FLT3靶向RNA干扰对HL-60细胞增殖凋亡及cyclinD1、cyclinA表达的影响

目的探讨FLT3靶向RNA干扰对HL-60细胞增殖、凋亡及cyclinD1、cyclinA表达的影响。方法体外构建FLT3靶向短发夹状干扰RNA(FLT3-shRNA),转染HL-60细胞,RT-PCR、流式细胞术(FCM)鉴定FLT3的表达;CCK-8法检测细胞增殖活力;FCM检测细胞周期;AnnexinV染色法检测凋亡;RT-PCR及Western blot检测cyclinD1,cyclinA在mRNA、蛋白水平的表达。结果FLT3-shRNA转染可下调FLT3的表达,它对FLT3 mRNA和蛋白的抑制率分别达(81.66±10.25)%,(76.76±11.23)%。FLT3表达下降后细胞增殖活力受到抑制,转染48h抑制率达(31.66±2.97)%,72h达(33.10±3.43)%;细胞生长曲线低平,缺乏指数增殖特征。与对照组比,转染48h细胞周期重新分布,G0/G1期(58.48±6.17)%的明显上升,S期(27.72±5.10)%下降;细胞早期凋亡率(8.95±0.88)%上升;细胞内cyclinD1的mRNA、蛋白表达下降,cyclinA的表达无明显改变。结论FLT3靶向RNA干扰通过下调cyclinD1表达有效地抑制细胞增殖,具有潜在的临床应用价值。     

鱼藤素上调 Kruppel样因子 15表达影响卵巢癌 SKOV细胞的增殖和凋亡

目的探讨鱼藤素对卵巢癌 SKOV细胞增殖和凋亡的影响及可能的作用机制。方法本研究于 2019年 3月至 2020年 3月进行,鱼藤素作用 SKOV细胞后,细胞计数试剂盒 -8(CCK-8)检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,蛋白免疫印迹(Western blotting)法分别对细胞中细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂 1(P21)、细胞周期蛋白 D1(CyclinD1)、 B淋巴细胞瘤 -2(Bcl-2)及 Bcl-2相关 X蛋白( Bax)、 Kruppel样因子 15(KLF15)蛋白表达水平进行检测,实时荧光定量 PCR(RT-qPCR)检测 KLF15 mRNA表达水平。转染 KLF15过表达载体上调 SKOV细胞中 KLF15表达后,上述相同方法观察上调 KLF15表达对 SKOV细胞增殖、凋亡及 CyclinD1、P21、Bcl-2和 Bax蛋白表达的影响。结果鱼藤素作用 SKOV3细胞后,细胞活性( 0.49±0.04、0.39±0.03、0.30±0.02)、 CyclinD1(0.53±0.05、0.45±0.05、0.21±0.03)及 Bcl-2(0.40±0.04、0.24±0.02、0.16±0.01)蛋白表达水平降低( P<0.05),细胞凋亡率［(6.63±0.69)%、(12.71±1.06)%、(20.27±2.25)%］、 P21(0.23±0.02、0.46±0.04、0.74±0.03)、 Bax(0.20±0.02、0.36±0.02、0.55±0.05)蛋白表达水平升高, KLF15 mRNA和蛋白表达水平升高( P<0.05)。上调 KLF15表达后, SKOV3细胞活性、 CyclinD1及 Bcl-2蛋白表达水平降低( P<0.05)细胞凋亡率、 P21及 Bax蛋白表达水平升高( P<0.05)。下调 KLF15表达后,鱼藤素作用的 SKOV3细胞活性、 CyclinD1及 Bcl-2蛋白表达水平升高( P<0.05)细胞凋亡率、 P21及 Bax蛋白表达水平降低( P<0.05)。结论鱼藤素可抑制卵巢癌 SKOV3细胞增殖,并诱导 SKOV3细胞凋亡作用机制与上调细胞中 KLF15表达有关。     

