同时下调长链非编码RNA PVT1和MINCR对Raji细胞增殖的影响

目的 探讨同时下调长链非编码RNA（lncRNA）人浆细胞瘤转化迁移基因1（PVT1）和MINCR（MYC-induced long non-coding RNA）对淋巴瘤细胞株Raji增殖的影响及其可能机制。方法 合成靶向PVT1、MINCR的小干扰RNA（siRNA）和无关对照siRNA（SC-siRNA）序列。实验分为PVT1-siRNA组、MINCR-siRNA组、PVT1-siRNA+MINCR-siRNA组、无关对照组和细胞组（未转染的Raji细胞）。将各条siRNA转入Raji细胞后，用实时定量RT-PCR方法检测MINCR RNA表达水平；分别用CCK8法、流式细胞仪、Western blot检测细胞增殖、细胞周期和c-Myc蛋白的表达情况。结果 转染MINCR-siRNA后MINCR表达下调，与无关对照组和细胞组相比差异有统计学差异（P<0.05）。PVT1-siRNA联合MINCR-siRNA转染到Raji细胞后，细胞增殖明显受到抑制（P<0.05），细胞周期阻滞于G1期（P<0.05），c-Myc蛋白表达下降（P<0.05），且与单用PVT1-siRNA组、MINCR-siRNA组相比差异均具有统计学意义（P<0.05）。结论 同时下调PVT1和MINCR可以增强对Raji细胞增殖的抑制作用。     

铜绿假单胞菌注射液对NCI-N87胃癌细胞株增殖能力的影响及其机制研究

目的 探讨铜绿假单胞菌注射液（Pseudomonas aeruginosa mannose-sensitive hemagglutinin,PA-MSHA）对NCI-N87胃癌细胞增殖能力的影响及其分子作用机制。方法 MTT法检测PA-MSHA对NCI-N87胃癌细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞凋亡率,划痕实验和侵袭实验检测细胞迁移和侵袭能力的变化,Western Blot检测PTEN蛋白和p-AKT蛋白的表达变化,转染PTEN siRNA敲低PTEN表达后,再次行MTT法检测PA-MSHA对细胞增殖的影响。结果 PA-MSHA抑制NCI-N87胃癌细胞的增殖具有剂量和时间依赖性。与对照组比较,NCI-N87细胞经PA-MSHA处理后,凋亡率显著增加（P<0.05）,迁移和侵袭能力显著下降（P<0.05）。与对照组比较,PA-MSHA显著提高PTEN蛋白表达,降低p-AKT蛋白表达（P<0.05）。通过siRNA转染敲低PTEN表达后,PA-MSHA抑制NCI-N87细胞增殖的能力较对照组显著下降（P<0.05）。结论 PA-MSHA对NCI-N87胃癌细胞具有抑制增殖、促进凋亡、抑制侵袭转移的作用,其机制与PTEN/AKT信号通路有关。     

沉默CDK7通过下调YAP表达诱导子宫内膜癌细胞凋亡

目的 研究沉默细胞周期蛋白依赖性激酶7（CDK7）诱导Yes相关蛋白（YAP）表达下调对子宫内膜癌HEC-1-A细胞凋亡的影响。方法 利用siRNA干扰技术沉默HEC-1-A细胞中CDK7的表达，采用qPCR和Western blotting检测siRNA干扰后CDK7的表达水平，CCK-8实验检测沉默CDK7对HEC-1-A细胞活力的影响，流式细胞术检测沉默CDK7对HEC-1-A细胞凋亡的影响，Western blotting检测沉默CDK7对YAP和磷酸化YAP蛋白及其下游蛋白Cyr16、CTGF表达的影响，凋亡实验检测共转染si-CDK7和pcDNA3.1-YAP对细胞凋亡的影响。结果 转染si-CDK7后，HEC-1-A细胞中CDK7 mRNA和蛋白表达水平均显著下降（P<0.01），细胞活性显著降低（P<0.01），细胞凋亡率显著升高（P<0.01），YAP和磷酸化YAP蛋白及其下游蛋白Cyr16、CTGF表达水平明显下降（P<0.01）；共转染pcDNA3.1-YAP可逆转沉默CDK7导致的细胞凋亡（P<0.01）。结论 沉默CDK7可诱导YAP蛋白表达下调，促进子宫内膜癌HEC-1-A细胞凋亡。     

