丽水地产灵芝子实体与灵芝孢子粉中灵芝烯酸D、多糖及重金属元素的测定

摘 要 目的： 丽水地产灵芝子实体和灵芝孢子粉中三萜类化合物、多糖及重金属元素的含量测定。方法: 采用HPLC法测定样品中灵芝烯酸D含量及分析其他三萜类化合物,用蒽铜 硫酸比色法测定多糖含量,用原子吸收分光光度法测定2种重金属含量。结果: 灵芝子实体与灵芝孢子粉中三萜类化合物的HPLC特征图谱差异明显;灵芝孢子粉中多糖含量高于子实体;灵芝菌柄重金属含量较菌盖高,菌盖与孢子粉中重金属含量无明显差异。结论:本试验可为评价丽水地产灵芝子实体的质量及比较灵芝子实体与灵芝孢子粉的药效提供理论依据。     

灵芝孢子粉多糖Lzps-1的化学研究及其总多糖的抗肿瘤活性

目的研究微波软化灵芝孢子粉中的多糖组分及其抗肿瘤活性。方法用水提取微波软化灵芝孢子粉总多糖，总多糖经分级沉淀得到多糖组分Lzps-C，再采用DEAE-cellulose和Sephadex G-50柱色谱进行分离纯化，用化学和光谱方法分析其结构。结果从微波软化灵芝孢子粉的水提物中分得一个多糖Lzps-1，其平均分子量为8 000，为葡聚糖。微波软化灵芝孢子粉的水提物得到的总多糖Lzps对小鼠Lewis肺癌、小鼠S₁₈₀肉瘤有较好的抑制作用，并能明显提高荷Lewis肺癌小鼠NK活性。结论Lzps-1是首次从灵芝孢子粉中分离得到。Lzps具有抗癌活性。     

三种灵芝不同部位的活性成分含量差异性分析

目的比较三种灵芝（霍芝I号、韩芝、日芝）不同药用部位的总多糖、总三萜、灵芝酸A及灵芝酸B的含量差异,为全面评价灵芝药材及孢子粉的质量及其药用成分的合理利用提供依据。方法采用苯酚一硫酸法测定总多糖含量;香草醛一冰乙酸一高氯酸显色法测定总三萜的含量;HPLC法测定灵芝酸A、B的含量。结果每种灵芝不同药用部位的总多糖含量由高到低依次为：孢子粉〉菌盖〉菌柄;每种灵芝不同药用部位的总三萜含量由高到低依次为：菌盖〉菌柄〉孢子粉;每种灵芝不同药用部位的灵芝酸A和灵芝酸B含量由高到低依次为：菌盖〉菌柄〉孢子粉,且灵芝酸A的含量均明显高于灵芝酸B。结论该研究为全面评价灵芝子实体及孢子粉的质量及其药用成分的合理利用提供依据。,     

两个厂家灵芝孢子粉质量比较

目的对拟用于医院制剂研发的两个厂家的灵芝孢子粉进行质量比较,为购买优质灵芝孢子粉原料药提供依据。方法依据2010年版《中国药典(一部)》并参考相关文献中有关中药灵芝的检测方法,对北京A厂和山东B厂两厂家灵芝孢子粉的破壁率、水分、灰分、多糖进行比较。结果两厂家供试品的薄层色谱图在波长365 nm处均与灵芝对照药材相同位置有相同颜色的荧光斑点;北京A厂的灵芝孢子破壁率为90%,山东B厂的破壁率为97%,二者含水量、多糖均符合药典规定,但北京A厂灵芝孢子粉的总灰分含量为3.37%,超出药典规定的含量限度。结论山东B厂灵芝孢子粉的质量较优,可作为医院制剂灵芝孢子粉胶囊研制的原料药。     

