青蒿琥酯诱导人早幼粒白血病细胞HL60凋亡的线粒体机制

目的 :探讨青蒿琥酯 (artesunate ,Art)诱导人急性早幼粒白血病细胞HL6 0凋亡的线粒体机制。方法 :用Art处理HL6 0细胞 ,通过MTT比色法检测细胞增殖抑制的效果 ;透射电镜、DNA凝胶电泳技术观察细胞的凋亡 ;流式细胞术 (flowcytometry ,FCM)进行细胞周期分析和线粒体膜电位 (mitochon drialmembranepotential ,MMP)水平的检测 ;比色法检测半胱 天冬氨酸蛋白酶 3(cysteinecontainingas partate,Caspase 3)活性。结果 :Art呈浓度和时间依赖性的抑制HL6 0细胞的增殖 (P <0 .0 5 )。Art诱导后HL6 0细胞出现典型的凋亡形态学变化和生化改变 ,G2 M期细胞比例增高 ,S期减少 ,凋亡率上升 (P <0 .0 5 ) ,线粒体膜电位降低 (P <0 .0 5 ) ,Caspase 3活性增强 (P <0 .0 5 )。结论 :Art可能通过线粒体 半胱 天冬氨酸蛋白酶 3特定途径诱导HL6 0细胞凋亡。     

高三尖杉酯碱对HL-60细胞端粒酶量的抑制效应

目的　研究高三尖杉酯碱 (HHT)对HL 6 0细胞端粒酶活性的影响及诱导凋亡作用。方法　采用端粒重复序列扩增法 (TRAP) 酶联免疫吸附试验(ELISA)检测了HL 6 0细胞的端粒酶量变化 ,用细胞形态学观察 ,DNA琼脂糖凝胶电泳 ,流式细胞术检测和DNA片段原位末端标记 (TUNEL)法检测了细胞凋亡现象。结果　 5～ 5 0 0 μg·L- 1HHT处理HL 6 0细胞 0～ 4 8h ,HL 6 0细胞端粒酶量呈剂量依赖性和时间依赖性下降。同时 ,HL 6 0细胞发生了凋亡。结论　HHT有降低HL 6 0细胞的端粒酶量 ,诱导细胞凋亡作用。     

梁金菇多糖诱导红白血病细胞株凋亡的实验研究

目的：研究梁金菇多糖（LJPS）对白血病细胞系K562细胞促进凋亡作用，旨在为开发新型的抗肿瘤中药提供实验依据。方法：应用细胞形态学观察、DNA凝胶电泳、流式细胞仪等方法研究了梁金菇多糖对白血病细胞系K562细胞凋亡的影响。结果：LJPS可诱导K562细胞凋亡，其有效浓度在1.25mg/ml时处理5天效果最佳，凋亡率为22．3％。     

重组人白血病抑制因子体外诱导HL-60细胞凋亡与bcl-2及p53表达的关系

目的 :探讨重组人白血病抑制因子 (rh LIF)诱导HL 6 0细胞凋亡的作用及其可能机制。方法 :不同剂量 (10～ 4 0 0 0U·ml-1)的rh LIF作用HL 6 0细胞 3d后 ,用流式细胞仪观察分析细胞周期变化并检测细胞凋亡率 ,用TUNEL法检测原位细胞凋亡情况 ;分别用免疫组化法和原位杂交法检测rh LIF作用 2、4、6d后P5 3蛋白及p5 3mRNA、bcl 2mRNA表达水平的改变。结果 :rh LIF (10～ 4 0 0 0U·ml-1)作用d 3,细胞凋亡率较对照组显著增加 ,其中以10 0 0U·ml-1组的作用最强 ;rh LIF (80 0U·ml-1)作用 2～ 6d ,P5 3蛋白和p5 3mRNA表达也同步增高 ,而bcl 2mRNA表达显著降低 (P <0 .0 1)。结论 :rh LIF能诱导HL 6 0细胞凋亡 ,该作用与P5 3蛋白表达增加和bcl 2表达降低有关     