Fibronectin 1促进胃癌细胞耐药及其作用机制研究

目的 探讨纤连蛋白1（FN1）促进胃癌细胞耐药及其作用机制。方法 选择胃癌细胞系MKN45、MKN45/DDP、MKN45/VCR进行pLV-FN1、pLV-NC、FN1 siRNA慢病毒和脂质体3000瞬时转染,将转染pLV-FN1的设为FN1过表达组（FN1）,转染pLV-NC的为阴性对照组（Vector）,转染FN1 siRNA慢病毒的为FN1敲低组（si-FN1）,转染脂质体3000的为空白对照组（si-control）。分别采用qRT-PCR、MTT、克隆形成实验、Western blotting检测FN1 mRNA和蛋白的表达,MKN45/DDP细胞增殖、凋亡、集落形成情况及耐药相关蛋白的表达。结果 FN1 mRNA和蛋白在MKN45和MKN45/VCR细胞中的表达水平均显著低于MKN45/DDP细胞（P<0.05）;FN1敲低组细胞增殖能力显著低于空白对照组（P<0.001）,FN1过表达组细胞增殖能力明显高于阴性对照组（P<0.001）;FN1敲低组细胞凋亡率明显高于空白对照组（P<0.001）,FN1过表达组细胞凋亡率显著低于阴性对照组（P<0.05）;FN1敲低组细胞集落形成能力明显低于空白对照组（P<0.001）,FN1过表达组细胞集落形成能力显著高于阴性对照组（P<0.001）;FN1敲低组MRP-1、p-STAT3、STAT3、p-AKT蛋白表达水平均明显低于空白对照组（P<0.001）。结论 FN1的高表达可能参与胃癌化疗耐药的相关过程,下调FN1表达有助于恢复耐药胃癌细胞对化疗的敏感性,有望为改善胃癌化疗疗效提供新的思路和方法。     

肝癌患者锌指蛋白281的表达水平及其对肝癌细胞增殖凋亡的影响

目的 探讨肝癌患者锌指蛋白281（ZNF 281）的表达水平,并分析其对人肝癌细胞HepG2增殖和凋亡的影响。方法 收集河南大学第一附属医院2014年1月至2017年1月经手术切除后病理切片证实的肝癌标本82例及癌旁正常组织标本50例,采用免疫组化法检测肝癌和癌旁正常肝组织标本中ZNF 281蛋白表达情况,并分析ZNF 281阳性表达与临床病理参数[性别、年龄、肿瘤直径、国际恶性肿瘤分期(TNM分期)、淋巴结转移、甲胎蛋白(AFP)]的关系;采用荧光定量PCR检测上述组织中ZNF 281 mRNA的表达情况;采用沉默RNA （siRNA） ZNF 281转染人肝癌细胞HepG2,根据转染情况分为空白对照组（正常培养的HepG2）、阴性对照组、siRNA ZNF 281组[转染ZNF 281基因特异性siRNA干扰组],并用荧光定量PCR检测转染后HepG2细胞中ZNF 281 mRNA的表达,四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测转染后细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果 肝癌组织中ZNF 281 mRNA的相对表达量高于正常肝组织（P<0.05）;肝癌组织ZNF 281蛋白阳性表达率为74.39%,高于癌旁正常肝组织的18.0%（P<0.05）,且ZNF 281蛋白阳性表达患者肿瘤直径>5 cm,TNM为Ⅲ~Ⅳ期,淋巴结转移比例分别为65.57%、73.77%、45.90%,高于ZNF 281蛋白表达阴性的38.10%、38.10%、14.29%（P<0.05）。siRNA ZNF 281组HepG2细胞中ZNF 281 mRAN表达量低于空白对照组和阴性对照组（P<0.05）;siRNA ZNF 281组细胞生长抑制率和细胞凋亡率均高于空白对照组和阴性对照组（P<0.05）;空白对照组和阴性对照组HepG2细胞中ZNF 281 mRAN表达量及细胞生长抑制率和细胞凋亡率比较,差异无统计学意义（P>0.05）。结论 肝癌组织中ZNF 281蛋白及其RNA均呈高表达;沉默ZNF 281基因可抑制人肝癌细胞HepG2增殖,诱导其凋亡。     

