肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体和半胱天冬酶-3在再生障碍性贫血骨髓单个核细胞中的表达

目的探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）和半胱天冬酶-3（Caspase-3）在再生障碍性贫血（AA）骨髓单个核细胞中表达及其在AA造血干细胞凋亡中的作用。方法选取15例初诊和治疗后进入缓解期的AA患者、15例骨髓象正常的患者为研究对象,采用流式细胞术检测患者骨髓单个核细胞中TRAIL表达,采用酶标仪检测骨髓单个核细胞Caspase-3的表达。结果AA初诊时、缓解期和对照组TRAIL蛋白表达分别为（5．94±2．57）％、（2．87±1．72）％和（3．01±2．06）％,Caspase．3蛋白表达分别为（1．3840±0．0236）、（0．8018±0．0126）和（0．7441±0．0112）,AA初诊时TRAIL和Caspase-3蛋白表达显著高于缓解期和对照组,差异均有统计学意义（均P〈0．05）;对照组TRAIL和Caspase-3蛋白表达高于AA缓解期,但差异均无统计学意义（均P〉0．05）。结论AA患者骨髓单个核细胞中TRAIL和Caspase-3呈高表达,它们可能参与诱导AA患者造血细胞凋亡。     

再生障碍性贫血患者死亡受体5的表达及意义

目的通过检测再生障碍性贫血(简称再障)患者骨髓单个核细胞肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)的死亡受体5(deathreceptor5,DR5)mRNA的表达,探讨DR5诱导的凋亡在诱导再障造血干细胞凋亡中的作用。方法采用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)对12例再障(再障组)、11例再障治疗后达缓解(缓解组)、12名健康人(对照组)骨髓单个核细胞DR5mRNA的表达进行检测。结果①再障组、缓解组、对照组DR5mRNA均有表达。②再障组DR5mRNA的表达高于缓解组、对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。③缓解组与对照组间DR5mRNA的表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论DR5mRNA在再障患者骨髓单个核细胞中表达增高,提示DR5介导的细胞凋亡可能在再障的发病机制中发挥一定的作用。     

再生障碍性贫血小鼠骨髓基质细胞分泌RCAS1水平及其意义

目的研究免疫介导再生障碍性贫血(AA)小鼠骨髓基质细胞RCAS1表达及其意义。方法建立免疫介导小鼠再障模型。反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测再障小鼠骨髓基质细胞RCAS1基因表达,流式细胞术检测再障小鼠骨髓基质细胞培养上清作用后正常小鼠骨髓单个核细胞(BMMNC)的凋亡。结果①AA小鼠骨髓基质细胞均有RCAS1的表达,表达强度为2.17±0.87,明显高于对照组0.96±0.22(P<0.01)。②AA骨髓基质细胞培养上清作用后正常小鼠BMMNC凋亡率为(8.85±1.05)%,明显高于对照组的(2.10±0.25)%(P<0.01)。结论AA骨髓基质细胞RCAS1高表达,其培养上清作用后正常小鼠BMMNC凋亡增加,提示RCAS1可能参与了再障造血功能衰竭。     

环孢素A治疗前后慢性再生障碍性贫血患者骨髓吲哚胺2,3双加氧酶水平变化

目的检测环孢素A治疗前后慢性再生障碍性贫血(AA)患者骨髓单个核细胞中吲哚胺2,3双加氧酶(IDO)的表达情况,探讨IDO在慢性AA发病机制中的作用。方法用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测9例初治及环孢素A治疗3个月后慢性AA患者骨髓单个核细胞中IDO mRNA的表达水平,并分析其与中性粒细胞绝对值、网织红细胞相对值、血小板计数及血红蛋白含量相关性。数据分析采用t检验和直线相关分析。结果①初治慢性AA患者骨髓单个核细胞中IDO mRNA表达强度为(0.42±0.10),明显高于对照组[(0.19±0.14),P<0.01]。②环孢素A治疗3个月后慢性AA患者骨髓单个核细胞中IDO mRNA表达强度为(0.19±0.12),明显低于治疗前[(0.42±0.10),P<0.01]。③IDO与中性粒细胞绝对值、网织红细胞相对值、血小板计数及与血红蛋白含量的r值分别为0.459、-0.056、-0.482、0.006(P均>0.05),均无明显线性相关关系。结论在慢性AA患者骨髓单个核细胞中,IDO表达增加,促进色氨酸向犬尿氨酸转化,而色氨酸的耗竭及其代谢产物犬尿氨酸可抑制T淋巴细胞的增殖、诱导T淋巴细胞的凋亡,提示IDO在慢性AA的发病机制中可能起保护作用。     

