体外培育牛黄在慢性溃疡性结肠炎小鼠中的抗凋亡机制

目的：研究体外培育牛黄（Calculus Bovis Sativus,CBS）在慢性溃疡性结肠炎（ulcerative colitis,UC）中的抗凋亡机制。方法：将28只雄性C57BL/6小鼠采用随机数表法分为4组,分别为：正常对照组,模型对照组,CBS低剂量组和CBS高剂量组。给予2%葡聚糖硫酸钠（dextran sulfate sodium,DSS）溶液分3个周期诱导慢性溃疡性结肠炎模型。CBS低剂量组和CBS高剂量组在造模期间的最后7 d分别给予50,150 mg·kg^-1·d^-1CBS灌胃处理。计算小鼠生存率,观察结肠组织形态学改变,苏木素-伊红染色、糖原染色评价小鼠结肠损伤情况,TUNEL检测结肠细胞凋亡情况,Western Blot检测细胞凋亡相关蛋白Caspase3、Bcl-2、Bax表达水平。结果：与正常对照组相比,模型对照组小鼠生存率明显下降,结肠组织损伤严重,结肠细胞凋亡率显著增加;Caspase3、Bax蛋白表达量增加而Bcl-2表达减少,Bax/Bcl-2比值升高。经CBS处理后,小鼠生存率提高,结肠组织损伤得到缓解,结肠细胞凋亡率明显下降;Caspase3、Bax蛋白表达水平下调而Bcl-2表达上调,Bax/Bcl-2比值也有所降低。结论：CBS能够通过抑制结肠细胞的凋亡对DSS诱导的慢性UC产生疗效,其抗凋亡机制可能是对细胞凋亡相关蛋白Caspase3、Bcl-2、Bax表达的调控作用。     

非诺贝特改善脂多糖诱导的急性肺损伤及其机制研究

摘要：目的　探究非诺贝特（Fen）对急性肺损伤（ALI）的作用及机制。方法　（1）体内实验。30只C57BL/6雄性小鼠采用随机数字表法分成6组：正常组,模型组（LPS组）,阳性药地塞米松（DXMS）组,Fen低、中、高剂量（20、40、80 mg/kg）组。分组给药12 h后,收集肺泡灌洗液（BALF）,处死小鼠,获取肺组织,记录肺组织湿/干质量比;酶联免疫吸附试验（ELISA）检测肺组织肿瘤坏死因子（TNF）-α、白细胞介素（IL）-6和IL-1β含量;BCA比色法和瑞氏-吉姆萨染色检测BALF中总蛋白含量和免疫细胞数目;苏木精-伊红（HE）染色观察肺组织病变并进行病理评分。Western blot检测肺组织B淋巴细胞瘤-2蛋白（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）及c-Jun氨基末端激酶（JNK）、磷酸化JNK（p-JNK）表达。（2）体外实验。实验设Control、LPS（10 mg/L）、LPS+Fen（5 μmol/L）、LPS+Fen（10 μmol/L）、LPS+Fen（20 μmol/L）组。A549细胞经LPS（10 mg/L）处理后分别加入5、10、20 μmol/L的Fen处理12 h,分别用DCFH-DA、Annexin V-FITC/PI法和Western blot检测Fen对A549细胞ROS、凋亡和凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax及p-JNK影响。另选取LPS（10 mg/L）+Fen（20 μmol/L）处理后添加H2O2（100 μmol/L）,观察细胞ROS、凋亡率和凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达变化。此外,选取LPS（10 mg/L）+Fen（20 μmol/L）处理后添加JNK激动剂Anisomycin（3 μmol/L）,观察Bcl-2、Bax表达变化。结果　（1）与正常组相比,模型组小鼠肺组织湿/干质量比,肺组织损伤评分,TNF-α、IL-6、IL-1β含量,肺泡灌洗液总蛋白含量,免疫细胞数目,p-JNK和Bax表达均出现显著升高,Bcl-2表达显著降低。与模型组相比,Fen低、中、高剂量组上述指标变化均被逆转。（2）Fen能显著减少LPS诱导的A549细胞ROS含量,降低凋亡率,抑制p-JNK和Bax表达并促进Bcl-2表达。H2O2可逆转Fen引起的上述效应。Anisomycin也能抑制Fen引起的Bcl-2上调和Bax蛋白下调。结论　Fen可通过ROS/JNK信号抑制细胞凋亡,从而减轻ALI。     

