作用于HIV包膜蛋白亚基gp41的多肽类融合抑制剂

HIVgp4 1是病毒包膜上介导HIV与靶细胞膜融合的跨膜糖蛋白 ,其包膜外区包括位于N末端的融合多肽和下游的N末端重复序列 (NHR) ,以及C末端的重复序列(CHR)。衍生于gp4 1NHR和CHR的N 多肽和C 多肽具有抑制HIV与靶细胞融合的活性 ,其中C 多肽T 2 0已获得美国FDA批准 ,成为继逆转录酶抑制剂和蛋白酶抑制剂后的第三类抗艾滋病药物 ,即HIV融合抑制剂。由于T 2 0等为多肽类药物 ,容易被体内蛋白酶降解 ,临床剂量大 ,用基因工程手段难以满足需要 ,因此只能采用多肽合成技术进行生产 ,成本高昂。为此 ,人们希望寻找到具有相似机制的活性短肽 ,或通过多肽设计使活性多肽适合用基因工程进行大规模生产。近年来 ,对N 多肽和C 多肽进行结构改造已成为研究的热点 ,出现了许多相对分子质量较小 ,不容易被内源性蛋白酶降解 ,或者能用基因工程手段生产的活性多肽 ,同时多肽药物抑制HIV感染的作用机制也因此而逐渐清晰起来     

作用于gp41的HIV融合抑制剂高通量筛选方法的研究

目的　对作用于gp4 1的HIV融合抑制剂筛选方法进行研究和改进 ,使其成为更加简便的高通量药物筛选模型。方法　采用夹心ELISA方法 ,检测HIVgp4 1六股α 螺旋束的形成。结果　以特异性识别HIVgp4 1六股α 螺旋束的单克隆和多克隆抗体为基础建立的改良夹心ELISA方法 ,特异性好 ,准确性高 ,更为简便和经济 ,能稳定有效地检测样品对 gp4 1六股α 螺旋束形成的抑制作用。 结论　本研究建立的改良方法可作为高通量药物筛选方法 ,用于从中草药库、噬菌体肽库和微生物发酵液等复杂组分样品中筛选作用于 gp4 1的HIV融合抑制剂 ,以研究开发抗HIV药物     

HIV-1融合抑制剂研究现状及发展趋势

HIV-1融合抑制剂是继逆转录酶和蛋白酶抑制剂后的新一类抗HIV感染药物, 通过阻断病毒与靶细胞膜的融合从而抑制病毒进入靶细胞, 在感染的初始环节切断HIV-1的传播, 其中多肽类融合抑制剂T-20已于2003年上市。HIV-1融合抑制剂以HIV-1跨膜糖蛋白gp41为作用靶标, 它们是一些天然或合成的多肽以及小分子化合物, 通过与gp41功能区结合从而抑制其促融合功能的发挥。近年来, 随着对膜融合过程分子机制以及gp41功能研究的不断深入, 新的以gp41不同功能区为靶点的融合抑制剂分子不断被发现, 成为倍受关注的研究热点之一。本文着重对近年来HIV-1融合抑制剂的研究现状及发展趋势进行综述。     

酸性天然凝胶电泳法研究HIV进入抑制剂ADS-J1的作用机制

目的ADS-J1是通过虚拟筛选从20000个化合物中获得的靶向HIVgp41的小分子HIV进入抑制剂。该研究探讨ADS-J1与gp41的结合位点和作用机制。方法采用酸性天然聚丙烯酰胺凝胶电泳技术(AN-PAGE),研究ADS-J1与衍生于gp41不同功能区的多肽的结合。结果此前采用的天然聚丙烯酰胺凝胶电泳(N-PAGE)等方法,由于不能显示衍生于gp41的N-端多肽,未能确定ADS-J1的作用位点。该研究建立的AN-PAGE技术,能直接显示N-端多肽的条带,证实ADS-J1能与gp41的N-端螺旋重复序列(NHR)复合螺旋核中的深穴结合,从而抑制gp41六螺旋束结构的形成,而且深穴中第574位的赖氨酸残基(K574)与ADS-J1的抑制作用密切相关。结论ADS-J1通过与gp41 NHR靶穴中的K574结合,抑制gp41六螺旋束结构的形成,从而抑制HIV进入靶细胞。此外,该研究建立的AN-PAGE技术,为研究靶向Ⅰ型包膜病毒的病毒进入抑制剂的作用机制提供了一个简便有效的实验方法。     

病毒蛋白片段抑制HIV的感染性

美国 Merck研究所的 Kim等曾报道过对 1型人类免疫缺陷病毒 (HIV- 1)侵入抑制剂 5 - Helix的研究。该肽源于 HIV- 1包膜蛋白 gp4 1亚单位上的两个亲和区 ,可与 gp4 1上的 C端螺旋 (C螺旋 )结合 ,以阻止侵入细胞所需的蛋白复合物的形成。　　最近 Kim等研制出基于 N螺旋的肽。他们将三个 N螺旋结合起来 ,模拟病毒准备侵入细胞时形成的复合物 ,这些 N肽在体外能有效阻止 HIV感染。尽管这些结合物未像 5 - Helix那样 ,对 A、B和 D亚型 HIV进行试验 ,但研究人员认为 ,由于 N肽与 5 - Helix有一些相同的区域 ,因此 ,将会有效抵抗这三…     