抑制生长因子受体连接蛋白-2表达对乳癌细胞生长的影响

目的进一步验证生长因子受体连接蛋白-2(Grb2)的表达在乳癌发展中的作用。方法应用脂质体转染技术将Grb2小干扰RNA(siRNA)转染至乳癌细胞SKBr3中,台盼蓝计数法测定存活细胞数,TUNEL技术和AnnexinⅤ/PI染色分析转染后细胞的凋亡,免疫细胞化学技术分析转染后细胞Grb2的表达。Western蛋白质印迹法测定Grb2、细胞外信号调节激酶(p42/44ERK)、磷酸化p42/44ERK(P-p42/44ERK)、原癌基因蛋白质c-akt(Akt)、磷酸化Akt(P-Akt)和STAT5转录因子表达的改变。流式细胞术检测细胞活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)3的表达。结果台盼蓝计数法结果显示,转染Grb2siRNA可有效抑制SKBr3的生长。TUNEL实验显示,Grb2siRNA转染SKBr3细胞后,随着时间延长,凋亡细胞明显增加。AnnexinⅤ/PI测定结果亦提示,Grb2的抑制可明显诱导SKBr3细胞凋亡。转染48h后,SKBr3的活化caspase3表达水平由0.99%升至17.43%。免疫组化染色表明,Grb2siRNA转染细胞后,SKBr3细胞Grb2表达明显下降,由转染24h后的下降至转染72h后的+～-。Western蛋白质印迹分析证实,Grb2的抑制可导致SKBr3细胞P-p42/44ERK,P-Akt以及STAT5表达明显下降。P-p42ERK与p42ERK的相对吸光度值之比由未转染的(60±17)%下降至转染24h后的(38±13)%,及转染48h后的(21±8)%;P-p44ERK与p44ERK的相对吸光度值之比,由未转染时(104±16)%,分别下降至(49±13)%及(30±10)%;P-Akt与Akt的相对吸光度值之比由未转染的(40±6)%下降至(32±10)%和(15±4)%。与未转染组相比,转染24及48h后STAT5相对吸光度值分别下降为(64±6)%和(52±14)%。结论抑制Grb2的表达可抑制乳癌细胞生长并诱导细胞凋亡。     

miR-18a靶向 WNT2B对子宫肌瘤细胞增殖和凋亡的影响研究

目的观察微小核糖核酸 -18a(miR-18a)靶向 WNT家族成员 2B(WNT2B)对子宫肌瘤细胞增殖和凋亡的影响。方法于 2019年 10月至 2020年 3月研究 miR-18a靶向 WNT2B对子宫肌瘤细胞增殖和凋亡的影响;子宫肌瘤组织和正常子宫肌组织收集自延安市人民医院;在子宫肌瘤细胞中转染 miR-18a模拟物( miR-18a mimics)qRT-PCR方法检测 miR-18a表达变化,四甲基偶氮唑蓝(MTT)测定细胞增殖,碘化丙啶(PI)单染法检测细胞周期变化, Annexin V-,FITC/PI双染法检测细胞凋亡变化,蛋白质印迹法( Western blotting)检测细胞周期蛋白 D1(cyclin D1)、细胞周期数依赖性蛋白激酶 4(CDK4)、B细胞淋巴瘤 /白血病 -2原癌基因(Bcl-2)、Bcl-2相关 X蛋白( Bax)蛋白表达变化。利用荧光素酶报告系统鉴定 miR-18a与 WNT2B的靶向关系。将 WNT2B过表达载体与 miR-18a mimics共转染到子宫肌瘤细胞中,同样利用上述方法测定细胞增殖、周期以及凋亡变化。结果与正常子宫肌细胞( 1.00±0.10)比较,子宫肌瘤细胞中 miR-18a表达水平( 0.52±0.06)下降;与 miR-NC组( 0.97±0.13)比较,转染 miR18a mimics后的子宫肌瘤细胞中 miR-18a表达水平( 3.21±0.25)升高,细胞增殖能力［A值( 0.44±0.06)比( 0.26±0.03)］下降,细胞 G1期比例［( 57.15±6.94)%比( 72.21±4.15)%］升高,细胞凋亡率［( 6.38±0.41)%比( 25.21±2.10)%］也升高,细胞中 cyclin D1［( 0.50±0.05)比( 0.20±0.02)］、 CDK4［( 0.54±0.06)比( 0.29±0.04)］、 Bcl-2［( 0.66±0.07)比( 0.42±0.05)］蛋白表达水平下降, Bax［(0.47±0.05)比( 0.82±0.09)］蛋白表达水平升高。 miR-18a靶向抑制子宫肌瘤细胞中 WNT2B的表达。 WNT2B过表达载体提高上调 miR-18a的子宫肌瘤细胞增殖能力,降低细胞 G1期比例,减少细胞凋亡。结论 miR-18a靶向抑制 WNT2B表达降低子宫肌瘤细胞增殖能力并诱导细胞凋亡。     