氨基胍对内毒素性肺损伤细胞凋亡的影响

目的观察选择性一氧化氮合酶抑制剂氨基胍(AG)对大鼠内毒素性肺损伤(ALI)细胞凋亡的影响,探讨AG对肺损伤组织的保护作用及其机制。方法健康♂SD大鼠,随机分为:①对照组;②模型组(LPS组);③AG治疗组。其中LPS组和AG治疗组按治疗时间又分为给LPS3h后治疗3h(3h+3h)组和给LPS6h后治疗3h(6h+3h)组,AG治疗组分别于给LPS3h和6h后给AG(100mg·kg-1),ip给药,LPS组给等量的生理盐水;(3h+3h)组于注射LPS6h后处死大鼠;(6h+3h)组于注射LPS9h后处死大鼠,每组8只动物。模型组、AG治疗组iv注射LPS复制内毒素性肺损伤大鼠模型,对照组给等量生理盐水。逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法测定肺组织中NOSmRNA表达变化;电镜、流式细胞术(FCM)检测肺细胞凋亡率;Westernblot法检测Caspase-3蛋白的表达;免疫组化法测定Bcl-2和Bax蛋白的表达;光镜、电镜观察肺组织病理变化。结果与对照组比较,大鼠肺损伤后,iNOSmRNA表达增强,eNOSmRNA表达减弱,nNOSmRNA表达没有明显变化;细胞凋亡率、Caspase3和Bax蛋白表达明显升高,Bcl-2蛋白表达下降,Bcl-2/Bax降低;肺损伤3h用AG治疗3h后,iNOSmRNA表达、细胞凋亡率、Caspase-3和Bax蛋白表达低于对照组,Bcl-2蛋白表达、Bcl-2/Bax高于对照组,肺组织病理改变减轻;肺损伤6h用AG治疗3h后,治疗效果较差。结论AG在较早时候给药可减轻内毒素性肺损伤,可能与减弱iNOSmRNA和Caspase-3表达、增强Bcl-2蛋白表达、减弱Bax蛋白表达、调节Bcl-2蛋白/Bax蛋白平衡有关。     

恩氟烷对多柔比星致大鼠心肌损伤及p38MAPK信号通路的影响

摘要：目的:探究恩氟烷（ENF）对多柔比星（DOX）致大鼠心肌损伤及p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）信号通路的影响。方法:将72只大鼠随机分为对照组（Control组）、DOX组、ENF低（ENF-L,1%）、中（ENF-M,2%）、高剂量组（ENF-H,3%）、SB组(p38MAPK抑制剂SB203580 1.5 mg·kg-1),每组12只。采用尾静脉注射DOX(4 mg·kg-1)制备心肌损伤大鼠模型。药物组大鼠吸入相应剂量的药物2h。停止吸入后超声心电图检查大鼠心脏功能;生化法检测血清肌酸激酶同工酶MB（CKMB）、肌钙蛋白I（cTnI）、乳酸脱氢酶（LDH）水平和心肌匀浆中丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）水平;HE染色观察心脏组织形态变化;流式细胞术检测心肌细胞凋亡;荧光探针测定心肌中活性氧（ROS）水平;Western blot检测心肌组织p38MAPK通路和凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2基因（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶3（Caspase-3）的表达。结果:与Control组相比,DOX组大鼠的左心室舒张末期容积（LVEDV）、左心室收缩末期容积（LVESV）、血清CKMB、cTnI、LDH、心肌MDA水平、心肌细胞凋亡率、ROS水平、p-p38MAPK/p38MAPK、Bax、Caspase-3表达等指标均显著升高（P<0.05）,左心室射血分数（LVEF）和左心室短轴缩短率（LVFS）、心肌SOD、GSH-Px、Bcl-2表达等指标则显著下降（P<0.05）,心肌损伤严重;与DOX组相比,SB组和ENF-M、ENF-H组大鼠的LVESV、LVEDV、血清CKMB、cTnI、LDH、心肌MDA、细胞凋亡率、ROS水平、p-p38MAPK/p38MAPK、Bax、Caspase-3表达明显下降（P<0.05）,LVEF、LVFS、心肌SOD、GSH-Px、Bcl-2的表达明显升高（P<0.05）;心肌损伤明显减轻。结论:恩氟烷对多柔比星诱导的心肌损伤有保护作用,其作用可能与抑制p38MAPK通路的激活,改善心肌细胞线粒体氧化损伤,抑制细胞凋亡有关。     

