西安地区孕妇TORCH感染的血清学检测

自１９９４年３月－１９９６的３月，应用Ｅｌｉｓａ法，１９３３例孕妇做了弓形体（ＴＯＸ）、风疹病毒（ＲＶ）、巨细胞病毒（ＣＭＶ）、单纯疱疹病毒Ｉ型和Ⅱ型（ＨＳＶ１、ＨＳＶｔ）５种病原体血清特异性ＩｇＭ、ＩｇＧ抗体的检测。结果显示：孕妇血清中各病原体特异性ＩｇＭ抗体阳性率分别为３．４１％、１．４５％、５．５４％、２．３３％、１．８６％；特异性ＩｇＧ抗体一率分别为１０．７７％、８８．５０％、８９．６２＾     

上海地区急性散发性戊型肝炎的特异性诊断和调查──应用抗人μF（ab’）_2—HRP检测抗HEVIgM

以Ｇｅｎｅｌａｂｓ的ＨＥＶＩｇＧＥＬＩＳＡ试剂盒和抗人μＦ（ａｂ’）＿２—ＨＲＰ检测抗ＨＥＶＩｇＧ和ＩｇＭ，从上海地区４６７例急性病毒性肝炎病人和８４例健康人血清中分别检出抗ＨＥＶＩｇＧ阳性１０５例（２２％）和１１例（１３％）（Ｐ＞０．０５）。从上述病人共检出抗ＨＥＶＩｇＭ阳性６４例（１４％），其中３６例抗ＨＥＶＩｇＭ阳性出自１１１例急性非甲非乙非丙型肝炎，２８例抗ＨＥＶＩｇＭ阳性出自３３３例急性甲型肝炎病人，而２３例急性乙型和丙型肝炎病人，８４例健康人以及另外的２４例非病毒性肝炎（内４例类风湿因子阳性）病人血清均为抗ＨＥＶｌｇＭ阴性。结果表明：在检测抗ＨＥＶＩｇＭ的ＥＬＩＳＡ系统中，应用抗人μＦ（ａｂ’）＿２—ＨＲＰ作为酶标第二抗体，取得了满意的结果；上海地区急性非甲非乙非丙型肝炎中，３２％为戊型肝炎，急性甲型肝炎病人中８％同时感染了ＨＡＶ和ＨＢＶ。     

上海地区急性散发性戊型肝炎的特异性诊断和调查：——应用抗人μF（ab…

以Ｇｅｎｅｌａｂｓ的ＨＥＶ ＩｇＧ ＥＬＩＳＡ试剂盒和抗人μＦ（ａｂ’）２－ＨＲＰ检测抗ＨＥＶ ＩｇＧ和ＩｇＭ，从上海地区４６７例急性病毒性肝炎病人和８４例健康人血清中分别检出抗ＨＥＶ ＩｇＧ阳性１０５例（２２％）和１１例（１３％）（Ｐ〈０．０５）。从上述病人共检出抗ＨＥＶ ＩｇＭ阳性阳性６４例（１４％），其中３６例抗ＨＥＶ ＩｇＭ阳性出自１１１例急性非甲非乙非丙型肝炎，２８例抗ＨＥＶ ＩｇＭ阳性     

抗HCV-IgM抗体测定及临床初步应用

将市售ＨＣＶ－ＩｇＧ诊断试剂盒加以改良，建立了ＨＣＶ－ＩｇＭ抗体检测方法，与抗ＨＢｃ－ＩｇＭ，抗ＨＢｓ－ＩｇＭ，抗ＣＭＶ－ＩｇＭ，抗ＲＶ－ＩｇＭ，ＲＦ及抗核抗体（ＡＮＡ）阳性血清均不起反应。正常人群中抗ＨＣＶ－ＩｇＭ阳性率为１．５％（１／６８），抗ＨＣＶ－ＩｇＧ阳性的４３例血透患者检出抗ＨＣＶ－ＩｇＭ１４例（３２．６％），１２例输血后肝炎抗ＨＣＶ－ＩｇＭ全部阳性。以上结果表明，抗ＨＣＶ－ＩｇＭ可作为输血后ＨＣＶ感染的一个敏感指标     

