胃癌组织中p16基因甲基化水平以及mRNA表达的关系

目的探讨胃癌组织中抑癌基因p16基因甲基化水平与基因表达的关系。方法选取抚顺市中心医院2005至2008年普外切除胃癌标本50例,应用逆转录PCR(RT-PCR)方法及甲基化特异性PCR(MSP)方法分别检测胃癌标本抑癌基因p16的表达及甲基化情况,并探讨二者关系。结果①胃癌原发灶标本中p16基因甲基化率为28%(14/50)。②发生甲基化的胃癌标本mRNA表达量为(0.12±0.05),未发生甲基化的胃癌标本mRNA表达量为(0.77±0.13),下调明显(P<0.01)。结论 p16基因的异常甲基化是胃癌发生、发展过程中的频繁事件。p16基因启动子区CpG岛过甲基化是此基因在胃癌中表达缺失或下调的原因之一,在胃癌的发生发展中起一定作用,可能成为胃癌的早期诊断及治疗靶点基因之一。     

ITP中IFN-γ和IL-4 mRNA表达与其甲基化水平的相关性研究

目的:检测免疫性血小板减少症(ITP)患者的干扰素(IFN)-γ和白细胞介素(IL)-4的mRNA表达水平及其各自基因启动子区DNA甲基化的水平.方法:取36例ITP患者(ITP组)和36例正常对照(对照组)外周血,采用实时定量PCR方法检测IFN-γ和IL-4的mRNA水平;随机抽取2组中的各10例,采用DNA甲基化修饰后测序的方法检测IFN-γ和IL-4基因启动子区的甲基化水平,并计算IFN-γ和IL-4基因的mRNA水平与其基因启动子区DNA甲基化水平的相关性.结果:与对照组相比,ITP组IFN-γ的mRNA水平增高(1.86±0.29 vs 0.83±0.14,P＜0.05),而IL-4的mRNA水平降低(0.78±0.22 vs 1.45±0.40,P＜0.05),Th1/Th2(IFN-γ/IL-4)比值升高(7.11±0.60vs 3.12±1.88,P＜0.01).2组IFN-γ和IL-4基因CpG岛的位点甲基化水平和整体甲基化水平差异均无统计学意义(P＞0.05).ITP组中IFN-γ和IL-4的mRNA表达水平与基因启动子区甲基化水平不存在相关性(均P＞0.05).结论:ITP患者处于Th1极化状态,IFN-γ和IL-4的基因启动子区的甲基化水平对各自基因mRNA水平的表达不起调控作用.     

乳腺癌NOEY2基因启动子区甲基化的研究

目的检测NOEY2基因在乳腺癌发生不同阶段的甲基化状态及其在乳腺浸润性导管癌(IDC)中的mRNA表达水平,探讨NOEY2基因启动子区异常甲基化与乳腺癌发生发展的关系。方法收集2010年1月—2012年1月手术切除乳腺的女性患者标本,其中IDC组46例,乳腺普通型导管增生(UDH)组30例,癌旁正常乳腺组织(NBT)组20例,乳腺原位导管癌(DCIS)组20例,乳腺非典型导管增生(ADH)组13例,采用甲基化特异性PCR(MSP)检测NOEY2基因的甲基化率及水平,分析其与临床病理参数的关系;采用实时定量PCR检测30例IDC中NOEY2基因的mRNA相对表达量,分析NOEY2基因甲基化对其mRNA表达的影响。结果 IDC组的完全甲基化率高于NBT及UDH组(P<0.01);NOEY2基因完全甲基化与乳腺癌患者的临床分期、组织学分级有关(P<0.05),而与年龄、肿瘤大小、ER、PR、HER2无相关性(P>0.05);完全甲基化的IDC标本NOEY2 mRNA表达量低于部分甲基化的IDC标本(P<0.05);IDC中NOEY2基因的甲基化水平与NOEY2基因mRNA表达量呈负相关(r=-0.659,P<0.05)。结论 NOEY2基因启动子区异常高甲基化及其导致的mRNA表达下调在乳腺癌发生发展过程中起重要作用。     

miR-27a和miR-181b表达水平在胃癌早期诊断的价值

目的研究外周血中miR-27a、miR-181b的表达水平在胃癌早期的诊断价值。方法采用RT-PCR法检测46例胃癌患者(A组)、27例胃癌前病变患者(B组)及21例健康人(C组)外周血浆中miR-27a、miR-181b的表达水平。结果与C组相比,A组和B组血浆中miR-27a、miR-181b的表达明显增加(P<0.01或P<0.05),ROC曲线下面积分别为0.876、0.770和0.769、0.749;而A组和B组miR-27a、miR-181b表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论外周血浆中miR-27a、miR-181b有作为胃癌早期诊断标志物的潜力。     

