蝙蝠葛碱体外肝肾细胞毒性的初步研究

目的探讨北豆根中的成分蝙蝠葛碱在体外对人正常肝细胞(L-02)、人胚肾细胞(HEK-293)和人肾小管上皮细胞(HK-2)的影响.方法采用 MTT 法检测蝙蝠葛碱对肝细胞和肾细胞活力的影响;采用倒置相差显微镜对给药后的细胞形态进行观察;检测给予蝙蝠葛碱后,肝细胞培养上清液中的功能性指标(AST、ALP、LDH)和肾细胞培养上清液中的功能性指标(LDH)的含量.结果 MTT 法显示,50~100 g·mL-1的蝙蝠葛碱能显著降低 L-02细胞的活力(P <0.01),25~200 g·mL-1的蝙蝠葛碱对 HEK-293细胞有明显的抑制作用(P <0.01),12.5~50 g·mL-1的蝙蝠葛碱能降低 HK-2细胞的活力(P <0.01或 P <0.05);给予蝙蝠葛碱后,肝肾细胞均不同程度的皱缩、减少、甚至死亡,且随药物浓度的增加细胞呈现此状态的数目增多;100和200 g·mL-1的蝙蝠葛碱能显著升高肝细胞培养上清中的AST、ALP、LDH 含量和肾细胞上清中的 LDH 含量(P <0.01).结论蝙蝠葛碱对肝肾细胞均有毒性作用.μμμμ     

HPLC方法测定华佗再造丸中阿魏酸、吴茱萸内酯、吴茱萸碱和吴茱萸内碱的研究

目的 建立HPLC法测定华佗再造丸中阿魏酸、吴茱萸内酯、吴茱萸碱及吴茱萸次碱的含量.方法 采用Waters SunFire C18（4.6mm×250mm,5μm）色谱柱,以乙腈-0.1%磷酸进行梯度洗脱,流速1.0mL·min-1,阿魏酸检测波长为323nm,吴茱萸内酯、吴茱萸碱检测波长为225nm,吴茱萸次碱检测波长为343nm,柱温30℃.结果 表明阿魏酸、吴茱萸内酯、吴茱萸碱和吴茱萸次碱分别在3.91～39.10μg·mL-1（r=1.0000）、10.70～64.20μg·mL-1（r=0.9998）、7.60～76.00μg·mL-1（r=0.9999）、3.65～36.50μg·mL-1（r=0.9999）范围内与峰面积呈良好的线性关系;平均回收率（n=6）分别为96.6%（RSD=1.0%）、98.1%（RSD=2.2%）、100.3%（RSD=0.8%）、95.3%（RSD=1.2%）.结论 本文方法简便准确,可用于华佗再造丸中阿魏酸、吴茱萸内酯、吴茱萸碱及吴茱萸次碱的含量测定.     

HPLC法同时测定吴茱萸中吴茱萸碱、吴茱萸次碱与吴茱萸内酯的含量

目的:建立同时测定吴茱萸中吴茱萸碱、吴茱萸次碱与吴茱萸内酯含量的方法。方法:采用高效液相色谱法。色谱柱为迪马C1(8200mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈-0.04%庚烷磺酸钠溶液(48:52,V/V),流速为1.0mL·min-1,检测波长为225nm,柱温为35℃。结果:吴茱萸碱、吴茱萸次碱、吴茱萸内酯的进样浓度分别在5.38～53.80、5.02～50.20、10.30～103.00μg·mL-(1r均为0.9999)范围内与各自峰面积积分值呈良好线性关系;三者平均加样回收率分别为99.75%、97.66%、85.68%,RSD分别为0.67%、1.16%、1.54%(n=6)。结论:本方法简便、可行、重复性好,可用于吴茱萸中吴茱萸碱和吴茱萸次碱的含量测定;但吴茱萸内酯的回收率较低,需进一步改进其测定方法。     