微小RNA-150 靶向c-Myb 表达对T 淋巴细胞白血病Jurkat细胞增殖的影响

目的探讨微小RNA-150(miR-150)靶向c-Myb表达对人T淋巴细胞白血病(T-LL)Jurkat细胞增殖的影响。方法体外培养人Jurkat细胞,分为空白对照组(不转染)、阴性对照组(转染negative control-miR-150)和miR-150过表达组(转染hsamiR-150 mimic)。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测Jurkat细胞中miR-150 及c-Myb 表达;人胆囊收缩素/缩胆囊素八肽(CCK-8)法检测Jurkat细胞增殖;流式细胞仪检测各组Jurkat细胞凋亡情况;双荧光素酶报告基因实验检测miR-150和c-Myb的靶向关系;蛋白质印迹法(Western blotting)检测各组Jurkat细胞中c-Myb、增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达情况。结果空白对照组与阴性对照组Jurkat细胞中miR-150表达水平、c-Myb mRNA及蛋白表达水平、OD值、细胞凋亡率、及PCNA、Bax蛋白水平差异无统计学意义(P>0.05);与空白对照组相比,miR-150过表达组Jurkat细胞中miR-150表达水平［(1.42±0.14)比(1.03±0.09)］、凋亡率［(20.79±1.15)%比(8.76±0.74)%］、Bax蛋白表达水平［(0.65±0.18)比(0.42±0.13)］显著升高(P<0.05),c-Myb mRNA［(0.66±0.14)比(0.98±0.09)］及蛋白表达水平［(0.37±0.06)比(0.64±0.12)］、OD值［(0.25±0.06)比(0.46±0.09)］、PCNA蛋白表达水平［(0.33±0.07)比(0.56±0.11)］显著降低(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验显示,c-Myb是miR-150的靶基因。结论miR-150靶向c-Myb表达抑制Jurkat细胞增殖并诱导其凋亡。     

微小RNA-545-3p对结直肠癌细胞进展的影响研究

目的 研究微小RNA-545-3p在结直肠癌(CRC)进展中的作用和调控机制。方法 正常培养的人结直肠黏膜上皮细胞系NCM460以及人CRC细胞系(HCT-15、HCT-116和HCT-8)分为NCM460组、HCT-15组、HCT-116组和HCT-8组。将miR-545-3p模拟物、模拟物阴性对照、miR-545-3p抑制剂、抑制剂阴性对照和血管内皮生长因子A(VEGFA)过表达载体、miR-545-3p模拟物和VEGFA过表达载体分别转染至HCT-116细胞，分别为miR-545-3p mimic组、mimic-NC组、miR-545-3p inhibitor组、inhibitor-NC组、mimic-NC+VEGFA组、miR-545-3p mimic+VEGFA组。以实时定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测CRC患者癌组织和细胞系中miR-545-3p和VEGFA的表达水平。以细胞计数法-8(CCK-8)检测细胞增殖能力；以Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力；以原位末端标记(TUNEL)法检测细胞的凋亡；以蛋白质印迹(Western blot)法检测B淋巴...     

人参皂苷Rh2 调控微小RNA-133a-3p 对瘢痕疙瘩成纤维细胞凋亡的影响

目的探讨人参皂苷Rh2调控微小RNA(miR)-133a-3p对瘢痕疙瘩成纤维细胞(KF)凋亡的影响。方法用浓度为50、100、200 mg/L的人参皂苷Rh2培养KF,未给人参皂苷Rh2的KF记为对照(NC)组;将miR-NC、miR-133a-3p分别转染至KF中记为miR-NC组、miR-133a-3p组;将anti-miR-NC、anti-miR-133a-3p分别转染至KF再用200 mg/L的人参皂苷Rh2处理记为anti-miR-NC+人参皂苷Rh2组、anti-miR-133a-3p+人参皂苷Rh2组。流式细胞术检测细胞凋亡;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-133a-3p表达水平;蛋白质印迹法检测裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Cleaved caspase-3)、β-连环素(β-catenin)表达。结果与对照组相比,50、100、200 mg/L 人参皂苷Rh2 处理的KF 中细胞凋亡率升高［(9.08±0.91)%、(16.28±1.63)%、(23.18±2.32)%比(4.29±0.43)%］,miR-133a-3p表达水平升高,β-catenin表达水平降低(P<0.05)。过表达miR-133a-3p,Cleavedcaspase-3表达水平升高,细胞凋亡率升高(P<0.05)。低表达miR-133a-3p部分逆转了人参皂苷Rh2对KF凋亡和β-catenin的影响。结论人参皂苷Rh2可促进瘢痕疙瘩成纤维细胞凋亡,其机制可能与miR-133a-3p和Wnt/β-catenin信号通路有关。     

