2种海参胶原蛋白多肽对血管内皮细胞保护作用的比较研究

目的 观察革皮氏海参和北极刺参胶原蛋白多肽对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)损伤的血管内皮细胞的保护作用,探讨其保护内皮细胞的作用机制。方法 采用ox-LDL处理血管内皮细胞(ECV304)建立氧化应激损伤模型,以MTT法测定ECV304的增殖活性,硫代巴比妥酸法测定细胞内的丙二醛(MDA)含量,比色法测定一氧化氮合酶(NOS)活力和一氧化氮(NO)释放量,Hoechst33258染色法检测细胞的凋亡,Western blotting法检测caspase-3蛋白的表达。结果 经2种海参胶原蛋白多肽预处理后,ECV304细胞的增殖率显著升高 (P<0.05,P<0.01),细胞凋亡比率和MDA含量显著降低(P<0.05,P<0.01),细胞NOS活力和NO释放量均显著提高 (P<0.05,P<0.01),凋亡蛋白caspase-3的表达量显著降低。结论 2种海参胶原蛋白多肽均能有效保护脂质过氧化物损伤的血管内皮细胞,其中北极刺参胶原蛋白多肽在抑制细胞凋亡和提高NOS活性方面效果更突出,可能与其氨基酸组成有关。     

川芎嗪对脂多糖诱导的血管内皮细胞损伤的影响

目的探讨川芎嗪(tetramethylpyrazine,TMP)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导引起的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)损伤的保护作用。方法以人脐静脉内皮细胞为实验对象,MTT法检测细胞活力,比色法测定一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)活性,硝酸还原酶法测上清液一氧化氮(nitric oxide,NO)含量,荧光法测定胞内NO及ROS水平,流式细胞仪法测定细胞凋亡与周期。结果川芎嗪与脂多糖同内皮细胞孵育后没有引起细胞活力的明显改变,排除了实验模型中药物直接细胞毒作用。脂多糖可以抑制细胞NOS活性(P<0.05)及胞内外NO含量(P<0.05),增加胞内ROS水平(P<0.01),促进细胞凋亡(P<0.05),抑制正常细胞周期的进程(P<0.05),而川芎嗪可以恢复脂多糖所致的上述效应,并具有一定的浓度依赖性。结论川芎嗪可以通过有效抑制脂多糖诱导的HUVEC NO、ROS水平改变所引起的细胞凋亡,从而起到内皮细胞损伤的保护作用。     

桂哌齐特拮抗氧化低密度脂蛋白对人脐静脉内皮细胞的损伤

目的研究桂哌齐特对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)损伤人脐静脉内皮细胞系ECV304的保护作用。方法传代培养ECV304细胞,随机分为空白对照组、模型组、桂哌齐特(200mg·L~(-1)和400mg·L~(-1))组,与ox-LDL共同孵育24h制模,观察培养上清液中一氧化氮(NO)与丙二醛(MDA)含量的变化,测定Fura-2/AM负载后的内皮细胞的游离静息钙浓度([Ca~(2+)]_i)。结果 ox-LDL诱导的模型组上清液中NO的浓度明显降低,MDA含量显著升高(均P<0.01)。桂哌齐特组NO浓度增加(P<0.01),MDA含量降低均(P<0.05)。与空白对照组相比,模型组的[Ca~(2+)]_i显著升高,桂哌齐特组能降低损伤导致的[Ca~(2+)]_i升高(均P<0.01)。结论桂哌齐特能拮抗ox-LDL对人脐静脉内皮细胞的损伤作用。     

高甘油三酯血清对人脐静脉内皮细胞的损伤作用

目的:研究单纯高甘油三酯血清(HTGBS)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的损伤作用。方法:体外培养HUVEC,观察不同浓度的HTGBS对血管内皮细胞活力(MTT法测吸光度A值)、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮合酶(NOS)活性,丙二醛(MDA)和一氧化氮(NO)含量的影响。运用WesternBlot和酶联免疫吸附测定法(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,ELISA)检测各组细胞中血红素氧化酶-1(HO-1)蛋白的表达和细胞培养上清液中碳氧血红蛋白(COHb)的含量。结果:5%浓度的HTGBS对血管内皮细胞有明显的损伤作用,显著降低细胞活力、NO含量和SOD、NOS活性(P<0.01),显著升高血管内皮细胞中LDH、iNOS活性和MDA含量(P<0.01),并且5%HTGBS显著诱导细胞HO-1蛋白的表达并增加细胞培养液中CO的生成量(P<0.01)。结论:HTGBS体外诱导HUVEC氧化损伤,使细胞活力和抗氧化能力显著降低,增加其通透性及脂质过氧化程度,影响内皮细胞分泌功能并能诱导HO-1蛋白表达代偿性升高。     

