黄芪多糖保护去卵巢大鼠成骨细胞功能活性的机制研究

目的　探讨黄芪多糖对去卵巢大鼠成骨细胞功能活性和核因子E2相关因子（Nrf2）/血红素氧合酶-1（HO-1）/醌氧化还原酶1（NQO1）通路的影响。方法　双侧卵巢切除法构建骨质疏松大鼠模型并分为模型组、雌二醇（0.1 mg/kg）组、黄芪多糖组（20 mg/kg）、黄芪多糖（20 mg/kg）+全反式维甲酸（ARTA,7 mg/kg）组,另选健康大鼠作为假手术组（生理盐水灌胃）,每组15只,干预8周。采用X线小动物骨密度仪检测大鼠胫骨骨密度、骨矿量,三点弯曲法测定生物力学性质;分离各组大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）并诱导成骨细胞分化,MTT法检测成骨细胞活性,Bradford法检测碱性磷酸酶（ALP）活性,邻甲酚酞络合酮法测定钙沉积量,酶联免疫吸附试验检测骨成型蛋白2（BMP2）、骨钙素（BGP）、骨保护素（OPG）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）水平,Western blot检测Nrf2、HO-1和NQO1表达。结果　与假手术组相比,模型组骨密度、骨矿量、最大载量、断裂能、成骨细胞活性、ALP活性、钙沉积量和BMP2、BGP、OPG、SOD、Nrf2、HO-1、NQO1水平降低,MDA水平升高（P＜0.05）;与模型组比较,雌二醇组、黄芪多糖组大鼠骨密度、骨矿量、最大载量、断裂能、成骨细胞活性、ALP活性、钙沉积量及BMP2、BGP、OPG、SOD、Nrf2、HO-1、NQO1水平均升高,MDA水平降低（P＜0.05）,而与黄芪多糖组比较,黄芪多糖+ARTA组大鼠上述指标变化趋势相反（P＜0.05）。结论　黄芪多糖可改善去卵巢大鼠成骨细胞功能,机制可能与激活Nrf2/HO-1/NQO1通路有关。     

雌激素促进人的类成骨细胞TE85成骨作用的受体机制

目的：研究雌激素促进人的类成骨细胞株TE85细胞骨形成的作用。方法：用³H-胸腺嘧啶、³H-脯氨酸参入法分别测定细胞的增殖和胶原合成; 紫外分光光度法测定细胞内骨碱性磷酸酶（ALP）活性; 放免法测定细胞内骨钙素（BGP）含量; 放射配基法测定细胞核雌激素受体结合。结果：雌激素（E₂, 0.01～1.0 nmol.L^-1）可浓度依赖地刺激TE85细胞的³H-胸腺嘧啶和³H-脯氨酸的参入量; 在相同的时间点和剂量下,可增加成骨细胞内ALP活性和BGP的含量。结论：E₂通过增加成骨细胞数量、促进细胞胶原蛋白及ALP和BGP的合成而促进成骨作用,这些作用是通过雌激素受体介导的。     

骨形成蛋白2基因转染对犬牙髓细胞生物学特性的影响

目的构建骨形态发生蛋白2（bone morphogenetic proteins 2,BMP2）绿色荧融合蛋白pEGFP-N1-BMP2真核表达质粒,然后再用其在体外转染犬牙髓细胞（DDPCs）形成BMP2-DDPCs细胞,观察BMP2基因转染对牙髓细胞生物学特性的影响。方法构建pEGFP-N1-BMP2真核表达质粒,采用阳离子脂质体转染法将BMP2基因转染体外培养的DDPCs,检测BMP2-DDPCs碱性磷酸酶（ALP）活性,骨钙素（OC）产量和Ⅰ型胶原合成量等指标的测定,研究BMP2基因转染对牙髓细胞生物学特性的影响。结果成功构建pEGFP-N1-BMP2真核表达质粒,对构建的BMP2真核重组质粒用XhoI、HindIII进行双酶切,其产物进行琼脂糖凝胶电泳后,在1.2、4.7kb可见两条特异条带;并进行全基因序列测序,报告100%符合,证明pEGFP-N1-BMP2重组质粒构建成功。BMP2-DDPC中ALP活性,OC产量和Ⅰ型胶原合成量增加,与对照组DDPCs、N1-DDPCs相比差异有统计学意义（P〈0.05）,通过增强ALP、OC和Ⅰ型胶原等成骨标志物的表达,促进牙髓细胞向成牙本质细胞分化。结论 pEGFP-N1-BMP2真核表达质粒转染后的牙髓细胞,具有成牙本质细胞的特征。     