用合成肽为抗原检测戊型肝炎病毒IgG和IgM抗体

选择并合成戊型肝炎病毒（ＨＥＶ），ＯＲＦ（阅读框架）－１、ＯＲＦ－２及ＯＲＦ－３中的４个肽段。其中合成肽（ＳＰＢ３６）可用于酶联免疫吸附法检测戊型肝炎病毒的ＩｇＧ及ＩｇＭ抗体。对１３４份肝炎患者血清分别以重组抗原及ＳＰＢ３６抗原检测戊肝抗体ＩｇＧ，相对符合率为８５．１％。对比检测戊肝抗体ＩｇＭ（４４份）相对符合率为８８．６％。合成肽因结构组成明确，不需要特殊纯化，特异性较高，用于检测抗体有其优点。     

HER2/neu抗体对SKBR3乳腺癌细胞株酪氨酸磷酸化及细胞增殖的影响(摘要)

研究抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ胞外区的特异性抗体对ＳＫＢＲ３乳腺癌细胞株酪氨酸磷酸化及细胞增殖的影响。方法Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法及抗体介导的特异性细胞增殖试验;筛选乳腺癌病人抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ抗体阳性血清ＩｇＧ的ＥＬＩＳＡ方法。结果试验发现单抗ｃｎｅｕ５对ＳＫＢＲ３细胞ｐ１８５酪氨酸磷酸化有明显促进作用,但对细胞增殖的影响不明显;而单抗ｃｎｅｕ２对ＳＫＢＲ３细胞ｐ１８５酪氨酸磷酸化及细胞增殖均有明显作用。在此基础上,收集乳腺癌病人血清１４份,分离纯化其血清ＩｇＧ,并经ＥＬＩＳＡ方法筛选出５份乳腺癌病人抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ抗体阳性血清ＩｇＧ。细胞增殖试验发现该５份标本中有３份对ＳＫＢＲ３细胞增殖有显抑制作用。选其中１份抑制增殖的阳性血清ＩｇＧ进一步研究其对ＳＫＢＲ３细胞ｐ１８５酪氨酸磷酸化的影响,结果发现该病人血清ＩｇＧ对细胞酪氨酸磷酸化也有抑制作用。结论抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ的特导性抗体可能通过抑制细胞的信号传递系统而抑制肿瘤生长。     

用合成肽为抗原检测戊型肝炎病毒IgG和IgM抗体

选择并合成戊型肝炎病毒（ＨＥＶ），ＯＲＦ（阅读框架）－１、ＯＲＦ－２及ＯＲＦ－３中的４个肽段。其中合成肽（ＳＰＢ３６）可用于酶联免疫吸附法检测戊型肝炎病毒的ＩｇＧ及ＩｇＭ抗体。对１３４份肝炎患者血清分别以重组抗原及ＳＰＢ３６抗原检测戊肝抗体ＩｇＧ，相对符合率为８５．１％。对比检测戊肝抗体ＩｇＭ（４４份），相对符合率为８８．６％。合成肽因结构组成明确，不需要特殊纯化，特异性较高，用于检测抗体有其优点。     

免疫滴金技术检测肾综合征出血热特异性抗体与中西医结合治疗的研究

为探索一种更为简便，快速，特异，敏感的肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）抗体的检测方法及中西医结合治疗该病的有效手段。１８６例ＨＦＲＳ病人血清同时采用免疫滴金法９ＣＧＩＤＡ）与酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）对比检测特生免疫球蛋白Ｍ抗体（抗ＨＦＲＳ－ＩｇＭ），免疫荧光法（ＨＦＡＴ）对比检测特异性免疫球蛋白Ｇ抗体（抗ＨＦＲＳ－ＩｇＧ）并以２０例发热待排，４８例病毒性肝炎血清作对照；１０１例ＨＦＲＳ病人分组进行中     

