舒芬太尼后处理对糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响及其与PI3K/Akt通路的关系

目的探讨舒芬太尼后处理在糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用。方法健康成年雄性SD大鼠,250~300 g,采用腹腔注射链脲佐菌素65 mg/kg,制备糖尿病大鼠模型。取造模成功大鼠24只,采用随机数字表法,将其随机分为4组(n=6):糖尿病假手术组(DM-S组)、糖尿病缺血再灌注组(DM-IR组)、糖尿病舒芬太尼后处理组(DM-SP组)和糖尿病舒芬太尼后处理+渥曼青霉素组(DM-SP+W组)。另取正常大鼠24只,采用随机数字表法,将其随机分为4组(n=6):非糖尿病假手术组(NDM-S组)、非糖尿病缺血再灌注组(NDM-IR组)、非糖尿病舒芬太尼后处理组(NDM-SP组)和非糖尿病舒芬太尼后处理+渥曼青霉素组(NDM-SP+W组)。采用结扎左冠状动脉前降支30 min后再灌注120 min的方法制备心肌缺血再灌注模型。S组只穿线不结扎,SP组于再灌注前5 min经舌下静脉注射舒芬太尼1.0μg/kg,SP+W组在注射舒芬太尼前注射PI3K抑制剂Wortmannin 15μg/kg。于再灌注120 min经腹主动脉取血,测血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)浓度。处死大鼠后,取心脏,确定心肌梗死区与缺血危险区体积的比值(IS/AAR值),采用蛋白印迹法测定Akt、p-Akt的表达。结果在糖尿病与非糖尿病组,与S比较,IR组,SP组和SP+W组CK-MB浓度升高,IS/AAR增大,p-Akt表达上调(P<0.05)。非糖尿病组中,与NDM-IR组比较,NDM-SP组CK-MB浓度降低,IS/AAR减小,p-Akt表达上调(P<0.05),而糖尿病组中,DM-SP组与DM-IR组,上述指标差异无统计学意义,且DM-SP组CK-MB浓度和IS/AAR明显高于NDMSP组、p-Akt表达明显低于NDM-SP组。结论糖尿病因素可消除舒芬太尼后处理对心肌缺血再灌注损伤的保护作用,其机制可能与糖尿病状态下影响PI3K/Akt通路有关。     

舒芬太尼后处理对缺血再灌注损伤的大鼠心肌自噬的影响及PI3K-Akt通路在其中的作用

目的研究舒芬太尼后处理对缺血再灌注损伤后的大鼠心肌自噬的影响,并探讨磷脂酰肌醇-3-激酶/丝氨酸-苏氨酸激酶(PI3K-Akt)信号转导通路在其中的作用。方法健康雄性SD大鼠30只,体质量220~260 g,采用随机数字表法随机分为5组,每组6只:假手术组(S组)、缺血再灌注组(I/R组)、舒芬太尼后处理组(SP组)、舒芬太尼后处理+PI3K抑制剂Wortmannin组(SP+W组)及Wortmannin组(W组)。S组只穿线不结扎,I/R组、SP组、SP+W组和W组结扎30 min,再灌注前5 min经股静脉分别注射0.9%氯化钠注射液、舒芬太尼(1μg/kg)、舒芬太尼(1μg/kg)+Wortmannin(15μg/kg)和Wortmannin(15μg/kg)稀释液1 ml。再灌注120 min时1取动脉血用酶联免疫吸附法(ELISA)法检测血清肌钙蛋白(c Tn-I)含量判断心肌受损的程度。2取心尖缺血组织固定后切片,在透射电镜下观察心肌细胞中线粒体损伤和自噬的发生情况。3采用蛋白印迹法检测缺血心肌组织中Akt、p-Akt及自噬相关蛋白Beclin-1的表达,并计算p-Akt/Akt比值。结果与S组比较,其余各组c Tn-I、pAkt/Akt、Beclin-1含量均明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);与I/R组比较,SP组c Tn-I、Beclin-1含量明显下降,p-Akt/Akt比值升高,差异有统计学意义;I/R组、SP+W组及W组两两比较c Tn-I、p-Akt/Akt、Beclin-1含量,差异无统计学意义(P>0.05)。电镜下显示:S组心肌细胞线粒体结构完整清晰;其余各组线粒体结构模糊,嵴断裂伴有水肿及自噬小体数量的增加。结论舒芬太尼后处理通过降低心肌自噬水平,从而减轻大鼠心肌缺血再灌注的损伤,其机制可能与PI3K-Akt通路有关。     

