狼毒大戟中4种二萜类成分在大鼠肝微粒体中的代谢

目的研究狼毒大戟中4种二萜类成分在大鼠肝微粒体中的代谢产物并探讨其代谢规律。方法运用大鼠肝微粒体体外孵育法,将岩大戟内酯A、岩大戟内酯B、17-羟基岩大戟内酯A、17-羟基岩大戟内酯B加至由还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸启动的大鼠肝微粒体孵育体系中,于37℃条件下孵育30 min,再用乙腈终止反应。以阴性组(先加乙腈再启动孵育30 min)为参考,采用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱联用技术,利用Analyst^■TF 1.7.1、PeakView^■2.2、MetabolitePilot 1.5、MasterView 1.2软件对其质谱裂解规律和代谢产物进行推测与鉴定。结果4种二萜类成分在二级质谱中均易丢失H₂O和CO等中性碎片。岩大戟内酯A和17-羟基岩大戟内酯A在肝微粒中的代谢反应主要为二羟基化、脱氢和一羟基化反应,分别鉴定出6、5个代谢产物。岩大戟内酯B和17-羟基岩大戟内酯B在肝微粒体中的代谢反应主要为一羟基化、水合和同分异构化反应,均鉴定出5个代谢产物。结论岩大戟内酯A和17-羟基岩大戟内酯A在大鼠肝微粒体中均产生了羟基化及脱氢代谢产物,岩大戟内酯B和17-羟基岩大戟内酯B在大鼠肝微粒体中均产生了羟基化、水合及同分异构化代谢产物。4种二萜类成分的代谢产物均是Ⅰ相代谢产物。     

左旋一叶碱的代谢转化

目的研究一叶碱［securinine,(-)SE］在大鼠体内外的代谢转化。方法采用大鼠肝微粒体体外温孵法对(-)SE的代谢转化进行了研究,优化了代谢体系,建立了反相HPLC法同时分离检测(-)SE及其体外代谢产物的分析方法。用液液萃取,制备TLC及半制备HPLC分离纯化了4个代谢产物并进行了光谱鉴定。在此基础上,建立了生物体液中(-)SE及其代谢物的反相HPLC分析方法,并用该法检测了ip给药后大鼠的胆汁、尿样及其经β-葡糖醛酸苷酶水解后的样品。结果代谢物分别鉴定为6-位羟基,6-位羰基及5-位α及β羟基取代的(-)SE,还证实了体内6-位羟基代谢物进一步形成了二相结合型产物。结论基本阐明(-)SE在大鼠体内外代谢转化的途径。     

丹皮酚兔体内吸收试验

牡丹皮中主要成分丹皮酚通过兔口服,作了吸收试验。取其尿液经薄层层析分离,再用双波长色谱扫描法测定其代谢产物,证明丹皮酚口服后能被吸收,并从排出物尿中检出丹皮酚、2,4-二羟基乙酰苯和2,5-二羟基-4-甲氧基乙酰苯三种物质,为研究丹皮酚口服给药提供了实验依据。     

UPLC-MS/MS快速鉴定乔松素在人肝微粒体中的代谢产物

目的以超高效液相色谱质谱联用法(UPLC-MS/MS)快速鉴定乔松素在人肝微粒体中的代谢产物。方法以人肝微粒体体外孵育体系对乔松素进行代谢研究,以UPLC-MS/MS鉴定乔松素的体外代谢产物。结果建立了乔松素的体外代谢孵育体系,UPLC-MS/MS在6 min内检测到乔松素的4个代谢产物,分别鉴定为柚皮素、5,6,7-三羟基二氢黄酮、5,7,8-三羟基二氢黄酮和乔松素-7-葡萄糖醛酸苷,这4个代谢产物均为首次发现的乔松素人肝微粒体体外代谢产物。结论乔松素在人肝微粒体中的主要代谢途径为羟基化和葡萄糖醛酸化,5,7,8-三羟基二氢黄酮是其主要羟基化产物,乔松素-7-葡萄糖醛酸苷可能为乔松素的主要代谢失活形式。     