中国自主开发的艾滋病病毒膜融合抑制剂西夫韦肽顺利完成Ⅱb期临床研究

从2010年8月1日在北京召开的西夫韦肽研讨会上了解到,我国自主开发的艾滋病病毒膜融合抑制剂西夫韦肽已顺利完成Ⅱb期临床试验,并被证实疗效显著。西夫韦肽属国家一类创新药物,由天津扶素生物公司开发,系依据艾滋病病毒膜融合蛋白gp41的空间结构而设计和合成的一个新艾滋病病毒膜融合抑制剂,已在中国、美国和欧洲等地区获得专利授权。     

抑制HIV包膜蛋白亚基gp41六股螺旋形成的链霉菌多糖的分离与结构分析

目的从链霉菌发酵液中定向分离纯化抗HIV1包膜糖蛋白gp41六股α螺旋束形成作用的多糖成分,并进行结构分析。方法乙醇沉淀多糖类大分子物质、Sevage法去蛋白、DEAE纤维素离子交换层析法及SephadexG25凝胶过滤法纯化多糖。其结构经HPLC、UV、IR、1HNMR以及高碘酸氧化、Smith降解等方法进行测定。抗HIVgp41活性检测采用夹心ELISA方法。结果分离纯化出的目的多糖属于中性多糖,分子量约为4855ku;单糖组成以葡萄糖为主,含有少量果糖,二者的摩尔比约为22∶1(1096∶048);糖苷键的链接方式为(1→4)αD吡喃型,并含1→6位键合的支链;命名为SMP。SMP对HIVgp41六股α螺旋束的形成有明显抑制作用,其半效抑制浓度(IC50)为(14548±725)mg·L-1。结论从链霉菌发酵液中分离纯化出一种新的抑制HIV包膜糖蛋白gp41六股α螺旋束形成的链霉菌多糖。     

EGCG乙酸酯的HIV融合抑制活性及其作用机制研究

 目的：研究EGCG乙酸酯的HIV融合抑制活性,并探讨其作用靶点。方法：采用HPLC分析pH对于EGCG乙酸酯稳定性的影响以及EGCG乙酸酯在细胞中的水解产物;采用酶联免疫测定法、细胞-细胞融合方法以及假病毒实验检测EGCG乙酸酯抑制HIV与靶细胞融合的活性;应用分子对接软件研究EGCG与gp41的结合位点。结果：EGCG通过其苯环结构和羟基分别与gp41 NHR区域的疏水残基和正电荷残基结合从而抑制病毒的进入。用乙酰基保护EGCG活性酚羟基形成EGCG乙酸酯,稳定性明显增强。EGCG乙酸酯在酶联免疫反应中无活性,但在细胞实验中能有效抑制HIV介导的细胞融合及HIV假病毒感染,其半数抑制浓度IC50分别为（4.93±0.57）和（1.45±0.32） μg?mL-1。EGCG乙酸酯在细胞中的水解产物被证明为EGCG。结论：EGCG乙酸酯在细胞中能转化为母体药物,从而具有HIV融合抑制活性,且靶向作用于HIV gp41。该前药有望研发为稳定、高效的抗HIV药物,用于HIV的治疗。     

HIV-1侵入抑制剂的研究进展

人类免疫缺陷病毒(HIV)-1侵入抑制剂能抑制HIV进入靶细胞,在最初环节抑制病毒的传播。具有高活性、较好药物代谢性质的肽及肽类似物不断被发现,并成为抗HIV药物研究的热点。根据HIV-1进入靶细胞的3个步骤可将侵入抑制剂分为黏附抑制剂、辅助受体结合抑制剂和融合抑制剂,并对其研发策略和研究进展进行综述。     

作用于病毒细胞融合过程的药物

美国Trimeris制药公司正在开发一类阻挡病毒进入细胞的化合物。他们正注重于包膜病毒与细胞膜的融合过程，这个病毒生命循环的关键步骤允许病毒将其遗传物质DNA或RNA注入宿主细胞。膜融合是真核细胞的普遍过程，对于免疫缺陷病毒（HIV），感染的细胞之间的传递也是一种融合过程。导向化合物Pentafuside来自于HIV一1包膜糖蛋白的一部分，它是HIV-1融合抑制剂。HIV－1的表面带有糖蛋白gP120和gP41的寡聚复合体，在自然和静止状态下，两个gP120和两个gP41的杂寡聚物通过非共价蛋白-蛋白作用相联，gP41介导与细胞的融合，“融合区”被…