生存素反义寡核苷酸诱导HL-60细胞凋亡的实验研究

目的 :探讨特异性靶向生存素的反义寡核苷酸 (ASODN)对急性早幼粒细胞系HL 6 0细胞凋亡的影响。方法 :应用四唑盐 (MTT)比色法分析细胞增殖 ;倒置显微镜观察细胞形态学变化 ;原位末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡指数 (AI) ;流式细胞术(FCM)定量检测细胞凋亡 ;RT PCR半定量检测生存素mRNA的表达。结果 :5～ 2 0 μmol·L-1生存素ASODN对HL 6 0细胞增殖均有抑制作用 ,且呈时间和剂量依赖性。ASODN组凋亡率和生存素基因表达抑制率明显高于对照组。结论 :生存素ASODN能有效抑制HL 6 0细胞生存素mRNA的表达并诱导细胞凋亡 ,表明生存素对维持肿瘤细胞的增殖具有非常重要的作用。     

青蒿琥酯诱导肿瘤细胞凋亡与抑制存活蛋白表达有关

目的 :探讨青蒿琥酯 (artesunate ,Art)诱导肿瘤细胞凋亡与存活蛋白 (survivinprotein)表达的关系。方法 :采用细胞荧光染色、流式细胞术、琼脂糖凝胶电泳法和测定细胞浆Caspase 3的活性等手段检测肿瘤细胞暴露于不同浓度的Art时 ,对肿瘤细胞凋亡的诱导作用 ;用RT PCR、WesternBlotting法 ,检测不同浓度的Art作用于肿瘤细胞时 ,对survivinmRNA和survivin蛋白表达的影响。结果 :HL6 0细胞暴露于Art时 ,呈现典型细胞凋亡特征 ,如 :胞核固缩、形成凋亡小体 ;凋亡细胞的比例呈浓度依赖性增高 ;琼脂糖电泳出现明显的“梯状”条带 ;细胞浆Caspase 3的活性呈浓度依赖性增高等。RT PCR检测表明 ,A5 49细胞暴露于Art 10和 5 0g·L-172h后 ,survivinmRNA的表达呈浓度依赖性降低 ,对照组、10和 5 0mg·L-1处理组的survivin条带和内标GAPDH条带灰度的比值分别为 1.74 5、0 .390和0 .0 2 3;WesternBlotting法也检测到Art抑制Survivin蛋白的表达。结论 :Art诱导肿瘤细胞发生凋亡 ,激活Caspase 3途径 ,可能与抑制survivin基因表达有关     

蛋白酶体抑制剂MG132诱导HepG2细胞凋亡及其机制研究

目的观察蛋白酶体抑制剂MG132对人肝癌细胞HepG2的致凋亡作用,并从泛素蛋白酶体途径(UPP)相关基因E1、E2和E3及天冬氨酸特异的半胱氨酸蛋白酶3(Caspase3)表达初步探讨MG132的致细胞凋亡机制。方法采用多个浓度(2、5、10μmol·L-1)的蛋白酶体抑制剂MG132处理HepG2细胞;流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡率,DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡;逆转录聚合酶链反应(RTPCR)检测UPP相关基因E1、E2、E3和凋亡相关基因Caspase3的转录水平;免疫细胞化学检测Caspase3蛋白表达。结果对照组HepG2细胞凋亡率低于5%,在2、5和10μmol·L-1MG132作用下,细胞凋亡率分别为42.9%、66.1%、72.8%,MG132诱导HepG2细胞凋亡具有量效关系;RTPCR检测发现细胞内UPP相关基因E1、E2、E3mRNA表达下降,而凋亡相关基因Caspase3mRNA表达上调;免疫组化检测Caspase3蛋白表达水平升高。结论蛋白酶体抑制剂MG132能够诱导HepG2细胞凋亡,其机制可能与MG132抑制UPP活性,使细胞内Caspase3蛋白降解减少,同时上调Caspase3基因转录,促进细胞凋亡。     