左旋一叶萩碱的代谢转化

目的　研究一叶碱 [securinine ,( - )SE]在大鼠体内外的代谢转化。方法　采用大鼠肝微粒体体外温孵法对 ( - )SE的代谢转化进行了研究 ,优化了代谢体系 ,建立了反相HPLC法同时分离检测 ( - )SE及其体外代谢产物的分析方法。用液液萃取 ,制备TLC及半制备HPLC分离纯化了 4个代谢产物并进行了光谱鉴定。在此基础上 ,建立了生物体液中 ( - )SE及其代谢物的反相HPLC分析方法 ,并用该法检测了ip给药后大鼠的胆汁、尿样及其经 β 葡糖醛酸苷酶水解后的样品。结果　代谢物分别鉴定为 6 位羟基 ,6 位羰基及 5 位α及 β羟基取代的 ( - )SE ,还证实了体内 6 位羟基代谢物进一步形成了二相结合型产物。结论　基本阐明 ( - )SE在大鼠体内外代谢转化的途径     

蒿甲醚在大鼠肝微粒体中的生物转化

经苯巴比妥钠诱导的大鼠肝微粒体酶代谢,蒿甲醚三个代谢产物被证实,即二氢青蒿素,脱氧二氢青蒿素和9β-羟基蒿甲醚。9β-羟基蒿甲醚与大鼠肝灌流得到的9α-羟基蒿甲醚经核磁共振,二维相关谱,在束电子轰击质谱和圆二色谱等证实是一对差向异构体,说明蒿甲醚的代谢除脱甲基及脱氧外,尚有9位羟化,羟化产物具有立体选择性,初步体外试验显示两种羟化代谢产物均有抗疟效应。     

苯环喹溴铵在大鼠肝微粒体中的代谢转化研究

目的:建立检测大鼠肝微粒体中苯环喹溴铵代谢产物的方法,验证其在大鼠体内的代谢途径。方法:采用大鼠肝微粒体体外温孵法,建立液相色谱-质谱法测定并分析肝微粒体中苯环喹溴铵及其代谢物。色谱及质谱条件如下:色谱柱为TSK-gelODS-80Ts,流动相为甲醇-40mmol·L-1的乙酸铵水溶液(含0.1%甲酸)梯度洗脱;正离子模式,扫描型离子检测。结果:在体外代谢系统中,根据质谱碎片信息检测出6个代谢产物,分别是苯环喹溴铵的二羟基、单羟基和氧化产物。结论:建立的液相色谱-质谱法能够准确灵敏地测定大鼠肝微粒体中苯环喹溴铵的代谢产物,验证了在大鼠体内苯环喹溴铵的代谢部位在环戊烷基上。     

蓝萼甲素在大鼠体内外的代谢转化

目的研究蓝萼甲素在大鼠体内外的代谢转化。方法采用大鼠肝微粒体体外温孵法,研究对蓝萼甲素的代谢转化。采用RP-HPLC法同时分离检测蓝萼甲素及其体外代谢产物。结果用液-液萃取、制备HPLC法,从大鼠胆汁中分离了一个代谢产物,经质谱分析推测结构为羟基化蓝萼甲素,并采用HPLC-MS连用,分析了肝微粒体体外温孵样品中的代谢产物,推测了蓝萼甲素的可能代谢转化途径。结论蓝萼甲素在大鼠肝微粒体和胆汁中可被代谢转化,主要代谢产物为羟基化蓝萼甲素。     

五味子醇甲的代谢转化

采用动物肝微粒体体外代谢法对五味子醇甲的代谢转化进行了研究。从体外代谢产物中鉴定其主要的三个代谢物为:7,8-顺二羟基五味子酸甲;7,7-顺二羟基-2-去甲基五味子醇甲及7,8-顺二羟基-3-去甲基五味子醇甲。在此基础上,建立了生物体液中五味子醇甲及其代谢物的反相HPLC分析方法,并用此法检测了服药后大鼠的胆汁及尿样,比较了体外代谢与体内代谢的异同。     

右旋黄皮酰胺在大鼠肝微粒体中的代谢转化

目的：研究黄皮酰胺的主要代谢途径,为进一步研究黄皮酰胺代谢的立体选择性打下基础。方法：用大鼠肝微粒体体外温孵法对右旋黄皮酰胺((+)-clausenamide)进行温孵,用硅胶柱色谱、制备TLC分离纯化代谢产物并通过光谱分析鉴定其结构。结果：分离得到5个代谢产物CM1,CM3,CM4,CM5及CM6,其结构分别鉴定为6-羟基,4-羟基,4,6-二羟基,4-苯环邻位羟基,4,7-苯环间位-二羟基黄皮酰胺。结论：黄皮酰胺的代谢主要发生羟化或双羟化,CM3是其主要代谢产物,量较少的CM4,CM6为其进一步代谢产生的双羟基代谢产物;另2个代谢产物CM1,CM5产生的量也较少;CM2未分离得到,但通过HPLC分析知其为右旋黄皮酰胺的微量代谢产物。     