再生障碍性贫血及慢性粒细胞性白血病患者骨髓单个核细胞Notch1表达研究

目的了解再生障碍性贫血(AA)患者及慢性粒细胞性白血病(CML)患者骨髓单个核细胞(BMMNC)Notch1表达情况,探讨Notch1与骨髓增生能力的相关性.方法应用半定量RT-PCR检测15例AA患者、8名正常对照者和10例CML患者BMMNC的Notch1的表达,并比较了8例AA患者化疗前后BMMNC的Notch1的表达,及10例CML患者化疗前后BMMNC的Notch1的表达.结果AA患者BMMNC的Notch1表达低于正常对照组(P<0.05);CML患者BMMNC的Notch1表达高于正常对照组(P<0.05);AA患者化疗后Notchl表达上调(P<0.05);CML患者化疗后Notch1表达下调(P<0.05).结论Notch1在AA患者BMMNC和正常人BMMNC中表达有差异,可能是AA患者骨髓增生能力低下的原因之一;AA患者化疗后BMMNC的Notch1表达水平上调,提示皮质激素和睾丸酮联合应用提高AA患者造血能力可能与Notch1上调有关.CML患者BMMNC的Notch1表达高于正常人,化疗缓解后Notch1表达下调,提示Notch1过度表达可能与CML的发生相关.     

40例骨髓增生异常综合征染色体核型及凋亡

目的 探讨不同类型骨髓增生异常综合征(MDS)患者骨髓染色体核型和凋亡现象及其机制.方法 采用骨髓短期培养和G显带技术对40例MDS患者进行染色体核型分析,钙磷脂结合蛋白(Annexia-V)-FITC标记药物骨髓单个核细胞,了解其早期凋亡的情况,逆转录-PCR分析自杀相关因子(Fas)和凋亡抑制蛋白(survivin,生存素)mRNA表达变化.结果 20/40例MDS患者检出染色体异常,其中难治性贫血(RA)7/20例(35%),RA伴有环状铁幼粒细胞(RARS)1/2例(50%),RA伴多系发育异常(RCMD)5/8例(62.5%),RA伴原始细胞增多(RAEB)7/10例(70%);国际预后评分系统(IPSS)1年白血病转化率为低危组5%(1/20),中危1、2组25%(3/12),高危组75%(6/8),各组间差异有统计学意义(P＜0.05);骨髓单个核细胞凋亡MDS患者高于10例正常体检者(对照组),从低危组到高危组凋亡减少,生存素基因mRNA表达增加,Fas mRNA表达下降.结论 染色体核型分析在MDS的预后评估中有重要价值;MDS从低危组到高危组凋亡减少,可能与生存素、Fas基因表达有关.     

PDCD5与BCL-2在多发性骨髓瘤中的表达

目的研究促凋亡基因PDCD5和抑凋亡基因BCL-2在多发性骨髓瘤中的表达情况.方法免疫组化及逆转录-聚合酶链反应方法(RT-PCR)检测31例及25例正常对照骨髓单个核细胞中PDCD5和BCL-2蛋白及mRNA的表达,用统计软件分析其表达水平之间的关系.结果MM组PDCD5阳性细胞率(%)和染色强度指数(SⅡ)均显著低于对照组,BCL-2阳性细胞率(%)和SⅡ显著高于对照组,PDCD5蛋白和BCL-2蛋白阳性细胞率(%)呈负相关(r=-0.86,P＜0.05).MM组PDCD5 mRNA的相对表达水平显著低于对照组,BCL-2 mRNA的相对表达显著水平高于对照组,PDCD5、BCL-2 mRNA表达水平呈负相关(r=-0.90,P＜0.05).结论MM患者骨髓单个核细胞中,PDCD5蛋白、mRNA表达下调,而BCL-2蛋白、mRNA上调,二者表达水平呈负相关.     

