中西药联合对胃癌SGC-7901/ADR细胞MRP介导的耐药性研究

目的：探讨中西药联合逆转胃癌多药耐药亚系SGC-7901/ADR细胞MRP介导的耐药性作用。方法：以SGC-7901/ADR细胞为靶细胞,以不加药组为阴性对照组,5-FU组、斑贞1号组、班贞1号＋5-FU组、班贞1号＋5-FU＋TMP组为实验组,采用半定量RT-PCR法检测SGC-7901/ADR细胞在不同药物作用下MRP mRNA的表达情况。结果：5-FU组与阴性对照组比较,耐药细胞MRP mRNA表达差异无统计学意义（P〉0.05）,提示MRP参与SGC-7901/ADR细胞对5-FU的多药耐药性;其他实验组组间比较及与阴性对照组比较,MRP mRNA表达差异均有统计学意义（P〈0.01）,中西药联合组（斑贞1号＋5-FU＋TMP）MRP mRNA表达量最低（仅为0.07）。结论：中西药联合可以克服SGC-7901/ADR细胞由MRP介导的多药耐药性,为当前胃癌的治疗提供了新的理论依据。     

斑贞1号、川芎嗪和5-氟尿嘧啶联合对人胃癌细胞肺耐药蛋白基因表达影响

目的探讨斑贞1号、川芎嗪（TMP）和5-氟尿嘧啶（5-FU）联合逆转人胃癌细胞系SGC-7901/ADR与LRP表达的相关性。方法采用半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）比较人胃癌细胞SGC-7901/ADR细胞在单纯5-FU和5-FU联合斑贞1号及TMP处理组肺耐药蛋白（LRP）mRNA的表达情况。结果 5-FU组与阴性对照组比较,LRPmRNA表达差异无统计学意义（P〉0.05）;而5-FU联合斑贞1号及TMP处理组LRP mRNA表达量明显降低,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论斑贞1号、TMP和5-FU联合逆转SGC-7901/ADR细胞耐药性可能与LRP基因相关,为当前胃癌的治疗提供了新的理论依据。     

中西药联合对胃癌SGC-7901/ADR细胞LRP、MRP基因表达的影响

目的:探讨中西药联合(班贞1号+5-FU+TMP)对胃癌SGC-7901/ADR细胞MRP、LRP基因表达的影响。方法:以胃癌多药耐药细胞株SGC-7901/ADR为靶细胞,以不加药组为阴性对照组,5-氟尿嘧啶(5-FU)组、班贞1号组、班贞1号+5-FU组、中西药联合组为实验组,采用半定量RT-PCR法检测SGC-7901/ADR细胞在不同药物作用下MRP、LRP mRNA的表达。结果:5-FU组与阴性对照组相比,MRP、LRP mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05)。中西药联合组MRP、LRP mRNA表达明显降低,与阴性对照组及其他实验组比较有统计学意义(P<0.05)。结论:中西药联合能够抑制SGC-7901/ADR细胞MRP、LRP mRNA表达,逆转了SGC-7901/ADR细胞的耐药性,其机制可能与下调MRP、LRP基因表达有关。     

班贞1号和TMP逆转胃癌细胞SGC-7901，ADR对5-FU耐药性机制研究

目的：探讨班贞1号和川芎嗪（TMP）联合逆转人胃癌细胞系SGC-7901／ADR对5一FU耐药性与bcl-2表达的相关性。方法：采用半定量逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）比较SGC-7901／ADR细胞在单纯5-FU和5-FU联合中药班贞1号及TMP处理组bcl-2mRNA的表达情况。结果：5-FU组与阴性对照组相比,bcl-2mRNA表达无显著性差异（P〉0．05）,而5-Fu联合中药班贞1号及TMP处理组bcl-2mRNA表达量明显降低（P〈0．05）。结论：班贞1号和TMP联合逆转人胃癌细胞对5-FU耐药性可能与抗调亡分子bcl-2相关,为中西药联合治疗胃癌奠定一定的理论基础。     