骨桥蛋白对甲状腺癌细胞生物学效应的影响

目的 探讨骨桥蛋白（OPN）对甲状腺癌生物学行为的影响。方法 SW579细胞置于6孔板中培养,采用随机数字表法分成对照组、阴性对照组、OPN siRNA干扰组3组,每组3个孔,每个孔2 mL,细胞密度为1×10⁴/mL。对照组不作任何处理,阴性对照组转染OPN阴性序列,OPN siRNA干扰组转染OPN siRNA序列。采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（qRT-PCR）测定并比较转染后3组细胞OPN、MMP-2、MMP-9、Caspase-3的mRNA水平,四甲基偶氮唑盐（MTT）测定转染后3组细胞的抑制率,流式细胞仪检测转染后3组细胞凋亡率,Transwell小室检测转染后3组细胞的侵袭力,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测3组OPN、MMP-2、MMP-9、Casepase-3的蛋白水平。结果 OPN siRNA干扰组的OPN mRNA的表达水平显著低于对照组和阴性对照组,细胞凋亡率显著高于对照组以及阴性对照组,侵袭能力显著低于对照组和阴性对照组,OPN、MMP-2、MMP-9 mRNA和蛋白水平显著低于对照组和阴性对照组,Casepase-3mRNA和蛋白水平显著高于对照组和阴性对照组,差异均有统计学意义（P<0.05）。结论 OPN干扰后SW579细胞增殖和侵袭能力下降,凋亡率增加,其机制可能与凋亡蛋白caspase-3水平增加,MMP-2、MMP-9水平下降有关。     

RNAi沉默PCDGF基因对喉鳞癌Hep-2细胞生物学特性的影响

目的 研究RNAi沉默畸胎瘤细胞源性生长因子（PCDGF）表达对喉鳞癌Hep-2细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响。方法 RT-PCR检测喉鳞癌组织中PCDGF的mRNA表达水平;Hep-2细胞分为空白对照组、阴性对照组和PCDGF-siRNA组,Western blot检测转染效果及Bcl-2、Bax、E-cadherin和MUC1蛋白表达;CCK8实验检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;Transwell 小室检测细胞侵袭能力。结果 喉鳞癌组织中的PCDGF mRNA表达水平显著高于声带息肉组织（t=6.88,P=0.005）。PCDGF在喉鳞癌组织中高表达。PCDGF-siRNA组喉鳞癌Hep-2细胞中PCDGF、Bcl-2、MUCI蛋白表达显著低于空白对照组（P<0.05）,Bax、E-cadherin蛋白表达显著高于空白对照组（P<0.05）,细胞增殖率显著低于空白对照组（P<0.05）,细胞侵袭数显著低与空白对照组（P<0.05）,细胞凋亡率显著高于空白对照组（P<0.05）。结论 抑制PCDGF的表达能够抑制喉鳞癌Hep-2细胞的增殖和侵袭能力,诱导细胞发生凋亡。     

ALCAM基因1沉默对胃癌细胞增殖和凋亡的影响及分子机制

目的 探讨活化白细胞黏附分子（ALCAM）基因沉默对胃癌细胞增殖和凋亡的影响,并对其分子机制进行初步研究。方法 将ALCAM 和对照 shRNA转染至胃癌细胞SGC-7901中,建立稳定细胞系,分别采用实时荧光定量（RT-PCR）技术和蛋白免疫印迹法（Western blot）检测转染后SGC-7901细胞中ALCAM mRNA和蛋白水平;采用CCK-8法检测转染后SGC-7901细胞的增殖情况;采用流式细胞术检测转染后SGC-7901细胞凋亡情况。采用胃癌肿瘤模型分析ALCAM基因沉默对肿瘤生长的影响。结果 ALCAM shRNA稳定细胞系ALCAM mRNA（1.01±0.26）和蛋白质的表达水平（1.66±0.23）低于对照 shRNA组细胞ALCAM mRNA（0.12±0.06）和蛋白质水平（0.23±0.09）,差异有统计学意义（P<0.05）。与对照shRNA稳定细胞系比较,ALCAM shRNA 稳定细胞系细胞增殖活性下降（P<0.05）、凋亡水平升高（P<0.05）、荷瘤小鼠肿瘤生长速度减缓（P<0.05）。ALCAM下调并不影响总蛋白激酶B（AKT）和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）的表达,而降低了AKT和mTOR磷酸化水平,抑制了mTOR活性,此外,ALCAM蛋白敲低提高了Caspase-3蛋白的表达水平,激活了凋亡信号通路。结论 ALCAM基因沉默能够降低胃癌细胞中ALCAM的表达水平,抑制胃癌细胞的增殖,增加细胞凋亡。     

