荨麻青霉对莪术醇的微生物转化

目的使用荨麻青霉(IFFI 04015,Penicillium urticae)对莪术醇进行微生物转化研究。方法采用一级发酵培养的方法对菌体进行发酵培养,并在此发酵培养液中对莪术醇进行微生物转化,通过硅胶柱色谱和制备型HPLC等方法从其发酵培养液中分离得到2个转化产物,利用光谱学方法对其进行结构鉴定。结果2个化合物的结构分别鉴定为3-α-羟基莪术醇(1)和11-R-12-羟基莪术醇(2)。结论化合物1为未见文献报道的新化合物,化合物2为首次通过该真菌对莪术醇生物转化得到。     

莪术醇亚微乳剂含量及有关物质测定方法的建立

目的:建立莪术醇亚微乳剂中莪术醇及有关物质的毛细管气相色谱测定方法.方法:采用气相色谱方法,HP-5柱(30.0 m×0.32 mm,0.25 μm);进样体积2μL,分流比10:1,进样口温度250℃;柱温(炉温)180℃,柱流量1.0 mL·min-1;检测器FID,检测器温度250℃,载气为氮气(N2).结果:莪术醇与相关杂质及降解产物均分离良好;空白乳剂对测定无干扰.莪术醇在0.01～2.0 g·L-1范围内具有良好的线性关系(r=1.0000);平均回收率为100.79%(RSD为1.47%).结论:该方法用于莪术醇亚微乳剂的质量评价,操作简便,定量准确,专属性强,灵敏度高,重现性好.     

雅致小克银汉霉AS3.2028对香紫苏醇的初次及二次羟基化修饰

目的应用生物转化的方式对香紫苏醇的反式十氢萘环进行羟基化修饰。方法选择经典的药物代谢模型真菌雅致小克银汉霉AS3.2028对香紫苏醇进行一次和二次转化,转化产物经过硅胶柱层析及葡聚糖凝胶Sephadex LH20分离纯化,进而采用MS、1D/2D NMR技术鉴定转化产物结构。结果与结论雅致小克银汉霉AS3.2028对香紫苏醇初级转化,得到4个转化产物,分别为2α-OH香紫苏醇、3β-OH香紫苏醇、18-OH香紫苏醇和19-OH香紫苏醇。继而首次以3β-OH香紫苏醇为底物再次进行羟基化,得到3β,6α-OH香紫苏醇及3-羰基香紫苏醇,其中3β,6α-OH香紫苏醇为未见报道的新化合物。     

耐酸青霉菌Penicillium purpurogenum OUCMDZ-019的次级代谢产物研究

目的 对耐酸产紫青霉OUCMDZ-019的次级代谢产物进行化学成分和生物活性研究,发现潜力结构资源。方法 对菌株进行规模发酵得到粗提物,利用常压柱层析、凝胶分子筛以及半制备高效液相等方法进行次级代谢产物的分离纯化;利用现代波谱学方法(核磁共振1D NMR、2D NMR、圆二色谱ECD、旋光等)对化合物进行结构鉴定,并评价其抗病毒生物活性。结果 分离鉴定得到4个单体化合物,(-)-Mitorubrinol (1)、6″-Hydroxy-(R)-mitorubrinic acid (2)、(-)-Mitorubrinic acid (3)、Purpurquinone D (4)。结论 从耐酸真菌产紫青霉OUCMDZ-019的次级代谢产物中分离鉴定得到了化合物1~4,均属于嗜氮酮类化合物,研究获得规模量产化合物3,为后续药物的结构衍生打下基础。     

莪术单煎及与三棱合煎后挥发油中有效成分煎出率的比较研究

目的:研究莪术与三棱配伍前后莪术挥发油中4种有效成分的煎出率变化,为揭示莪术与三棱配伍的作用机制提供参考。方法:采用高效液相色谱法同时测定莪术单煎及与三棱合煎后挥发油中4种有效成分(莪术二酮、莪术醇、吉马酮、β-榄香烯)的含量,并对各成分的煎出率进行比较。结果:与莪术单煎比较,合煎后挥发油中莪术二酮、莪术醇、吉马酮的煎出量差异具有统计学意义(P<0.05),β-榄香烯的煎出率差异无统计学意义(P>0.05)。结论:莪术与三棱配伍合煎后可有效增加其挥发油中有效成分莪术二酮、莪术醇和吉马酮的溶出,推测此可能为二者配伍后药效增强的原因。     