DLK1及c-FLIP基因在AML中的表达

目的 探讨急性髓细胞白血病(AML)患者c-FLIPL、c-FLIPS及DLKl基因的表达水平及临床意义.方法 应用逆转录-PCR半定量检测8例AML(AML组)及3例非恶性血液病患者(对照组)骨髓单个核细胞中c-FLIPL、c-FLIPS及DLKl mRNA的表达水平.结果 AML组患者DLKl mRNA、c-FLIPL mRNA、c-FLIPS mRNA表达均明显高于对照组(P＜0.05),且AML各FAB亚型间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 DLKl、c-FLIPL及c-FLIPS基因在AML患者中表达异常增高,可能在白血病细胞逃脱凋亡、无限增殖中发挥作用.     

抑制PARP-1表达在棕榈酸诱导大鼠心肌细胞凋亡中的保护作用

目的探讨抑制PARP-1表达缓解棕榈酸诱导的H9C2心肌细胞凋亡效果及其作用机制。方法取H9C2细胞随机分成正常组、PA组和抑制组。PA组接受0.4μmol/L PA干预,抑制组接受20 nmol/L PARP-1抑制剂+0.4μmol/L PA干预,正常组不接受任何干预。干预24 h后测定各组细胞凋亡情况、线粒体电位、ROS水平和凋亡相关蛋白。结果抑制组细胞存活抑制率明显高于PA组(P0.05)。ROS测定结果显示,抑制组ROS水平低于PA组。线粒体膜电位结果显示,抑制组细胞线粒体跨膜电位高于PA组,而弱于对照组。流式细胞仪检测结果显示,PA组活细胞率明显低于对照组(P0.01),而细胞凋亡率明显高于对照组(P0.01),抑制组活细胞率明显高于PA组(P0.01),而细胞凋亡率明显低于PA组(P0.01)。抑制组H9C2细胞的PARP-1蛋白表达(25.84±6.47)明显低于对照组(96.94±8.74)%和PA组(89.72±7.55)%(P0.05),抑制组H9C2细胞的Caspase-3蛋白(44.66±7.72)%和Bax蛋白(48.62±7.58)%表达明显低于PA组(95.44±12.58)%和(88.28±10.25)%(P0.05),但高于对照组H9C2细胞(23.45±6.25)%和(20.57±6.22)%(P0.05)。结论抑制PARP-1表达能缓解PA脂毒性引起H9C2心肌细胞凋亡,其作用机制可能为提升心肌细胞线粒体活性,抑制细胞ROS水平和细胞凋亡蛋白表达。     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体及扇贝多肽在UVA诱导HaCaT细胞凋亡中的作用

目的研究UVA对HaCaT细胞肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumour necrosis factor related apoptosis inducing ligand,TRAIL)表达的影响;复制UVA诱导的HaCaT细胞凋亡模型,探究TRAIL在UVA诱导的HaCaT细胞凋亡中的作用及扇贝多肽(Polypeptide from Chlamys farreri,PCF)对UVA诱导的TRAIL凋亡通路的影响。方法实验设计分为5组:对照组、UVA模型组、UVA+5.69mmol·L-1PCF组、UVA+2.84mmol·L-1PCF组、UVA+1.42mmol·L-1PCF组。Real-TimePCR检测TRAIL mRNA表达;蛋白质印迹法检测TRAIL蛋白表达及caspase-8活性;琼脂糖凝胶电泳分析TRAIL中和性抗体对UVA诱导的HaCaT细胞凋亡的影响。结果8J·cm-2UVA照射HaCaT细胞后TRAIL mR-NA及蛋白表达增加,与对照组相比差异有显著性(P<0.01);TRAIL中和性抗体对UVA诱导的HaCaT细胞凋亡有抑制作用;1.42~5.69mmol·L-1剂量范围内的PCF可剂量依赖性抑制UVA引起的HaCaT细胞TRAIL mRNA及蛋白表达(P<0.05,P<0.01);PCF对UVA引起的HaCaT细胞caspase-8的活化有抑制作用,且呈量效关系。结论UVA可增强HaCaT细胞TRAIL表达;TRAIL参与了UVA诱导的HaCaT细胞凋亡;PCF对UVA诱导的HaCaT细胞TRAIL表达有抑制作用,也可减弱UVA诱导的caspase-8活化,以其抗氧化活性抑制TRAIL凋亡通路而发挥抗凋亡作用。     