高效液相色谱法测定辛萸贴片中吴茱萸次碱的含量

目的建立辛萸贴片中吴茱萸次碱的HPLC测定方法。方法采用ZORBAX SB-C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm)甲醇-水-冰醋酸(60∶40∶0.1)为流动相,流速1.0 mL.min-1,检测波长为343 nm。结果吴茱萸次碱线性范围为10.66~106.0μg.mL-1(r=0.999 9),平均回收率为99.6%(RSD为1.50%)。结论本方法简便、快速、准确,适用于用辛萸贴片的质量控制。     

超临界流体萃取吴茱萸中吴茱萸碱和吴茱萸次碱

目的研究超临界流体萃取(SFE)吴茱萸中吴茱萸碱和吴茱萸次碱的提取工艺,并用高效液相色谱法(HPLC)测定吴茱萸碱和吴茱萸次碱的含量.方法采用95%乙醇作夹带剂,运用超临界流体的萃取工艺,含量测定时,在Water-C18柱上,以乙腈-水(43∶57)为流动相,流速1.0 mL*min-1,检测波长290 nm,柱温40℃.结果吴茱萸碱和吴茱萸次碱的标准曲线在0.024～0.120 μg(r=0.9994)和0.026～0.130 μg(r=0.9995)之间有较好的线性关系;加样平均回收率分别为102.7%(RSD=1.58)和101.7%(RSD=1.79%). 结论采用SFE萃取吴茱萸中吴茱萸碱和吴茱萸次碱的提取工艺速度快,HPLC法测定吴茱萸碱和吴茱萸次碱的含量精确,重现性好.     

34种吴茱萸中吴茱萸碱和吴茱萸次碱的含量测定

建立了吴茱萸中吴茱萸碱和吴茱萸次碱的反相高效液相色谱法 ,并用该法测定了 34种不同产地及不同炮制方法吴茱萸中吴茱萸碱和吴茱萸次碱的含量 .采用峰面积内标法定量 .吴茱萸碱和吴茱萸次碱在 0 5～ 2 0g/mL范围内均呈线性 ,相关系数分别为 0 9999、0 9998,平均回收率分别为 96 6 %、96 0 %     

吴茱萸化学成分研究

目的 研究吴茱萸的活性成分。方法用硅胶色谱技术和重结晶等方法分离化学成分，用IR、NMR和MS等波谱方法确定其结构。结果获得4个化合物，分别鉴定为吴茱萸碱(Ⅰ)、吴茱萸次碱(Ⅱ)、吴茱萸内酯(Ⅲ)和羟基吴茱萸碱(Ⅳ)。结论 首次系统归属吴茱萸碱和吴茱萸次碱的波谱数据。     

HPLC法测定超微戊己丸中吴茱萸碱和吴茱萸次碱含量

目的：建立超微戊己丸中吴茱萸碱和吴茱萸次碱的含量测定方法。方法采用Kromasail C18色谱柱（250mm×4.6mm,5μm）,流动相为流速1.0mL/min的乙腈-乙腈10%（50：50）,测定波长为225nm。结果吴茱萸碱和吴茱萸次碱理论板数分别为2681和2067,Y吴茱萸碱=1.965×10^-7X ＋0.07646,r=0.9999）, Y吴茱萸次碱=3.658×10^-7X-0.2199,r=0.9999）,吴茱萸碱与吴茱萸次碱的线性区间分别为10.2～51.0μg/mL以及10.0～50.0μg/mL ,两者平均回收率分别为97.3%和101.4%,其相对标准偏差分别为3.2%和3.9%,最低检测限为0.05μg/mL和0.1μg/mL。结论使用高效液相色谱法对超微戊己丸当中的吴茱萸碱以及吴茱萸次碱含量进行检测的精确率较高,重现性好。     