Hydralazine逆转胃癌细胞株p16基因甲基化及增强其表达的研究

目的:通过使用甲基转移酶抑制剂肼屈嗪(Hydralazine)作用于胃癌细胞株BGC-823,观察Hydralazine对MTS1/p16基因启动子区CpG岛甲基化、p16mRNA、p16蛋白表达及细胞增殖的影响;分析p16基因启动子区CpG岛甲基化与p16基因表达两者间的关系,以此考察胃癌细胞株BGC-823p16基因的失活机制是否与启动子区CpG岛甲基化有关。方法:对体外培养的胃癌细胞株BGC-823进行分组实验,实验组加入水溶性的Hydralazine,浓度0、10、30、100μmol/L,对照组不加Hydralazine,96h后对两组分别行甲基化特异性PCR法(MSP)、RT-PCR及Westernblot检测,以观察p16基因甲基化状态、mRNA、蛋白表达的变化;应用6种不同浓度的水溶性Hydralazine(0、3、10、30、100、300μmol/L)处理胃癌细胞BGC-823,72h后行MTT检测,以观察对细胞增殖的影响。结果:P16基因在胃癌细胞株BGC-823中,启动子区CpG岛呈高甲基化状态,mRNA及蛋白呈低水平表达。Hydralazine阻断甲基转移酶作用后,p16基因启动子区CpG岛呈去甲基化状态,Hydralazine浓度越高,CpG岛去甲基化越明显。Hydralazine阻断甲基转移酶作用后,用药后p16mRNA表达较前明显增强(P<0.05)。Hydralazine阻断甲基转移酶作用后,用药后p16蛋白表达较前明显增强(P<0.01)。MTT检测到不同浓度的Hydralazine(0、3、10、30、100、300μmol/L)对细胞增殖的抑制率差异有统计学意义(P<0.05),其量效关系反映出抑癌基因p16去甲基化程度越高,对胃癌细胞株BGC-823的增殖抑制越显著。结论:P16基因动子区CpG岛甲基化是p16基因失活的重要机制。     

多发性骨髓瘤患者DAPK的表达及启动子区甲基化状态的研究

目的研究多发性骨髓瘤(MM)患者抑癌基因DAPK的表达及其启动子区甲基化状态,探讨其在MM发生发展中的作用。方法采用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)技术及实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)研究MM患者骨髓单个核细胞DAPK基因启动子甲基化发生率及其mRNA的表达水平。结果 MM患者DAPK基因启动子甲基化阳性率为18.52%,对照组中DAPK基因启动子区甲基化阳性率为0;MM组与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。MM组和对照组DAPK mRNA表达情况,差异无统计学意义(P>0.05);MM患者中甲基化组低于非甲基化组;甲基化组、非甲基化组与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.0167);MM患者的初治组低于复发组,初治组、复发组与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.0167)。结论 DAPK基因启动子区甲基化可能是其mRNA表达的机制之一,并在MM的发病中具有一定的作用。     

胃癌BLU基因启动子区高甲基化的临床意义

目的研究BLU基因启动子区高甲基化在胃癌发生发展中的作用。方法应用甲基化特异性PCR技术分别检测92例胃癌组织与相应的癌旁组织以及79例胃癌患者与79例正常人外周血BLU基因甲基化水平,分析BLU基因甲基化与临床病理参数的相关性。结果胃癌组织BLU基因甲基化率高于癌旁组织(67.39%vs.52.17%)(P<0.05)。BLU基因甲基化与患者性别、年龄、肿瘤大小、分化程度、TNM分期和浸润深度之间无明显相关性(P>0.05),但与肿瘤淋巴结转移密切相关(P<0.05)。胃癌患者外周血BLU基因甲基化率与正常人外周血比较差异无统计学意义(63.29%vs.56.96%)(P>0.05)。结论 BLU基因启动子的CpG岛在胃癌组织存在高甲基化现象,提示BLU基因的高甲基化可能与抑癌基因被失活从而导致胃癌的发生有关。BLU甲基化可能参与胃癌淋巴结转移。     