基于超高效液相质谱联用和多重质量亏损过滤技术研究儿茶素的体外代谢产物

目的：采用超高效液相质谱联用和多重质量亏损过滤技术（MMDF）研究儿茶素在大鼠肝微粒体中的代谢产物。方法：体外培育大鼠肝微粒体代谢模型,采用UPLC-LTQ-Orbitrap和MMDF鉴定儿茶素的体外代谢产物。结果：通过高分辨质谱数据,保留时间和碎片离子,在肝微粒体中共鉴定7个新的代谢产物,主要为羟基化和葡萄糖结合物。并首次推测了儿茶素在肝微粒体中的代谢途径。结论：采用UPLC-LTQ-Orbitrap和质量亏损过滤技术快速,准确,灵敏的鉴定了儿茶素在体外的代谢产物研究,丰富了儿茶素的代谢产物种类,为儿茶素的新药研发,提供理论基础。     

相转移催化合成丹皮酚

目的研究中药牡丹皮活性成分丹皮酚的合成方法。方法以间苯二酚为原料,通过乙酰化得到2,4-二羟基苯乙酮,应用四丁基碘化铵为相转移催化剂与碘甲烷甲基化得到丹皮酚。结果合成丹皮酚总收率为68.32%,目标化合物通过UV、IR表征。结论以间苯二酚为原料、直接用水蒸气蒸馏得到丹皮酚,该方法操作简便,稳定可靠,适合工业化生产。     

左旋黄皮酰胺在大鼠肝微粒体中的代谢转化研究

用大鼠肝微粒体体外温孵法进行了左旋黄皮酰胺[(-)-clausenamide]代谢转化研究,优化了温孵体系,建立了反相HPLC-DAD同时分离检测左旋黄皮酰胺及其体外代谢产物的分析方法。用硅胶低压柱色谱、制备TLC及制备HPLC分离纯化了两个代谢产物并进行了光谱鉴定。结果表明,两个代谢物分别确定为6-和5-位羟基取代的黄皮酰胺。     

抗肿瘤药LS-177在大鼠和人肝微粒体中的代谢产物研究

目的：推测LS-177在大鼠和人肝微粒体中代谢产物的结构及其可能的体外代谢途径。方法：体外孵育大鼠和人肝微粒体代谢模型,采用超高效液相质谱联用（LC-MSⁿ）法,推测LS-177的体外代谢产物的结构。结果：通过质谱数据、保留时间和碎片离子,在肝微粒体中共检测到5个代谢产物,初步推测LS-1177在肝微粒体中可能的代谢途径。结论：建立LC-MSⁿ方法,初步推测LS-177在大鼠和人肝微粒体中代谢产物的结构,为其体内外代谢的进一步研究以及化学结构类似物的体外代谢研究提供一定的参考依据。     

硝克柳胺在大鼠和人肝脏的体外代谢研究

研究硝克柳胺在大鼠肝微粒体和胞浆中的代谢动力学，鉴定硝克柳胺在大鼠和人肝微粒体中的主要代谢产物及参与代谢的药物代谢酶。采用高效液相色谱-紫外检测(HPLC-UV)方法测定大鼠肝微粒体和胞浆中硝克柳胺浓度，应用选择性抑制剂鉴定参与硝克柳胺代谢的药物代谢酶类型，采用液相色谱-串联质谱联用(LC-MS/MS)法分离鉴定硝克柳胺在大鼠和人肝微粒体中的主要代谢产物。硝克柳胺在大鼠和人肝微粒体的主要代谢产物(M₁)为硝基还原产物［3-(3′-羧基-4′-羟基苯胺羰基)-6-氨基-7-羟基-8-甲基香豆素］，大鼠体内(血浆、尿液、胆汁及肝组织)主要代谢产物与M₁一致。硝克柳胺的体外代谢是依赖多个药物代谢酶参与的酶促反应，包括微粒体CYP450还原酶、细胞色素b₅还原酶和CYP2C6以及胞浆NAD(P)H脱氢酶和黄嘌呤氧化酶。     

氯代正丁苯酞在大鼠肝微粒体中的代谢研究

用大鼠肝微粒体体外温孵方法进行了氯代正丁苯酞(CBP)代谢转化研究,优化了温孵体系的组成,建立了反相HPLC-DAD在线同时分离检测CBP及其4个体外代谢产物的分析方法,并比较了在苯巴比妥(PB)与3-甲基胆蒽(3-MC)诱导的微粒体中代谢差别。利用TLC、柱色谱与制备HPLC分离纯化了3个主要代谢产物,并进行了NMR,MS,UV等光谱鉴定,确定了其主要代谢产物为γ-羟基氯代正丁苯酞与β-羟基氯代正丁苯酞及它们的立体异构体。     