戊型肝炎病毒（HEV）基因疫苗免疫小鼠的初步研究

本研究将含ＨＥＶＯＲＦ３ｃＤＮＡ的真核表达质粒作为基因疫苗直接注射到ＢＡＬＢ／ｃ小鼠骨胳肌内，引发了实验小鼠特异性抗－ＨＥＶＩｇＧ反应。小鼠经２次基因疫苗接种或１次基因疫苗，然后用ＨＥＶ重组蛋白加强免疫后，血清抗－ＨＥＶＩｇＧ滴度较接种１次基因疫苗组明显升高。     

戊型肝炎病毒（HEV）基因疫苗免疫小鼠的初步研究

本研究将含ＨＥＶ ＯＲＦ３ ｃＤＮＡ的真核表达质粒作为基因疫苗直接注射到ＢＡＬＢ／ｃ小鼠骨骼肌内，引发了实验小鼠特异性抗－ＨＥＶ ＩｇＧ反应。小鼠经２次基因疫苗接种或１次基因疫苗，然后用ＨＥＶ重组蛋白加强免疫后，血清抗－ＨＥＶ ＩｇＧ滴度较接种１次基因疫苗组明显升高。     

戊型肝炎病毒合成肽决定簇检测抗HEV的研究

利用３段分别代表ＨＥＶ３个基因区的合成多肽，研制成ＥＬＩＳＡ抗ＨＥＶ检测试剂。此试剂对ＩｇＧ及ＩｇＧ检测出阳性率在急性ＮＡＮＢＮＸ肝炎患者中分别为５４．１％（５３／９８）和３３．７％（３３／９８），在其他疾病患者正常献血员中则分别为２．７％－６．３％和０％－２．６％。与Ｇｅｎｅｌａｂｓ重组抗原生产的检测试剂比较，两者有很好的一致性，其阳性符合率为９０．０％，阴性符合率为９８．５％，总符合率为９７．     

血清戊型肝炎抗体检测的比较研究

目的评价戊型肝炎抗HEV E2 IgM、IgG酶联免疫试剂(捕获法)在戊型肝炎诊断中的意义。方法对226例肝病患者及50例健康体检者进行抗HEV E2 IgM、IgG检测,同时对226例患者进行上海科华抗HEV IgM、IgG试剂平行检测。结果抗HEV E2 IgM ELISA试剂在226例肝病患者中检出43例阳性,阳性率为19.0%。上海科华试剂在226例肝病患者中检出45例抗HEV-IgM阳性和/或抗HEV-IgG阳性,阳性率为19.9%,与抗HEV E2 IgM ELISA试剂检测结果相符,差异无统计学意义(P>0.05)。抗HEVE2IgM阴性、抗HEV IgG阳性的99例临床诊断考虑戊型肝炎既往感染病例中,上海科华试剂检出16例抗HEV IgG阳性,占16.2%。结论抗HEV E2 IgM ELISA试剂用于戊型肝炎急性感染的检测灵敏准确,是一个较好的HEV近期感染指标。万泰抗HEVIgG试剂在戊型肝炎既往感染的诊断上具有准确、敏感的优势。     

戊型肝炎患者肝组织中HEV抗原的检测研究

目的：用抗－ＨＥＶ ＯＲＦ２单克隆抗体和抗－ＨＥＶ ＯＲＦ２单链可变区抗体研究急性戊型肝炎的免疫病理学,探讨二者在临床病理诊断中的应用价值。方法：（１）以杂交瘤技术制备的抗－ＨＥＶ单克隆抗体（ＭｃＡｂ,ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ）作为第一抗体,用免疫组化ＬＳＡＢ法检测急性戊型肝炎患者肝组织中的ＨＥＶ抗原。（２）用抗－ＨＥＶ ＯＲＦ２单链可变区抗体以间接酶标法检测肝组织内的ＨＥＶ抗原。结果：用抗－ＨＥＶ单克隆抗体从１４例急性戊型肝炎肝标本中检出９例ＨＥＶ抗原阳性者（６４．２８％）,其中８例阳性标本用抗－ＨＥＶ ＯＲＦ２单链可变区抗体检测ＨＥＶＡｇ均为阳性。ＨＥＶ抗原在肝细胞浆表达以胞浆弥漫型为主,尚可见膜型表达。ＨＥＶ抗原阳性细胞集中分布有病变明显区,伴淋巴细胞浸润,病变较轻区也可见随机散在分布,部分     