21例重型再生障碍性贫血患者CD34^＋细胞检测及临床意义

目的：检测重型再生障碍性贫血（SAA）患者CD34^＋细胞骨髓单个核细胞比例,了解再生障碍性贫血发病与造血干细胞、祖细胞的关系。方法：应用流式细胞仪检测21例重型再生障碍性贫血患者CD34^＋细胞表达水平。并与对照组比较。结果：再生障碍性贫血组21例患者CD34^＋细胞比例为（0．196±0．164）％,对照组10例患者CD34^＋细胞比例为（1．129±0．570）％,两组比较,差异有统计学意义（P〈0．01）。结论：再生障碍性贫血患者CD34^＋细胞表达明显减少,支持再生障碍性贫血造血干细胞内在缺陷的发病学说。此检测有助于再生障碍性贫血诊断,值得临床推广。     

CD105在急性白血病中的表达及其临床意义

目的探讨CD105在急性白血病骨髓细胞的表达及其意义。方法分离骨髓单个核细胞,采用流式细胞仪（FCM）检测CD105的表达。结果CD105在急性白血病骨髓细胞表达率[（30．39±8．69）％]明显高于对照组[（1．90±0．61）％]（P〈0．05）;且急性淋巴白血病表达CD。阳性率[（49．92±16．71）％]高于在急性髓系白血病的表达率[（22．21±9．95）％]（P〈0．05）;化疗缓解后CD。表达率[（3．99±1．45）％]比化疗前[（48．74±16．45）％]显著减低（P〈0．05）;浸润组CD105表达率[（41．39±14．05）％]高于非浸润组[（21．06±9．14）％]（P〈0．05）。结论CD105在急性白血病细胞的异常表达,可能与白血病发病和预后有关。     

Caveolin-1蛋白在急性白血病中表达的研究

目的探讨急性白血病（AL）初次诱导化疗缓解前后caveolin-1蛋白表达的变化及Caveolin-1蛋白的表达与AL分型的关系。方法采用流式细胞术检测65例AL患者及10例正常对照组Caveolin-1蛋白的表达。结果65例初治组AL患者表达Caveolin—1蛋白的阳性细胞率（2.31±3．62）％、平均荧光强度（69．88±21．17）,分别较10例正常对照组的阳性细胞率（77．50±1．76）％、平均荧光强度（289．87±7．92）明显下降（P〈0．01）;38例AL患者诱导化疗缓解后表达Caveolin-1蛋白的阳性细胞率（3．03±3．87）％与初治组比较无明显差异（P〉0．05）,但平均荧光强度（152．74±25．81）较初治组明显升高（P〈0．01）。各种类型的急性白血病表达Caveolin-1蛋白的阳性细胞率、平均荧光强度无明显差异（P〉O．05）。结论急性白血病的Caveolin-1蛋白表达水平较正常人明显下降,且AL初次诱导化疗缓解后Caveolin-1蛋白的表达较初治时有所恢复．提示Caveolin-1蛋白的高表达可能与AL患者预后有关．     

Bcl-2 与急性白血病患者骨髓组织血管新生的关系

目的通过检测急性白血病（AL）患者骨髓病理切片中血管内皮生长因子（Vascular Endothelial Growth Factor,VEGF）及Bcl-2蛋白的表达和微血管的生成情况及VEGF及Bcl-2蛋白的表达和微血管生成之间的相关性。方法免疫组织化学染色方法检测35例AL患者和35例对照组骨髓病理切片中的,Bcl-2表达;ELISA检测患者血清中VEGF-C的表达。结果对照组患者血清中VEGF-C为（126.34±21.22）pg/ml,实验组患者血清中VEGF-C为（324.45±34.12）pg/ml,35例AL患者,微血管密度（microvessel density,MVD）的平均光密度值为（0.3573±0.030）。35例对照组骨髓病理免疫组织化学片中,MVD的平均光密度值为（0.2192±0.037）。AL患者的MVD平均光密度值明显高于对照组,有显著性差异。结论 AL患者的骨髓组织中由于VEGF的表达,诱导产生更多的Bcl-2蛋白来降低AL细胞凋亡,从而增加AL的恶性程度。     