长链非编码 RNA变异性浆细胞瘤异位 1通过调控微小 RNA-214-3p/人凋亡抑制蛋白 X轴影响皮肤黑色素瘤细胞的顺铂耐药性

目的探讨长链非编码 RNA(lncRNA)变异性浆细胞瘤异位 1(PVT1)调控微小 RNA(miR)-214-3p/人凋亡抑制蛋白 X(XIAP)对皮肤黑色素瘤( CMM)细胞的顺铂( DDP)耐药性的影响。方法该研究起止时间为 2020年 3—9月。体外培养人皮肤黑色素瘤 SK-MEL-1/DDP细胞,将细胞分为空白对照组( NG组,不做处理)、阴性转染组( NC组,转染 PVT1-inhibitor阴性对照)、抑制 PVT1表达组( PVT1-inhibitor组,转染 PVT1-inhibitor)、共转染组( PVT1-inhibitor-miR-214-3p-inhibitor组,转染 PVT1inhibitor同时转染 miR-214-3p-inhibitor)。采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应( qRT-PCR)检测 SK-MEL-1/DDP细胞 PVT1、 miR-214-3p水平; MTT法检测四组 SK-MEL-1/DDP细胞增殖能力及对 DDP的耐药性;流式细胞仪检测四组 SK-MEL-1/DDP细胞凋亡率;蛋白质印迹法( Western blotting)检测四组 SK-MEL-1/DDP细胞 XIAP、细胞增殖相关核抗原 Ki-67、凋亡相关蛋白 B细胞淋巴瘤 -2(Bcl-2)、 Bcl-2相关 X蛋白( Bax)表达水平。应用 TargetScan数据库预测 PVT1与 miR-214-3p的靶向关系,双荧光素酶报告基因实验验证。结果与 NG组、 NC组比较, PVT1-inhibitor组 SK-MEL-1/DDP细胞增殖抑制率［( 22.87±3.43)%比( 0.00± 0.00)%、(0.08±0.01)%］、凋亡率［( 40.05±6.06)%比( 15.69±2.35)%、(17.01±2.55)%］、 miR-214-3p及 Bax表达均显著升高( P< 0.05)PVT1、药物半数抑制浓度( IC50)值［( 15.13±0.45)μg/L比( 45.03±1.35)μg/L、(47.81±1.33)μg/L］、 Ki-67、Bcl-2蛋白、 XIAP mRNA及,其蛋白表达水平均显著降低( P<0.05);与 PVT1-inhibitor组比较, PVT1-inhibitor+miR-214-3p-inhibitor组 SK-MEL-1/ DDP细胞增殖抑制率［(15.12±2.27)%比( 22.87±3.43)%］、凋亡率［(27.88±4.19)%比( 40.05±6.06)%］、 miR-214-3p及 Bax表达均显著降低( P<0.05)IC50［(23.98±0.72)μg/L比(15.13±0.45)μg/L］Ki-67、Bcl-2蛋白、 XIAP mRNA及蛋白表达水平均显著升高(P<0.05)。TargetScan,数据值库预测显示 miR-214-3p是 PVT1的潜在靶、基因,双荧光素酶报告基因实验证实二者存在靶向关系。     

