黄连碱对人乳腺癌MDA-MB-231细胞周期和增殖的作用及其机制

目的 探讨黄连碱对人乳腺癌细胞株MDA-MB231细胞周期和增殖的作用及相关机制.方法 MTT法和瑞-姬氏染色法分别检测黄连碱对MDA-MB-231细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞周期分布,RT-PCR检测细胞周期相关基因包括细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)、CDK6、p21及p27mRNA的表达变化.结果 黄连碱可明显抑制MDA-MB-231细胞的增殖;黄连碱处理细胞后G0/G1期细胞比例减少,而S期和G2/M期细胞比例增高(P＜0.05或P＜0.01);黄连碱可上调p21 mRNA的表达、下调CDK4 mRNA和CDK6 mRNA的表达(P＜0.01),而对p27 mRNA水平无显著影响.结论 黄连碱在体外能通过诱导S期及G2/M期周期阻滞来抑制MDA-MB-231细胞的增殖;其机制可能与p21mRNA表达上调导致CDK4 mRNA及CDK6 mRNA减少有关.     

北美黄连有效成分的提取分离与含量测定

介绍了北美黄连的应用简况，用溶剂法提取其有效成分北美黄连碱和盐酸小檗碱，并用柱层析，重结晶法加以分离精制，同时建立了这两种成分的含量测定方法。     

黄连生物碱成分的 HPLC-DAD-MS 分析

目的：优化测定黄连中生物碱成分的高效液相色谱法条件,并用 LC - MS 鉴定黄连中主要生物碱类成分。方法：使用 Zorbax SB C18色谱柱,流动相 A 为乙腈,流动相 B 为水溶液（含20 mmol／ L 乙酸铵和0.5%乙酸）,梯度洗脱,检测波长345 nm。联用电喷雾-离子阱质谱检测器鉴定主要色谱峰的成分。结果：建立了测定黄连中黄连碱、巴马汀和小檗碱三个成分含量 HPLC 方法,黄连碱、巴马汀和小檗碱的线性范围分别为0.0420~0.840μg、0.0448~0.896μg 和0.0502~1.004μg;LC - MS 鉴定了黄连中7个色谱峰。结论：该方法简便、准确、可靠,能用于控制黄连药材及饮片的质量,同时该方法使用溶解性好、易挥发的乙酸铵代替十二烷基硫酸钠（SDS）做离子对试剂,适用于 LC - MS 分析。     

黄连及其制剂中小檗碱的薄层扫描法定量

本文介绍了黄连及其制剂盐酸黄连素片、胃疡安胶囊、胃炎康胶囊使用荧光扫描法测定小檗碱的含量，具有图谱清晰、分离效果好、操作简便迅速、结果准确等特点。     

黄连及其复方治疗抑郁症的临床应用和现代研究进展

黄连复方目前已经用于抑郁症的治疗。本文从传统理论,基础研究和临床研究3个方面,对黄连,黄连复方及黄连主要成分小檗碱的抗抑郁作用进行了综述,并对其机制进行了初步探讨,为深入开展药理研究和进一步临床推广应用提供了科学依据。     

HPLC法测定不同产地黄连饮片中生物碱的含量

目的考察不同产地黄连饮片中生物碱的含量。方法采用高效液相色谱法测定不同产地黄连饮片中表小檗碱、黄连碱、巴马汀和小檗碱4种生物碱的含量,以乙腈-0.1%磷酸溶液(50∶50)(每100Ll加十二烷基磺酸钠0.1g)为流动相,Agilent ZORBAX Eclipse XDB C18柱(4.6mm×250mm,5μm)为固定相,流速为1.0L/min,柱温为35℃,检测波长为345nm。结果盐酸小檗碱在0.096～0.480μg范围内呈线性关系,回收率为97.95%,RSD为1.03%。结论本法测定黄连饮片中4种生物碱含量简单、快速、准确、重现性好,符合含量测定建立的要求,可以为判断黄连饮片质量的方法之一。     

黄连总碱-卡波姆复合物的制备、体外释药特性及其胃生物粘附性能评价

目的：探讨黄连总碱-卡波姆复合物的缓释特性及其胃生物粘附性能。方法以复合物收率和载药量为指标,采用单因素法分别探讨卡波姆品种、卡波姆浓度、黄连总碱浓度等因素对酸碱沉淀反应的影响。采用体外释放度测定法探讨黄连总碱-卡波姆复合物在pH值分别为1.2,5.0,6.8,7.0和7.4的介质中的释药动力学。采用大鼠胃内的留存量测定法初步探讨黄连总碱-卡波姆复合物在体内的胃生物粘附性。结果（1）黄连总碱-卡波姆复合物消除了黄连的强烈苦味,最佳的卡波姆品种为934P,卡波姆浓度为0.25%,黄连总碱浓度为1%。（2）黄连总碱-卡波姆复合物在人工胃液中具有较佳的缓释性能。但在纯水、pH 5.0、pH 6.8和pH 7.4四种介质中的释药非常缓慢。（3）黄连总碱-卡波姆复合物在胃内的滞留时间远远大于黄连总碱。结论黄连总碱-卡波姆复合物具有良好的缓释性能和胃生物粘附性能。     