大豆异黄酮对成骨细胞增殖活性的测定和BGP mRNA的表达

目的研究不同浓度的大豆异黄酮对体外培养大鼠成骨细胞增殖活性和骨钙素(BGP)基因表达的影响。方法采用新生大鼠颅骨分离培养成骨细胞,加入不同浓度的大豆异黄酮(20、40、60、80μg/μL),另设空白对照组。MTT法测成骨细胞增殖活性。提取细胞总RNA,RT-PCR半定量分析细胞BGP mRNA表达。结果 MTT结果显示,60和80μg/μL组成骨细胞增殖活性与对照组相比显示增高,有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR结果显示:60和80μg/μL组BGP mRNA表达增强,有统计学意义(P<0.01)。结论大豆异黄酮可以促进成骨细胞的增殖活性和BGP基因上调,并呈明显的剂量依赖关系。     

盐酸二甲双胍对成骨细胞增殖、BMP-2及Cbfa-1基因表达的影响

目的初步研究二甲双胍（MF）在体外对小鼠颅盖骨成骨细胞增殖、骨形态发生蛋白一2（BMP一2）及核心结合因子（Cbfa一1）mRNA表达的影响,探讨二甲双胍对骨代谢的可能作用机制。方法（1）分离培养原代颅盖骨成骨细胞并对其进行鉴定。（2）以乳鼠成骨细胞为体外实验模型,不同浓度（0、50、100、200、400Ixmol／L）的MF干预体外培养的成骨细胞24h后,M1vr法检测成骨细胞的增殖能力,实时荧光定量PCR法检测成骨细胞BMP-2及Cbfa-1基因表达。结果二甲双胍干预成骨细胞24h后,可促进成骨细胞的增殖,在浓度400μxmol／L的OD值最大为0．298±0．047（P〈0．05）;可促进BMP-2及Cbfa-1mRNA的表达,呈剂量效应关系。结论二甲双胍可促进成骨细胞的增殖和分化,可能通过调节BMP-2及Cbfa-1的表达,从而促进骨的形成。     

SLE患者血清B—ALP、PINP、NTX、CTX水平的研究

目的B—ALP、PINP、NTX、CTX是骨形成和代谢的指标,为了解系统性红斑狼疮（SLE）患者骨代谢状况,对系统性红斑狼疮（SLE）患者血清的B—ALP、PINP、NTX、CTX进行了测定。方法测定42例SLE患者及30例正常对照者血清的B—ALP、PINP、NTX、CTX水平。结果SLE患者血清B—ALP（5．03±1．22）μg／L、PINP（30．18±5．14）μg/L较正常对照组的B—ALP（7．85±1．30）μg/L、PINP（45．12±4．95）μg／L明显下降（P〈0．05）。SLE患者血清NTX（5．12±1．08）nmBCE／L、CTX（0．26±0．07）μg/L较正常对照组的NTX（2．01±0．95）nmBCE／L、CTX（0．15±0．05）μg/L明显上升（P〈0．05）。结论SLE患者存在骨形成障碍,骨吸收率增高。     