PI3K-Akt信号转导通路在舒芬太尼后处理减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用

目的探讨磷脂酰肌醇-3-激酶/丝氨酸-苏氨酸激酶(PI3K-Akt)信号转导通路在舒芬太尼后处理减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用。方法健康雄性SD大鼠50只,体质量230²80 g,2280 g,2³月龄,采用随机数字表法,将其随机分为5组(n=10):假手术组(S组)、心肌缺血再灌注损伤组(I/R组)、舒芬太尼后处理组(PO组)、舒芬太尼后处理组+PI3K特异性抑制剂LY294002组(PO+L组)、PI3K特异性抑制剂LY294002组(L组)。I/R组,PO组,PO+L组,L组采用结扎左冠状动脉前降支30 min,再灌注120 min的方法来建造心肌缺血再灌注的模型。I/R组在再灌注前5 min时尾静脉注射0.9%氯化钠注射液1 ml,PO组在再灌注前5 min时尾静脉注射1ml舒芬太尼稀释液1μg/kg,PO+L组尾静脉注射1 ml舒芬太尼稀释液1μg/kg+LY2940020抑制剂0.3mg/kg,L组尾静脉注射1 ml LY2940020抑制剂0.3 mg/kg。于再灌注120 min时处死大鼠,取缺血部位心肌组织,用10%甲醛固定,常规石蜡包埋,切片。光镜下观察病理学结果,采用免疫组织化学方法测定心肌细胞Akt及磷酸化Akt(p-Akt)的表达,计算p-Akt平均吸光度值与Akt平均吸光度值的比值(p-Akt/Akt),采用TUNEL染色法检测心肌细胞凋亡,计算心肌细胞凋亡指数(AI)。结果与S组比较,其余4组AI、p-Akt/Akt的表达均升高(P<0.05);PO组比I/R组、PO+L组、L组AI降低,p-Akt/Akt的表达升高(P<0.05);PO+L组比L组AI降低,p-Akt/Akt的表达升高(P<0.05);I/R组与PO+L组及L组上述指标比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 PI3K-Akt信号转导通路参与了舒芬太尼后处理减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤的作用。     

缺血后处理对再灌注损伤鼠肺IL-17和IL-8的影响

目的研究缺血后处理对再灌注损伤鼠肺IL17和IL-8的影响,并分析其可能的肺保护作用机制。方法构建大鼠在体肺脏缺血再灌注损伤模型,30只SD大鼠随机分为假手术对照组(Sham组)、缺血再灌注组(IR组)和缺血后处理组(IPostC组),每组10只。在体大鼠IR损伤模型制备完成后,阻断左肺门,终止血供及通气,造成左肺缺血,达预定时间后松开阻断带恢复血供及通气形成再灌注损伤。Sham组开胸游离左肺门穿阻断带而不结扎持续180 min;IR组缺血60 min后再灌注120 min;IPostC组缺血60 min后给予重复三次的5 min灌注和5 min缺血的后处理,继以恢复血供行再灌注90 min。三组实验结束后均留取左肺组织、左支气管肺泡灌洗液标本,分别用于测定IL-17、IL-8的含量,留取小块肺组织测定肺湿/干重比(W/D)。结果Sham组支气管肺泡灌洗上清液中IL-17含量明显低于IR组和IPostC组(P0.05);IPostC组支气管肺泡灌洗上清液中IL-17含量明显低于IR组(P0.05)。Sham组支气管肺泡灌洗上清液中IL-8含量明显低于IR组和IPostC组(P0.05);IPostC组支气管肺泡灌洗上清液中IL-8含量明显低于IR组(P0.05)。Sham组肺组织中IL-17明显低于IR组和IPostC组(P0.05);IPostC组肺组织中IL-17明显低于IR组(P0.05)。Sham组肺组织中IL-8明显低于IR组和IPostC组(P0.05);IPostC组肺组织中IL-8明显低于IR组(P0.05)。Sham组肺组织W/D明显低于IR组(P0.05)和IPostC组;IPostC组肺组织W/D明显低于IR组(P0.05)。结论缺血后处理能明显减轻大鼠肺缺血再灌注损伤。其机制可能与抑制IL-17、IL-8活性从而减轻肺组织炎症损害有关。     