长链非编码 RNA肝癌高表达转录本通过微小 RNA-134-5p促进宫颈癌细胞恶性生物学行为的机制研究

目的探讨长链非编码 RNA(lncRNA)肝癌高表达转录本( HULC)通过抑制微小 RNA-134-5p促进宫颈癌细胞增殖、袭和迁移，促进凋亡的作用及其作用机制。方法 2019年 10月至 2020年 5月，通过实时荧光定量 PCR(qRT-PCR)检测体外培侵养的人正常宫颈上皮细胞和宫颈癌细胞中 HULC的表达情况，在宫颈癌 C-33A细胞中转染特异性 HULC siRNA，qRT-PCR检测转染效果，细胞计数试剂盒( CCK-8)法分析 C-33A细胞增殖情况，采用流式细胞术分析 C-33A细胞凋亡情况， Transwell实验分析 C-33A细胞侵袭和迁移能力，双荧光素酶报告基因实验检测 HULC与 miR-134-5p的相互作用。在抑制 HULC表达的 C-33A细胞中转染 miR-134-5p抑制剂，以同样的方法检测对细胞增殖、侵袭和迁移的影响。结果 HULC在宫颈癌细胞( HeLa、Cas. ki、SiHa、C-33A)中的表达水平为(1.95±0.24、2.26±0.21、1.77±0.19、3.49±0.40)，显著高于正常宫颈上皮细胞 1.00±0.11，HULC在 C-33A细胞中的表达量最高( P<0.05)。转染特异性 HULC siRNA能够抑制 C-33A细胞中 HULC的表达( 0.94±0.08比 0.18±     

长链非编码 RNA母系表达基因 8靶向微小 RNA-497-5p调控血管瘤血管内皮细胞的增殖和凋亡

目的 探讨长链非编码RNA母系表达基因8(MEG8)靶向微小RNA(miR)-497-5p对血管瘤血管内皮细胞的增殖和凋亡的影响.方法 实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测河南中医药大学第一附属医院2017年1月至2018年6月收集的52例血管瘤组织和与其对应的瘤旁正常皮肤组织中MEG8和miR-497-5p的表达水平.血管瘤血管内皮细胞HemEC分为si-NC组、si-MEG8组、miR-NC组、miR-497-5p组、si-MEG8+anti-miR-NC组、si-MEG8+anti-miR-497-5p组.四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,蛋白质印迹法(Western blotting)检测细胞周期蛋白D1(cyclin D1)和P21、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)和Bcl相关X(Bax)蛋白的表达水平.双荧光素酶报告基因实验验证MEG8和miR-497-5p的靶向关系.结果 与瘤旁正常皮肤组织相比,血管瘤组织中MEG8表达水平[(0.82±0.08)比(0.33±0.03)]升高(P<0.05),miR-497-5p表达水平[(0.34±0.03)比(0.84±0.08)]降低(P<0.05).与si-NC组比较,si-MEG8组HemEC细胞存活率[(39.61±4.06)％比(103.50±11.04)％]、cyclin D1和Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05),凋亡率[(26.57±2.73)％比(8.33±0.85)％]、P21和Bax蛋白表达升高(P<0.05).与miR-NC组比较,miR-497-5p组HemEC细胞存活率[(48.87±5.09)％比(104.11±10.64)％]、cy?clin D1和Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05),凋亡率[(21.26±2.45)％比(8.33±0.85)％]、P21和Bax蛋白表达升高(P<0.05).MEG8和miR-497-5p直接特异性结合.与si-MEG8+anti-miR-NC组比较,si-MEG8+anti-miR-497-5p组HemEC细胞存活率[(86.10±8.81)％比(40.23±4.35)％]、cyclin D1和Bcl-2蛋白表达升高(P<0.05),凋亡率[(15.32±1.67)％比(26.81±2.94)％]、P21和Bax蛋白表达降低(P<0.05).结论 抑制MEG8通过靶向miR-497-5p能够抑制血管瘤血管内皮细胞增殖,促进细胞凋亡,进而遏制血管瘤的发生发展.     

黑老虎根提取物调控微小 RNA-193对肝星状细胞 HSC-T6增殖凋亡的影响

目的探讨黑老虎根提取物对肝星状细胞(HSC-T6)增殖、凋亡的影响及分子机制。方法于2018年10月至 2019年12月进行该研究。将肝星状细胞 HSC-T6分为实验组(1、2、3组)、过表达微小 RNA(miR-NC)组、过表达微小 RNA-193(miR-193)组、实验 3+抑制物 miR-NC(anti-miR-NC)组、实验 3+抑制物 miR-193(anti-miR-193)组。流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡情况;细胞计数试剂盒 8(CCK-8)检测细胞存活率;蛋白质印迹法检测活化胱天蛋白酶 -3(cleaved caspase-3)、增殖细胞核抗原(Ki67)蛋白表达;时荧光定量 PCR(RT-qPCR)检测 miR-193表达水平。结果与对照组相比,实验 2、3组HSC-T6细胞 G0-G1期比例［(34.03±2.66)%实比(42.60±2.74)%、(50.37±3.42)%］细胞凋亡率［(7.40±0.88)%比(15.56±1.30)%、(21.75±1.62)%］、cleaved caspase-3(0.23±0.01比     