胃癌组织RASSF1A基因启动子甲基化测定分析

目的 检测胃癌和癌旁组织RASSF1A基因启动子甲基化改变规律.方法 取40例胃癌患者肿瘤组织及癌旁组织,用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)检测RASSF1A基因启动子的甲基化.结果 癌旁组织仅观察1例甲基化(2.5%),而肿瘤组织中26例出现甲基化表达(65.0%).(P＜0.05).结论 RASSF1A基因启动子区甲基化是是胃癌经常发生的分子事件,可能与胃癌癌变有一定关系.RASSF1A基因甲基化是对胃癌高危人群进行筛选的一项重要的候选指标.     

PTEN基因甲基化及其表达与非小细胞肺癌侵袭转移的关系

目的观察非小细胞肺癌组织中第10号染色体缺失的张力蛋白同源的磷酸酶基因(phosphatase and tensin homology deleted on chromosome ten,PTEN)mRNA表达和启动子区甲基化状态变化,探讨其与肺癌临床病理特征的关系。方法采用RT-PCR和甲基化特异性PCR法(MSP)分析肺癌及相应癌旁肺组织中PTEN基因表达情况及其启动子区甲基化状态。结果肺癌组织中PTEN基因启动子区甲基化率为57.8%(48/83),明显高于癌旁肺组织的30.1%(25/83)(P<0.05)。肺癌组织中PTENmRNA的阳性率为32.5%(27/83),明显低于癌旁肺组织的55.4%(46/83)(P<0.05);PTEN基因启动子甲基化与mRNA的表达与NSCLC的分化程度、TNM分期、淋巴结转移及术后生存时间有明显关系,PTEN甲基化状态与mRNA表达呈负相关(P<0.05)。结论肺癌组织中PTEN基因失表达与其启动子区甲基化有关,这可能是肺癌发生发展以及转移的原因之一。     

分泌型卷曲相关蛋白2启动子区甲基化与β联蛋白异常表达在结直肠癌中的意义

目的研究结直肠癌中Wnt/β-联蛋白(catenin)信号通路调控因子分泌型卷曲相关蛋白(SFRP)2基因启动子区甲基化状态及β-catenin蛋白的表达模式,探讨两者在结直肠癌中的关系及意义。方法用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)法和免疫组织化学法分别检测结直肠癌组、腺瘤组、非腺瘤性息肉组、健康对照组中SFRP2基因启动子区甲基化状态和β-catenin蛋白的表达情况。结果在结直肠癌组、腺瘤组、非腺瘤性息肉组、健康对照组中,SFRP2基因启动子区甲基化率分别为79%、63%、8%、0,差异有统计学意义(P<0.05);β-catenin蛋白表达率分别为74%、48%、4%、0,差异有统计学意义(P<0.05);SFRP2启动子区甲基化与β-catenin异常表达之间存在相关性(P<0.01);SFRP2启动子区甲基化和β-catenin异常表达均与肿瘤分化程度有关(P<0.05)。结论 SFRP2启动子区域甲基化频率及β-catenin异常表达率在结直肠癌中上调,两者可能共同促进了结直肠癌的发生发展。     

Diagnostic value of expressions of miR-27a and miR-181b for early detection of gastric cancer

目的 研究外周血中miR-27a、miR-181b的表达水平在胃癌早期的诊断价值.方法 采用RT-PCR法检测46例胃癌患者(A组)、27例胃癌前病变患者(B组)及21例健康人(C组)外周血浆中miR-27a、miR-181b的表达水平.结果 与C组相比,A组和B组血浆中miR-27a、miR-181b的表达明显增加(P＜0.01或P＜0.05),ROC曲线下面积分别为0.876、0.770和0.769、0.749;而A组和B组miR-27a、miR-181b表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 外周血浆中miR-27a、miR-181b有作为胃癌早期诊断标志物的潜力.     