硫化氢对脂多糖诱导的大鼠肺组织细胞凋亡的影响

目的探讨硫化氢(H2S)对脂多糖(LPS)诱导的内毒素性急性肺损伤(ALI)大鼠肺组织细胞凋亡的影响。方法♂SD大鼠48只,随机分为6组,每组8只:空白对照组、LPS组、LPS+NaHS低剂量组、LPS+NaHS中剂量组、LPS+NaHS高低剂量组和LPS+PPG组。LPS组、LPS+NaHS低、中、高剂量组和LPS+PPG组舌下静脉注射LPS(5 mg.kg-1),空白对照组注射等容量的生理盐水。LPS+NaHS低、中、高剂量组和LPS+PPG组在注射LPS 3 h时腹腔分别注射低、中、高剂量的氢硫化钠(NaHS)或炔丙基甘氨酸(PPG),空白对照组和LPS组腹腔注射等容量生理盐水。各组大鼠均在舌下静脉注射LPS或生理盐水6 h后处死,取肺组织。应用流式细胞学技术检测各组大鼠肺组织细胞凋亡情况,免疫组化法检测肺组织Bcl-2和Bax的表达,Westernblot检测肺组织天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3和9(Caspase-3、9)的蛋白表达。结果 LPS组与空白对照组比较肺组织细胞凋亡率明显升高,Bcl-2蛋白表达明显减弱,Bax蛋白表达明显增强,Bcl-2/Bax比值明显降低,Caspase-3和Caspase-9蛋白表达明显增强(P<0.05或P<0.01)。与LPS组比较,LPS+NaHS中、高剂量组肺组织细胞凋亡率明显降低,LPS+NaHS高剂量组Bcl-2阳性细胞表达明显增强,LPS+NaHS中、高剂量组Bax阳性细胞表达明显减弱,LPS+NaHS低、中、高剂量组Bcl-2/Bax比值明显增加,LPS+NaHS高剂量组Caspase-3和Caspase-9蛋白表达明显减弱(P<0.05或P<0.01)。与LPS组比较,LPS+PPG组肺组织细胞凋亡率明显升高,Bcl-2阳性细胞表达明显减弱,Bax阳性细胞表达明显增强,Bcl-2/Bax比值明显降低,Caspase-3和Caspase-9蛋白表达明显增强(P<0.05或P<0.01)。结论 LPS诱导的ALI早期肺组织细胞凋亡增加,给予外源性H2S可减少肺组织细胞凋亡,可能与通过下调Bax、Caspase-3、9蛋白表达和上调Bcl-2蛋白表达有关。     