白花蛇舌草对高糖诱导的人视网膜血管内皮细胞增殖、凋亡、活性氧水平的影响研究

目的探讨白花蛇舌草注射液( HDI)对高糖诱导的人视网膜血管内皮细胞( HRCECs)增殖、凋亡、氧化应激的影响及机制。方法 2019年 10月至 2020年 6月,体外培养 HRCECs。将 HRCECs分为对照组( 5.5 mmol/L葡萄糖处理细胞)、高渗对照组( 19.5 mmol/L甘露醇及 5.5 mmol/L葡萄糖处理细胞)、高糖对照组( 25 mmol/L葡萄糖处理细胞)、白花蛇舌草组( HDI组)(6.25 mL/L、12.5 mL/L、25 mL/L、50 mL/L HDI和 25 mmol/L的葡萄糖处理细胞)。处理细胞 48 h,通过 CCK8法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞周期及凋亡率;激光扫描共聚焦显微镜检测活性氧水平。蛋白质印迹法检测增殖细胞核抗原( PCNA)、细胞周期蛋白 A1(CyclinA1)和活化胱天蛋白酶 -3(cleaved caspase-3)蛋白表达。结果与对照组比较,高糖组细胞活性明显升高［(1.116±0.105)比( 0.684±0.072)］(P<0.05)。与高糖组比较, 12.5 mL/L、25 mL/L和 50 mL/L的白花蛇舌草组细胞活性明显降低［( 0.847±0.076)、(0.639±0.058)、(0.421±0.042)比( 1.116±0.105)］(P<0.05)。选择 50 mL/L的白花蛇舌草作为研究对象。与对照组比较,高糖组 G0/G期细胞百分比［( 60.02±5.01)%比( 54.72±4.31)%］、细胞凋亡率［( 17.11±1.01)%比( 3.32±0.47)%］、活性氧水平［( 96.18±5.22)比( 42.14±3.56)］及 PCNA、CyclinA1和 cleaved caspase-3表达均明显升高, G2/M期和 S期细胞百分比明显降低( P<0.05)。与高糖组比较, HDI组 G0/G期细胞百分比［( 32.31±3.42)%比( 60.02±5.01)%］、细胞凋亡率［( 9.72±0.73)%比     

乳酸诱导巨噬细胞M2型极化对黑色素瘤细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响

目的 探究乳酸（LA）是否可通过调控巨噬细胞M2型极化影响黑色素瘤细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭。方法 2021年1月至2022年2月采用细胞计数试剂盒（CCK-8）法检测乳酸对细胞的毒性;使用乳酸干预巨噬细胞后的细胞上清液培养黑色素瘤细胞,经CCK-8法和流式细胞术检测细胞增殖和凋亡;经划痕愈合实验和Transwell法检测细胞迁移和侵袭。通过光学显微镜对乳酸干预后的巨噬细胞的形态进行观察,并通过ELISA检测巨噬细胞极化相关因子的表达情况。实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应（qRT-PCR）检测乳酸对巨噬细胞中肿瘤蛋白翻译调节因子1(Tpt1)、肺腺癌转移相关转录本1(Malat1)表达的影响。结果 乳酸对巨噬细胞Raw264.7和黑色素瘤细胞B16F10均无明显毒性（P>0.05）。5、10、20 mmol/L乳酸干预Raw264.7细胞后的上清液后,B16F10细胞活力[（125.36±7.88）%、（144.36±8.65）%、（167.28±10.12）%比（100.00±0.00）%]、划痕愈合率[（39.21±3.15）%、（52.65±3.87）%、（64.24±6....     