二苯乙烯苷对大鼠成骨细胞增殖及分化的影响

目的研究二苯乙烯苷（THSG）对大鼠成骨细胞增殖、分化的影响。方法体外分离、培养SD大鼠成骨细胞,M1rr法检测成骨细胞增殖活性;碱性磷酸酶（ALP）活性试剂盒检测成骨细胞AIJP活性比;Elisa方法检测成骨细胞c-fos和c—ju．蛋白表达水平。结果0．03—10rag／mr的THSG干预成骨细胞24h成骨细胞活性较对照组明显增强（P〈0．05或〈0．01）;在二苯乙烯苷干预细胞后第3天时,二苯乙烯苷组成骨细胞ALP活性较对照组明显增加（P〈0．05或〈0．01）,成骨细胞c-fos和c-jun表达均较对照组明显增强（P〈0．05或〈0．01）。结论二苯乙烯苷能显著促进成骨细胞发育成熟。     

龙牙楤木皂苷Ⅳ对原代成骨细胞分化和矿化的影响

目的 研究龙牙楤木皂苷Ⅳ（Tarasaponin Ⅳ）对原代成骨细胞的分化及矿化的影响。方法 通过消化SD乳鼠颅盖骨,获得原代前成骨细胞,体外诱导培养并鉴定;采用MTT比色法检测Tarasaponin Ⅳ（10、20、30、40、50、60、70、80、90、100 μg/mL）作用于前成骨细胞的适宜质量浓度范围;用低、中、高浓度（0.5、5、50 μg/mL） Tarasaponin Ⅳ对成骨细胞进行干预,培养4 d后,试剂盒法进行细胞上清中碱性磷酸酶（ALP）活性测定;培养14 d后,按茜素红S染色试剂说明对细胞进行钙化结节染色。结果 与对照组比较,Tarasaponin Ⅳ各浓度组均能明显提高前成骨细胞活性（P<0.05、0.01）,0~60 μg/mL内细胞生存率呈递增趋势。与对照组比较,Tarasaponin Ⅳ低、中、高浓度组细胞上清ALP活性均显著下降（P<0.01）,中、高浓度组细胞矿化结节数目显著增多（P<0.01）,且均呈剂量相关性。结论 Tarasaponin Ⅳ可以促进前成骨细胞生长,增强成骨细胞矿化过程。     

壳聚糖修饰后的纳米羟基磷灰石作为BMP-2输送载体转染细胞的研究

目的：研究羟基磷灰石（hydroxyapatite,HA）纳米粒载体经壳聚糖（chitosan,CS）修饰后介导骨形态发生蛋白2（Bone morphogenetic protein2,BMP2）基因转染成骨细胞后的表达及表达产物对成骨细胞的影响。方法：用壳聚糖对羟基磷灰石纳米粒进行表面修饰;复苏成骨细胞株并进行传代培养,采用HA-CS纳米粒载体转染技术,将BMP-2目的基因导入成骨细胞,RT-PCR法鉴定BMP-2的整合和表达;检测细胞中碱性磷酸酶（alkaline phoaphatase,ALP）及骨钙素（osteocalcin,OCN）活性。结果：RT-PCR结果显示BMP-2基因在成骨细胞中稳定表达,而且表达产物增加了成骨细胞中碱性磷酸酶及骨钙素活性。结论：HA-CS纳米粒作为输送载体可以安全地将目的基因BMP-2导入成骨细胞中并稳定表达,同时增加了成骨细胞的生物学活性。     

辛伐他汀对成骨细胞分化和成骨基因的影响

目的 探讨辛伐他汀对成骨细胞分化及成骨基因表达的影响.方法 选取成骨肉瘤细胞株 MG-63,采用不同浓度辛伐他汀（0.0625、0.125、0.25、0.5和 1.0 μmol/L）处理成骨细胞,ALP活性检测辛伐他汀对成骨细胞分化作用的影响;实时定量 RT-PCR和免疫印迹检测细胞成骨基因 mRNA的表达.结果 通过不同浓度辛伐他汀处理成骨细胞后,不同浓度辛伐他汀组与对照组比较,成骨细胞ALP 活性差异均有统计学意义 （ P〈0.05）,其中 0.25 μmol/L 浓度组作用对成骨细胞碱性磷酸酶活性的影响最为显著.采用 0.25 μmol/L辛伐他汀处理成骨细胞后,辛伐他汀组与对照组比较,成骨细胞骨钙蛋白、ALP、I型胶原 mRNA表达差异均有统计学意义 （ P〈0.05）.结论 辛伐他汀可能通过上调成骨基因mRNA的表达水平来促进其分化,这为他汀类药物治疗骨质疏松症提供新的干预靶点.     