戊型肝炎病毒ORF2片段与ORF3嵌合重组抗原的纯化与免疫学性质

目的 考察具有多个优势原表位区段嵌合表达的戊型肝炎病毒（HEV）重组抗原的免疫学性质。方法 将构建的含有3个不同HEV抗原表位基因（ORF2.1:6287-6403nt,ORF2.2:6743-7126nt,ORF3）的表达质粒pThioHisORF(2.1 2.2 3）在大肠杆菌中进行异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达,其表达产物P（2.1 2.2 3）在8mol/L尿素下经阳离子柱SP Sepharose FF层析纯化,透析复性,以P(2.1 2.2 3）免疫家兔和小鼠,通过ELISA检测实验动物血清及戊型肝炎患者阳性血清IgG抗体,以Western蛋白印迹检测动物免疫血清对杆状病毒系统表达的抗原片段及嵌合抗原P（2.1 2.2 3）对患者阳性血清的免疫反应性。结果 纯化的抗原纯度达90％以上;免疫动物血清中检测到特异性抗体的滴度分别为1：25600（家兔）和1：12800（小鼠）以上,抗血清能够特异识别杆状病毒系统表达的HEV抗原片段,P（2.1 2.2 3）能与患者阳性血清特异反应。结论 嵌合表达的HEV重组抗原P（2.1 2.2 3）具有良好的免疫原性和免疫反应性,为进一步研究开发HIV诊断试剂盒及基因工程疫苗提供了基础。     

血透患者病毒感染状况初步调查

目的与方法：对４３例血液透析患者的五种肝炎相关病毒（ＨＢＶ、ＨＣＶ、ＨＥＶ、ＨＧＶ和ＣＭＶ）标志物进行了检测。结果：以单项抗－ＨＣＶＩｇＧ检出率最高,达５８．１％;抗－ＣＭＶＩｇＭ检出率次之,为４１．９％;其持依次为ＨＢｓＡｇ３０．２％,抗ＨＣＶＩｇＭ２５．６％,抗－ＨＢｃ１８．６％,抗－ＨＢｓ１６．３％,抗－ＨＧＶＩｇＧ９．３％,ＨＢｃＡｇ７．０％,抗ＨＢｅ４．７％,抗ＣＮＭＶ－ＩｇＧ４．７5,ry     

抗HEV ORF2单链可变区抗体的筛选和鉴定

目的：筛选和鉴定抗戊型肝炎病毒（ＨＥＶ）开放读码框架２（ＯＲＦ２）的人源化噬菌体单链可变区抗体。方法：以大肠杆菌表达的重组ＨＥＶ ＯＲＦ２多肽做为固相包被抗原,从半合成的人源化噬菌体抗体库中经过４轮“吸附－洗脱－扩增”的筛选过程及酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）、ＤＮＡ序列分析鉴定,获得抗原结合活性较强的抗－ＨＥＶ ＯＲＦ２单链可变区抗体,并以间接酶标法用该抗体对戊型肝炎患者石蜡包埋肝组织中的ＨＥＶ ＯＲＦ２抗原进行免疫组织化学鉴定。结果：筛选到的抗－ＨＥＶ ＯＲＦ２的单链可变区抗体基因。酶切和序列分析表明,该抗体基因由７９５ｂｐ组成：ＥＬＩＳＡ和免疫组织化学结果显示,抗－ＨＥＶ ＯＲＦ２人源化噬菌体单链可变区抗体能与重组ＨＥＶ ＯＲＦ２抗原特异性结合,并能够特异性识别戊型肝炎患者肝组织中的ＨＥＶ抗原。结论：此法     