微紫青霉中的化学成分研究

目的：研究微紫青霉代谢产物对稻瘟霉分生孢子和菌丝体的生长抑制作用。方法：通过理化性质和光谱数据的分析鉴定结构，利用稻瘟霉模型测试活性。结果与结论：从微紫青霉代谢产物中分离得到了4个化合物，分别鉴定为3-(1-甲基乙基)-6-(1-甲基丙基)-2，5-哌嗪二酮（Ⅰ）、（3S，8аS）-3-甲基-1，2，3，4，6，7，8，8а-八氢吡咯骈[1，2а]-吡嗪-1，4-二酮（Ⅱ）、二十二烷酸（Ⅲ）、2-甲酰基-3，5-二羟基-4-甲基苯甲酸（Ⅳ）。上述4个化合物均对稻瘟霉分生孢子和菌丝体的生长有一定的抑制作用。     

黑曲霉AS 3.739对莪术二酮的羟基化修饰

目的筛选对莪术二酮具有羟基化修饰作用的菌株。方法通过二级发酵法培养菌株,应用TLC和HPLC法检测转化结果 ,通过硅胶柱层析法分离纯化羟基化产物,应用光谱学方法鉴定产物的化学结构。结果从数十株丝状真菌筛选得到黑曲霉AS 3.739对莪术二酮具有羟基化修饰作用,并分离、纯化和鉴定了2种主要产物1、2。结论用黑曲霉(Aspergillus niger)AS3.739对莪术二酮实现了羟基化修饰,2种产物分别鉴定为2β-羟基莪术二酮(1)和3α-羟基莪术二酮(2),其中主产物2为首次用曲霉(Aspergillus)菌属转化获得。     

短刺小克银汉霉AS 3.970对川丁特罗的微生物转化

目的对川丁特罗进行微生物转化研究。方法利用短刺小克银汉霉Cunninghamella.blakesleana AS 3.970对川丁特罗进行微生物转化,通过柱层析、液相色谱-质谱及核磁技术对川丁特罗微生物转化产物进行分离与鉴定。结果短刺小克银汉霉Cunninghamella.blakesleana AS 3.970转化川丁特罗累计获得三个转化产物,分别是川丁特罗芳香羟胺代谢物、川丁特罗叔丁基羟基取代代谢物和1-羧基川丁特罗。结论通过微生物转化技术可以对川丁特罗进行微生物结构修饰。     

产紫青霉G59的两株突变株新产抗肿瘤活性产物研究

目的阐明无活性真菌产紫青霉G59的两株抗肿瘤活性突变株2-2-3和PDN-f-2新产活性产物。方法采用与原始菌样品直接对照和活性跟踪分离的实验模式,利用液液萃取、柱层析、重结晶等方法分离纯化活性产物。利用现代波谱技术鉴定化合物结构。用MTT法测试样品对K562细胞的抑制活性。结果从2-2-3和PDN-f-2发酵物中分别分离鉴定了ergone（1）和citrinin（2）。化合物1和2抑制K562细胞的IC50分别为7.4和48.0μg/ml。结论化合物1和2均为产紫青霉产物中未见报道的G59的两株突变株新产活性产物。将无活性真菌野生株转化成活性突变株并研究其新产活性产物,将有可能成为拓展药源真菌活性菌株新资源的很好途径。     

黑曲霉(AS 3.739)对莪术醇的生物转化及条件优化

目的以莪术醇为底物,用黑曲霉(AS 3.739)对莪术醇进行生物转化,并对种子培养基进行优化。方法从接菌量、是否加入氮源、种子培养时间以及转种后的投料时间几方面对黑曲霉的种子培养基进行优化,并从菌浓、pH值及转化率几个方面进行考察,得到优化的培养条件。结果优化后的转化条件为:加入1.8 g.L-1的酵母膏,接菌量为3%(φ),最佳种子培养时间是24 h,最佳投料时间是转种后12 h。结论采用优化后的种子培养基,黑曲霉(AS 3.739)转化莪术醇为3α羟基莪术醇(3α-hydroxy curcumol)的转化率明显增大。     

Janthinolide A-B, two new 2,5-piperazinedione derivatives from the endophytic Penicillium janthinellum isolated from the soft coral Dendronephthya sp

Two new 2,5-piperazinedione derivatives, janthinolide A and B (1-2), along with deoxymycelianamide, griseofulvin and dechlorogriseofulvin were isolated from the fermentation broths of the endophytic fungus Penicillium janthinellum isolated from a soft coral, Dendronephthya sp. Their structures were established by extensive spectroscopic data analysis.     