斑贞1号、TMP和5-FU联合对人胃癌细胞ERCC1表达的影响

目的 探讨斑贞1号、川芎嗪(TMP)和五氟尿嘧啶(5-FU)联合逆转人胃癌细胞系SGC-7901/ADR与ERCC1表达的影响。方法 采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR),监测人胃癌细胞SGC-7901/ADR细胞在5-FU组、斑贞1号组、斑贞1号+5-FU组、斑贞1号+5-FU+TMP组切除修复交叉互补基因1(ERCC1)m RNA的表达情况。结果 5-FU组与阴性对照组比较,ERCC1 m RNA表达差异无统计学意义(P0.05),而5-FU联合中药斑贞1号及TMP处理组ERCC1m RNA表达量明显升高(P0.05)。结论 斑贞1号、TMP和5-FU联合逆转SGC-7901/ADR细胞耐药性可能与ERCC1基因相关,为当前胃癌的治疗提供了新的理论依据。     

中西药结合对胃癌多药耐药的逆转和诱导凋亡作用

目的:探讨中西药结合对人胃癌多药耐药细胞SGC-7901/ADR的逆转和诱导凋亡作用.方法:以斑贞1号和/或氟尿嘧啶(5-FU)为阳性对照组,采用MTT法观察斑贞1号与5-FU,川芎嗪(TMP)联合对SGC-7901/ADR细胞的逆转及杀伤作用.采用流式细胞仪(FCM)测定各药物组细胞周期的变化.光镜和电镜观察药物联合前后SGC-7901/ADR细胞形态结构变化.结果:TMP明显提高SGC-7901/ADR细胞对斑贞1号 5-FU的敏感性,逆转倍数为10.39倍.细胞毒作用为:斑贞1号 5-FU TMP>斑贞1号 5-FU>斑贞1号>5-FU(P<0.01).FCM分析证明3种药物联合与对照组相比可将细胞阻滞在DNA合成前期和静息期-G0/G1期(P<0.05).光镜和电镜下观察到癌细胞体积变小,胞体全面变圆皱缩及典型的凋亡形态学改变.结论:中西药结合对SGC-7901/ADR细胞有较强的逆转和诱导凋亡作用,为当前肿瘤治疗提供了新思路.     

金雀异黄素增加5-氟尿嘧啶对胃癌SGC-7901细胞疗效的体外研究

目的:研究金雀异黄素(genistein,Gen)是否影响5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)对胃癌细胞SGC-7901的抗癌活性.方法:Gen、5-FU单独及两者联合处理胃癌SGC-7901细胞24、48及72 h后,采用MTT法测定癌细胞的活性;Gen、5-FU单独、联合处理胃癌SGC-7901细胞72 h后,透射电镜观察细胞超微结构改变,免疫细胞化学法研究凋亡相关基因的蛋白mt P53、Bcl-2和Bax的表达变化.结果:6 μmol/L Gen和10 μmol/L 5-FU联合应用比20 μmol/L Gen、10μmol/L 5-FU单独应用时对胃癌细胞的生长抑制更为显著(P＜0.01);Gen、5-FU单独及联合应用均可诱导SGC-7901细胞凋亡;Gen、5-FU联合时对SGC-7901细胞的凋亡相关蛋白Bax表达上调和mt P53、Bcl-2表达下调的作用较单独时明显(P＜0.05～0.01).结论:金雀异黄素能够增强5-FU对SGC-7901细胞的抗癌活性,可能与其调节细胞生存和凋亡的关键蛋白mt P53、Bcl-2和Bax的表达有关.金雀异黄素与5-FU联合应用可能改善胃癌化疗的结局,但这一方案的效果需要适当的临床试验来验证.     