骨关节炎患者关节软骨TIMP-3启动子区甲基化水平的初步研究

目的探讨关节软骨中组织金属蛋白酶抑制因子-3（TIMP～3）基因启动子区甲基化与其蛋白表达的相关性,并分析TIMP一3基因CpG岛异常甲基化与骨关节炎（OA）的关联性。方法应用甲基化特异性的聚合酶链反应（MSP）技术和免疫组织化学SP法分别检测14例健康人的正常关节软骨细胞和35例骨关节炎（OA）患者软骨细胞TIMP-3基因启动子区甲基化和蛋白表达情况。结果OA患者和健康人关节软骨中TIMP-3基因启动子区均有甲基化修饰,其阳性率分别为74.3％（26／35）和35．7％（5／14）,0A组TIMP-3基因启动子区甲基化率明显高于健康组（P〈0．05）。14例健康人中,软骨细胞TIMP-3蛋白表达阳性10例（71．4％）,而35例OA患者中,软骨细胞TIMP-3蛋白表达阳性11例（31．4％）。24例OA患者软骨细胞蛋白表达阴性的标本中．TIMP-3启动子区甲基化阳性21例（87．5％）;26例TIMP-3启动子区甲基化阳性的标本中,蛋白表达阴性21例（80．8％）,TIMP-3启动子区甲基化与蛋白表达呈显著负相关（P〈0．05）。结论启动子区CpG岛高甲基化是OA患者关节软骨细胞TIMP-3表达失活的主要机制之一,其可能参与了OA的发生和发展。     

中国散发性乳腺癌中ERα表达与ERα基因启动子甲基化相关性研究

目的探讨中国散发性乳腺癌中ERα蛋白表达和ERα基因启动子甲基化的相关性。方法通过甲基化特异性PCR法检测138例乳腺癌肿瘤组织中ERα基因启动子区四个CpG岛密集区域甲基化情况,免疫组织化学方法检测ERα,PgR蛋白表达。结果138例肿瘤组织中有83例发生ERα基因启动子甲基化(60.1%),69例ERα阴性标本有57例发生甲基化(82.6%)。ERα蛋白失表达与ERα基因启动子甲基化具有相关性。此外,ERα基因启动子甲基化与PgR蛋白低表达相关。(76%vs24.1%;P<0.00001)。结论中国散发性乳腺癌普遍存在ERα基因启动子甲基化,ERα基因启动子甲基化与ERα、PgR蛋白低表达相关,ERα基因的表遗传学改变在中国散发性乳腺癌发生发展中具有重要作用。     

己烯雌酚对HOSE细胞中HOXA10基因表达及DNA甲基化的影响

目的研究己烯雌酚对人正常卵巢上皮细胞株HOSE中HOXA10基因表达及基因启动子区CpG岛甲基化的影响。方法用不同浓度的己烯雌酚(5×10-6、5×10-7、5×10-8 mol/L)作用于体外培养的人正常卵巢上皮细胞株HOSE。培养5d后收集细胞,应用实时荧光定量PCR和Western blot检测HOXA10基因mRNA和蛋白的表达;运用甲基化特异性PCR检测HOXA10基因启动子区CpG岛的甲基化状态。结果己烯雌酚作用后,HOSE细胞中HOXA10基因mRNA和蛋白表达上调(P<0.05),并且HOXA10基因启动子区发生去甲基化改变。结论己烯雌酚可以上调人正常卵巢上皮细胞株HOSE中HOXA10基因的表达,与其对HOXA10基因启动子区CpG岛甲基化的影响有关。     