卡托普利对尼古丁所致大鼠血管内皮功能损伤的保护作用

目的:探讨卡托普利对尼古丁损伤大鼠肠系膜动脉内皮依赖性舒张功能的保护作用及其机制。方法:将30只大鼠分为3组,即正常对照组、尼古丁损伤组(2mg·kg-1)、卡托普利组(尼古丁2mg·kg-1+卡托普利3mg·kg-1),4周后检测各组肠系膜动脉环血管舒张率及血清一氧化氮(NO)含量,一氧化氮合成酶(NOS)、超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果:尼古丁使肠系膜动脉环血管舒张率明显降低,并伴随血清NO含量及NOS、SOD活性的明显下降(P<0.01或P<0.05);而卡托普利可升高血管舒张率,并且抑制了尼古丁诱导的NO含量及NOS、SOD活性的下降(P<0.01)。结论:卡托普利对尼古丁所致的血管内皮功能损伤具有明显保护作用,该作用可能与其抗氧化、促进内皮细胞合成、释放NO有关。     

栀子苷对氧化应激损伤血管内皮细胞的保护作用

目的研究栀子苷对体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)氧化损伤的保护作用。方法采用过氧化氢(Hy-drogen peroxide,H2O2)建立体外培养的HUVEC细胞氧化应激损伤模型。将细胞分为正常对照组、H2O2氧化损伤组、H2O2加栀子苷低、中、高剂量组,其中后3组给予栀子苷预培养24h后加入400μmol.L-1H2O2,然后继续培养12h。MTT法检测细胞存活率;检测各组细胞内超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、一氧化氮合酶(NOS)水平和培养液中一氧化氮(NO)水平;检测细胞内活性氧簇(ROS)水平;用流式细胞仪检测细胞凋亡及周期改变。结果栀子苷能明显提高H2O2损伤的内皮细胞的存活率,提高细胞内SOD、GSH-Px、NOS活性,使培养液中NO含量增加,降低细胞内ROS水平,减少H2O2诱导的细胞凋亡率,恢复血管内皮细胞增殖。结论栀子苷具有较强的抗氧化能力及内皮细胞保护作用,可减轻血管内皮细胞的氧化损伤。     

淫羊藿苷对过氧化氢诱导的血管内皮细胞损伤的保护作用

目的研究淫羊藿苷对过氧化氢所致血管内皮细胞损伤的影响。方法体外培养血管内皮细胞,淫羊藿苷预处理24h后,采用过氧化氢诱导氧化损伤模型,MTT法测定细胞活性,测定细胞培养液中乳酸脱氢酶（LDH）的释放、细胞中丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）的活力。结果淫羊藿苷能明显提高细胞存活率,增加细胞内SOD活性,降低培养液中LDH释放和细胞内MDA含量。结论淫羊藿苷对过氧化氢诱导的血管内皮细胞损伤有明显的保护作用,可能与其抗氧化有关。     

红车轴草总黄酮对H_2O_2诱导的血管内皮细胞损伤的保护作用

目的观察红车轴草总黄酮对H2O2诱导的血管内皮细胞损伤的保护作用,并探讨其可能的作用机制。方法利用体外培养的人脐静脉血管内皮细胞ECV-304,采用H2O2诱导细胞损伤模型,观察红车轴草总黄酮对H2O2所致的血管内皮细胞损伤的保护作用。MTT法检测细胞存活率、试剂盒测定细胞中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及细胞中丙二醛(MDA)的含量、乳酸脱氢酶(LDH)的漏出量;荧光法检测Caspase-3的活性;Hoechst33342及PI荧光染色法观察红车轴草总黄酮对H2O2诱导血管内皮细胞凋亡的影响;JC-1染色法检测红车轴草总黄酮对H2O2损伤血管内皮细胞线粒体膜电位的影响,检测各组细胞内ROS的表达水平。结果与空白对照组相比,H2O2损伤组细胞存活率降低、细胞内LDH,漏出量增加(P<0.001);抗氧化酶SOD、CAT、GSH-Px活性降低、MDA含量升高(P<0.01);Caspase-3活性升高(P<0.001)、ROS含量升高、线粒体膜电位降低;与模型组相比,红车轴草总黄酮各剂量组(12.5、25、50mg.L-1)及槲皮素组(30 mg.L-1)细胞存活率明显增加(P<0.01,P<0.05),红车轴草总黄酮各剂量组(12.5、25、50 mg.L-1)及槲皮素组(30 mg.L-1)均能明显降低LDH漏出量(P<0.01,P<0.05)、明显增强SOD、CAT及GSH-Px活力(P<0.01,P<0.05)、降低MDA、ROS含量及Caspase-3活性(P<0.05,P<0.01)、升高线粒体膜电位(P<0.01)。结论红车轴草总黄酮对H2O2诱导的内皮细胞损伤有明显的保护作用,其初步作用机制可能与抗自由基,减轻脂质过氧化、降低Caspase-3活性及稳定线粒体膜电位有关。     