HPLC法测定灵芝子实体和孢子粉中灵芝酸C2、灵芝酸G和灵芝酸A

目的 建立灵芝子实体和孢子粉中3种灵芝酸类成分的HPLC测定方法,为全面评价灵芝药材和孢子粉的质量提供依据.方法 采用HPLC方法测定,Diamonsil(钻石)C8色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相乙腈-0.03％磷酸(28∶72),体积流量1.2 mL/min,检测波长250 nm;柱温35℃.结果 灵芝酸C2、灵芝酸G、灵芝酸A分别在0.40～10.06 μg(r=0.999 99)、0.40～10.00 μg (r=0.999 99)、0.40～10.00 μg(r=0.999 99)线性关系良好,平均回收率分别为101.04％、99.39％、101.22％,RSD值分别为1.64％、1.86％、2.20％(n=6):灵芝子实体中3种灵芝酸的质量分数分别在0.06～0.29 mg/g、0.12～0.37 mg/g、0.19～0.41 mg/g,灵芝孢子粉供试品中3种灵芝酸的质量分数分别在0～0.01 mg/g、0、0～0.03 mg/g.结论 本方法简便,稳定,可用于灵芝三萜类成分C2、灵芝酸G、灵芝酸A的定量分析.     

灵芝孢子粉中维生素和多糖的分析

测定了灵芝孢子粉中维生素C、E和胡萝卜素、多糖的含量，依次分别为5．60、61．98、0．090和751mg／100g。     

段木灵芝与代料灵芝的化学成分的研究Ⅱ.主要营养成分、孢子、多肽、油脂成分

目的研究段木灵芝多肽、孢子破壁前后油脂与多糖变化。结果一般化学成分分析中代料灵芝的蛋白质含量14．34％,是段木灵芝的1.6倍,代料灵芝多糖含量高于段木灵芝1～2.6倍。灵芝破壁孢子油脂释放能力是未破壁孢子的5．2倍;破壁孢子的活性成分多糖肽是未破壁孢子多糖肽含量1.69倍。灵芝多糖肽由16种氨基酸组成。从脂肪分析结果来看,灵芝孢子油的饱和脂肪酸含量为23．70％,不饱和脂肪酸为76.20％,对于孢子油是否有应用价值,值得进一步研究。     

灵芝孢子粉对荷VX2乳腺癌兔生存期和远处转移的影响

目的探讨灵芝的孢子粉对荷VX2乳腺癌兔的生存期和远处转移的影响。方法将成功接种荷VX2乳腺癌兔随机分为灵芝组和对照组，对照组以0．5％羧甲基纤维素钠6．67ml／（kg·d）灌胃，灵芝组灵芝孢子粉2g／（kg·d）灌胃。解剖自然死亡或结束时处死的兔子。用Kaplan—Meier进行生存曲线分析，LogRank进行生存曲线显著性检验，并比较两组的远处转移。结果结束时（10周）灵芝组60％生存，而对照组只有20％生存，两组生存曲线差别有统计学意义（P〈0．05）。灵芝组有80％转移，而对照组全部（100％）有远处转移；兔最终死于远处转移。结论灵芝孢子粉能够延长荷VX2乳腺癌兔的生存期，可能延缓转移和减少远处转移。     

灵芝孢子粉中多糖的制备工艺研究

目的：针对灵芝孢子粉多糖的制备工艺进行研究。方法：以多糖转移率为指标,比较布袋包煎和搅拌提取两种工艺;采用单因素法,考察搅拌提取中料液比和提取次数对多糖提取的影响;根据滤液的性状,比较静置取上清液、离心、布袋滤过和板框滤过等多种滤过方法,优化滤过工艺。结果：灵芝孢子粉多糖的最佳制备工艺条件为：按料液比1：30加水至提取罐中,煮至100℃,投料,保温搅拌提取2min,静置24min,取上清液,离心,滤液先通过（5μm滤袋）,再板框滤过,滤液浓缩至相对密度为1．10（60℃）,醇沉,取沉淀减压干燥,千膏得率为3．26％,多糖含量为25．1％,多糖转移率97％。结论：该工艺可行有效,具有实际生产意义。     