双去甲氧基姜黄素对小鼠乳腺癌的抗肿瘤作用及机制

目的　本研究旨在研究双去甲氧基姜黄素（bisdesmethoxycurcumin,BDMC）对小鼠乳腺癌的影响及机制。方法　采用小鼠乳腺癌4T1细胞,分为Control组及不同剂量（3、9、27 μM）BDMC组,通过CCK8法检测BDMC对小鼠乳腺癌4T1细胞增殖的影响,TUNEL染色检测BDMC对4T1细胞凋亡的影响,Western blot检测BDMC对4T1细胞Bax、Bcl-2及cleaved caspase-3表达的影响;采用4T1乳腺癌荷瘤小鼠模型,分为Control组及不同剂量（10、30 mg/kg）BDMC组,检测BDMC对小鼠肿瘤体积及体质量的影响,Western blot检测BDMC对乳腺癌小鼠肿瘤组织Bax、Bcl-2及cleaved caspase-3表达的影响。采用单因素方差分析。结果　与Control组相比,9、27 μM BDMC均能明显抑制4T1细胞增殖（均P<0.01）,促进其凋亡（均P<0.01）,同时上调细胞Bax/Bcl-2比值及cleaved caspase-3表达（均P<0.01）;10、30 mg/kg BDMC均能明显抑制乳腺癌小鼠肿瘤体积的增长（均P<0.05）,同时明显上调肿瘤组织Bax/Bcl-2比值及cleaved caspase-3表达（均P<0.05）,但对体质量无明显影响。结论　BDMC对乳腺癌小鼠模型具有明显的抗肿瘤作用,其机制与激活线粒体凋亡通路有关。     

FoxO1在同型半胱氨酸诱导的肾脏足细胞损伤及凋亡中的作用研究

摘要：目的　探讨叉头状转录因子O1（FoxO1）在同型半胱氨酸（Hcy）诱导的肾脏足细胞损伤及凋亡中的作用。方法　采用高蛋氨酸饮食喂养胱硫醚β-合成酶（Cbs）基因正常Cbs+/+小鼠和单基因敲除Cbs+/-小鼠各10只。8周后处死,收集肾组织,PAS染色观察小鼠肾小球形态学变化。体外培养足细胞,分为Control组和Hcy组（用含80 μmol/L Hcy的细胞培养液干预48 h）。将携带绿色荧光蛋白（GFP）的过表达FoxO1腺病毒（Ad-FoxO1）和干扰FoxO1腺病毒（Sh-FoxO1）转染足细胞,分为对照组、Ad-GFP组、Ad-FoxO1组、Sh-NC组、Sh-FoxO1组、Ad-GFP+Hcy组、Ad-FoxO1+Hcy组、Sh-NC+Hcy组、Sh-FoxO1+Hcy组。Western blot检测小鼠肾组织和足细胞裂隙膜蛋白（Podocin和Nephrin）、FoxO1及凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、半胱氨酸蛋白酶12（Caspase12）蛋白表达;qPCR检测小鼠肾组织和足细胞中FoxO1 mRNA的表达。结果　PAS染色结果显示,Cbs+/+组小鼠肾小球结构正常,基底膜清晰且分布均匀,而Cbs+/-组小鼠肾小球基底膜则呈现节段性增厚,系膜基质增多;与Cbs+/+组小鼠比较,Cbs+/-组小鼠肾组织中Podocin、Nephrin和FoxO1蛋白、FoxO1 mRNA的表达明显降低（P＜0.01）。与Control组比较,Hcy组FoxO1 mRNA和蛋白表达显著降低（P＜0.01）;过表达FoxO1后,与Ad-GFP+Hcy组相比,Ad-FoxO1+Hcy组Podocin和Nephrin蛋白表达均明显升高,Bax/Bcl-2比值、Caspase12蛋白表达均明显降低（P＜0.05）;而干扰FoxO1后,与Sh-NC+Hcy组相比,Sh-FoxO1+Hcy组Podocin和Nephrin蛋白表达均明显降低,Bax/Bcl-2比值、Caspase12蛋白表达均明显增高（P＜0.05）。结论　FoxO1可减轻Hcy诱导的小鼠肾脏足细胞损伤及凋亡。     

生脉注射液对大鼠阿霉素心肌损伤的保护作用及其抗细胞凋亡机制研究

目的探讨生脉注射液对阿霉素心肌损伤的作用是否为通过抗细胞凋亡机制。方法腹腔注射阿霉素建立大鼠阿霉素心肌损伤模型。观察大鼠心率变化,计算死亡率;测定各组大鼠肌酸激酶同工酶（CK-MB）;TUNEL法检测细胞凋亡;免疫组化检测Bax、Bcl-2蛋白水平表达;RT-PCR检测Bax、Bcl-2mRNA水平表达。结果生脉注射液在蛋白、mRNA水平可明显使Bcl-2表达增加,Bax表达减少;减少CK-MB释放,减少死亡率。与模型组比较均有显著性意义（P〈0.01或0.05）,其疗效成一定剂量依赖性。结论生脉注射液对大鼠阿霉素心肌损伤有明显疗效,其机制可能与抑制细胞凋亡等作用有关。     