槐耳颗粒联合DC-CIK细胞对乳腺癌MDA-MB-231干细胞体内外杀伤作用研究

目的 探究白屈菜红碱（CHE）对腺样囊性癌细胞（ACC2）生长的抑制作用及机制。方法 利用CCK8法、EdU法、Hoechst33342/PI双染色法、试剂盒法检测CHE对ACC2细胞活力、细胞增殖、细胞凋亡和活性氧（ROS）水平的影响;通过Western blotting技术检测CHE对Cleaved-Caspase 3、PARP、NF-κB、p-JNK、p-p38蛋白表达的影响;利用斑马鱼移植瘤模型检测CHE对斑马鱼体内ACC2细胞生长的抑制作用。结果 CCK-8结果显示：与对照组比较,2、3、4、5、6、7、8、9、10 μmol/L的CHE显著降低ACC2细胞的存活率（P<0.05、0.01）,且呈浓度相关性; ROS检测结果显示：与对照组比较,5、8 μmol/L的CHE导致ACC2细胞内的ROS水平显著上升（P<0.05、0.01）; EdU增殖检测结果表明：与对照组比较,5、8 μmol/L的CHE致使ACC2细胞的增殖能力显著下降（P<0.01）;Hoechst/PI染色结果显示：与对照组比较,CHE 5、8 μmol/L组ACC2细胞凋亡率显著上升（P<0.01）。抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸（NAC）显著抑制CHE诱导的ROS水平升高、细胞凋亡增加（P<0.01）;Western blotting结果显示：2、5、8 μmol/L的CHE能够显著上调Cleaved-Caspase 3、PARP、NF-κB蛋白的表达（P<0.01）,且呈现浓度相关性,5、8 μmol/L的CHE能够显著上调p-JNK的蛋白表达（P<0.01）,8 μmol/L的CHE能够显著上调p-p38的蛋白表达（P<0.01）;NAC显著降低由CHE导致的Cleaved-Caspase 3、PARP、NF-κB、p-JNK、p-p38蛋白表达增加（P<0.01）,5、8 μmol/L CHE能够有效抑制斑马鱼体内肿瘤的生长（P<0.01）。结论 体外及斑马鱼移植瘤模型证明,CHE可以有效抑制ACC2细胞生长,其机制与提高细胞ROS水平,上调NF-κB、p-JNK、p-p38表达,从而抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡相关。     

右美托咪定对子宫内膜癌细胞增殖、凋亡及Wnt/β-catenin通路的影响

目的 探究右美托咪定对子宫内膜癌细胞增殖、凋亡及Wnt/β-连环蛋白（β-catenin）通路的影响。方法 将Ishikawa、RL95-2细胞分为对照组,右美托咪定1、10、100 nmol/L组,右美托咪定（100 nmol/L）＋LiCl组。CCK-8法和EdU检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blotting检测增殖细胞核抗原（PCNA）、B淋巴细胞瘤-2蛋白（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、β-连环蛋白（β-catenin）、c-Myc基因（c-Myc）、细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）表达水平。构建子宫内膜癌裸鼠模型,分为对照组、右美托咪定组、右美托咪定＋LiCl组,测量肿瘤质量与体积,苏木精–伊红（HE）染色观察移植瘤组织形态,免疫组化法检测移植瘤组织Ki-67、β-catenin蛋白表达。结果 与对照组相比,不同浓度右美托咪定处理后Ishikawa、RL95-2细胞吸光度（A）值、EdU阳性细胞率、迁移细胞数、侵袭细胞数、PCNA、Bcl-2、β-catenin、c-Myc、Cyclin D1蛋白表达显著降低,凋亡率、Bax表达上升（P＜0.05）;与右美托咪定100 nmol/L组相比,右美托咪定＋LiCl组A值、EdU阳性细胞率、迁移细胞数、侵袭细胞数、PCNA、Bcl-2、β-catenin、c-Myc、Cyclin D1蛋白表达显著升高,凋亡率、Bax表达下降（P＜0.05）。右美托咪定能抑制移植瘤质量和体积,促进肿瘤凋亡,降低β-catenin、Ki-67蛋白表达（P＜0.05）;LiCl能逆转右美托咪定对移植瘤的抑制作用（P＜0.05）。结论 右美托咪定能抑制子宫内膜癌细胞增殖,促进凋亡,其作用机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。     