骨生长肽羧基端5肽衍生物H13D联合阿仑膦酸钠对去卵巢模型大鼠骨代谢的影响

目的:探讨骨生长肽羧基端5肽衍生物H13D联合阿仑膦酸钠(Alen)对去卵巢模型大鼠骨代谢的影响。方法:将大鼠随机分为假手术组、模型组、H13D(10nmol/100g)组、Alen(10μg/100g)组及其联用组,每组8只,皮下注射相应药物,12周后检测各组大鼠腰椎骨(L1～L4)和股骨的骨密度(BMD)、血清生化指标[Ca、P、碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(BGP)]、骨形态学变化。结果:各组大鼠血清中Ca、P水平比较均无明显变化。与假手术组比较,其余各组大鼠ALP、BGP水平均升高,仅模型组和联用组有统计学差异(P<0.05或P<0.01);与模型组比较,其余各组大鼠ALP、BGP水平均降低,仅H13D组和Alen组有统计学差异(P<0.05);骨密度和骨形态学比较表明,联用组优于假手术组(P<0.05),假手术组优于Alen组(P<0.05),Alen组优于H13D组,H13D组优于模型组(P<0.05)。结论:H13D联合Alen治疗可明显增加去卵巢模型大鼠骨密度,改善骨微结构,具有明显的协同作用。     

中药复骨方对糖皮质激素致骨质疏松骨折大鼠骨代谢及骨密度的影响

目的 观察中药复骨方对糖皮质激素致骨质疏松骨折模型大鼠骨代谢及骨密度的影响.方法 将48只SD大鼠随机分为基础组、模型组及治疗组各16只.基础组仅给予肌内注射生理盐水1 mg/kg,模型组和治疗组予肌内注射地塞米松1 mg/kg,1次/d,3次/周,用药8周建立糖皮质激素性骨质疏松（GIOP）模型.第8周末对3组大鼠手术造成单侧股骨闭合性骨折,骨折处采用金属内固定,复制GIOP骨折模型.术后第2天开始治疗组中药复骨方药液灌胃,持续8周.检测大鼠血清钙（Ca）、磷（P）、碱性磷酸酶（ALP）、骨钙素（BGP）指标,采用双能X线吸收法（DXA）测量大鼠股骨骨密度.结果 骨折术前,模型组大鼠骨密度值为（0.219±0.013）g/cm2,基础组骨密度值为（0.283±0.015）g/cm2,模型组骨密度值明显低于基础组（t=12.8970,P＜0.05）.实验16周末,治疗组股骨全长骨骨密度为（0.265±0.014）g/cm2,高于模型组（t=9.8403,P＜0.05）.实验12周末,治疗组大鼠血清Ca为（2.35±0.19） mmol/L、P为（2.47±0.23） mmol/L、ALP为（196.74±25.38） U/L及BGP为（1.33±0.25） μg/L,与模型组比较均显著升高,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 中药复骨方可显著提高GIOP骨折大鼠股骨骨密度,升高GIOP骨折大鼠血清Ca、P、ALP及BGP活性,促进骨形成,有助于GIOP骨折的愈合.     

