瘢痕成纤维细胞收缩功能研究

瘢痕增生并继发挛缩畸形的发生、发展机制至今尚不清楚,临床上也无确切可靠的治疗方法。本实验利用胶原胶结缔组织收缩模型,观察体外培养的瘢痕及正常皮肤成纤维细胞促胶原胶收缩情况,了解瘢痕成纤维细胞收缩能力,探讨瘢痕挛缩的发生、发展机制。１　材料和方法１．１　胶原制备［１］　用０．１％醋酸溶液提取鼠尾胶原粗制液,加氯化钠至５％终质量浓度,胶原絮状沉淀,离心收集,透析去除盐成分后,４℃储存。１．２　成纤维细胞培养　将手术切除的增生性瘢痕（８例）及正常皮肤组织（６例）剪成细小碎块后进行组织块培养,培养液为１…     

绵羊肝包虫囊液抗原成分的分离与鉴定

本文采用分子筛层析方法,分离、提取了绵羊肝包虫囊液抗原成分,结果表明经葡聚糖凝胶层析试验明确得到四个峰型;同时采用聚丙烯酰胺凝胶电泳,免疫电泳方法,对层析所得四个洗脱峰型进行抗原成分、活性的鉴定,证明经层析实验所得的第1、2峰具有包虫免疫活性的特异抗原成分。本研究为包虫病免疫学诊断、单克隆抗体制备及包虫疫苗试制提供了科学依据。     

成纤维细胞生长因子对体外培养的兔软骨细胞增生的作用

将经消化后的新西兰幼兔软骨细胞接种在含有碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)或缺乏bFGF的培养液中进行培养 ,观察bFGF对软骨细胞的增生作用及其最佳质量浓度 ,并测取软骨细胞对3 H 胸腺嘧啶的摄取量。发现bFGF可促进软骨细胞数目增多 ,促进软骨细胞增生的最佳质量浓度为 1 0～ 1 5 μg/L ;培养基中含有bFGF和缺乏bFGF生长的软骨细胞对3 H 胸腺嘧啶摄取量有明显差异 (P <0 .0 5 )。提示 :bFGF可促进兔关节软骨细胞增生 ,其促细胞增生作用在一定范围内同bFGF质量浓度成正相关。     

纸层先导设计法(摘要)

1.在中草药整理提高工作中,经常遇到的问题是如何分离未知混合成分。“纸层先导设计法”可为总成分的分离工作(液、液萃取)设计出较精确的方案。做到:想要分离哪些成分或组分,实践结果就能较好地分出这些成分或组分。而且分离纯度也将按予先的设计要求给以实现。 2.纸层先导设计法的基本原理和设计步骤:“纸层先导设计法”,就是先进行纸层析实验,并以纸层析结果及其计算数据作指导,设计液、液萃取的实验方案。本设计法依据的基本原理是:纸层析在本质上属于分配层析,它和液、液萃取法分离物质的机理是相同的。     

肺泡巨噬细胞WH因子与创伤愈合的研究

创伤愈合过程中,肉芽组织起着十分重要的作用。肉芽组织的主要组成成分为新生毛细血管和成纤维细胞,凡能刺激成纤维细胞增生的就有利于创伤的愈合。据文献报道,巨噬细胞能分泌促成纤维细胞增殖因子、毛细血管增生因子■和溶菌酶等。本文目的在于证实肺泡巨噬细胞(AM)的功能对体外成纤维细胞增殖的影响,并在此基础上     

重组融合饰胶蛋白拮抗转化生长因子β1刺激增生性瘢痕成纤维细胞增殖的作用

目的　观察重组谷胱甘肽 S-转移酶与饰胶蛋白的融合蛋白 (GST- Decorin)对转化生长因子β1 刺激增生性瘢痕成纤维细胞的作用 ,探索瘢痕治疗的新方法 .方法　采用 RT- PCR技术克隆饰胶蛋白 (Decorin) c DNA并连接到 p GEX- 4T- 1载体上 ,大肠杆菌内表达 GST- Decorin;体外分离培养增生性瘢痕成纤维细胞 ,加入 1∶ 6.2 5 ,1∶ 12 .5 0 ,1∶ 2 5 .0 0 ,1∶ 5 0 .0 0 ,1∶ 10 0 .0 0稀释度的 GST- Decorin,经四唑盐 (MTT)比色法测定细胞增殖速度 ;进一步将 2 mg/L 的 TGR- β1 或同时与 1∶ 12 .5 0的 GST-Decorin加入培养基内 ,…     