七氟烷后处理联合七氟烷预处理对急性心肌缺血-再灌注大鼠血浆SOD及MDA的影响

目的探讨七氟烷后处理联合预处理是否能减轻再灌注损伤,其作用是否较单一作用更强及其机制,为临床应用提供实验依据。方法健康雄性Wistar大鼠50只,随机分为5组,假手术组（S组）：大鼠冠脉只穿线不结扎;缺血再灌注组（I/R组）：大鼠造模,缺血30 min,再灌注120 min;七氟烷预处理组（sevopre组）：缺血前30 min,吸入2.5%的七氟烷15 min,洗脱15 min,结扎左冠状动脉前降支,再灌注120 min;七氟烷后处理组（sevopo组）：大鼠再灌注前1 min吸入2.5%的七氟烷5 min,再灌注120 min;七氟烷后处理＋七氟烷预处理组（pre＋po组）：缺血前30 min,吸入2.5%的七氟烷15 min,洗脱15 min,结扎左冠状动脉前降支,再灌注前1 min吸入2.5%的七氟烷5 min,再灌注120 min。实验结束时取颈动脉血及心肌组织分别测定丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）活性及心肌梗死面积。结果再灌注120 min后,pre＋po组与sevopre组、sevopo组比较心肌梗死面积显著减少（P〈0.05）,显著升高了SOD活性,降低了丙二醛含量（P〈0.05）。结论七氟烷后处理联合预处理能减少心肌梗死面积,提高再灌注后SOD活性,降低MDA含量,从而减轻心肌缺血再灌注损伤。     

JAK2-STAT3通路介导缺血后处理心肌保护作用的初步研究

目的:观察缺血后处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤后心肌梗死面积及心肌细胞凋亡的影响,初步探讨其心肌保护的作用机制.方法:36只健康雄性Wistar大鼠(230～280 g)随机平均分为3组,缺血再灌注(I-R)组,缺血后处理(Post)组,缺血后处理+ AG490(JAK2-STAT3通路阻断剂)组(Post+AG490组).I-R组缺血30 min, 再灌注120 min. Post组缺血30 min,再灌注120 min,并于再灌注前实施缺血后处理(灌注10 s,缺血10 s) 3个循环.Post+AG490组再灌注前5 min静脉注射AG490,其他处理与Post组相同.再灌注120 min后取心肌标本.TTC染色法检测心肌梗死面积;TUNEL法测定心肌细胞凋亡指数.结果:缺血后处理组与对照组相比心梗面积及心肌细胞凋亡指数明显降低(P ＜ 0.05).AG490抑制了缺血后处理的心肌保护作用.结论:缺血后处理具有显著的心肌保护作用,这一作用是由JAK2-STAT3通路介导的.     