淫羊藿甙对体外培养大鼠成骨细胞Cbfa1基因表达的影响

目的观察淫羊藿甙对体外培养大鼠成骨细胞功能及对转录因子核心结合因子a1（Cbfa1）mRNA表达的影响,探讨淫羊藿甙抗骨质疏松的作用机制。方法用酶消化法获得新生（〈24 h）SD大鼠颅盖骨成骨细胞,进行体外原代培养。将不同浓度的淫羊藿甙（1,10,100 ng/ml）分别加入培养液中,观察成骨细胞的形态、增殖和分化功能。用RT-PCR法测定成骨细胞Cbfa1、碱性磷酸酶（ALP）和Ⅰ型胶原（ColⅠ）mRNA表达水平的变化。结果 1、10和100 ng/ml淫羊藿甙均可促进Cbfa1、ALP和ColⅠmRNA表达（P〈0.05）,且以10 ng/ml组作用最显著。结论淫羊藿甙能促进体外培养成骨细胞增殖与分化,通过提高成骨细胞转录因子Cbfa1的基因表达水平诱导骨形成,是其抗骨质疏松作用机制之一。     

壮骨颗粒对去卵巢大鼠骨质疏松症的影响

目的探讨壮骨颗粒对原发性骨质疏松症的作用机制,为壮骨颗粒治疗骨质疏松症提供实验依据。方法建立6个月龄雌性SD大鼠卵巢摘除骨质疏松模型,模型成立后随机分为A组（假手术对照组）、B组（去卵巢对照组）、C组（钙尔奇-D组）、D组（壮骨颗粒组）,A、B组喂服生理盐水、C组喂服钙尔奇-D、D组喂服壮骨颗粒。喂药12周后处死取材,检测大鼠离体股骨骨密度和血清钙、磷、碱性磷酸酶（ALP）、骨钙素（BGP）、雌二醇（E2）等的浓度。结果 A组大鼠毛皮颜色光泽,饮食、活动均正常;B组大鼠毛皮颜色无光泽,饮食量减少,活动次数降低,体重高于A组（P〈0.01）,与发生骨质疏松症时出现的脾肾阳虚标准相符;C、D组大鼠毛皮颜色光亮,饮食量增加,活动次数增多,体重高于A组（P〈0.05）。B组股骨骨密度及血清E2水平均显著低于A组（P〈0.05）,C、D组双侧骨密度水平显著高于B组（P〈0.05）。4组间的血清钙、磷水平差异无统计学意义（P〉0.05）;B组血清BGP测定结果显著高于A组（P〈0.05）,C、D组也明显高于A组（P〈0.01）,而与B组差异无统计学意义（P〉0.05）;C、D组血清ALP较A组明显升高（P〈0.01）。结论壮骨颗粒可以提高骨质疏松大鼠的骨密度及BGP、E2水平,增强成骨细胞活性,促进骨形成,抑制骨吸收。     

骨代谢生化指标测定在妇科临床中的应用

目的观察骨代谢生化指标在妇女绝经前后的变化,探讨其在妇科临床中的应用价值。方法严格按照随机化原则选择绝经前后的妇女各56例,运用双能X线吸收仪测量观察者腰、髋部的骨密度(BMD),同时抽取静脉血进行骨代谢酶免疫生化指标(血骨钙素BGP、Ⅰ型前胶原羧基肽CICP、碱性磷酸酶ALP、钙Ca、磷P、及Ca/Cr和HOP/Cr比值的测定,将两组结果进行统计学分析。结果绝经后组血骨钙素低于绝经前组,差异具有统计学意义(P<0.05)、绝经后组Ⅰ型前胶原羧基肽检测结果显著高于绝经前组(P<0.01)、两组骨密度检测前后下降幅度差异无统计学意义(P>0.05)、Ca/Cr和HOP/Cr比值的测定两组间差异无统计学意义,相关性统计分析显示同组内BGP、CICP、ALP有相关性。结论表明BGP、ALP、CICP能较好地反映绝经后女性体内雌激素量下降,导致骨吸收活跃的过程,而传统上临床使用的Ca/Cr和HOP/Cr比值则不能敏感的反映出此种变化,需要进一步改进。