L-硝基精氨酸对大鼠内毒素性肺损伤治疗作用及其机制的研究

目的探讨L-硝基精氨酸（NG—nitro-L—arginine,L—NA）对内毒素性肺损伤大鼠肺表面活性物质（PS）和细胞凋亡的影响,探讨L—NA对肺损伤的保护作用及其机制。方法健康雄性SD大鼠采用舌下静脉注射脂多糖（LPS）复制肺损伤模型,分别于给予LPS 1h和6b后给予0．9％氯化钠溶液（对照纽及LPS组,静脉给药）和L-NA（20mg／kg,静脉给药）（L-NA治疗组）,治疗3h,取肺组织,原位杂交法（ISH）测定肺组织肺表面活性物质蛋白A（SP-A）mRNA;流式细胞术（FCM）检测肺细胞凋亡率;Western blot法检测Caspase-3蛋白的表达;免疫组化法测定Bcl-2和Bax蛋白的表达。结果与对照组比较,大鼠肺损伤后SP-A mRNA表达明显下降（P〈0．01）;细胞凋亡率、Caspase-3和Bax蛋白表达明显升高（P〈0．01）,Bcl-2蛋白表达和Bcl-2／Bax降低（P〈0．01）;肺损伤1h用L—NA治疗3h后,SP-A mRNA阳性细胞表达明显增强（P〈0．05）,细胞凋亡率降低（P〈0．05）;但Caspase-3、Bax、Bcl-2蛋白表达、Bcl-2／Bax与LPS组比较没有明显的变化（P〈0．05）,肺组织病理改变减轻,肺损伤6h用L—NA治疗3h对LPS引起的以上变化没有明显影响。结论肺损伤1h后给予L—NA可减轻内毒素性肺损伤,增强PS表达,减少细胞凋亡是其机制之一。     

Caspase抑制剂对大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响

目的 探讨Caspase抑制剂z-VAD-fmk对缺血-再灌注(I-R)心肌细胞凋亡及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响.方法 24只大鼠随机分为假手术(C)组、I-R对照(B)组和z-VAD-fmk治疗(A)组,以穿线结扎或松扎左冠状动脉制备大鼠心肌I-R模型,TUNEL法检测心肌细胞凋亡指数(AI),免疫组化法检测Bcl-2、Pax蛋白表达,并分析心肌组织病理学损害程度.结果 B组和A组Bcl-2、Bax基因蛋白表达水平均明显高于C组(P<0.05).A组凋亡指数显著低于B组;与B组比较,A组Bax蛋白表达水平有所下降,而Bcl-2蛋白表达水平显著升高(P<0.05),Bcl-2/Bax比值较对照组明显增加.结论 Caspase抑制剂可抑制I-R后心肌细胞凋亡,其机制可能与上调Bcl-2和下调Bax蛋白表达有关.     