高密度脂蛋白对缺血再灌注大鼠心肌损伤保护作用的研究

目的 探讨高密度脂蛋白(HDL)预处理对大鼠心肌缺血再灌注的影响.方法 将42只SD大鼠随机分为假手术组(S组)、缺血再灌注组(IR组)和缺血再灌注HDL预处理组(H/IPC).以穿线结扎左冠状动脉制备心肌缺血再罐注模型,H/IR组缺血前10 min经尾静脉注入HDL(30 mg/kg).检测3组大鼠缺血再灌注后30、60、120、240 min血清肌酸激酶(CK)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的含量;观察3组大鼠缺血再灌注后120 min心肌组织病理学变化.结果 H/IPC组与IR组比较,大鼠CK、ICAM-1含量均降低,下降率分别为36.5%、32.0%、12.6%(P＜0.01);S组CK、ICAM-1含量明显低于IR组(P＜0.01),S组心肌纤维大小均匀、线粒体结构清楚;与IR组比较,H/IPC组伤后240 min心肌细胞变性、炎性细胞浸润及线粒体肿胀程度减轻,且未见细胞溶解坏死.结论 HDL对大鼠心功能的保护作用,可能与HDL抑制ICAM-1的表达有关.     

冠心宁注射液对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用

目的:观察冠心宁注射液对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用,探讨冠心宁抗心肌缺血再灌注损伤的保护机理.方法:雄性SD大鼠30只随机分成假手术组(C组)、缺血再灌注组(I/R组)、冠心宁治疗组(G组),建立大鼠在体心肌缺血再灌注模型:C组丝线穿过冠状动脉前降支但不结扎,I/R、G组通过结扎心脏左冠状动脉前降支40 min,再灌注60 min制作缺血再灌注损伤动物模型.缺血前30 min,G组经腹腔注射冠心宁注射液10.0 ml·kg-1,余两组注射等量0.9%氯化钠注射液.测定再灌注60 min后心肌超氧化物岐化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量,同时取每组大鼠心肌检测梗死面积,电镜下观察缺血区心肌超微结构变化.结果:与I/R组相比,G组再灌注后60 min心肌MDA含量降低(P<0.01),SOD活性增高(P<0.01),梗死面积较小(P<0.01),心肌超微结构受损较轻.结论:冠心宁注射液对心肌缺血再灌注损伤有明显的保护作用,其机制与其增强心肌抗氧化作用有关.     

缺血后处理对大鼠缺血再灌注心肌的保护作用

目的观察缺血后处理对大鼠缺血再灌注心肌的保护作用,进一步探讨其心肌保护的作用机制。方法雄性Wistar大鼠随机分为3组:假手术组,缺血再灌注组,缺血后处理组,每组8只。建立在体心肌缺血再灌注模型,监测左室收缩压、左室舒张末压等心功能指标的变化;测定丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活力。结果与假手术组比较,缺血再灌注组和缺血后处理组的心功能水平均显著降低,MDA含量显著增高,SOD活力显著下降(P<0.01);但与缺血再灌注组比较,缺血后处理组心功能恢复水平增高,SOD活力上升(P<0.05),MDA含量显著降低(P<0.01)。结论缺血后处理具有明确的心肌保护功能,可以改善心功能,减轻氧化应激损伤。     

大鼠急性肾缺血再灌注时心肌细胞氧化损伤及瑞芬太尼的干预作用

目的观察大鼠急性肾缺血再灌注时心肌细胞氧化损伤以及瑞芬太尼预处理对氧化损伤的干预作用。方法建立大鼠肾缺血再灌注损伤模型。将54只Wistar大鼠随机分为假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(I/R组)、瑞芬太尼预处理组(R组)。Sham组只结扎单侧肾脏,另一侧只穿线不结扎;I/R组结扎右侧肾脏,动脉夹夹闭左侧肾蒂45min后开放,于再灌注30min、1、2、3h处死大鼠;R组为缺血前以1μg·kg-1·min-1微泵输注瑞芬太尼30min进行预处理,余同I/R组。分别检测各组大鼠心肌组织超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)含量及谷胱甘肽过氧物酶(GSH-Px)活力变化。结果I/R组、R组与Sham组相比,心肌组织MDA含量升高,SOD、GSH-Px活力降低,且在1、2、3h时间点,差异均有统计学意义(P<0.05)。R组与I/R组比较,心肌组织MDA含量降低,SOD、GSH-Px的表达增高,且差异有统计学意义(P<0.05)。结论大鼠急性肾缺血再灌注可造成心肌细胞氧化损伤,而瑞芬太尼预处理可起到一定的保护作用。     