抑制成纤维细胞增残的方药与实验研究

成纤维细胞在不同组织部位的导演增残及细胞外基质的过度分泌,可引起各种结缔组织增生疾病的发生,随着对各种结缔组织增生性疾病的实验研究的深入,人们认识到一些中药及其提取物有抑制成纤维细胞增残和过度分泌基质作用,可以有效地阻止增生性结缔组织疾病的发生,发展,从而达到治疗作用,为研究中医药治疗成纤维细胞增残引起民的结缔组织增生性疾病,提供了客观的科学理论依据,现对近10年来有关中药的单方和复方对成纤维细胞的增残的抑制实验研究进展作一综述.     

生长因子的寡核苷酸对成纤维细胞增生的影响

目的 :观察一些生长因子有义和反义寡核苷酸对成纤维细胞增生的影响。方法 :采用细胞增生试验。结果 :1酸性成纤维细胞生长因子 (a FGF)的寡核苷酸和表皮生长因子 (EGF)的寡核苷酸以抑制细胞增生为主。2碱性成纤维细胞生长因子 (b FGF)的有义寡核苷酸对成纤维细胞增生有抑制作用 ,但其反义寡核苷酸却有促进成纤维细胞增生的倾向。结论 :此实验提示反义寡核苷酸可以作为药物用于某些疾病的治疗 ,但其可能通过多种机理起治疗作用     

miR-222通过MMP1对增生性瘢痕成纤维细胞的调控机制研究

目的观察成纤维胶原酶1（MMP1）和miR-222在增生性瘢痕（HS）成纤维细胞中的表达水平,探讨miR-222对HS发生、发展的调控机制。方法选取36例HS患者的HS组织,并各留取HS旁正常组织作为对照。分离培养出HS组织与正常组织的成纤维细胞;采用RT-PCR法检测成纤维细胞MMP1mRNA和miR-222表达水平;采用Westernblot法检测成纤维细胞MMP1蛋白表达水平;采用MTT法检测成纤维细胞增殖情况;采用双荧光素酶报告实验检测miR-222是否可调控MMP1基因。结果与正常组织比较,HS组织成纤维细胞MMP1mRNA、蛋白表达水平均下调（均P＜0.05）,miR-222表达水平上调（P＜0.05）。与空白对照成纤维细胞比较,HS组织转染MMP1过表达质粒后的成纤维细胞MMP1mRNA、蛋白表达水平均上调（均P＜0.05）,增殖速度明显减慢（P＜0.05）;转染antagomiR-222质粒后的成纤维细胞miR-222表达水平下调（P＜0.05）,MMP1mRNA表达水平上调（P＜0.05）,增殖速度明显减慢（P＜0.05）。双荧光素酶报告实验结果表明miR-222能与MMP1基因的3′-UTR区相结合,从而调控其表达。结论miR-222在HS组织中存在过表达,miR-222或通过负调控其靶基因MMP1的表达而发挥其调控成纤维细胞增殖和凋亡的作用。     

蚯蚓生物工程技术研究进展

从蚯蚓中已经提取出的活性成分包括：纤溶酶、纤溶酶原激活剂、钙调素和钙调素结合蛋白、胆碱酯酶、过氧化氢酶、促髓系细胞增殖组分、抗微生物蛋白、收缩血管蛋白、溶血蛋白、免疫球蛋白梓粘连物和抗肿瘤瘤成分等。综述近几年来国内外对上述成分的研究进展。     

免疫活性地龙肽的制备及其对小鼠NK细胞活性的影响

目的:提取低分子量免疫活性地龙肽,并就其对自然杀伤(NK)细胞活性的影响进行体外研究。方法:采用粗分离、凝胶过滤层析和阴离子交换层析等方法分离纯化地龙肽;采用乳酸脱氢酶法测定NK细胞活性。结果:用凝胶过滤层析分离得到地龙肽T(分子量8000～20000,含有7种蛋白)。用离子交换层析又将地龙肽T分为A、B两部分,地龙肽A由5种蛋白组成,其中有4种分子量在13000以下;地龙肽B仅由一种蛋白构成,分子量约11000;地龙肽A和T可明显提高NK细胞的活性;地龙肽A、B和T皆可减弱环磷酰胺和地塞米松的免疫抑制作用,提高NK细胞的杀伤率。结论:地龙肽T、A单独应用即可以增强NK细胞的活性,并与IL-2具有协同作用;地龙肽T、A和B还可以拮抗地塞米松、环磷酰胺等免疫抑制剂。     