不同方法对黄连小檗碱的纯化比较研究

目的:比较大孔吸附树脂和液液萃取两种方法对黄连小檗碱的纯化效果,为开发利用黄连小檗碱提供参考.方法:采用大孔吸附树脂法和液液萃取两种方法.结果:以标准品盐酸小檗碱为对照,大孔吸附树脂在产品重量和产品中小檗碱含量方面均明显高于液液萃取,其中D101大孔吸附树脂对黄连小檗碱有较好的纯化效果,产品中小檗碱含量达29.82％.结论:黄连小檗碱为传统中药材黄连的主要成分,在抗菌消炎、心血管疾病治疗等方面显示出良好的治疗效果.具有广阔的应用前景.     

黄连饮片极细粉化形式的考察

目的:寻找中药黄连饮片形式改革的合理方式。方法:采用薄层色谱法分别测定黄连饮片极细粉、按传统中药煮制及沸水冲泡方式制得溶液和黄连常规饮片传统中药煮制法制得的溶液等3种溶液中的小檗碱含量。结果:3种溶液中所含盐酸小檗碱量分别为10.49%、10.01%和6.85%;黄连饮片极细粉在传统中药煮制法及沸水冲泡方式制得溶液,相对于黄连常规饮片传统中药煮制法制得溶液中含有盐酸小檗碱百分含量,分别为153.14%及146.13%。结论:中药饮片极细粉化形式可能是一些中药饮片改革比较实际及合理的方式。     

胶束色谱分析黄连及含黄连中成药中小檗碱型生物碱的研究

本文报道用胶束色谱法分离测定黄连(黄柏)及含黄连(黄柏)中成药中黄连碱、药根碱、巴马亭和小槃碱。考察了固定相、胶束浓度、有机改性剂浓度及pH对组分保留行为的影响。实验结果表明;影响该色谱分离的主要因素为固定相极性和胶束浓度。同时在肢束流动相中加入甲醇改性剂,可在室温下显著地提高柱效。用键合苯基固定相,以3.5%十二烷基硫酸钠/0.1 N酒石酸—甲醇(30:70)胶束溶液作流动相,测定了十几种黄连(黄柏)及含黄连(黄柏)的中成药。     

HPLC测定岩黄连注射液中岩黄连碱的含量

目的:建立 HPLC 法岩黄连注射液中岩黄连碱的含量。方法:Luna C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-水(1:1,1000 mL 含磷酸二氢钾3.4 g,十二烷基硫酸钠1.7g),流速1.0 mL·min~(-1),检测波长347 nm,柱温为室温。结果:岩黄连碱在5.48～49.34μg·mL~(-1)浓度范围内呈良好的线性关系(r=1.0000);方法平均加样回收率为99.96%,RSD=0.41%(n=6)。结论:本法可作为岩黄连注射液的质量控制方法。     

RP-HPLC测定不同品种黄连中的黄连碱和表小檗碱

目的 测定不同黄连药材中黄连碱、表小檗碱的含量。方法 采用反相高效液相色谱法。结果 不同品种的黄连中黄连碱的含量均在l％以上；所有的黄连均含有黄连碱、表小檗碱、小檗碱、巴马汀、药根碱的五个峰，它们之间的含量比例为1．5：1：6：1．5：0．8。结论 所用方法可作为黄连药材的定量测定方法。     

黄连中小檗碱的提取方法研究进展

黄连是一种具有广泛生物活性的传统中药,主要含有小檗碱等成分。常用的方法有酸水法,醇提法,超声波法,微波法。本文对近年来黄连中小檗碱的提取工艺进行了综述和研究,为更好地开发和利用黄连提供了理论依据。     

黄连提取工艺的研究

采用硅胶G薄层色谱法对黄连进行鉴定,证明黄连的提取物中主要成分为小檗碱。运用正交试验设计法筛选出黄连中小檗碱提取的最佳条件,采用高效液相色谱法,以提取液中的小檗碱的含量为指标优选出黄连中小檗碱的提取工艺。本实验表明,回流提取或连续回流提取,水(用黄连粗粉,回流2次,每次1.5小时,加水量为12倍)和乙醇(体积浓度分别为50%、60%、70%)提取黄连中小檗碱的效果基本相同。因此,用水代替乙醇作溶剂,既可保证提取的质量,又能降低成本。本研究结果为黄连中小檗碱的工业化生产提供了理论参考。     