IL-10抑制脂多糖诱导的Hela细胞IL-15和IL-6转录

目的研究IL-10对脂多糖(LPS)诱导的Hela细胞IL-15mRNA和IL-6 mRNA表达的影响,分析其激活的信号转导通路。方法培养的Hela细胞,经不同浓度的LPS及IL-10单独或联合处理后,提取细胞总RNA和总蛋白,RT-PCR分析IL-15和IL-6转录水平的变化,Westernblot分析信号转导通路蛋白变化。结果RT-PCR分析得知①1ng～10μgLPS刺激Hela细胞12h后,IL-15 mRNA和IL-6 mRNA水平均明显上调(与对照组比较:P<0.01),且存在剂量依赖关系,100ng/mL时达峰值;100ng/mLLPS刺激Hela细胞0～24h,IL-15 mRNA和IL-6 mRNA水平亦明显上调(与对照组比较:P<0.01),24h内存在时间依赖关系,12h时达峰值。②单独IL-10(10ng/mL)作用于Hela细胞12h后,IL-15 mRNA和IL-6 mRNA没有明显变化(与对照组比较:P>0.05)。不同浓度的IL-10(1,10,100ng/mL)均下调100ng/mLLPS诱导的Hela细胞IL-15 mRNA和IL-6 mRNA的表达,且浓度越高IL-10抑制作用越明显。Western blot分析显示LPS主要通过磷酸化信号蛋白PI3K/AKT和ERK1/2上调IL-15和IL-6转录,IL-10能阻断AKT的磷酸化而对ERK1/2的磷酸化没有影响。结论IL-10可抑制LPS诱导的炎症细胞因子IL-15和IL-6的转录,这可能与其阻断AKT的磷酸化有关,因而,IL-10可能应用于某些临床感染性疾病的预防和治疗。     

Utilizing IL-12, IL-15 and IL-7 as Mucosal Vaccine Adjuvants

In this paper we review and discuss three of the most exciting and promising cytokines for therapeutic intervention and immunomodulation of immune responses including those on mucosal surfaces. The main properties of IL-12, IL-15 and IL-7 are described and the studies utilizing these cytokines as immunomodulators and vaccine adjuvants discussed.     

手足口病患儿血清中IL-6IL-10IL-13及IL-17的变化及临床意义

目的 探讨手足口病患儿血清中IL-6 IL-10 IL-13及IL-17的变化及临床意义.方法 采用酶联免疫吸附实验（ELISA）抗体夹心法测定46例手足口病患儿急性期、恢复期及40例健康体检儿童血清IL-6、IL-10、IL-13、IL-17的含量,对手足口病患儿急性期、恢复期进行比较,同时对其中重症患儿、普通患儿进行比较,用统计软件进行统计学分析.结果 急性期重症组与普通组IL-6、IL-10、IL-13及IL-17水平均明显升高,与对照组比较有统计学意义（P＜0.01）,重症组与普通组比较有统计学意义（P＜0.01）.恢复期重症组与普通组IL-6、IL-17较急性期下降,普通组与对照组比较无统计学意义（P＞0.05）,而重症组与对照组比较有统计学意义（P＜0.01）,但是IL-10、IL-13重症组和普通组均较急性期下降,但仍高于对照组,两组与对照组比较有统计学意义（P＜0.01）.结论 炎症因子IL-6、IL-17在急性期水平显著升高,而抑制性细胞因子IL-10、IL-13水平升高持续到恢复期.     