表达戊型肝炎病毒ORF2蛋白的重组腺病毒构建及其经粘膜途径免疫小鼠

目的 构建可表达戊型肝炎病毒(hepatitis E virus,HEV)ORF2蛋白(112-660ea)的重组腺病毒Adasy-EORF2,探讨其经鼻腔和腹腔免疫小鼠后。诱导机体产生特异性体液免疫和粘膜免疫应答的能力,为研制戊型肝炎疫苗探索新的途径。方法 经PCR扩增编码ORF2蛋白(112-660aa)的基因片段,将其连接于重组腺病毒Adasy系统的穿梭质粒pTrack-CMV上,与腺病毒基因组质粒pAdEasy-l共转化宿主菌BJ5183,经细菌内同源重组获得重组腺病毒基因组质粒,转染293细胞以产生、扩增重组腺病毒。将重组腺病毒以10^7pfu的剂量经鼻腔和腹腔免疫小鼠,通过ELISA检测血液IgG和粘膜IgA的应答情况。结果 重组腺病毒经鼻腔免疫小鼠后可刺激机体产生特异性IgA、IgG免疫应答,IgG最高滴度达l：l000。经腹腔免疫可刺激小鼠产生IgG免疫应答,最高滴度可达l：10000,未检测到明显的IgA应答。结论 表达HEV ORF2蛋白的重组腺病毒能刺激机体产生有效的免疫应答,具有成为新型戊型肝炎疫苗的潜力．     

戊型肝炎IgG抗体检测方法的建立

为建立一种简便、快速诊断戊型肝炎病毒血清抗体的检测方法,以基因工程HEVORF2区重组蛋白抗原和人工会成HEVORF3区合成多肽抗原混合作为包被抗原,辣根过氧化物酶标记的单克隆抗人IgG抗体为第二抗体,建立了间接酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清中HEVIgG抗体技术。检测中国药品生物制品检定所《检测抗HEV抗体国家参考品》全套血清盘：特异性参比品30份,全部为阴性;阳性参比品10份,全部为阳性;精密性参比品,CV（n＝10）＜15％。17例非甲、乙、丙肝炎患者,黄殖出现后4个月内,HEVIgG抗体检出率为100％。普通人群HEVIgG抗体检出率为1％～2％。表明该方法检测HEVIgG抗体,特异性强、敏感性高、操作简便快速,适用于临床对戊型肝炎的诊断和流行病学调查。     

甲型与戊型肝炎的临床对比分析

目的 比较甲型肝炎（甲肝）与戊型肝炎（戊肝）的临床特点。方法 用ＥＬＩＳＡ法对７５５例肝炎患者进行甲,乙,丙,戊,庚型肝炎的病原学检测,结果 甲肝和戊肝的检出率分别是１１．１％和９．７％,差异无显著性（Ｐ〉０．０５）而两者在发病年龄,病程,总胆红素及与其他肝炎病毒的重叠或混合感染率方面差异有显著性（Ｐ〈０．０５或Ｐ〈０．０１）。结论 与甲肝相比,该地区戊肝同样常见,戊肝具有发病年龄较大,黄痘较深,     

戊型肝炎病毒ORF3基因在杆状病毒系统中的表达与免疫学性质

目的 利用杆状病毒系统表达戊型肝炎病毒（HEV）ORF3,为进一步研究免疫学性质与功能提供基础。方法 通过RT－PCR方法获得HEV ORF3基因的目的基础片段,插入中间转染载体质粒pVL1393,构建重组质粒,再与杆状病毒线性DNA（BaculoGold^TM）共转染Sf9昆虫细胞,通过同源重组得到重组杆状病毒,以此重组杆状病毒感染昆虫细胞后,对表达的重组蛋白进行免疫学检测并免疫小鼠。结果 表达的重组蛋白约占昆虫细胞总蛋白的2％,可被戊型肝炎患者与实验猴阳性抗血清有效识别,并能诱导小鼠产生对HEV特异性免疫应答。结论 重组杆状病毒可高效表达HEV ORF3基因片段,表达产物具有HEV特异的免疫原性。