环孢素A、维拉帕米、川芎嗪对胃癌多药耐药细胞株SGC-7901／ADR逆转作用的研究

目的：探讨环孢素A（CsA）、维拉帕米（VP）、川芎嗪（TMP）对胃癌多药耐药细胞株SGC-7901／ADR耐药性的逆转作用。方法：采用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法观察SGC-7901／ADR对化疗药氟尿嘧啶（5-FU）的耐药性，选择CsA、VP、TMP的非细胞毒性剂量，并观察其与5-Fu联合对SGC-7901／ADR的逆转作用。结果：SGC-7901／ADR对化疗药5-FU具有耐药性，相对耐药性（RF）为97．49；CsA3．0mg／L、VP10．0mg／L、TMP300．0mg／L以下为SGC-7901／ADR细胞的非细胞毒性剂量，除CsA外，VP和TMP对SGC-7901／ADR的逆转作用呈剂量依赖关系；300．0mg／L TMP较10．0mg／LVP逆转作用强（P〈0．01），使SGC-7901／ADR相对耐药性降至12．89，将5-FU IC50由13．001mg／L下调到1．542mg／L，逆转倍数是8．43倍。结论：SGC-7901／ADR对5-Fu具有耐药性，300．0mg／L TMP是SGC-7901／ADR细胞多药耐药性最有效的逆转剂。     

山竹提取物对胃癌SGC-7901细胞的体外实验研究

目的观察山竹提取物（GME）对人胃癌细胞SGC-7901增殖情况的影响,探讨其作用机制。方法采用新型四氮唑盐法（MTS）检测GME对SGC-7901细胞增殖的影响;采用流式细胞仪检测GME对SGC-7901细胞凋亡和诱导活性氧（ROS）水平的影响;采用Westernblot检测不同浓度GME对BGC-7901细胞的PTEN、Bax、Bcl-2表达的影响。结果GME显著抑制SGC-7901细胞的增殖（P＜0.05）,与阳性对照组5-氟尿嘧啶（5-FU）相比抑制率也较高（P＜0.05）,其半数抑制浓度为：7.89滋g/ml。经5、7.5滋g/ml的GME处理24h后,可有效促进SGC-7901细胞凋亡（P＜0.05）,ROS水平的累积;GME相同方式处理后,SGC-7901细胞中PTEN和Bax的蛋白表达量上调,Bcl-2蛋白表达量降低（P＜0.05）。结论GME能够显著抑制胃癌SGC-7901细胞的增殖,能够诱导SGC-7901细胞ROS水平的累积,并通过影响PTEN、Bax和Bcl-2蛋白的表达,促进其凋亡。     

Effects of Serum Containing Chinese Medicine Sanpi Pingwei (散癖平胃) Formula on Proliferation and Apoptosis of Human SGC-7901 Cells

Objective:To investigate the effects of serum containing Chinese medicine(CM) Sanpi Pingwei(散癖平胃,SPPW) formula on the proliferation and apoptosis of human SGC-7901 cells and the possible mechanism.Methods:Serum containing CM SPPW formula(SPPW serum) was prepared by a serum pharmacology method.Human SGC-7901 cells were incubated with SPPW serum at three different concentrations and with the anticancer drug 5-fluorouracil(5-FU),respectively.Cell proliferation was assessed by MTT assay,and cell apoptosis was detected by flow cytometry assay.Real-time quantitative polymerase chain reaction(RT-PCR) and Western blot assay were employed to confirm the expressions of Bcl-2,Bax and p53 in SGC-7901 cells at mRNA and protein levels,respectively.Results:SPPW serum suppressed the proliferation of SGC-7901 cells in a time- and dose-dependent manner.The colony forming rate of negative control was 48.2%,while those in the three SPPW serum groups and the 5-FU group decreased significantly (P<0.01).The number of colony forming units in the SPPW high dosage group was significantly smaller than that in the 5-FU group(P<0.01).MTT assay showed that SPPW serum restrained the proliferation of SGC-7901 cells,and the inhibition rate increased significantly in a dose-dependent manner.Annexin V/PI Assay suggested that SPPW serum induced the apoptosis of SGC-7901 cells significantly.RT-PCR and western blot assay indicated that SPPW serum upregulated the protein and mRNA expression levels of Bax and p53 in SGC-7901 cells,but downregulated the protein and mRNA expressions of Bcl-2.Conclusions:SPPW formula inhibits the proliferation of SGC-7901 cells in vitro and induces the cell apoptosis.It plays an anticancer role by regulating the expressions of Bax,p53 and Bcl-2 in SGC-7901 cells.     