舒芬太尼调控 miR-1抑制肝癌细胞 MHCC97-H增殖、侵袭和迁移的机制研究

目的 探讨舒芬太尼调控微小RNA-1(miR-1)表达对人肝癌MHCC97-H细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其机制.方法 本研究起止时间为2018年3月至2019年9月,采用细胞计数试剂盒(CCK-8)实验检测不同浓度的舒芬太尼对人肝癌MHCC97-H细胞活力的影响,qRT-PCR检测舒芬太尼对MHCC97-H细胞中miR-1表达的影响;通过脂质体转染法将miR-1抑制剂(inhibitor)及阴性对照转染至MHCC97-H细胞,实验分为Control组、舒芬太尼(Sufentanil)组、转染对照(Sufentanil+NC)组和转染(Sufent-anil+miR-1)组.细胞计数试剂盒(CCK-8)实验检测各组MHCC97-H细胞增殖能力,Transwell实验检测各组MHCC97-H细胞侵袭能力,划痕实验检测各组MHCC97-H细胞迁移能力,蛋白质印迹法(Western blotting)检测各组MHCC97-H细胞中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达情况.结果 不同浓度的舒芬太尼对肝癌MHCC97-H细胞活力具有不同程度的抑制作用;与Control组比,Sufentanil组MHCC97-H细胞中miR-1的表达[(1.00±0.09)比(2.25±0.24)]明显升高(P<0.05),细胞增殖[(0.54±0.05)比(0.34±0.03)]、侵袭[(106.24±8.25)个比(51.34±5.02)个]和迁移能力[(37.36±4.01)％比(16.34±1.72)％]降低(P<0.05),MMP-2[(0.33±0.04)比(0.15±0.02)]和MMP-9[(0.24±0.02)比(0.11±0.01)]的表达下调(P<0.05);与Sufentanil+NC组比,Sufentanil+miR-1组MHCC97-H细胞中miR-1的表达[(2.20±0.21)比(1.42±0.15)]明显降低(P<0.05),细胞增殖[(0.32±0.03)比(0.46±0.04)]、侵袭[(52.36±5.14)个比(91.16±6.06)个]和迁移能力[(17.11±1.71)％比(29.85±3.10)％]升高(P<0.05),MMP-2[(0.15±0.02)比(0.27±0.02)]和MMP-9[(0.13±0.01)比(0.19±0.02)]的表达上调(P<0.05).结论 舒芬太尼可通过调控miR-1的表达抑制人肝癌MHCC97-H细胞的增殖、侵袭和迁移,其机制可能与调控MMP-2和MMP-9表达有关.     

人类表皮生长因子受体 2对胃癌细胞增殖、迁移侵袭和凋亡的影响

目的 研究人类表皮生长因子受体2(HER2)对胃癌细胞增殖、迁移侵袭和凋亡的影响,并探讨其机制.方法 2018年11月至2019年6月,运用实时定量PCR(qRT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测永生化的正常胃上皮细胞GES-1、胃癌细胞SGC-7901、MGC-803、BGC-823中HER2的表达;将空载体(pcDNA 3.1)、HER2过表达载体(pcDNA 3.1-HER2)、小干扰RNA阴性对照(si-NC)、HER2小干扰RNA(si-HER2)用脂质体法转染至SGC-7901细胞.噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖;Tran-swell小室检测细胞迁移和侵袭;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测细胞中p16、p21、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、裂解的聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(cleaved-PARP)、裂解的半胱氨酸蛋白酶3(cleaved caspase-3)蛋白表达.结果 与正常胃上皮细胞GES-1相比,胃癌细胞SGC-7901、MGC-803、BGC-823中HER2的表达[(3.02±0.28),(2.51±0.21),(2.36±0.19)比(1.00±0.08)]明显升高,其中SGC-7901细胞中的表达最高(P<0.05);过表达HER2后,SGC-7901细胞的增殖[(1.12±0.09)比(0.61±0.06)]、迁移[(170±15)比(100±9)]和侵袭[(130±12)比(75±6)]能力均明显上调,细胞的凋亡力[(8.03±0.69)％比(19.46±1.44)％]明显下调(P<0.05);敲减HER2则可下调SGC-7901细胞的增殖[(0.59±0.05)比(0.89±0.08)]、迁移[(55±5)比(100±8)]和侵袭[(36±4)比(75±6)]能力,上调细胞的凋亡[(16.82±1.15)％比(8.01±0.65)％]能力(P<0.05).重要的是,过表达HER2可明显抑制SGC-7901细胞中增殖抑制蛋白p16、p21,迁移侵袭相关蛋白MMP-2、MMP-9,凋亡促进相关蛋白cleaved-PARP、cleaved caspase-3的表达,敲减HER2具有相反的作用.结论 HER2可促进胃癌细胞的增殖、迁移侵袭,抑制凋亡,其可能与调控功能增殖、迁移侵袭及凋亡相关蛋白表达有关.     