子宫内膜癌中Syk基因的表达及其甲基化分析

目的 探讨Syk基因在子宫内膜良、恶性组织中的表达及其启动子甲基化与子宫内膜癌发生、发展的关系.方法 采用RT-PCR方法检测52例子宫内膜癌及癌周组织、30例子宫内膜不典型增生、28例复杂型増生、30例单纯型增生和40例正常内膜组织中Syk mRNA 的表达情况,同时采用MSP方法检测其基因启动子甲基化情况.结果 在子宫内膜癌组、癌周组织、不典型增生组、复杂和单纯型增生及正常子宫内膜组中Syk基因表达依次增高,Syk基因甲基化程度依次降低,差异有统计学意义(P<0.05);Syk基因表达水平及其基因启动子甲基化程度在复杂型增生、单纯型增生及正常子宫内膜间的差异无显著性(P>0.05);子宫内膜癌中Syk基因的阳性表达及甲基化程度与癌症的临床分期(χ2=4.65,P<0.01;χ2=4.33,P<0.05)、淋巴结转移(χ2=10.68,P<0.01; χ2=5.86,P<0.05) 、肌层浸润深度(χ2=5.82,P<0.05; χ2=3.90,P<0.05)相关,而与内膜癌组织学分级无明显相关性(χ2=0.03,P>0.05;χ2=0.94,P>0.05).Syk基因启动子甲基化与Syk基因表达缺失明显相关(P<0.05).结论 Syk 基因启动子甲基化可能是导致Syk基因失活的原因之一,Syk基因启动子甲基化可能与子宫内膜癌发生发展有关.     

乳腺癌组织中C-erbB2基因启动子区CpG岛甲基化分析

目的了解乳腺癌组织中致癌基因C-erbB2启动子区CpG岛的甲基化状态。方法收集经病理确诊的39例乳腺癌患者甲醛固定的癌组织及相应的癌旁组织各39份;采用甲基化特异聚合酶链反应(MSP)检测C-erbB2基因启动子区CpG岛的甲基化状态。结果乳腺癌组织中C-erbB2基因启动子区CpG岛的甲基化率(51.3%)低于癌旁组织中存在的甲基化率(74.4%),二者之间差异有统计学意义(P<0.05)。结论所检测标本显示乳腺癌组织与癌旁组织间C-erbB2基因启动子区CpG岛甲基化率差异有统计学意义,提示C-erbB2的低甲基化可能是C-erbB2蛋白高表达和乳腺癌发生的原因之一。     

miR-497和miR-34a在铂敏感和铂耐药卵巢上皮癌患者中的表达差异及机制研究

目的:探讨微小核糖核酸miR-497和miR-34a在铂敏感和铂耐药卵巢上皮癌(EOC)患者中表达的差异及机制。方法:选取2008年1月-2012年1月于我院妇产科行卵巢癌分期手术或肿瘤细胞减灭术的EOC患者72例,术后均行以铂类药物为基础的规范化疗,并进行随访(时间为2008年7月-2016年7月)。根据患者对铂类药物的敏感性将其分为铂敏感组(42例)和铂耐药组(30例)。采用实时荧光定量聚合酶链反应法检测两组患者肿瘤组织中miR-497和miR-34a的表达水平,并考察其与患者总生存时间的相关性;采用巢式降落式甲基化特异性聚合酶链反应法检测患者miR-497和miR-34a启动子区DNA甲基化水平,采用蛋白印迹法考察组蛋白H3第9位赖氨酸残基二甲基化(H3K9me2)水平,采用染色质免疫共沉淀法检测miR-497和miR-34a启动子区H3K9me2水平。结果:铂敏感组患者miR-497和miR-34a的表达水平均显著高于铂耐药组,差异均有统计学意义(P<0.05);72例患者的总生存期为(45.7±17.5)个月,与其miR-497和miR-34a表达水平呈正相关(r2分别为0.2714、0.3782,P<0.01)。铂耐药组患者miR-497和miR34a启动子区DNA甲基化水平均显著高于铂敏感组,且其启动子区H3K9me2水平也显著高于铂敏感组,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01);而铂耐药组患者H3K9me2水平虽略高于铂敏感组,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论:EOC患者肿瘤组织中miR-497和miR-34a的表达水平与铂化疗的敏感性及患者的生存时间有关,启动子区DNA甲基化和组蛋白甲基化可能是其表达变化的机制之一。     