同种异体间充质干细胞改善大鼠皮肤愈合的研究

目的：将骨髓间充质干细胞的移植引入大鼠皮肤损伤的治疗中,观察大鼠骨髓间充质干细胞注射治疗皮肤损伤的有效性和安全性。方法体外完成大鼠骨髓间充质干细胞的分离、培养、纯化、扩增和传代;大鼠的分组并建立皮肤损伤模型;骨髓间充质干细胞局部注射;Western blot检测大鼠创面角质化细胞生长因子（ KGF）蛋白的表达;建模后连续创面组织病理学观察。结果实验组建模后3 d、7 d、14 d创面愈合率分别为（21．95±8．11）％、（56．25±4．96）％、（79．85±5．44）％,明显优于同期对照组的（12.11±4．87）％、（30．24±1．53）％、（58．51±6．52）％（ t＝4．693、3．853、2．559,均P＜0．05）。建模后14 d,实验组与对照组KGF蛋白的Western Blot条带显示结果显示实验组创面组织中的KGF蛋白表达较高;观察HE染色后的皮肤组织切片发现,建模后14 d实验组小鼠创面愈合情况优于对照组。结论将骨髓间充质干细胞的移植治疗引入大鼠皮肤损伤的治疗,可以促进大鼠皮肤损伤的愈合。     

再生障碍性贫血患者骨髓中RCAS1水平的研究

目的分析RCAS1在再生障碍性贫血患者骨髓上清及骨髓基质细胞培养上清中的表达。方法酶联免疫吸附试验(ELISA)方法测定17例再生障碍性贫血患者及18例正常对照骨髓上清及骨髓基质细胞培养上清中sRCAS1水平。结果①再生障碍性贫血患者骨髓上清中sRCAS1水平为(0.37±0.14)μg/L,正常对照为(0.09±0.11)μg/L(P<0.05)。②再生障碍性贫血患者基质细胞培养上清中sRCAS1水平为(1.00±0.08)μg/L,正常对照组为(0.81±0.05)μg/L(P<0.05)。结论再生障碍性贫血患者骨髓上清及骨髓基质细胞培养上清中sRCAS1水平明显高于正常对照组。     

组织蛋白酶S抑制剂对兔血管平滑肌细胞凋亡的影响

目的 研究组织蛋白酶S抑制剂对培养的兔血管平滑肌细胞凋亡的影响及其机制.方法 获取兔主动脉组织,传代培养血管平滑肌细胞,将细胞分为对照组、单药组(血管紧张素Ⅱ)、联合组(组织蛋白酶S抑制剂+血管紧张素Ⅱ);采用流式细胞术和脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测血管平滑肌细胞凋亡,蛋白质印迹法检测B细胞淋巴瘤基因-2蛋白、B细胞淋巴瘤基因-2相关蛋白X及半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-3的表达.结果 ①流式细胞术检查及TUNEL染色结果均显示,联合组血管平滑肌细胞晚期凋亡数量明显低于单药组;TUNEL染色10 h和12 h时点,单药组与联合组差异有统计学意义[ 10 h:(23607±176)比(36058±269)个,12 b:(29813±205)比(39146±263)个,均P＜0.05];②蛋白质印迹检测结果显示,与单药组相比,联合组B细胞淋巴瘤基因-2相关蛋白X/B细胞淋巴瘤基因-2蛋白明显下降,组间差异有统计学意义(P＜0.05);联合组半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-3表达明显降低,组间差异有统计学意义(P＜0.05).结论 组织蛋白酶S抑制剂可能通过下调B细胞淋巴瘤基因-2相关蛋白X、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-3表达减轻血管平滑肌细胞凋亡.