灵芝孢子粉与子实体中三萜类化合物、多糖及重金属元素的含量比较

目的:比较灵芝孢子粉与子实体中三萜类化合物、多糖及重金属元素的含量差异。方法:采用高效液相色谱(HPLC)法分析灵芝孢子粉和子实体样品中的三萜类化合物,用电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)技术对上述样品中5种重金属元素的含量进行测定,用蒽酮-硫酸法测定其中多糖的含量。结果:灵芝孢子粉和子实体中三萜类化合物的HPLC特征图谱差异明显;灵芝孢子粉中多糖的含量高于子实体中的含量;而重金属元素的含量二者没有显著差异。结论:本试验结果可为灵芝孢子粉与子实体药理作用的差异提供理论依据。     

灵芝滴丸中灵芝多糖的含量测定

目的：探讨灵芝滴丸中灵芝多糖的含量测定方法。方法：采用紫外分光光度法，检测波长为625nm。结果：线性范围为20．8-208．0μg／ml（r=0．9976），平均回收率为99．56％，RSD为1．52％。结论：本法简便快捷，准确度高，重复性好，可作为本制剂的质控方法。     

RP-HPLC和UV-VIS法测定灵芝不同收获期的多糖肽和灵芝酸

目的研究灵芝不同栽培方式和不同收获期中多糖肽和灵芝酸A、B的变化,为灵芝规范化栽培及制定产品质量标准提供依据。方法 RP-HPLC测定菌草灵芝和仿野生栽培的灵芝提取物的灵芝酸A、B的变化。色谱柱为XB-C18柱(150mm×4.6mm,5μm),流动相为0.05%磷酸-乙腈(65:35),检测波长254nm,常温,进样量50μL。以灵芝多糖肽为对照品,采用Folin-酚试剂法,通过紫外-可见吸收光谱法检测菌草灵芝和仿野生栽培灵芝不同收获期提取物的多糖肽。结果灵芝酸A、B线性范围分别为14.8～371.0和16.4～409.0μg/mL,平均回收率为95.0%、100.5%,RSD分别为1.18%、3.37%(n=6)。灵芝多糖肽在100～600μg/mL与吸光度值呈线性关系,r=0.9995,回收率95%～100%。结论该方法简便、快速,可用于灵芝及其产品中多糖肽和灵芝酸A、B的质量控制。菌草灵芝沸水提取能将多糖肽和灵芝酸分离,既简化了灵芝水、醇提取工艺,又提高经济效益。     

高效毛细管电泳法测定灵芝多糖中单糖的组成

目的：采用高效毛细管电泳法测定灵芝多糖中单糖的组成。方法：灵芝多糖水解后，经PMP衍生化，高效毛细管电泳分析。电泳条件：缓冲液为50mmol·L^-1硼砂溶液（pH9．3）；柱温25℃；电压20kV；检测波长200nm；气压进样3．445kPa，进样时间5s。结果：灵芝多糖中含葡萄糖、半乳糖、木糖、甘露糖的摩尔比为4．5：2．8：1．3：3．6。结论：该方法具有简单、快速、分离效率高等特点，可用于测定灵芝多糖中单糖的组成。     

灵芝及灵芝孢子粉的毒理学与安全性评价研究进展

本文对灵芝及灵芝孢子粉的概况、灵芝孢子粉的去壁和破壁技术、灵芝孢子粉的鉴定方法进行了梳理,并重点对灵芝孢子粉毒理学各项研究(包括急性毒性、遗传毒性、重复给药毒性、幼龄动物毒性研究等)进行整理归纳,现有文献表明灵芝及灵芝孢子粉在上述毒理学试验中安全性良好,无明显毒性。     