辛伐他汀抑制大鼠心肌细胞TNF-α的表达及其与活性氧的关系

目的:探讨辛伐他汀对脂多糖(LPS)诱导大鼠心肌细胞TNF-α表达的影响及其分子机制.方法:以培养的新生SD大鼠心肌细胞为实验模型,应用RT-PCR和ELISA检测TNF-α mRNA和蛋白表达水平,采用荧光探针二氯荧光素二乙酸(DCF-DA)测定细胞内活性氧(ROS)水平,通过细胞色素C还原试验测定还原型辅酶Ⅱ(NADPH)氧化酶活性.结果:LPS组心肌细胞TNF-α mRNA和蛋白表达水平分别为(0.29±0.07)、(83.6±14.5)pg/mL,与对照组(0.07±0.02)、(22.1±7.1)pg/mL比较显著升高(P＜0.01).1 μmol/L和10 μmol/L辛伐他汀干预下TNF-α mRNA水平为0.18±0.05、0.15±0.02,蛋白含量为(43.1±8.3)、(40.1±7.3)pg/mL,与IPS组比较显著降低(P＜0.01).在抗氧化剂氮乙酰半胱氨酸和二亚苯基碘鎓预处理后,TNF-α蛋白含量分别为(39.1±10.2)、(37.9±8.9)pg/mL,与LPS组比较均显著降低(P＜0.01).LPS组DCF荧光强度为83±15,NADPH氧化酶活性为(246±43)%,均明显高于对照组(P＜0.01).辛伐他汀干预下DCF荧光强度为41±8,氧化酶活性为(120±17)%,与LPS组比较均显著下降(P＜0.01).在外源性H_2O_2刺激下,TNF-α蛋白含量为(65.0±17.2)pg/mL,与对照组比较显著升高(P＜0.01).辛伐他汀干预下TNF-α蛋白含量为(58.8±15.8)pg/mL,与H_2O_2,组比较变化相近(P＞0.05).在甲羟戊酸和辛伐他汀共同干预作用下,心肌细胞TNF-α mRNA和蛋白表达水平、ROS水平及NADPH氧化酶活性与辛伐他汀干预组比较均显著升高(P＜0.01),与LPS组比较变化相近(P＞0.05).结论:辛伐他汀能够抑制LPS诱导心肌细胞TNF-α表达的作用,其机制可能与降低NADPH氧化酶活性从而减少ROS的生成有关.     

没食子乙醇提取物对结肠癌细胞JAK2/STAT3信号通路的调控作用研究

目的基于蛋白酪氨酸激酶2(JAK2)/信号传导及转录活化因子3(STAT3)信号通路研究没食子乙醇提取物对结肠癌细胞HCT-116、Caco-2增殖、迁移的调控机制。方法采用CCK-8法检测0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mg/mL没食子乙醇提取物作用12、24、48、72 h后对HCT-116、Caco-2细胞增殖的影响。以0.1、0.3、0.5 mg/mL没食子乙醇提取物作用于HCT-116、Caco-2细胞24 h后,采用划痕实验测定细胞的迁移情况,采用荧光探针法检测细胞内活性氧(ROS)水平,采用酶联免疫吸附法检测细胞上清液中白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,采用Western blot法检测细胞中JAK2、STAT3磷酸化水平和B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达水平。结果与空白对照比较,0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mg/mL没食子乙醇提取物作用12、24、48、72 h后均可显著抑制细胞增殖(P<0.05)。0.1、0.3、0.5 mg/mL没食子乙醇提物作用24 h后,2种细胞的划痕愈合率和细胞上清液中IL-6、TNF-α水平,以及细胞中JAK2、STAT3磷酸化水平和Bcl-2蛋白表达水平均显著降低(P<0.05);细胞内ROS水平、Bax蛋白表达水平均显著升高(P<0.05)。结论没食子乙醇提取物可抑制结肠癌细胞HCT-116、Caco-2的增殖和迁移,其机制可能与增加细胞内ROS的积累,下调肿瘤微环境中炎症因子IL-6、TNF-α的表达和JAK2/STAT3信号通路中JAK2、STAT3的磷酸化水平,进而下调Bcl-2蛋白表达、上调Bax蛋白表达有关。     