Microbial transformation of curcumol by Cunninghamella blakesleana

Microbial transformation of curcumol (1) by Cunninghamella blakesleana (AS 3.970) yielded six metabolites. On the basis of spectral data, their structures were elucidated as 14-hydroxy-9E curcumol (2), 10R,14-dihydroxy curcumol (3), 10S,14-epoxy curcumol (4), 10R,14-epoxy curcumol (5), 10S,14-epoxy-7,11-dehydrocurcumol (6), 10R,14-epoxy-7,11-dehydrocurcumol (7), respectively. Among them 2, 3, 6 and 7 are new compounds; 4 and 5, 6 and 7 are two pairs of epimers.     

Phytotherapeutic activity of curcumol: Isolation,GC–MS identification,and assessing potentials against acute and subchronic hyperglycemia,tactile allodynia,and hyperalgesia

Context: Curcumol has recently attracted special attention due to its potential activities in many chronic disorders. Moreover, the traditional role of turmeric [Curcuma longa L. (Zingiberaceae)] in suppression of hyperglycemia is of great interest.

Objectives: The present work explores the potential acute and subchronic antihyperglycemic, antinociceptive, and in vivo antioxidant effects of curcumol in alloxan-diabetic mice.

Materials and methods: Bio-guided fractionation, column-chromatography, and GC–MS were utilized to identify the most active compound of turmeric (curcumol). Turmeric (25, 50, and 100?mg/kg), the curcumol rich fraction (CRF) (7?mg/kg), and curcumol (20, 30, and 40?mg/kg) were assessed for their acute (6 h) and subchronic (8 d) antihyperglycemic potentials and antinociceptive effects (8 weeks) were measured, using hot-plate and tail-flick latencies and von-Frey filaments method and in vivo antioxidant effects in alloxan-diabetic mice.

Results: The most-active turmeric fraction was found to be rich in curcumol (45.5%) using GC–MS analysis method. The results proved that the highest dose levels of turmeric extract and curcumol exerted remarkable hypoglycemic activity with 41.4 and 39.3% drop in the mice glucose levels after 6 h, respectively. Curcumol (40?mg/kg) was found to be 9.4% more potent than turmeric extract (100?mg/kg) in subchronic management of diabetes. Curcumol also showed a significant improvement of peripheral nerve function as observed from the latency and tactile tests.

Discussion: The antioxidant potential of curcumol may cause its ability to ameliorate diabetes and diabetes-related complications.

Conclusions: Curcumol, a natural metabolite with a good safety-profile, showed results comparable with tramadol in reversing diabetes-induced tactile allodynia and hyperalgesia.     

莪术醇对肝星状细胞Rho-ROCK信号通路作用的实验研究

目的：研究莪术醇对肝星状细胞Rho-ROCK信号通路的作用，以此来分析莪术醇抗肝纤维化的作用机制。方法：用莪术醇孵育HSC-T6细胞48 h后用MTT法检测细胞增殖率，用免疫印迹和RT-PCR检测Rho-ROCK信号通路上关键分子RhoA和ROCK2的表达和含量。结果：RT-PCR检测发现莪术醇高、中、低浓度对Rho-ROCK信号通路中的关键分子RhoA和ROCK2mRNA的表达较模型组有抑制作用，而且这种抑制作用有明显的剂量依赖性，差异有显著性（P<0.05）；WB检测发现莪术醇高、中、低浓度对Rho-ROCK信号通路中的关键分子RhoA和ROCK2的表达较模型组有抑制作用，而且这种抑制作用有明显的剂量依赖性，差异有显著性（P<0.05）。结论：莪术醇可以抑制Rho-ROCK信号通路的活动，达到抗肝纤维化的效果。     

莪术醇的分离鉴定及体外抗肿瘤作用机制研究

目的探讨莪术醇的分离鉴定方法及体外抗肿癌作用机制。方法莪术油减压蒸馏,收集重结晶得莪术醇,采用油醚-乙酸乙酯条带显色;体外培养宫颈癌细胞、肺癌细胞,采用四氮唑盐(MTT)法检测宫颈癌细胞、肺癌细胞的增殖情况;试验分为模型组、莪术醇组和莪术油组,采用流式细胞仪检测凋亡率,采用蛋白质印迹法检测肿瘤细胞Ki67和PCNA蛋白表达水平。结果减压蒸馏可分离得到莪术醇,其纯度为89.57%。莪术醇及莪术油均可有效抑制宫颈癌细胞、肺癌细胞的增殖,且莪术醇对宫颈癌细胞、肺癌细胞的抑制率高于莪术油。与模型组相比,莪术醇组和莪术油组细胞凋亡率、半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)及B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)相关X蛋白(Bax)表达水平显著升高,Ki67,PCNA及Bcl-2蛋白表达水平显著降低(P<0.05);与莪术油组相比,莪术醇组细胞凋亡率、Caspase-3及Bax蛋白表达水平显著升高,Ki67,PCNA及Bcl-2蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。结论莪术油通过减压蒸馏分离出的莪术醇,可有效抑制肿瘤细胞增殖并促进其凋亡,且莪术醇效果显著优于莪术油。     