提取物纯度对吴茱萸碱和吴茱萸次碱溶解度与表观分配系数的影响

分别采用平衡法和摇瓶法测定高、中、低纯度(71.0%,49.2%和25.4)吴茱萸提取物中吴茱萸碱和吴茱萸次碱的溶解度及表观分配系数,采用HPLC法测定两者的浓度.高中低纯度吴茱提取物中吴茱萸碱和吴茱萸次碱均在PEG-400中溶解度最高,分别为8～14mg/ml和13～19mg/ml:异丙醇中的溶解度最低(均小于7mg/ml).吴茱萸碱和吴茱萸次碱在介质中的溶解度依次为PEG-400＞Tween-80＞RH-40＞MCT>无水乙醉=1,2-丙二醇=1,3-丁二醇=异丙醇.两者的表观分配系数的对数值(1gp)为0.6～1.2.吴茱萸提取物纯度越高,吴茱萸碱和吴茱萸次碱的溶解度越低:纯度与表观分配系数无相关性.pH对溶解度和表观分配系数均无明显影响.     

HPLC同时测定肠康片中吴茱萸碱、吴茱萸次碱、木香烃内酯和去氢木香内酯的含量

目的 建立肠康片中吴茱萸碱、吴茱萸次碱、木香烃内酯和去氢木香内酯的HPLC含量测定方法。方法 色谱柱为岛津Eclipse-XDB-C₁₈柱(250 mm×4.6 mm, 5μm),流动相为乙腈-0.02%磷酸(40∶60),流速1.0 mL·min^-1,柱温为35℃,检测波长为225 nm。结果 吴茱萸碱y=102097.5127x+1168.9695(r=0.9999),线性范围为0.5016～5.0160μg·mL^-1,平均回收率为101.52%,RSD=1.87%(n=6);吴茱萸次碱：y=524410184x-316.7073(r=0.9998),线性范围为0.5021～5.0209μg·mL^-1,平均回收率为101.56%、RSD=2.06%(n=6);木香烃内酯：y=1757575.24234x-75774.20833(r=0.9996),线性范围为0.0299～0.2993 mg·mL^-1,平均回收率为100.05%、RSD=1.26%(n=6);去氢木香内酯：y...     

万古霉素对人肾小管上皮细胞中肾损伤分子-1表达的影响研究

目的:探讨万古霉素对人肾小管上皮细胞(HK-2细胞)中肾损伤分子-1(KIM-1)表达的影响及其可能机制。方法:体外培养HK-2细胞,按万古霉素作用浓度和时间分为不同浓度(0、10、20、30、40、50、60μg·mL-1)和不同时间(0、3、6、12、24、48h)组。显微镜观察HK-2细胞形态学变化,反转录-聚合酶链反应检测KIM-1mRNA表达,细胞免疫荧光法和免疫印迹法检测KIM-1蛋白表达,硫代巴比妥酸法检测HK-2细胞上清液中丙二醇(MDA)的含量。结果:镜下显示,0μg·mL-1组贴壁细胞生长良好,20、40μg·mL-1组部分贴壁细胞脱落和坏死,60μg·mL-1组大部分细胞脱落和坏死;与0μg·mL-1组比较,各浓度组KIM-1mRNA的表达均明显增强(P<0.05或P<0.01),10、20μg·mL-1组KIM-1蛋白表达明显增强(P<0.01),30、40、50、60μg·mL-1组MDA含量明显增强(P<0.01);与0h组比较,24、48h组KIM-1mRNA和蛋白表达、MDA含量均显著增强(P<0.05或P<0.01)。结论:万古霉素刺激可促进HK-2细胞KIM-1mRNA和蛋白的表达,其机制可能与万古霉素致HK-2细胞氧化应激有关。     