小檗碱通过诱导细胞抑制性自噬发挥抗胃癌作用

目的探讨中药黄连活性成分小檗碱抗胃癌作用及相关机制。方法用MTT法检测小檗碱对人胃癌BGC-823细胞的生长抑制作用;用MDC染色结合流式细胞术及GFP-LC3质粒转染法检测小檗碱引起BGC-823细胞发生自噬;用Western印迹法检测自噬标志蛋白LC3和Beclin-1表达水平;引入自噬抑制剂3-MA和CQ,用MTT法检测小檗碱诱导的自噬与细胞存活之间的关系;建立人胃癌BGC-823细胞裸鼠移植瘤模型,评价小檗碱在体内抑制人胃癌细胞移植瘤的生长作用,用免疫组化法和Western印迹法检测肿瘤组织中自噬相关蛋白的表达水平。结果小檗碱呈时间-剂量依赖性的诱导BGC-823细胞死亡,其48 h的IC50值为24μmol·L~(-1)。与对照组相比,小檗碱处理后细胞中自噬小体的数目及自噬标志蛋白LC3及Beclin-1的表达水平皆随时间依赖性增加,且抑制自噬后小檗碱引起的细胞死亡率下降,提示小檗碱诱导的自噬发挥抑制细胞生长的作用。裸鼠移植瘤实验表明,5、10及20 mg·kg~(-1)的小檗碱均对裸鼠移植瘤的生长具有显著的抑制作用,且抑制作用与剂量成正比。其中小檗碱高剂量组的相对肿瘤增殖率为28%,优于阳性对照药物5-FU(31%)。同时,小檗碱不影响裸鼠的体重,裸鼠生长状态良好,说明其毒性较小。进一步发现小檗碱能够呈剂量依赖性的增加肿瘤组织中自噬标志性蛋白LC3-Ⅱ和Beclin-1的表达水平。结论小檗碱在体内和体外通过诱导细胞抑制性自噬而发挥抗胃癌作用。     

黄连的不同干燥方法对小檗碱含量的影响

本文作者比较了太阳光直射、太阳光下用薄纸遮盖、微火炒、烘箱烘等四种不同的干燥方法,及烘箱烘法中不同温度对黄连中小檗碱含量的影响。结果显示:采用烘箱或烘房低温干燥,它既保证了外观色泽的不变,又保证了内在有效成份的免遭破坏,同时也缩短了干燥的时间,操作起来也较方便,是医院加工炮制行之有效的好方法。     

温度对黄连提取方法的影响

以小果碱为成分指标,用稀盐酸法对黄连的不同提取温度进行比较,结果随着温度升高,小檗碱得量增高,但温度达100℃时,小檗碱被破坏较大。     

天然产物黄连碱的合成工艺改进

目的改进天然产物黄连碱的合成工艺。方法以2,3-二羟基苯甲醛为起始原料,经环合、缩合和闭环3步反应得到目标化合物黄连碱。其中,主要针对第二步缩合反应的纯化步骤以及第三步闭环反应的溶剂选择和纯化过程做了有效的改进工作。结果中间体和目标产物结构经1H-NMR、13C-NMR图谱数据确证,总收率可达43.0%,目标化合物经HPLC检测纯度高达98.5%。结论改进后的合成方法反应步骤少、操作简单、条件温和、产物收率及纯度较高,有利于工业化生产。     

黄连有效成分盐酸小檗碱、盐酸药根碱、黄连碱及其混合物对NCI-H716细胞分泌胰高血糖素样肽1(GLP-1)的影响

目的:研究黄连有效成分对NCI-H716细胞分泌胰高血糖素样肽1(GLP-1)的影响。方法:分别设置空白对照组、盐酸药根碱(JAT)组、盐酸小檗碱(BER)组、黄连碱(COP)组、盐酸巴马汀(BM)及BER十COP十JAT高剂量组和BER+COP+JAT低剂量组,同时以BER组为阳性对照组。采用CCK-8法检测各组药物不同浓度下对细胞增殖的抑制作用,确定药物浓度范围;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测NCI-H716细胞分泌GLP-1的量;采用聚合酶链式反应(PCR)检测NCI-H716细胞表达GLP-1RNA的量。结果:COP、JAT,以及高、低浓度BER+COP+JAT均能促进NCI-H716细胞分泌GLP-1(P<0.05),其中,BER+COP+JAT高浓度组及BER+COP+JAT低浓度组促GLP-1分泌作用均优于阳性对照组(P<0.05);COP、JAT组与阳性对照组相比无显著性差异(P>0.05)。结论:JAT、COP对NCI-H716细胞分泌GLP-1均有促进作用,且BER+COP+JAT混合组效果优于其单体组。