温莪术挥发油中莪术醇的含量测定

本文报告用薄层层析-红外光谱法测定莪术挥发油中莪术醇的含量。以石油醚-丙酮(96:4)为展开剂,在硅胶G板上将挥发油中极性较小的干扰物质层析至高R_f值区而将莪术醇留在原点附近,然后无需标记出莪术醇的斑点,根据经实验求出的莪术醇的R_f值直接将薄层上莪术醇部分刮下洗脱,再以红外光谱中莪术醇分子中亚乙烯基的吸收峰(面外弯曲振动890 cm^-1,11.24μm)为定量谱带,用四氯化碳为溶剂,以红外光谱法测定莪术醇的含量。由于亚乙烯基谱带的专属性较强,除干扰组分外,其他组分与莪术醇无需严格分离。本法操作简便,结果稳定,统计结果表明,8次测定的平均相对偏差小于2%。     

海绵共生真菌Penicillium janthinellum LZDX-32-1抗乙型肝炎病毒次生代谢产物研究

目的 探究Xest,ospongia testudinaria海绵共生真菌Penicillium janthinellum LZDX-32-1的次生代谢产物及其抗乙型肝炎病毒(HBV)活性。方法 对菌株进行发酵,运用现代色谱学方法(硅胶柱色谱、凝胶柱色谱、C-18反相柱色谱,以及半制备HPLC)对发酵产物进行分离,运用现代波谱学技术(核磁共振、质谱、紫外等),结合文献数据对比鉴定了化合物的结构;采用HepG2.2.15细胞模型的HBV DNA 水平用实时定量 PCR测定评价化合物的抗HBV活性。结果 分离鉴定了11个化合物,分别为：penialidin C (1)、penialidin A(2)、6-(2,4-dihydroxy-6-methylphenyl)-4-hydroxy-2-pyrone(3)、trans-3,4-dihydro-3,4,8-trihydroxynaphthalen-1(2H)-one(4)、epi-?isoshinanolone (5)、 pyrenocine B(6)、FK17-P2b1(7)、cordyol C(8)、diorcinol(9)、p-acetamidobenzoic acid(10)、2-(2-oxoindolin-3-yl)-acetamide(11)。 活性评价结果报道化合物5显示有抗HBV活性。结论 Xestospongia testudinaria海绵共生真菌 Penicillium janthinellum LZDX-32-1能够代谢产生具有抗HBV活性的次生代谢产物。     

反相高效液相色谱法测定莪术油注射液中莪术醇和牛儿酮的含量

目的利用反相高效液相色谱法同时测定莪术油注射液中莪术醇和牛儿酮含量。方法采用AgilentTC ODS色谱柱(4.6 mm×15 cm,5μm),流动相A:乙腈-甲醇-水-磷酸(550∶225∶225∶1);流动相B:甲醇,梯度洗脱,流速1.0 mL/min,柱温:35℃,检测波长:210 nm。结果在该条件下,莪术醇、牛儿酮浓度分别在0.940 6~94.06μg/mL和1.333~133.2μg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系;回收率分别为100.70%和100.37%,RSD分别为0.86%和0.92%。结论本法可用于同时测定莪术油注射液中莪术醇和牛儿酮的含量,方法简便、结果准确。     

Enzymatic preparation of ginsenosides Rg2, Rh1, and F1 from protopanaxatriol-type ginseng saponin mixture

During investigations on the hydrolysis of a protopanaxatriol-type saponin mixture by various glycoside hydrolases, it was found that two minor saponins, ginsenosides Rg 2 and Rh 1, were formed in high yields by crude beta-galactosidase from Aspergillus oryzae and crude lactase from Penicillium sp., respectively. Moreover, a crude preparation of naringinase from Penicillium decumbens readily hydrolyzed a protopanaxatriol-type saponin mixture to give an intestinal bacterial metabolite, ginsenoside F 1 as the main product. A crude preparation of hesperidinase from Penicillium sp. selectively hydrolyzed ginsenoside Re into ginsenoside Rg 1. This is the first report on the enzymatic preparation of minor saponins, ginsenosides Rg 2 and Rh 1, and of an intestinal bacterial metabolite, ginsenoside F 1, with a high efficiency from a protopanaxatriol-type saponin mixture.