蒺藜皂苷单体B对心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的观察蒺藜皂苷单体B(TTSMB)对大乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用。方法分离出生1～3d大鼠心肌细胞,培养72h后随机分为:正常对照组(Control)、缺氧/复氧模型组(H/R)、蒺藜皂苷组(GSTT)、蒺藜皂苷单体B(TTSMB)10、1、0.1nmol·L-1组。观察细胞形态学变化,应用MTT比色法检测细胞存活率,测定培养基中肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)释放量,超氧化物歧化酶(SOD)活性,丙二醛(MDA)含量,并采用流式细胞仪检测心肌细胞凋亡率及应用Western blot检测TTSMB对凋亡相关蛋白caspase-3的作用。结果与对照组比较,H/R组心肌细胞存活数明显减少,心肌细胞培养液中CK、LDH、AST释放量增加(P<0.01),SOD活力下降,MDA含量升高(P<0.01);与模型组比较,TTSMB10、1、0.1nmol·L-1组存活心肌细胞数明显增多(P<0.05,P<0.01),心肌细胞培养液中CK、LDH、AST含量降低,SOD活力增加、MDA含量降低(P<0.05,P<0.01),心肌细胞凋亡率明显下降,caspase-3表达亦下降。结论TTSMB可减轻心肌细胞缺氧/复氧损伤,抑制心肌细胞凋亡,具有心肌细胞保护作用,其机制与抗自由基作用有关。     

养心颗粒对急性心肌梗死犬血管内皮细胞及心肌损伤的保护作用

目的观察养心颗粒(YXG)对急性心肌梗死犬血管内皮细胞及心肌损伤的保护作用。方法采用结扎冠脉前降支的方法,复制急性心肌梗死模型。分别测定冠脉结扎前以及药后不同时间点血浆超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、内皮素(ET)、一氧化氮(NO)、P-选择素及肌酸磷酸激酶同工酶(CK-MB)的变化。采用N-BT染色法测定心肌梗死面积。结果YXG治疗组与模型组比较,血浆CK-MB、MDA、ET、P-选择素降低(P<0.05~0.01),而血浆SOD和NO升高(P<0.05~0.01),梗死面积明显缩小(P<0.01)。结论YXG对急性心肌梗死犬心肌及血管内皮细胞的损伤具有保护作用,其作用机制可能与抗氧化、改善血管内皮细胞的分泌功能及抑制血小板活化有关。     

晚期糖基化终末产物对人脐静脉内皮细胞分泌NO功能的影响

【摘要】 目的 探讨晚期糖基化终产物（AGEs）对人脐静脉内皮细胞一氧化氮分泌功能的影响。方法 培养人脐静脉内皮细胞,制备晚期糖基化终末产物（AGEs-HSA）。将体外培养的人脐静脉内皮细胞随机分为AGEs-HSA组和HSA（人血白蛋白）组, 分别用不同浓度的AGEs-HSA、HSA刺激内皮细胞24 h。然后用酶联免疫法分别测定细胞培养上清液中的NO含量、NOS活性、SOD活性和MDA含量。结果 1与HSA组相比,AGEs-HSA组在浓度为100、200、400 mg/L 时能够明显抑制内皮细胞NO的产生和NOS的活性,并呈浓度依赖性（P <0.05）。2与HSA组相比,AGEs-HSA组在浓度为25、50、100、200、400 mg/L 时均能够明显抑制内皮细胞SOD的活性和促进MDA含量的增加,并呈浓度依赖性（P <0.05）。3 AGEs-HSA组中在AGEs-HSA刺激浓度为400 mg/L时, NO浓度和NOS活性、SOD活性呈正相关（P <0.01）,而与MDA含量呈负相关（P <0.01）。NOS的活性与SOD活性呈正相关（P <0.01）,与MDA含量呈负相关（P <0.01）。结论 晚期糖基化终末产物能够抑制人脐静脉内皮细胞NO的分泌。其机制之一可能是AGEs介导内皮细胞发生氧化损伤致使NOS活性降低进而导致内皮细胞NO分泌下降。      