YAP1靶向抑制剂CA3对人子宫内膜癌细胞增殖和凋亡的影响及分子机制

目的 探讨YAP1靶向抑制剂CA3对人子宫内膜癌Ishikawa和RL95-2细胞增殖和凋亡的影响及分子机制。方法 采用不同浓度CA3处理Ishikawa和RL95-2细胞,利用CCK-8和克隆形成试验检测细胞增殖能力,微板检测系统检测细胞内ROS水平,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blotting检测YAP1、MCM5、Bax和Bcl-2蛋白表达水平。结果 与对照组相比,CA3处理组能够明显降低细胞生存率、减少克隆形成数目、增强细胞内ROS水平和诱导细胞凋亡,下调YAP1、MCM5和Bcl-2蛋白表达水平,但对Bax蛋白表达水平没有影响。结论 CA3靶向沉默YAP1抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡,起到明显的抗肿瘤作用,有望成为临床干预和治疗子宫内膜癌的潜在药物。     

五氧化二砷体外对NB4细胞增殖及程序化死亡作用的研究

目的：探讨五氧化二砷（As2O3)对急性早幼粒白血病（APL）细胞NB4增殖及细胞程序化死亡的影响。方法：用细胞生长曲线，集落培养，流式细胞仪检测，DNA电泳，bcl-2蛋白和P53蛋白表达等方法观察NB4细胞增殖，凋亡和癌基因表达情况。结果：As2O5能显著地抑制NB4细胞增殖和细胞生长活力，诱导NB4细胞程序化死亡，下调p53,bcl-2蛋白表达，并能抑制造血祖细胞集落形成。结论：As2O5对APL细胞NB4具有较强的抑制和诱导凋亡作用，可能成为治疗APL有效的药物之一。     

靶向沉默SSBP1基因对肝癌HepG2细胞增殖、侵袭转移的影响

目的 观察靶向沉默线粒体单链DNA结合蛋白(SSBP1)基因对肝癌HepG2细胞增殖、侵袭转移的影响.方法 设计并构建靶向SSBP1 基因的特异性siRNA,采用脂质体介导瞬时转染肝癌HepG2细胞,细胞分3组:对照组、空白转染组、转染组.Real time-PCR和Western-blot检测靶向干扰后SSBP1 mRNA和蛋白表达变化.CCK-8法检测细胞增殖.流式细胞仪检测细胞周期、凋亡率及线粒体膜电位.划痕实验及Transwell 侵袭实验检测细胞侵袭转移能力.Western-blot检测增殖、侵袭转移相关基因蛋白表达状况.结果 SSBP1 siRNA能够显著抑制SSBP1 mRNA和蛋白表达.与对照组和空白转染组比较,转染SSBP1 siRNA后HepG2细胞增殖能力、G2期和S期细胞比例、线粒体膜电位明显降低,G1期细胞比例、细胞凋亡率明显升高(P<0.05);同时细胞增殖相关基因PCNA、凋亡抑制基因Bcl-2、转移相关基因MMP-9蛋白表达显著下调,凋亡诱导基因Bax蛋白表达显著上调(P<0.05).结论 靶向沉默SSBP1基因能够通过线粒体途径抑制肝癌HepG2细胞增殖、侵袭转移,并诱导其凋亡.     

LINC00691负调控miR-512-5p对非小细胞肺癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响

目的 探讨LINC00691对非小细胞肺癌（NSCLC）细胞恶性生物学行为的影响。方法 RT-qPCR检测30例NSCLC患者癌组织和对应癌旁组织中LINC00691和miR-512-5p的表达。双荧光素酶报告基因实验验证LINC00691和miR-512-5p的靶向关系。将A549细胞分为si-NC组、si-LINC00691组、miR-NC组、miR-512-5p组、si-LINC00691+anti-miR-NC组和si-LINC00691+anti-miR- 512-5p组,MTT和克隆形成实验检测细胞增殖情况,流式细胞术、Transwell检测细胞凋亡、迁移和侵袭,Western blotting检测细胞中Ki67、Cleaved-caspase3、E-cadherin和N-cadherin蛋白表达。结果 LINC00691在NSCLC癌组织中表达水平上升（P<0.05）,而miR-512-5p表达水平下降（P<0.05）。LINC00691在A549细胞中负调控miR-512-5p。沉默LINC00691表达或过表达miR-512-5p可降低A549细胞的存活率、克隆形成数、迁移和侵袭数以及Ki67、N-cadherin蛋白表达水平,提高其凋亡率,上调Cleaved-caspase3、E-cadherin蛋白表达水平（P<0.05）。沉默miR-512-5p表达逆转了沉默LINC00691表达对A549细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用及凋亡促进作用。结论 沉默LINC00691可能通过靶向上调miR-512-5p表达来抑制NSCLC细胞的增殖、迁移和侵袭,并促进其凋亡。     