红景天苷对脂多糖诱导的支气管上皮细胞损伤的保护作用

目的：探讨红景天苷对脂多糖（LPS）诱导的正常人支气管上皮细胞（NHBE）损伤的保护作用及机制。方法：培养NHBE细胞,调整其细胞的密度为每毫升含有1＆#215;104个,给予不同浓度的红景天苷（3.3、10、30μg·mL-1）作用24 h,MTT检测细胞的活力,观察红景天苷在正常的情况下对人支气管上皮细胞的影响。在此基础上,以终浓度为2μg·mL-1的LPS作用NHBE细胞6 h,诱导其损伤,然后给予红景天苷24 h,MTT检测细胞活力,收集上清液,ELISA试剂盒检测炎症因子IL-6（白介素-6）、IL-1β（白介素-1β）、TNF-α（肿瘤坏死因子-α）的水平,收集细胞,用Western blot方法测定细胞中的蛋白NF-κB（核因子）、MAPK（丝裂原活化蛋白激酶）的表达。结果：在正常条件下,红景天苷对人支气管上皮细胞的活力无影响,没有损伤作用。红景天苷可明显降低培养液中IL-6、IL-1β、TNF-α的水平（P〈0.01）,降低细胞中NF-κB、MAPK的表达（P〈0.01）。结论：红景天苷可以通过降低IL-6、 IL-1β、TNF-α的水平来减轻LPS诱导的NHBE细胞的损伤,减轻炎症反应。     

Aβ（25-35）对原代培养大鼠皮质神经元的损伤作用

目的考察Aβ25-35对原代培养大鼠皮质神经元的损伤作用。方法将原代培养的大鼠皮质神经元分为对照组、谷氨酸（glutamate,Glu）组及3个浓度的Aβ25-35组,每组各6孔。观察神经元的形态改变,并测定细胞存活率及培养液中乳酸脱氢酶（LDH）的活力值。结果与对照组比较,Glu组可造成大鼠皮质神经元明显损伤,形态发生显著改变,细胞存活率为（53.1±5.5）%（P〈0.01）,并且培养液中LDH漏出显著增多,LDH的活力值为（39.9±2.9）U/gProt（P〈0.01）;Aβ25-35三个剂量组神经元存活率均显著降低,分别为（69.3±5.9）%（P〈0.01）、（52.7±3.0）%（P〈0.01）和（33.2±1.8）%（P〈0.01）,Aβ25-35低、中剂量组培养液中LDH漏出未见明显改变,LDH活力值分别为（23.5±1.4）U/gProt和（24.7±1.3）U/gProt（P〉0.05）,Aβ25-35高剂量组培养液中LDH漏出显著升高,LDH活力值为（38.8±2.0）U/gProt（P〈0.01）,与Glu组相当（P〉0.05）。结论 Aβ25-35能剂量依赖性地损伤皮质神经元,1μmol/LAβ25-35剂量组处理24h后细胞存活率可降低50%左右,可用于Aβ25-35体外诱导阿尔茨海默病细胞模型的建立。     

不同生产工艺的戊己丸中吴茱萸碱和吴茱萸次碱含质量比较

目的:建立戊己丸中吴茱萸碱和吴茱萸次碱含质量的高效液相(HPLC)测定方法,并对超微戊己丸和常规戊己丸中吴茱萸碱和吴茱萸次碱的含质量进行比较。方法:采用色谱柱HypersilC18柱(4.6mm×250mm,5μm),流动相:乙腈水(48∶52),流速:1mL/min,检测波长:225nm。结果:吴茱萸碱和吴茱萸次碱的理论塔板数均大于3000,吴茱萸碱回归方程:A吴茱萸碱=107.73ρ-14.331,r=0.9999,线性范围1.02～20.4μg/mL;吴茱萸次碱回归方程:A吴茱萸次碱=15.596ρ-45.09,r=0.9998,线性范围4.4～176μg/mL。超微戊己丸中吴茱萸碱平均回收率为:99.61%,RSD为0.50%,质量分数为(0.096±0.0148)%;吴茱萸次碱平均回收率为94.85%,RSD为1.00%,质量分数为(0.343±0.0467)%。常规戊己丸中吴茱萸碱平均回收率为98.56%,RSD为1.70%,质量分数为(0.81±0.003)%;吴茱萸次碱平均回收率为99.55%,RSD为0.50%,质量分数为(0.161±0.0075)%。结论:超微戊己丸中吴茱萸碱和吴茱萸次碱的质量分数高于常规戊己丸。     