4种海参多肽抗氧化活性的比较研究

目的比较大西洋海参(Holothuria coluber Semper)、东海海参(Acaudina mobpadioides Semper)、刺参(Apostichopus japonicus)和加州拟刺参(Parastichopus californicus)这4种海参多肽的抗氧化活性。方法经酶解、超滤得到海参多肽,通过其对DPPH.、.OH和O2-.的清除效率来比较4种海参多肽的抗氧化活性。结果与结论4种海参多肽对自由基的清除能力总体上均随样品质量浓度的增加而增强,但同一种海参多肽对3种自由基的清除能力各不相同。大西洋海参多肽、刺参多肽和加州拟刺参多肽分别对.OH、DPPH.和O2-.的清除能力最强。此外,4种海参多肽中含有的主要氨基酸均为甘氨酸和丙氨酸。     

大黄酚对铅中毒小鼠学习记忆的改善作用及其机制研究

目的研究大黄酚对铅中毒小鼠学习记忆障碍的改善作用,探讨其可能的作用机制。方法采用连续8 d腹腔注射7 mg.kg-1醋酸铅造成铅中毒小鼠模型,应用避暗实验、水迷宫实验,观察腹腔注射大黄酚(10.0、1.0、0.1 mg.kg-1)14 d对铅中毒模型小鼠记忆障碍的改善作用,大黄酚治疗14 d后测定小鼠血铅、脑铅及脑组织中MDA含量SOD,GSH-Px活力,一氧化氮(NO)含量及一氧化氮合酶(NOS)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的活性。结果连续8 d腹腔注射7 mg.kg-1醋酸铅造成铅中毒小鼠学习记忆障碍,使小鼠脑铅、血铅升高,导致小鼠脑组织内SOD和GSH-Px活性降低,使小鼠脑组织内MDA含量增加,小鼠脑组织内NO含量增加,NOS和iNOS活性升高;连续ip大黄酚14d治疗后,可不同程度改善小鼠铅中毒造成的学习记忆障碍,降低血铅及脑铅水平,大黄酚(0.1 mg.kg-1)可升高铅中毒小鼠脑内SOD和GSH-Px的活性(P<0.01),对MDA含量无影响;大黄酚(10.0、1.0 mg.kg-1)可升高铅中毒小鼠脑内SOD和GSH-Px的活性,降低小鼠脑内MDA含量(P<0.01);大黄酚(0.1 mg.kg-1)可降低小鼠脑内NOS、iNOS的活性(P<0.05),对NO含量无影响;大黄酚10.0,1.0 mg.kg-1治疗组可降低小鼠脑内NO含量和NOS、iNOS的活性(P<0.01)。结论大黄酚通过提高铅中毒小鼠脑组织抗氧化酶活性同时降低NOS、iNOS的活性,抑制脂质过氧化,明显拮抗铅诱导的小鼠学习记忆障碍。     

Demethylbellidifolin inhibits adhesion of monocytes to endothelial cells via reduction of tumor necrosis factor alpha and endogenous nitric oxide synthase inhibitor level

The effect of demethylbellidifolin (DMB), a major compound of Swertia davidi Franch, on the adhesion of monocytes to endothelial cells induced by oxidized low-density lipoprotein (ox-LDL) was studied. Adhesion of monocytes to endothelial cells was induced by treatment with ox-LDL (100 microg/mL) for 48 h. Levels of tumor necrosis factor-alpha (TNF-alpha) and asymmetric dimethylarginine (ADMA, an endogenous inhibitor of NOS) in conditioned medium and the activity of dimethylarginine dimethylaminohydrolase (DDAH) in endothelial cells were measured. DMB (3 or 10 micromol/L) significantly inhibited the adhesion of monocytes to endothelial cells, attenuated an increase in levels of TNF-alpha and ADMA, and a decrease in the activity of DDAH by ox-LDL. The present results suggest that DMB inhibits the increased adhesion of monocytes to endothelial cells induced by ox-LDL, and that the effect of DMB is related to reduction of the ADMA concentration via reduction of TNF-alpha production in cultured endothelial cells treated with ox-LDL.     