siRNA靶向沉默人多梳基因 2对鼻咽癌细胞增殖及细胞周期的影响

目的 探讨siRNA沉默人多梳基因2(HPC2)对5-8F鼻咽癌细胞增殖的作用和细胞周期的影响.方法 用RNAi MAX将靶向HPC2的siRNA转染入鼻咽癌细胞5-8F,实验分scrambled阴性对照组,#1 siRNA-HPC2组,#2 siRNA-HPC2组,用CCK8法比较细胞增殖活力,平板克隆实验比较增殖能力,流式细胞仪检测比较各组细胞周期分布.结果 siRNA-HPC2细胞转染组的mRNA及蛋白表达较对照组明显降低(P<0.05),两个HPC2沉默组的细胞增殖活性及克隆形成能力较对照组明显下降(P<0.05).流式细胞检测发现HPC2沉默组的细胞G1/S时相转换较对照组减缓.结论 沉默HPC2表达,可以减弱鼻咽癌细胞的恶性增殖,与干扰了细胞周期的运行有关.     

BMP-2 通过BMP/Smad/ID3 通路调控非小细胞肺癌 A549细胞的凋亡

目的探讨BMP-2通过BMP通路调控非小细胞肺癌A549细胞凋亡的作用机制。方法通过双酶切/连接克隆的方法,构建BMP-2 siRNA慢病毒载体及BMP-2慢病毒载体并进行包装;转染慢病毒后,采用荧光显微镜对转染效率进行定性分析,流式细胞术对转染率进行定量分析,RT-qPCR和Western blotting检测BMP-2基因的表达,CCK-8检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blotting检测凋亡蛋白的表达水平以及A549细胞中Smad1/5/8、磷酸化Smad1/5/8(p-Smad1/5/8)和ID3蛋白的表达水平。结果转染后第3、4 d,BMP-2 siRNA可显著抑制A549细胞的增殖(P<0.05);转染后24 h,BMP-2 siRNA可显著诱导A549细胞的凋亡(P<0.05),且活化的凋亡蛋白Caspase-9和Caspase-3的表达水平显著升高(P<0.05),而过表达ID3可抑制BMP-2 siRNA对细胞凋亡的诱导作用。与未处理组和阴性对照组相比,BMP-2过表达组细胞中p-Smad1/5/8表达水平显著上调(P<0.05),而Smad1/5/8总蛋白表达水平无明显变化(P>0.05),ID3蛋白的表达显著上调(P<0.05)。结论BMP-2可通过BMP/Smad/ID3通路参与调控A549细胞的增殖和凋亡。     