半胱氨酸酶3和Bcl-2在三氧化二砷诱导Namalwa细胞凋亡过程中的表达及意义

目的:了解半胱氨酸酶3(Caspase 3)和Bcl-2在三氧化二砷(As2O3)诱导Burkitt’s淋巴瘤细胞系Namalwa凋亡效应中的作用。方法:琼脂糖凝胶电泳法和Annexin V/PI双染色流式细胞术检测细胞凋亡。应用Caspase 3抑制剂DEVD-CHO和As2O3共同处理细胞,检测Caspase 3和Bcl-2蛋白表达水平的变化。结果:As2O3使Namalwa细胞Caspase 3表达增加,Bcl-2蛋白表达降低。DEVD-CHO能抑制细胞凋亡,但不影响As2O3诱导Bcl-2蛋白表达水平降低的效应。结论:Caspase 3激活可能是As2O3诱导Namalwa细胞凋亡的机制之一。     

三氧化二砷诱导肿瘤细胞凋亡途径的研究

目的　探讨细胞线粒体跨膜电位 (Δψm)和半胱氨酶3(Caspase 3)在三氧化二砷 (As2 O3 )诱导肿瘤细胞凋亡过程中的作用。方法　以Namalwa、SGC790 1和Bcap37细胞为体外模型 ,流式细胞仪检测亚G1期细胞含量和细胞膜磷脂酰丝氨酸 (PS)外翻量等方法鉴定细胞凋亡 ;碘化丙啶 (PI) /Rhodamine(Rh12 3)双染色检测Δψm变化并观察了Caspase 3抑制剂DEVD CHO对As2 O3 诱导肿瘤细胞凋亡的影响。结果　As2 O3 诱导肿瘤细胞凋亡效应与其诱导细胞Δψm下降和Caspase 3活性升高相关 ,抑制Caspase 3活性后As2 O3 使细胞选择坏死通路。结论　As2 O3 可能通过诱导细胞Δψm下降激活Caspase 3并最终使肿瘤细胞凋亡。     

冬凌草甲素诱导HL-60细胞凋亡

目的　研究冬凌草甲素诱导人白血病HL 6 0细胞凋亡的作用。方法　形态学观察 ,DNA凝胶电泳及流式细胞术。结果　冬凌草甲素能显著地诱导HL 6 0细胞发生凋亡 ,其作用呈明显的浓度效应关系和时间依赖性。形态学观察可见凋亡小体的形成 ,琼脂糖凝胶电泳可见明显的DNA梯带 ;流式细胞仪检测到G1亚峰。结论　冬凌草甲素能诱导HL 6 0细胞凋亡 ,并与其细胞杀伤活性相互平行 ,提示冬凌草甲素的抗癌活性与诱导肿瘤细胞凋亡相关     

三羟基苯甲酸二聚体诱导HL-60细胞凋亡的作用

三羟基苯甲酸二聚体是从菱角中分离出的抗肿瘤单体化合物。本研究主要探讨三羟基苯甲酸二聚体对人早幼粒细胞性白血病细胞株HL-60细胞的抑制作用及诱导其凋亡的分子机制。通过MTT法检测三羟基苯甲酸二聚体对HL-60细胞的增殖抑制作用; 流式细胞仪检测细胞凋亡、细胞内活性氧及线粒体膜电位的变化; 蛋白印迹 技术 ( Western blotting ) 检测胞浆和线粒体细胞色素c水平, 分光光度法测定Caspase-9、Caspase-3蛋白活性。结果发现, 三羟基苯甲酸二聚体显著抑制HL-60细胞的增殖, 其作用呈时间和剂量依赖性。与对照组比较, 三羟基苯甲酸二聚体可增加HL-60细胞内活性氧水平, 降低HL-60细胞线粒体膜电位, 促进线粒体中细胞色素c释放入胞浆, 激活Caspase-9、Caspase-3蛋白。因此三羟基苯甲酸二聚体可能通过线粒体信号传导途径诱导HL-60细胞凋亡。     