齐墩果酸对氧化损伤模型人脐静脉内皮细胞的保护作用

目的:研究齐墩果酸对氧化损伤模型人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的保护作用。方法:分别以含10%胎牛血清DMEM高糖培养液[含氧化低密度脂蛋白(ox-LDL,质量浓度分别为0、25、50、100、200、400μg/ml)]培养HUVECs,CCK-8法检测细胞活性以筛选复制模型最适质量浓度。以0、10、20、40、60、80、100μmol/L齐墩果酸培养HUVECs,CCK-8法检测细胞活性以考察齐墩果酸试验最适浓度。以5、10、20、40μmol/L齐墩果酸作用于氧化损伤模型HUVECs(100μg/ml ox-LDL诱导),CCK-8法检测细胞活性,测定一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)水平。结果:复制模型ox-LDL最适质量浓度为100μg/ml;齐墩果酸试验最适浓度范围为0⁴0μmol/L;5、10、20、40μmol/L齐墩果酸可增加氧化损伤模型HUVECs存活率,增强CAT、GSH-PX、NOS活性,增加NO含量。结论:齐墩果酸能够保护ox-LDL氧化损伤的HUVECs,其保护机制与增强CAT、GSH-PX、NOS抗氧化酶活性有关。     

不同分子量仿刺参糖胺聚糖对大鼠纤溶系统活性的影响研究D

目的 以不同分子量仿刺参糖胺聚糖为研究对象,考察其对大鼠纤溶系统的影响。方法 运用kurz法,经FeCl3刺激,诱导大鼠颈总动脉血栓形成,考察4种不同分子量仿刺参糖胺聚糖（分子量由大到小依次为93 200、43 600、12 800、5 400 Da）对血栓形成的影响,以及对t-PA、u-PA、PAI-1及Plg含量的影响。结果 4种不同分子量仿刺参糖胺聚糖在不同给药剂量时,均能不同程度地抑制血栓形成（P < 0.05或P < 0.01）;在20 mg/kg的给药剂量下,体内t-PA含量显著升高（P < 0.05）,同时PAI-1和Plg含量降低（P < 0.05）,u-PA含量均无明显变化（P > 0.05）;实验结果表明仿刺参糖胺聚糖具有剂量依赖性和分子量依赖性,其中AHG（93 200 Da）作用最强,DAHG-III（5 400 Da）作用最弱。结论 不同分子量仿刺参糖胺聚糖可通过增强t-PA活性、抑制PAI-1活性,以及促进Plg转化为纤溶酶,增强机体的纤溶活性,发挥溶栓作用;四种不同分子量糖胺聚糖中,AHG对纤溶系统的作用最强。     

Effect of Huanglian Jiedu Decoction on vascular endothelium factor and expression of RhoA protein factor in young spontaneously hypertensive rats

To investigate the mechanism of effect of Huanglian Jiedu Decoction (HLJD) on vascular endothelium, we assessed the protective effect of HLJD on vascular endothelium in spontaneously hypertensive rats (SHR) and the expression of RhoA in thoracic aorta. A total of 40 SHR rats were randomly and evenly divided into model group (SHR group), positive group (captopril group), HLJD high-dose group, and HLJD low-dose group. Simultaneously, 10 Wistar Kyoto rats were used in the blank group.All groups were treated by gavage for 6 weeks. The changes of nitric oxide synthase (NOS), von Willebrand factor (vWF), endothelin (ET-1) and calmodulin (CAM) in rat serum were tested by enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) method. The expression of RhoA at the protein and mRNA levels in thoracic aorta was determined by Western blotting (WB) and quantitative real-time PCR, respectively. Compare with the blank group after 6 weeks, the levels of ET-l and VWF in serum of the model group were significantly increased (P<0.01), and the levels of NOS and CAM were significantly decreased (P<0.01). Conversely, the levels of ET-1 and vWF in the positive and HLJD groups were significantly decreased (P<0.01 or P<0.05), and the levels of NOS and CAM were significantly increased (P<0.01 or P<0.05) compared with the model group. The expression of RhoA at the mRNA and protein levels was decreased obviously (P<0.05) in HLJD high-dose group. The results shown that HLJDincreased diastolic factor (CAM and NOS) in the vascular endothelial of rats, leading to reduced contraction factor (ET-1 and vWF). HLJD revealed the preventive function in the vascular endothelial dysfunction of the early stage hypertension through adjusting secretion of blood vessel endothelium (BVE) relaxing factor and improving vascular endothelial function.The mechanism might be associated with the inhibition of the activity of RhoA protein factor.