MTHFR基因启动子甲基化与糖尿病肾病发病的关系研究

目的 探讨亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）基因启动子甲基化与糖尿病肾病发病的关系。方法 根据慢性肾脏病分期标准将81例糖尿病肾病患者（肾病组）分为1～2期组（26例）,3a～3b期组（39例）,4～5期组（16例）,另选择139例单纯2型糖尿病患者（单纯糖尿病组）和51例体检志愿者（对照组）。检测3组血清MTHFR基因启动子甲基化、三酰甘油（TG）、同型半胱氨酸（Hcy）、糖化血红蛋白（HbA1c）、尿微量白蛋白、肾小球滤过率估算值（e GFR）水平。比较组间上述指标的差异,Logistic回归和ROC曲线分析MTHFR基因启动子甲基化与2型糖尿病患者发生糖尿病肾病的关系。结果 与对照组比较,肾病组、单纯糖尿病组MTHFR基因启动子甲基化水平降低（P<0.05）;与单纯糖尿病组比较,肾病组MTHFR基因启动子甲基化水平亦降低（P<0.05）。1～2期、3a～3b期、4～5期组患者MTHFR基因启动子甲基化水平依次降低（P<0.05）。多因素Logistic回归分析显示,高血压和尿微量白蛋白升高是2型糖尿病患者发生糖尿病肾病的危险因素,eGFR、MTHFR基因启动子甲...     

DNA甲基化参与PXR介导的CYP3A4的表达

目的 DNA甲基化作为表观遗传学的关键组成部分,在基因的表达调控中发挥重要作用。本实验旨在研究DNA甲基化对PXR(孕烷X受体)介导的CYP3A4基因表达的影响。方法以HepG2细胞为研究对象,(1)用甲基转移酶抑制剂5-Aza-2-d C处理细胞,并过表达PXR质粒,检测处理前后CYP3A4和PXR mRNA的表达;(2)构建pCpGLCYP3A4-启动子(P)和pCpGL-CYP3A4-启动子&增强子(EP)质粒,进行体外甲基化,通过双荧光素酶报告基因系统检测荧光素酶活性;(3) EP甲基化和未甲基化质粒转染细胞,用ChIP-q PCR技术检测CYP3A4启动子区PXR的富集;(4) EP甲基化和未甲基化质粒转染细胞,24 h后加入10μmol·L~(-1)利福平诱导,48 h检测CYP3A4 mRNA的表达。结果 (1) 5-Aza-2-d C能够显著促进CYP3A4和PXR mRNA的表达(P<0.05),呈浓度和时间依赖性;过表达PXR质粒同时暴露5-Aza-2-d C,CYP3A4 mRNA表达水平分别是过表达PXR质粒组和5-Aza-2-d C组的1.77倍和1.85倍(P<0.05);(2) EP未甲基化质粒+PSG5-PXR表达质粒组荧光素酶活性是对照组的1.88倍,而EP甲基化质粒+PSG5-PXR表达质粒组是对照组的1.05倍,两者有显著性差异(P<0.05);(3) EP未甲基化组PXR在CYP3A4启动子远端、中间和近端的富集分别为甲基化组的5.8,5.5和8.9倍;(4)利福平诱导后,EP未甲基化组CYP3A4 m RNA的表达量是对照组的2.4倍(P<0.05),而EP甲基化组CYP3A4 mRNA表达量无显著变化。结论 CYP3A4增强子区甲基化能够抑制PXR介导的CYP3A4的表达,且不受利福平诱导。     

RASSF1A基因启动子甲基化与贲门癌的相关性

目的 探讨抑癌基因RAS相关区域家族1基因(RASSF1A)在贲门癌组织中的表达与RASSF1A基因肩动子甲基化的关系.方法 运用RT-PCR方法检测35例贲门癌组织(A组)和20例贲门正常组织(B组)中RASSF1A的表达,并运用甲基化特异PCR(MSP)方法检测这些组织中RASSF1A基因启动子的甲基化情况.结果 RASSF1A基因在A组中有25例(71%)存在表达缺失,明显多于B组的3例(15%)(P<0.05).A组的RASSF1A基因启动子甲基化频率62%,明显高于B组的20%(P<0.05).结论 贲门癌组织中RASSF1A基因启动子的高甲基化是引起RASSF1A基因表达下调的重要原因,在肿瘤的发生和发展中起重要的调控作用.