3'取代吲哚类衍生物诱导HL-60细胞凋亡的实验研究

目的：研究3-吲哚乙基(3’-甲基-2’-酮)戊酰胺诱导HL-60细胞凋亡的作用机制。方法：用DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪分析3-吲哚乙基(3’-甲基-2’-酮)戊酰胺对HL-60细胞的凋亡诱导作用,检测天冬酰胺特异酶切的半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-8和Caspase-3活性来研究其对HL-60细胞的凋亡诱导途径,并通过间接免疫荧光技术检测其对Bcl-2表达的影响。结果：1．8％DNA琼脂糖凝胶电泳可观察到清晰的“DNA ladder”,流式细胞仪检测3-吲哚乙基(3’-甲基-2’-酮)戊酰胺对HL-60细胞具有明显的凋亡诱导作用。Caspase活性检测表明,Csapase-3活性明显升高而Caspase-8活性无明显变化。流式细胞仪分析表明Bcl-2的表达随着受试物浓度的升高而下降。结论：3-吲哚乙基(3’-甲基-2’-酮)戊酰胺可诱导HL-60细胞凋亡,其诱导凋亡与Bcl-2表达及Caspase-3活性有关。     

DNA引物酶抑制剂碘化-3,3′-二乙基-9-甲基-硫杂羰花青诱导人白血病HL-60细胞凋亡

目的研究DNA引物酶抑制剂碘化-3,3′-二乙基-9-甲基-硫杂羰花青(DMTCCI)诱导人粒细胞性白血病HL-60细胞凋亡并探索其机制。方法分别采用不同浓度的DMTCCI处理培养于RPMI-1640培养基的HL-60细胞。采用MTT法检测DMTCCI对HL-60细胞的生长抑制作用。采用流式细胞仪和DNA琼脂糖凝胶电泳方法检测细胞凋亡。采用蛋白免疫印迹(Western blotting)法观察凋亡相关蛋白survivin， Bcl-xL， Bad， Bax， Bcl-2， caspase-9， caspase-3， caspase-6， PARP， DFF45和lamin B的表达。采用ApoAlert Caspase-3分析试剂盒检测caspase-3的活性。结果DMTCCI具有抑制人白血病HL-60细胞增殖的作用，其IC₅₀值为0.24 μmol·L^-1。流式细胞仪和DNA琼脂糖凝胶电泳结果显示，DMTCCI可诱导HL-60细胞凋亡。在经DMTCCI处理的HL-60细胞中，survivin和Bcl-xL蛋白的表达水平下调，Bad和Bax蛋白的表达水平上调，Bcl-2蛋白的表达水平无变化，caspase-9，caspase-3，caspase-6，PARP，DFF45和lamin B被分别裂解，产生相应裂解产物。在HL-60细胞中，caspase-3的活性在1 μmol·L^-1 DMTCCI处理3 h时明显升高，在处理12 h时达到最高峰。结论DMTCCI可抑制人白血病HL-60细胞的增殖并诱导其发生细胞凋亡。Bcl-2家族蛋白、survivin和caspases家族蛋白可能参与了上述诱导HL-60细胞凋亡的过程。     

巴豆生物碱诱导Hela细胞凋亡及其作用机制

目的研究巴豆生物碱(CA)在体外诱导宫颈癌Hela细胞凋亡及其作用机制。方法 MTT法检测CA对Hela细胞增殖的抑制率;AnnexinV-PI染色检测细胞凋亡;Caspase-8试剂盒检测Caspase-8在Hela细胞中的活性;RT-PCR检测Caspase-8 mRNA的表达。结果巴豆生物碱对Hela细胞生长有抑制作用,且呈剂量依赖关系。流式细胞术结果提示CA可诱导Hela细胞凋亡。CA处理Hela细胞后发现Caspase-8活性明显增加,Caspase-8的mRNA高表达。结论 CA对人宫颈癌Hela细胞有增殖抑制和诱导凋亡作用,其诱导Hela细胞凋亡的分子机制可能与上调Caspase-8基因表达有关。     