IL-7及IL-15在肿瘤免疫疗法中的应用

嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)免疫疗法经过体外将正常T细胞进行基因修饰后,再回输入患者体内,以非人类白细胞抗原(HLA)依赖性方式识别肿瘤细胞并进行杀伤。自2017年美国食品药品监督管理局(FDA)批准了诺华及Kite公司两款嵌合抗原受体T细胞产品上市以来,嵌合抗原受体T细胞疗法在全球展开蓬勃发展。白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-7(IL-7)、白细胞介素-15(IL-15)、白细胞介素-21(IL-21)等细胞因子可促使嵌合抗原受体T细胞在体外有效增殖。本文主要对白细胞介素-7及白细胞介素-15进行阐述,探讨其作用机理以及临床应用。     

IL-3、IL-5及IL-8与鼻息肉的关系研究

目的检测鼻息肉组织中自细胞介素-3（IL-3）、白细胞介素-5（IL-5）和白细胞介素-8（IL-8）的含量,探讨细胞因子在鼻息肉形成中的作用。方法标本取自50例鼻息肉患者的息肉组织（研究组）和30例行鼻中隔手术患者的正常下鼻甲黏膜（对照组）,用酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测IL-3、IL-5和IL-8在鼻息肉标本和正常下鼻甲黏膜的含量。结果鼻息肉组织IL-3、IL-5和IL-8的水平明显高于对照组,两组间差异有统计学意义（P〈0．05）。结论IL-3、IL-5和IL-8在鼻息肉组织中明显升高,提示其可能与鼻息肉的发病机制有关。     

IL-2 and IL-4 counteract budesonide inhibition of GM-CSF and IL-10, but not of IL-8, IL-12 or TNF-alpha production by human mononuclear blood cells.

1. The combination of interleukin-2 (IL-2) and IL-4 reduces the inhibitory effects of glucocorticoids on granulocyte-macrophage colony-stimulating factor (GM-CSF) production, in agreement with the hypothesis that this combination causes glucocorticoid resistance. Whether a general cytokine resistance to glucocorticoids is induced by IL-2 and IL-4 has not been reported. 2. Mononuclear blood cells from healthy individuals were pre-treated with IL-2, IL-4, or IL-2+ IL-4 (31.3-500 U ml(-1)) for 48 h, prior to lipopolysaccharide (LPS; 10 ng ml(-1); 20 h) and budesonide addition. Cytokine levels in the supernatants were analysed using specific immunoassays. DNA content was analysed to estimate cell numbers. 3. GM-CSF production was totally inhibited by budesonide at 10(-8) M in vehicle treated cultures, while IL-10 was inhibited to 33.4+/-4.3% of control. IL-2, IL-4, or IL-2 + IL-4 reduced the inhibitory effects of budesonide on GM-CSF to similar levels (23.7 6.7, 31.6+/-8.5 and 35.1+/-4.3% of control, respectively). IL-2, IL-4, or IL-2 + IL-4 also reduced the inhibitory effects of budesonide on IL-10 production (46.5+/-6.6, 55.9+/-7.3%, and 68.3+/-9.9% of control, respectively). In contrast, IL-8, IL-12 and TNF-alpha production did not become resistant to budesonide. 4. Thus, glucocorticoid resistance induced by IL-2 and IL-4 is not general at the cytokine production level. While the glucocorticoid sensitivity of GM-CSF and IL-10 production decreased, the sensitivity of IL-8, IL-12 or TNF-alpha production was unchanged. Also, the mixture of IL-2 and IL-4 is not crucial for induction of glucocorticoid resistance of GM-CSF production.     

IL-19, IL-20 and IL-24: potential therapeutic targets for autoimmune diseases

IL-19, IL-20 and IL-24 are members of the IL-10 family of cytokines, the human IL-19, IL-20 and IL-24 genes are all located on the q32 region of chromosome 1, and the three cytokines also share a common receptor IL-20R1/IL-20R2 heterodimer. These cytokines due to the similarity and shared receptor usage, are quite overlapping in function. Recently, the available evidence has indicated that interaction of these cytokines with their receptors might exhibit pro-inflammatory effects on autoimmune diseases, particularly psoriasis and rheumatoid arthritis. Since an imbalance between anti- and pro-inflammatory cytokines contribute to the development of autoimune diseases, these cytokines may be implicated in the pathogenesis of autoimmunity. In this paper, we concisely discuss the biological features of IL-19, IL-20 and IL-24, and focus on their potential roles in autoimmune diseases. Hopefully the information obtained will lead to a better understanding of the pathogenesis and development of novel therapeutic strategies for autoimmune diseases.