赤子爱胜蚓纤维蛋白溶解酶的亲和层析纯化和生化特性

用慈菇蛋白酶抑制剂Sepharose 4B亲和层析方法从蚯蚓丙酮粉抽提液中得到较高纯度和活性的蚯蚓纤维蛋白溶解酶(纤溶酶)制剂。经快速蛋白质液相色谱(FPLC)分析,内含9个纤溶活性峰。对其中第九峰进行电泳测定,为单一条带,分子量为27000,还测定了其氨基酸组成,糖含量及酶的底物特异性。     

蚯蚓提取物的物理性状和化学成分的检测

作者进行本实验的目的是检测蚯蚓提取物的化学成分，为分离其有效组分提供依据．蚯蚓提取物是按该室方法从蚯蚓体内提取的混合物．化学成分分析选用分光光度仪、紫外分光光度仪、氨基酸分析仪和原子吸收光谱仪等．实验结果表明每百克提取物中各化学成分的含量（ｇ）：多肽蛋白质类物质为４０．４８０，核黄素为０．０１２，维生素Ｃ为０．０２１，ＤＮＡ为０．０９４，ＲＮＡ为０．８２０，总还原糖为１４．２８０，并有１７种氨基酸和１１种无机元素．     

猪心组织型纤溶酶原激活剂的提纯和鉴定

取猪心组织用丙酮去脂,pH4.2、0.45mol/L醋酸钾缓冲液抽提组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)。抽提液经硫酸铵分段盐析,然后用纤维蛋白-Sepharose柱吸附t-PA,2mol/L硫氰酸钾洗脱的t-PA溶液经Sephadex G-150凝胶过滤,得到纯的t-PA。其比活性为39038.5 IU/mg,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定其分子量为67000。提纯过程中应用了蛋白酶抑制剂(aprotinin)以及6-氨基己酸,以抑制单链t-PA转变为双链t-PA。t-PA活性测定以尿激酶(UK)为参考标准。     

中国龙虾过敏原的分离纯化研究

目的:分离、纯化和鉴定中国龙虾的主要过敏原。方法:利用传统的硫酸铵分级沉淀和等电点沉淀方法对过敏原粗提夜进行初分,在蛋白核酸检测仪检测控制下,用DEAE-52离子交换层析柱进行阶段洗脱和Sepha-dex G-100凝胶柱层析,免疫斑点法(Dot-ELISA)确定其免疫活性部分。结果:中国龙虾过敏原蛋白的硫酸铵沉淀范围在35%～60%之间,pH=4.7、4.5时的等电点沉淀蛋白质有明显的过敏原活性;离子交换层析中的具过敏原活性蛋白峰的蛋白条带分子量为15 000、20 700、34 000、60 000和83 200;Sephadex G-100凝胶层析后具过敏原活性蛋白峰SDS-PAGE显示只有34 000分子量的蛋白条带,纯度为91.5%。结论:分离、纯化鉴定出中国龙虾分子量为34 000的主要过敏原,对于过敏原的标准化、提高过敏性疾病诊治水平具有重要的意义。     

胰岛素受体的分离纯化及其酪氨酸蛋白激酶特性的研究

本文利用差速离心,2%Triton X-100增溶,伴刀豆球蛋白A-琼脂糖,胰岛素-亲和胶及麦胚凝集素-亲和胶亲和层析分离纯化了人胎盘的胰岛素受体。纯化的受体经圆盘电泳及HPLC凝胶过滤得单一峰。SDS-电泳显示分子量分别为135000及90000的两条带。纯受体有自身磷酸化作用,且对外源性底物呈现酪氨酸蛋白激酶活性。有意义地是纯化的受体的磷酸化可受促癌剂促癌因子抑制。     