地榆正丁醇萃取层对人肝癌细胞株HepG2增殖和凋亡的影响及其机制

目的：利用正丁醇溶剂提取地榆中的鞣质（15.36％）,研究其萃取层对人肝癌细胞株HepG2增殖和凋亡的影响及其机制。方法用不同浓度的正丁醇萃取层作用于人肝癌HepG2细胞,通过MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞术检测肿瘤细胞凋亡率和细胞内活性氧（ROS）的含量。结果 HepG2细胞经不同浓度（100,150,200,250,300μg·mL-1）的地榆正丁醇萃取层作用48 h,细胞增殖明显受到抑制,其IC50为222.87μg·mL-1。不同浓度（200,400,600μg·mL-1）的地榆正丁醇萃取层作用于HepG2细胞48 h后,细胞的凋亡率和细胞内ROS的含量均明显高于空白组（P〈0.05）,且随着地榆正丁醇萃取层浓度的增加,HepG2细胞的凋亡率和细胞内ROS的含量也逐渐升高。结论地榆正丁醇萃取层可以浓度依赖性方式抑制人肝癌细胞株HepG2的增殖并促进其凋亡,这可能与其促进细胞内ROS的产生有关。     

市售不同批次西洛他唑片人体药动学参数比较

目的:比较市售不同批次西洛他唑片的人体药动学参数。方法:18～22名健康志愿受试者单剂量口服中国大冢制药有限公司生产的不同批次西洛他唑片后,用高效液相色谱法测定血药浓度,以3p97计算机软件计算药动学参数。结果:该厂生产的5个批次西洛他唑片在人体内的药-时曲线均符合二室模型,主要药动学参数分别为:cmax(0.99±0.37)、(0.87±0.38)、(0.81±0.27)、(0.92±0.30)、(1.09±0.46)μg·mL-1,tmax(3.88±1.19)、(3.22±1.26)、(3.33±1.50)、(3.28±0.96)、(3.05±1.05)h,AUC0～48h(12.84±4.10)、(11.07±3.72)、(10.77±3.39)、(10.65±2.44)、(11.09±4.09)μg·h·mL-1。主要药动学参数经t检验,无显著性差异。结论:该厂家生产的不同批次的西洛他唑片在人体内的药动学过程基本一致,质量稳定,可用作西洛他唑片仿制药品的参比制剂。     

麻醉诱导期间靶控输注舒芬太尼对丙泊酚镇静作用的影响

目的:探讨麻醉诱导期间不同浓度舒芬太尼对睫毛反射、意识消失时丙泊酚血药浓度的影响。方法:选择40例择期手术患者靶控输注舒芬太尼、丙泊酚全凭静脉麻醉,根据舒芬太尼目标浓度将患者分为4组,分别为0ng·mL-(1A组)、0.2ng·mL-(1B组)、0.4ng·mL-(1C组)、0.8ng·mL-(1D组),每组10例。应用高效液相色谱-质谱联用法测定舒芬太尼血药浓度,反相高效液相色谱法测定丙泊酚血药浓度。结果:麻醉诱导睫毛反射与意识消失时,单用丙泊酚血药浓度分别为2.74μg·mL-1、3.87μg·mL-1;舒芬太尼靶浓度从0.2ng·mL-1升至0.8ng·mL-1,睫毛反射消失时丙泊酚血药浓度从2.67μg·mL-1降至1.58μg·mL-1、意识消失时从3.90μg·mL-1降至2.61μg·mL-1;舒芬太尼与丙泊酚在睫毛反射、意识消失时的量效关系均呈直线关系;D组分别与A、B组比较,在睫毛反射与意识消失时丙泊酚的效应室浓度均明显减少(P<0.05);D组与C组比较,在睫毛反射消失时丙泊酚的效应室浓度也明显减少。结论:麻醉诱导期舒芬太尼与丙泊酚在镇静催眠作用方面表现为相加作用,舒芬太尼靶浓度0.4～0.8ng·mL-1时可明显降低丙泊酚在睫毛反射与意识消失时的血药浓度,推荐临床应用舒芬太尼靶浓度0.4～0.8ng·mL-1为宜。