灵芝(孢子粉)生药质量检测

目的 通过显微形态、化学成分的检测分析,探讨灵芝孢子粉生药质量检测方法。方法 一般化学成分按常规方法进行,锌、锰等微重元素分析采用原子吸收分光度法(AAS),多酶含量的检测采用苯酚-硫酸比色法,牛磺酸分析采用氨基酸自动分析仪;破壁形态观察和破壁率的检测采用数字显微镜、扫描电镜进行。结果 破壁前后孢子的粗蛋白、总酷、微量元素、牛磺酸等含量均变化不大,而粗脂肪(索氏提取)及多糖(热水提取)含量明显增加。在扫描电镜和光学显微镜下,未破壁孢子粉的显微形态完整,而破壁孢子粉样品中观察不到完整的孢子,其孢壁蛄构基本解体,孢内物质是易释出。结论 (1)水溶性多糖(Polysaccharides)、灵芝酸(Triterpenoid acids)及牛磺酸(Taurine)等含量可以作为灵芝孢子粉生药质量控制的重要指标;(2)对破壁孢子粉的检测可以数字显微镜或扫描电镜观察其破壁形态及破壁率高低。     

两种灵芝孢子粉抗肿瘤及免疫功能研究

目的检验两种灵芝产品（灵芝粉LZ、破壁灵芝孢子粉PB）抑制肿瘤及提高免疫力的效果。方法通过移植性肿瘤实验、迟发型变态反应、血清溶血素实验、NK细胞活性检测实验，统计各个指标结果。结果移植性肿瘤实验结果表明破壁灵芝孢子粉的抑瘤效果明显，具有一定的抑制肿瘤作用；破壁灵芝孢子粉免疫调节作用显著，迟发型变态反应与血清溶血素实验结果为阳性；灵芝粉有一定的免疫调节作用，迟发型变态反应结果为阳性。结论破壁灵芝孢子粉能较好的抑制肿瘤及增强免疫力。     

灵芝糖泰胶囊质量标准的研究

采用薄层色谱法对灵芝糖泰胶囊中灵芝多糖进行性鉴别，并用分光光度法，以无水葡萄糖为对照品，测定灵芝多糖的含量，平均回收率为１００．３％，ＲＳＤ为０．９７％（ｎ＝５），重现性ＲＳＤ为１．０８（ｎ＝６）。     

灵芝孢子粉胶囊中多糖的含量测定

目的：建立灵芝孢子粉胶囊中多糖的含量测定方法。方法：以葡萄糖为标准对照品,采用硫酸-苯酚法测定灵芝孢子粉胶囊中多糖的含量,检测波长为487nm。结果：2.864～11.456μg.mL-1范围内吸光度与被测含量之间呈良好的线性关系,r=0.9995,平均回收率为100.3%。结论：本法准确可靠,重现性好,结果稳定。     

福建省常见灵芝的氨基酸分析比较

目的为进一步开发福建省野生灵芝资源作为参考。方法就福建省常见的几种栽培灵芝及野生灵芝的氨基酸含量作了分析比较。结果氨基酸总量树舌G．applanatum最高,南方树舌G．austrsale最低。人体必需氨基酸的比例,栽培紫芝G．．sinense最高,野生紫芝G．.sinense最低;但野生灵芝的必需氨基酸组成比例相对栽培灵芝更新近人体的必需氨基酸组成比例。结论必需氨基酸组成比例差异可能是由于品种及生长条件的差异造成;在(药用真菌)生物多样性保护和合理利用方面,野生灵芝的人工驯化栽培有着广阔的前景。在野生转家种的驯化栽培过种中,品种改良及栽培技术方面尚有需要改进,并与有效成分的分析测定(指纹图谱构建)相结合,以求获得较高的栽培品质。     

灵芝孢子粉抗肝纤维化作用的实验研究

目的观察破壁灵芝孢子粉对CCL4诱导的大鼠肝纤维化的影响。方法CCL4诱导大鼠肝纤维化动物模型,观察破壁灵芝孢子粉对大鼠肝纤维化形成过程中转化生长因子β1、金属蛋白酶抑制因子-1(TIMP-1)表达的影响及肝脏组织学变化。结果破壁灵芝孢子粉明显减少肝脏胶原沉积,可以明显降低TGF-β1．TIMP-1的表达(P<0．05)。结论破壁灵芝孢子粉可通过下调TGF -β1、TIMP-1抑制胶原合成及加强胶原分解,从而抑制肝纤维化形成。