福辛普利联合非诺贝特对糖尿病小鼠视网膜病变干预作用的研究

目的 研究福辛普利（Fosinopril）联合非诺贝特（Fenofibrate）对糖尿病小鼠视网膜细胞凋亡的影响及相关基因的表达和视网膜组织中血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）、氧化相关物质的影响,以明确其抑制糖尿病视网膜病变（diabetic retinopathy,DR）的作用机制。方法 选取清洁级性成熟ICR小鼠150只,随机分为5组（每组30只）：A组（假造模组,普通饲料喂养并给予相同体积的生理盐水）、B组（模型组,高脂饲料喂养4 w后给予腹腔注射链脲佐菌素（streptozotocin,STZ）,给予相同体积生理盐水灌胃8 w）、C组（福辛普利对抗组,高脂饲料喂养4 w后给予腹腔注射链脲佐菌素,给予福辛普利干预8 w）、D组（非诺贝特对抗组,高脂饲料喂养4 w后给予腹腔注射链脲佐菌素,给予非诺贝特干预8 w）、E组（福辛普利+非诺贝特联合对抗组,高脂饲料喂养4 w后给予腹腔注射链脲佐菌素,给予福辛普利+非诺贝特干预8 w）,0w和8w时测血糖BG,处死小鼠取眼球制备视网膜组织匀浆取上清检测谷光甘肽过氧化物酶（Glutathione peroxidase,GSH-PX）、超氧化物歧化酶（Superioxide dismutase,SOD）、活性氧类物质（Reactive oxygen species,ROS）、丙二醛（Malondialdehyde,MDA）、VEGF浓度,用RT-PCR法检测视网膜Bax与Bcl-2基因mRNA水平的表达,并用Tunel染色法检测视网膜细胞凋亡情况。结果B、C、D、E组小鼠用药前后血糖无差别(p>0.05); 均较A组明显升高(p<0.05);A组小鼠视网膜组织GSH-PX、SOD活性值及Bcl-2基因mRNA水平表达均高于其他四组（P＜0.05）,而ROS、MDA、VEGF、Bax基因mRNA水平表达与Tunel指数均低于B、C、D组（P＜0.05）;B组小鼠GSH-PX、SOD活性值及Bcl-2基因mRNA水平表达均低于其他四组（P＜0.05）,而ROS、MDA、VEGF、Bax基因mRNA水平表达与Tunel指数均高于其他四组（P＜0.05）;E组小鼠GSH-PX、SOD活性值及Bcl-2基因mRNA水平表达均高于C、D组（P＜0.05）,而ROS、MDA、VEGF、Bax基因mRNA水平表达与Tunel指数均低于C、D组（P＜0.05）;D组小鼠GSH-PX、SOD活性及Bcl-2基因mRNA水平表达均高于C组（P＜0.05）,而ROS、MDA、Bax基因mRNA水平表达与Tunel指数均低于C组（P＜0.05）;C组小鼠VEGF浓度值低于D组（P＜0.05）。结论 福辛普利及非诺贝特均能改善DR,通过抑制凋亡与抗氧化对视网膜起到一定的保护作用,但两药联合应用效果更佳。     

富氢水对小鼠脓毒症胰腺损伤的改善作用

目的 探讨富氢水（HRS）对脂多糖（LPS）诱导的小鼠脓毒症胰腺损伤的影响及可能机制。方法 采用 LPS尾静脉注射的方法建立小鼠脓毒症胰腺损伤模型。按随机数字表法将C57BL/6J雄性小鼠分为对照组、模型组 （LPS组,LPS 5 mg/kg尾静脉注射）和HRS处理组（LPS+HRS组,LPS造模1 h后HRS 10 mL/kg腹腔注射）,每组6只。 制模后观察各组小鼠行为学表现,24 h后对各组小鼠进行胰腺组织苏木素伊红（HE）染色,并于显微镜下进行改良 Schmidt组织病理学评分,酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测血清淀粉酶含量、胰腺组织中肿瘤坏死因子（TNF）-α、 白细胞介素（IL）-6、髓过氧化物酶（MPO）和丙二醛（MDA）水平。结果 与对照相比,LPS组小鼠表现为嗜睡、寒战、 行动迟缓,梳毛活动减少,并出现严重腹泻;胰腺组织出现水肿、炎性细胞浸润、出血和坏死,各项改良Schmidt组织 病理学评分及总分升高;血清淀粉酶水平升高,胰腺组织中TNF-α、IL-6、MPO和MDA水平升高（均P＜0.05）。与 LPS组相比,LPS+HRS组小鼠嗜睡和寒战程度减轻、梳毛活动增加、腹泻减轻、排泄物减少;胰腺组织水肿、炎性细胞 浸润、出血和坏死程度减轻,各项改良Schmidt组织病理学评分无明显变化（P＞0.05）,改良Schmidt组织病理学评分 总分降低;血清淀粉酶水平,胰腺组织中TNF-α、IL-6、MPO和MDA水平显著降低,但仍高于对照组（均P＜0.05）。 结论 富氢水可通过抑制炎症反应和减轻氧化应激改善LPS诱导的小鼠脓毒症胰腺损伤。     