DNA引物酶抑制剂碘化-3,3''-二乙基-9-甲基-硫杂羰花青诱导人白血病HL-60细胞凋亡

目的 研究DNA引物酶抑制剂碘化-3,3'-二乙基-9-甲基-硫杂羰花青(DMTCCI)诱导人粒细胞性白血病HL-60细胞凋亡并探索其机制.方法 分别采用不同浓度的DMTCCI处理培养于RPMI-1640培养基的HL-60细胞.采用MTT法检测DMTCCI对HL-60细胞的生长抑制作用.采用流式细胞仪和DNA琼脂糖凝胶电泳方法检测细胞凋亡.采用蛋白免疫印迹(Western blotting)法观察捌亡相关蛋白survivin,Bcl-xL,Bad,Bax,Bcl-2,caspase-9,caspase-3,caspase-6,PARP,DFF45和lamin B的表达.采用ApoAlert Caspase-3分析试剂盒检测caspase-3的活性.结果 DMTCCI具有抑制人白血病HL-60细胞增殖的作用,其IC50值为0.24μmol·L-1.流式细胞仪和DNA琼脂糖凝胶电泳结果显示,DMTCCI可诱导HL-60细胞凋亡.在经DMTCCI处理的HL-60细胞中,survivin和Bcl-xL蛋白的表达水平下调,Bad和Bax蛋白的表达水平上调,Bcl-2蛋白的表达水平无变化,caspase-9,caspase-3,caspase-6,PARP, DFF45和lamin B被分别裂解,产生相应裂解产物.在HL-60细胞中,caspase-3的活性在1μmol·L-1 DMTCCI处理3 h时明显升高,在处理12 h时达到最高峰.结论 DMTCCI可抑制人白血病HL-60细胞的增殖并诱导其发生细胞凋亡.Bcl-2家族蛋白、survivin和caspases家族蛋白可能参与了上述诱导HL-60细胞凋亡的过程.     

多胺缀合物WJH-6诱导白血病细胞凋亡机制研究

探讨新型多胺缀合物WJH-6对多胺转运体的识别及其诱导K562、HL-60白血病细胞凋亡的机制。采用MTT法检测细胞毒性; 应用流式细胞仪检测细胞周期及凋亡率的变化; 应用高内涵活细胞成像系统检测WJH-6对多胺转运体的识别, 细胞内含量的变化及对线粒体膜电位、Bid、Caspase-3、-8、-9的影响; 采用Western blotting方法检测线粒体及胞浆中细胞色素c含量的变化。实验结果显示, WJH-6具有良好的多胺转运体识别能力, 并可诱导白血病K562、HL-60细胞线粒体膜电位降低、细胞色素c释放以及Bid、Caspase-3、-8、-9等活化。本研究结果提示, WJH-6诱导的白血病K562、HL-60细胞凋亡与线粒体损伤有关。     

大黄素可能通过抑制Akt信号通路诱导HL-60细胞凋亡

为研究大黄素(emodin)对人髓系白血病细胞株HL-60细胞增殖、凋亡的影响及Akt信号通路在其中的作用, 应用MTT法检测大黄素对HL-60细胞增殖的影响；细胞周期分析、线粒体细胞凋亡流式检测法分析细胞周期变化及细胞凋亡；Western blotting检测Akt信号通路蛋白表达水平的变化。结果显示，大黄素能有效抑制HL-60细胞的增殖，作用48 h的IC₅₀约为20 μmol·L^-1， 并能诱导其凋亡, 随药物作用浓度的增加， 凋亡率也逐渐上升； 大黄素作用后， HL-60细胞G_0/G1期细胞增多， 而S期及G₂期的细胞减少； Western blotting检测结果显示， 大黄素下调HL-60细胞Akt、p-Akt、IκB-α、p-IκB-α、p65、p-p65、mTOR及p-mTOR蛋白的表达。因此,大黄素能有效抑制HL-60细胞增殖，将细胞阻滞于G_0/G1期，诱导其凋亡；Akt信号通路可能参与了大黄素抑制HL-60细胞增殖、诱导凋亡的过程。     