去甲斑蝥新型衍生物N-14NCTDA大鼠肝微粒体酶代谢

目的初步阐明十四烷基去甲斑蝥素酰亚胺(tetradecyl derivative of norcantharidin,简称N-14NCTDA)肝微粒体酶代谢情况,鉴定该药物体外Ⅰ相代谢产物,并推测其主要代谢途径。方法以超速离心法制备大鼠肝微粒酶并以二辛可酸(butyleyanoacrylate,BCA)法测定微粒体蛋白浓度。药物与肝微粒体在一定条件下孵育,使用飞行时间质谱(UPLC/Q-TOF MS)进行分析。结果制备的大鼠肝微粒体酶蛋白质量浓度约为6.4 g·L~(-1)。代谢研究结果显示,孵育后反应液中主要检测到3个代谢产物,其分子离子峰相对分子质量分别为380.280 6、378.264 8和394.259 7,分别对应原型药羟基化、醛基化及羧化产物。结论 UPLC/Q-TOF MS方法适用于N-14NCTDA和其代谢产物的定性鉴别。体外初步代谢结果表明,N-14NCTDA的酰亚胺键难以在肝脏水解释放出NCTD,其主要以末端烷基氧化的方式进行Ⅰ相代谢。     

血塞通注射液对鼠肝CYP3A体外抑制作用研究

目的：研究血塞通注射液对大鼠肝微粒体CYP3A酶活性的体外抑制作用。方法：在大鼠肝微粒体体外孵育体系中加入CYP3A酶的底物睾酮和不同体积的血塞通注射液,用高效液相色谱法测定睾酮的羟化代谢产物6β-羟基睾酮的生成量反映CYP3A酶的活性。酮康唑为阳性对照药。结果：在大鼠肝微粒体体外孵育体系中,血塞通注射液对CYP3A酶的IC50和Ki值分别为血塞通注射液原液的0．87％和0．43％。结论：血塞通注射液在体外对大鼠肝微粒体CYP3A酶活性有抑制作用,符合混合型抑制模型。     

抗焦虑新药AF-5及其代谢物在人肝微粒体体外温孵体系中代谢研究

目的研究一类抗焦虑新药AF-5及其代谢物(I,II)在人肝微粒体体外温孵体系中代谢情况.方法自制人肝微粒体,用Lowry法测定酶活性为8.79mg·mL^-1.以此配制人肝微粒体体外温孵体系,加入药物,温孵后,提取分离,GC-MS测定.结果鉴定了AF-5在人肝微粒体体外温孵体系中的两个主要代谢物,并阐明了其体外代谢途径为AF-5的4位首先氧化为羟基,然后氧化成羰基.结论AF-5在体外人肝微粒体温孵体系中,100min后完全代谢成羟基代谢物I及羰基代谢物II,以羟基代谢物为主要代谢产物.AF-5代谢物I在人肝微粒体温孵体系中,可转化为代谢物II,而代谢物II在人肝中则不再代谢.     

双环醇在大鼠和人肝微粒体的代谢

目的研究参与双环醇代谢的主要药物代谢酶及代谢动力学参数，分离鉴定双环醇代谢产物。方法双环醇与大鼠和人肝微粒体进行温孵，以高效液相色谱、质谱、核磁共振技术检测并分离鉴定双环醇及其代谢产物。结果双环醇在地塞米松诱导大鼠肝微粒体中的代谢速率显著高于正常大鼠肝微粒体，酮康唑可显著抑制双环醇的代谢。双环醇主要代谢产物为:4-羟基-4′-甲氧基-6-羟甲基-6′-甲氧羰基-2，3，2′，3′-双亚甲二氧基联苯和4-甲氧基-4′-羟基-6-羟甲基-6′-甲氧羰基-2，3，2′，3′-双亚甲二氧基联苯。结论双环醇在大鼠和人肝微粒体的主要代谢产物为4-羟基-4′-甲氧基-6-羟甲基-6′-甲氧羰基-2，3，2′，3′-双亚甲二氧基联苯和4-甲氧基-4′-羟基-6-羟甲基-6′-甲氧羰基-2，3，2′，3′-双亚甲二氧基联苯，细胞色素P450 3A主要参与双环醇代谢。