PCSK9抑制剂在ox-LDL诱导HUVECs损伤中的保护作用研究

目的　探讨人类枯草溶菌素转化酶9（PCSK9）抑制剂对氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）导致的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）损伤的保护机制。方法　对数生长期HUVECs细胞分为Control组（正常培养）,ox-LDL组（50 mg/L ox-LDL诱导24 h）,低、中、高剂量PCSK9抑制剂组（分别用5、10、20 μmol/L PCSK9抑制剂预处理24 h,再加入50 mg/L ox-LDL诱导24 h）。采用CCK-8法检测各组细胞活性并计算细胞存活率,实时荧光定量PCR（qPCR）和酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测细胞或细胞培养上清液中肿瘤坏死因子（TNF）-α,白细胞介素（IL）-6和单核细胞趋化蛋白（MCP）-1的转录和分泌水平;流式细胞术检测细胞凋亡情况。Western blot检测细胞凋亡相关蛋白（Bax、Bcl-2、Cleaved-Caspase-3）和核因子（NF）-κB通路相关蛋白的表达水平。结果　与Control组比较,ox-LDL组细胞存活率下降,TNF-α、IL-6和MCP-1转录及分泌水平升高,细胞凋亡率升高,促凋亡蛋白Bax、Cleaved-Caspase-3表达上调,抗凋亡蛋白Bcl-2下调,磷酸化NF-κB（p-NF-κB）水平上调;同时NF-κB在细胞核内表达上调,胞质中表达下调。中、高剂量PCSK9抑制剂处理后,与ox-LDL组比较,细胞存活率升高,TNF-α、IL-6和MCP-1转录和分泌水平下降,细胞凋亡率下降, Bax、Cleaved-Caspase-3表达下调,Bcl-2表达上调,p-NF-κB水平下降。进一步分析发现,PCSK9抑制剂下调ox-LDL导致的HUVECs细胞核中NF-κB表达,上调胞质中NF-κB的表达（P＜0.05）。结论　PCSK9抑制剂可以抑制ox-LDL导致的HUVECs炎症反应和细胞凋亡,发挥内皮功能保护作用。     

枸杞多糖对小鼠海马神经元细胞系缺糖缺氧损伤保护作用及机制研究

目的探讨枸杞多糖(LBP)对小鼠海马神经元细胞系HT22细胞缺糖缺氧损伤保护作用的机制。方法采用含1 mmol/L连二亚硫酸钠的无糖DMEM培养基建立HT22细胞缺糖缺氧损伤模型,设对照组、模型组和LBP高、中、低剂量(100、50、25 mg/L)组,以CCK8法检测细胞活性,流式细胞术检测检测细胞凋亡情况;Western blotting检测Bcl-2、Bax蛋白表达情况;利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测TNF-α、NF-κB、I-κBα、Caspase-9基因转录活性。结果与对照组比较,模型组HT22细胞存活率显著降低、凋亡率显著增加(P<0.05);TNF-α、NF-κB、Caspase-9基因转录活性显著上调,I-κBα基因转录活性显著下调(P<0.05);Bax蛋白表达水平显著升高,Bcl-2的蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。与模型组比较,LBP各剂量组细胞存活率显著上升、凋亡率显著下降(P<0.05);TNF-α、NF-κB、Caspase-9基因转录活性显著下调,I-κBα基因转录活性显著上调(P<0.05);Bax蛋白表达水平显著降低,Bcl-2的蛋白表达水平显著增高(P<0.05)。结论 LBP可能是通过下调TNF-α、NF-κB、Caspase-9基因转录活性以及Bax蛋白表达,增强I-κBα基因转录活性及Bcl-2的蛋白表达,抑制缺糖缺氧损伤诱导神经细胞凋亡的发生。