miR-197在人口腔鳞状细胞癌中的表达及对细胞增殖的作用机制★

目的 探讨miR-197在人口腔鳞状细胞癌（OSCC）中的表达及对细胞增殖的作用机制。方法 选取2015年3月—2019年3月在海南医学院第一附属医院选择手术切除病灶的100例OSCC患者的肿瘤组织及癌旁组织（距离病灶边缘超过2.5 cm），qRT-PCR检测miR-197在OSCC组织及细胞系CAL27中的表达，Western blotting检测JAK2在OSCC组织及细胞系中的表达。构建沉默miR-197表达的病毒载体（miR-197-siRNA）及miR-197-siRNA阴性对照（miR-197-siRNA-NC），转染CAL27细胞，以未处理的CAL27细胞作为空白对照；倒置显微镜观察转染miRNA-197后的细胞形态；流式细胞术、EdU标记实验、Transwell小室实验分别检测miR-197对CAL27细胞凋亡率、DNA合成能力、侵袭能力的影响；荧光素酶实验基因报告分析miR-197与JAK2的作用关系，Western blotting检测各组细胞中JAK2的表达。结果 qRT-PCR结果显示，与癌旁组织相比，miR-197在OSCC组织中的表达明显升高，JAK2在OSCC组织中的表达明显降低（P<0.05）。与人正常口腔黏膜角化细胞株HOKs相比，miR-197在人OSCC细胞株CAL27中的表达明显上升，JAK2在CAL27中的表达明显下降（P<0.05）；与miR-197-siRNA-NC组相比，miR-197-siRNA组贴壁细胞数量明显减少，胞质空泡样，细胞堆积明显增多，染色质固缩，核膜破损严重，线粒体空泡。流式细胞术、EdU标记实验、平板集落克隆实验、软琼脂集落形成实验结果表明，与miR-197-siRNA-NC组相比，miR-197-siRNA组细胞凋亡率明显增加，细胞内DNA合成明显受阻，细胞增殖和侵袭明显受到抑制，差异均具有统计学意义（P<0.05）；荧光素酶实验基因报告分析结果证明，miR-197与JAK2具有靶向调控关系；Western blotting结果表明，与miR-197-siRNA-NC组相比，miR-197-siRNA组细胞中JAK2的表达明显升高（P<0.05）。结论 miR-197在OSCC中呈高表达，下调miR-197可抑制OSCC细胞增殖，这可能与JAK信号通路有关。     

Flow cytometric analysis of T lymphocyte proliferation in vivo by EdU incorporation

Monitoring T lymphocyte proliferation, especially in vivo, is essential for the evaluation of adaptive immune reactions. Flow cytometry-based proliferation assays have advantages in measuring cell division of different T lymphocyte subsets at the same time by multicolor labelling. In this study, we aimed to establish the use of 5-Ethynyl-2′-deoxyuridine (EdU) incorporation in vivo to monitor T lymphocyte proliferation by flow cytometry with an adoptive transfer model. We found that fixation followed by permeabilization preserved T cell surface antigens and had no obvious effects on the fluorescence intensity of APC, PE, PE-Cy7, FITC and PerCP-Cy5.5 when the concentration of the permeabilization reagents was optimized. However, the click reaction resulted in a significant decrease in the fluorescence intensity of PE and PE-Cy7, and surface staining after the click reaction improved the fluorescence intensity. Thus, an extra step of blocking with PBS with 3% FBS between the click reaction and cell surface staining is needed. Furthermore, the percentage of EdU-positive cells increased in a dose-dependent manner, and the saturated dose of EdU was 20 mg/kg. Intraperitoneal and intravenous injection had no differences in lymphocyte proliferation detection with EdU in vivo. In addition, T cell proliferation measured by EdU incorporation was comparable to BrdU but was lower than CFSE labelling. In conclusion, we optimized the protocols for EdU administration in vivo and staining in vitro, providing a feasible method for the measurement of T lymphocyte proliferation with EdU incorporation by flow cytometry in vivo.     

Silencing livin gene by siRNA leads to apoptosis induction, cell cycle arrest, and proliferation inhibition in malignant melanoma LiBr cells

Aim： The aim of the present study was to investigate the effects of silencing the livin gene by small interfering RNA （siRNA） on the expression of livin and the effects on apoptosis, cell cycle, and proliferation in human malignant melanoma LiBr cells. Methods： Three chemically-synthetic siRNA duplexes targeting livin were transiently transfected into the LiBr cells, and the effects on livin expression were detected both at the mRNA level by real-time RT-PCR and at the protein level by Western blotting. Apoptosis was evaluated by terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated digoxigenin-dUTP nick-end labeling assay, flow cytometric analysis, and the expression of procaspase-3 and activated caspase-3 analysis by Western blotting. Cell cycle was analyzed by flow cytometry. Cell proliferation was determined by 3-（4,5-dimethylthiazol-2-yl）-2,5-diphenyltetrazolium bromide. Results： One of the 3 designed siRNA could effectively knock down the livin expression both at the mRNA and protein levels in dose- and time-dependent manners; 100 nmol/L with maximum downregulation on mRNA at 48 h, and on the protein at 72 h after transfection. Silencing livin could significantly induce apoptosis, arrest cell cycle at the Go/G1 phase, and inhibit proliferation in LiBr cells. Meanwhile, caspase-3 was activated. Conclusion： The livin gene could serve as a potential molecular target for gene therapy by siRNA for malignant melanoma.