艾叶乙酸乙酯提取物通过LINC01606/微小RNA-26b对结直肠癌细胞增殖、凋亡的影响

目的研究艾叶乙酸乙酯提取物对结直肠癌SW1116细胞增殖和凋亡的影响及其潜在的分子机制。方法2018年6月至2019年11月,用12.5 mg/L、25 mg/L、50 mg/L的艾叶乙酸乙酯提取物处理结直肠癌细胞SW1116,分别称为实验1、2、3组,人胆囊收缩素/缩胆囊素八肽(CCK-8)法、流式细胞术和克隆形成实验检测SW1116细胞存活率、凋亡率、细胞周期和克隆形成能力,蛋白质印迹法检测周期素依赖激酶抑制剂p21(P21)和胱天蛋白酶-3(caspase-3)蛋白表达水平,实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测细胞中LINC01606和微小RNA(miR)-26b的转录水平,双荧光素酶报告系统验证LINC01606和miR-26b 的关系。结果实验1、2、3 组的SW1116 细胞克隆形成数(101±9、79±8、56±6)、存活率［(81.57±8.02)%、(68.17±6.69)%、(48.26±4.91)%］、S期细胞百分比［(31.98±2.39)%、(26.10±2.21)%、(23.21±2.04)%］及细胞中LINC01606含量(0.76±0.05、0.51±0.05、0.34±0.04)逐渐降低(P<0.05),P21(0.34±0.03、0.47±0.04、0.67±0.05)、caspase-3(0.26±0.02、0.38±0.03、0.59±0.04)蛋白表达量、miR-26b 含量(1.26±0.09、1.41±0.10、1.69±0.12)、细胞凋亡率［(13.37±1.21)%、(17.94±1.47)%、(24.36±1.69)%］和G1期细胞百分比［(32.17±2.41)%、(37.04±2.75)%、(41.20±3.24)%］均逐渐升高(P<0.05),呈显著剂量依赖趋势,剂量越高效果越显著;过表达LINC01606和抑制miR-26b均可提高细胞克隆形成数、存活率和S期细胞百分比,降低P21、caspase-3蛋白表达量、细胞凋亡率及G1期细胞百分比;LINC01606靶向调控miR-26b。结论艾叶乙酸乙酯提取物通过LINC01606/miR-26b途径抑制SW1116细胞的增殖,促进细胞凋亡。艾叶乙酸乙酯提取物对结直肠癌具有潜在治疗作用。     

微小 RNA-216b-5p对骨肉瘤 MG63细胞功能的影响及其与高迁移率族蛋白 B1的靶向关系

目的 探讨微小RNA-216b-5p(miR-216b-5p)对骨肉瘤MG63细胞增殖、侵袭和凋亡的影响及其与高迁移率族蛋白B1(HMGB1)的靶向关系.方法 将体外培养的MG63细胞分为mimics-NC组、miR-216b-5p mimics组、inhibitor-NC组和miR-216b-5p inhibitor组,采用实时荧光定量PCR检测miR-216b-5p的表达,MTT法、Transwell小室和流式细胞仪分别检测细胞增殖、侵袭和凋亡能力.采用双荧光素酶报告基因实验检测miR-216b-5p和HMGB1的靶向关系,蛋白质印迹法(Western blot-ting)检测HMGB1蛋白的表达.结果 与mimics-NC组相比,miR-216b-5p mimics组细胞中miR-216b-5p的表达水平[(5.36±0.54)比(1.00±0.11)]和细胞凋亡率[(20.36±3.15)％比(8.58±1.22)％]明显升高,而细胞增殖活力、侵袭能力和细胞中HMGB1蛋白的表达水平均明显降低(P<0.05);miR-216b-5p inhibitor组细胞中miR-216b-5p的表达水平[(0.24±0.03)比(0.96±0.08)]和细胞凋亡率[(2.05±0.38)比(9.27±1.16)]较inhibitor-NC组明显降低,而细胞增殖活力、侵袭能力和HMGB1蛋白的表达水平较inhibitor-NC组均明显升高(P<0.05).双荧光素酶报告基因实验证实HMGB1是miR-216b-5p的靶基因.结论 miR-216b-5p可能通过靶向调控HMGB1表达,抑制骨肉瘤MG63细胞增殖、侵袭并诱导细胞凋亡.