-1beta-induced MUC2 and MUC5AC production was blocked by the ERK pathway inhibitor PD98059 or the p38 inhibitor SB203580. The inhibition of both MAPKs reduced IL-1beta-induced COX-2 expression and PGE(2) synthesis. Furthermore, the addition of PGE(2) to cells overcame the inhibitory effects of both MAPK inhibitors in IL-1beta-induced mucin production. These results indicate that in human pulmonary epithelial cells, IL-1beta activates ERK or p38 to induce COX-2 production, which in turn induces MUC2 and MUC5AC production.     

Fas抗体对体外培养的气道上皮细胞凋亡增殖的影响

目的观察Fas抗体、白细胞介素-1β(IL-1β)对体外培养的气道上皮细胞(AEC)凋亡、增殖的影响。方法分离培养兔的AEC,加入IL-1β与不同浓度的Fas抗体共同孵育,以流式细胞术和末端脱氧核苷酸转移酶介导脱氧三磷酸核苷缺口标记技术(TUNEL)法检测AEC凋亡的变化,以免疫细胞化学法检测AEC增殖细胞核抗原(PCNA)的表达程度。结果随Fas抗体浓度(500,1000ng/ml)增加,PCNA表达阳性率逐渐增高,分别为(49.7±6.7)%和(57.0±1.9)%,IL-1β组和IL-1β+Fas抗体(500ng/ml)组PCNA表达阳性率为(72.2±5.9)%和(44.6±8.0)%,以上各实验组与对照组表达阳性率[(36.5±2.1)%]比较,差异均有统计学意义(P<0.05),各加Fas抗体组与单加IL-1β组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论Fas抗体能够有效地诱导正常和炎症状态下原代AEC发生凋亡,IL-1β能有效地增强AEC的增殖作用,Fas抗体可以有效抑制IL-1β所致AEC的增殖作用,可能对抑制气道炎症和气道重塑有积极作用。