蚯蚓脱氧核糖核酸酶纯化及酶学性质

目的:从蚯蚓组织中纯化得到一种脱氧核糖核酸酶(取名为蚯蚓脱氧核糖核酸酶,简称EDNase)并研究其酶学性质.方法:采用丙酮沉淀、离子交换层析、高效液相层析、SDS-PAGE电泳,毛细管等点聚焦电泳和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱等方法.结果:经证实这种纯化方案的纯化倍数是137,酶得率为45.6%.EDNase的相对分子质量约为63 000.Mg2+,Mn2+和ca2+对酶活性有较强的抑制作用,而Na+则轻微的提高酶的活性.在pH 4.4～5.2的范围内EDNase酶活性稳定,其最适pH值为4.8.该酶的最适温度为37℃,在40℃范围内酶具有较高的稳定性.EDNase的等电点为6.20.在以小牛胸腺DNA为底物的条件下,酶的Km为1.52 g/L,Vmax为4.89 mg/(mL·min).该酶可有效降解超螺旋质粒DNA,线状λ-噬菌体DNA和细菌染色体DNA,对RNA未见任何降解作用.结论:这种酶具有独特的酶学性质,不同于以往所知的脱氧核糖核酸酶.     

尖吻蝮蛇毒无出血活性纤维蛋白溶解酶的纯化及其理化性质研究

目的：从蝮亚科尖吻蝮蛇毒(Agkistrodon acutus venom)中分离纯化出无出血活性纤维蛋白溶解酶(Non—hemonrrhagic fibrinolytic enzyme,NHFLE)并对其理化性质进行研究。方法：应用凝胶过滤和离子交换柱层析法分离纯化尖吻蝮蛇毒NHFLE，用纤维蛋白平板法测定其纤溶活力，用SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)测定其相对分子质量，用皮内出血实验测定其出血活性。结果：从短亚科尖吻蝮蛇毒中分离出一种单一组分的纤维蛋白溶解酶，它的相对分子质量为25000，没有出血活性，在普通纤维蛋白平板和加热平板上都能溶解纤维蛋白，相对活性为粗毒的3．2倍。结论：从尖吻蝮蛇毒中分离出相对分子质量为25000的纯化蛋白是具有直接溶解纤维蛋白活性，而无出血活性的单一的纤维蛋白溶解酶。     

鲜广地龙纯化蛋白的制备及其体外抗肺纤维化活性评价

目的 寻找一种方便快捷的鲜广地龙蛋白纯化方法,并探究其是否具有抗肺纤维化作用。方法 采用冷冻干燥法对鲜广地龙进行粗提取,再用分子排阻色谱分离纯化得到纯化蛋白（P2）,并质谱分析P2蛋白组成。细胞实验分组：C57BL/6小鼠24只,随机分3组（8只/组）。对照组、模型组（5 ng/mL TGF-β1处理）、SB431542组（2 μmol/L）和鲜广地龙纯化蛋白P2组（13.125 μg/mL）。动物实验分组：对照组（不处理）、模型组（博来霉素处理）、博来霉素+鲜广地龙纯化蛋白P2（5 mg/mL）。造模后给药21 d,在第22天进行取材。采用CCK8-法检测P2对MRC-5细胞的细胞毒性和肌成纤维细胞异常增殖的抑制;流式细胞术检验其对肌成纤维细胞的凋亡;HE 和 Massson 染色观察其对肺组织的病理学变化;RT-PCR、Western blot 检测其对α-SMA、Vimentin、E-cadherin和Collagen I的调节;机制方面通过检验P2对Smad2/3及P-Smad2/3的调节作用,进而证明其可通过TGF-β/Smad通路起到抗肺纤维化作用。结果 通过分子排阻色谱法可方便、稳定得到鲜广地龙纯化蛋白P2。体外实验显示P2具有抑制肌成纤维细胞的作用（P<0.01）,降低纤维化模型中α-SMA、Vimentin和Collagen I的表达（P<0.001或P<0.01）,升高E-cadherin的表达（P<0.01）,可抑制Smad2/3和P-Smad2/3的表达（P<0.001或P<0.01）。体内实验显示,P2可降低HE染色中炎症细胞的数量以及Masson染色中蓝色的胶原纤维区域。结论 运用分子排阻色谱可较为理想的获得鲜广地龙纯化蛋白P2,且其可通过调节TGF-β/Smad通路抑制肺纤维化进程。     

沙蚕纤溶酶的一种纯化方法

目的 从双齿围沙蚕体内提取并纯化一种新的纤溶酶。方法 应用硫酸铵沉淀、透析、凝胶柱层析（Sephadex G-100）以及电泳等生化手段对沙蚕纤溶酶进行分离纯化。用平板法测定它降解纤维蛋白的活性。结果 得到纯的沙蚕纤溶酶,测出其等电点为4．5左右,由两条边组成,其相对分子量分别为33000u和14400u。结论 该酶为首次从沙蚕中发现的一种新的纤溶酶。