灯盏花素增强马利兰抑制HL-60细胞作用的实验研究

目的:研究灯盏花素增强马利兰抑制HL-60细胞的作用。方法:MTT法检测细胞活性,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,Western blotting法检测肿瘤抑制基因(p53)/B细胞淋巴瘤-白血病-2(Bcl-2)的表达,ELISA、比色法和分光光度法分别检测细胞色素C、Caspase-3、Caspase-8和谷胱甘肽(GSH)的含量。结果:灯盏花素能增强马利兰抑制HL-60细胞生长的作用,促进小鼠淋巴细胞对马利兰的抵抗,上调p53/Bcl-2表达比率,激活Caspase-3和Caspase-8,升高细胞色素C,降低GSH。结论:灯盏花素对马利兰抗肿瘤具有增效减毒作用,其机制可能与激活肿瘤耐药细胞凋亡通路有关。     

c-myc、bcl-2基因表达和蝌蚪提取液抗早幼粒细胞白血病作用的研究

目的 研究蝌蚪提取液(T871)抗早幼粒细胞白血病(APL)的作用及其过程中c-myc、bcl-2癌基因表达的变化。方法 利用细胞生长曲线、形态学观察、流式细胞仪、TUNEL法及原位mRNA杂交和完整细胞原位斑点印迹技术，观察T871抗人APL细胞系(HL-60)细胞的作用及其过程中c-myc、bcl-2癌基因表达的变化。结果 T871能抑制HL-60细胞增殖，并出现细胞凋亡的形态学特征，流式细胞仪及TUNEL法检测结果显示凋亡细胞百分数比对照组显增加，并伴有癌基因c-myc、bel-2mRNA表达的下调。结论 T871可抑制HL-60细胞的增殖同时诱导其凋亡，且c-myc、bcl-2癌基因可能参与了此过程。     

Induction of caspase-3-dependent apoptosis in human leukemia HL-60 cells by δ-elemene

δ-Elemene, an antitumor component, is a chemical compound isolated from Curcuma wenyujin, a Chinese traditional herb. We examined whether δ-elemene could inhibit cell growth and cell cycle progression and induce apoptosis in human leukemia HL-60 cells. The results demonstrated that δ-elemene induces significant apoptosis of HL-60 cells, as shown by MTT assay, annexin V (AnV) binding of externalized phosphatidylserine (PS), and the mitochondrial probe JC-1 using flow cytometry. HL-60 cells treated with δ-elemene showed high percentages in the early apoptotic and late apoptoctic/necrotic stages, as well as caspase-3 activation of HL-60 cells. By monitoring the changes in cell cycle profiles, we confirmed that δ-elemene could interfere with the cell cycle in the G2/M phase and induce apoptosis in HL-60 cells in a time-dependent manner. Caspase-3 plays a direct role in proteolytic cleavage of the cellular proteins responsible for progression to apoptosis. Therefore we examined apoptosis in HL-60 cells after exposure to δ-elemene and measured caspase-3 activities with or without Z-Val-Ala-Asp-fluoromethylketone (z-VAD-fmk, a broad-spectrum caspase inhibitor) pretreatment using flow cytometric analysis. The results showed that δ-elemene could induce caspase-3 activation as detected by the decrease in δ-elemene-induced caspase-3 activities after treatment with z-VAD-fmk. In the present study, δ-elemene activated typical caspase-dependent apoptosis in HL-60 cells, as demonstrated by an inhibitory effect of z-VAD-fmk on this cell death. During δ-elemene-induced apoptosis, cytochrome c and apoptosis-inducing factor were released into the cytosol and BAX was translocated from the cytosol to mitochondria. However, these were not prevented by z-VAD-fmk. In conclusion, our study demonstrated that δ-elemene could induce G2/M cell cycle transition and trigger apoptosis through a caspase-3-dependent pathway.