miR-431-3p对胃癌细胞增殖和凋亡的影响及其靶向调控CTDP1基因表达机制

目的 探讨miR-431-3p对胃癌细胞增殖和凋亡的影响,阐明其可能的分子机制。 方法 取经病理诊断确诊为胃癌的68例患者的胃癌组织及其癌旁组织。采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测胃癌组织、癌旁组织和人正常胃黏膜上皮GES-1细胞、人胃癌细胞（MKN-28、MGC-803、MKN-45、SGC-7901和HGC-27）中miR-431-3p及羧基末端结构域磷酸酶1（CTDP1）mRNA表达水平,Western blotting法检测上述细胞中CTDP1蛋白和各组SGC-7901细胞中细胞色素C（Cyt C）、B细胞淋巴瘤2（Bcl-2）和Bcl-2相关X蛋白（Bax）蛋白表达水平。采用Pearson相关分析法分析miR-431-3p与CTDP1 mRNA表达水平的相关性,双荧光素酶报告基因实验检测miR-431-3p和CTDP1的靶向关系。将miR-431-3p mimic和CTDP1过表达慢病毒分别或同时转染至SGC-7901细胞中,将细胞分为空白组、空载过表达（mimic NC）组、miR-431-3p过表达（miR-431-3p mimic）组、空载慢病毒（Vector）组、CTDP1过表达慢病毒（CTDP1过表达）组和miR-431-3p mimic+CTDP1过表达（共转染）组。MTT法检测各组SGC-7901细胞增殖活性,克隆形成实验检测各组SGC-7901细胞单克隆形成数,流式细胞术检测各组SGC-7901细胞凋亡率。 结果 与癌旁组织比较,胃癌组织中miR-431-3p表达水平降低（P<0.01）,CTDP1 mRNA表达水平升高（P<0.01）,并且二者表达水平呈负相关关系（r=－0.316,P=0.009）。与GES-1细胞比较,其他5种胃癌细胞中miR-431-3p表达水平均降低（P<0.01）,CTDP1 mRNA和蛋白表达水平均升高（P<0.05）。双荧光素酶报告系统,miR-431-3p靶向调控CTDP1表达。与空白组和mimic NC组比较,miR-431-3p组SGC-7901细胞中CTDP1和Bcl-2蛋白表达水平、细胞增殖活性和克隆形成数降低（P<0.05）,细胞凋亡率和细胞中Cyt C及Bax蛋白表达水平升高（P<0.05）。与空白组和Vector组比较,CTDP1过表达组SGC-7901细胞中CTDP1和Bcl-2蛋白表达水平、细胞增殖活性及克隆形成数升高（P<0.05）;细胞凋亡率和细胞中Cyt C及Bax蛋白表达水平降低（P<0.05）。与空白组和miR-431-3p组比较,共转染组SGC-7901细胞中CTDP1和Bcl-2蛋白表达水平、细胞增殖活性及克隆形成数水平升高（P<0.05）,细胞凋亡率和细胞中Cyt C及Bax蛋白表达水平降低（P<0.05）。 结论 miR-431-3p过表达能抑制人胃癌细胞增殖,并促进细胞凋亡,可能是与靶向下调CTDP1基因表达有关。     

青藤碱联合氟尿嘧啶对人胃腺癌SGC7901细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨青藤碱联合氟尿嘧啶(5-Fu)对人胃癌SGC7901细胞增殖及Bcl-2、Bax和环氧化酶(COX)-2表达的影响。方法:体外培养人胃腺癌SGC7901细胞系,四甲基偶氮唑蓝法测定对照组、5-Fu组(5-Fu 50 mg/L)、青藤碱低浓度组(青藤碱 1.25 mmol/L)、青藤碱中浓度组(青藤碱2.5 mmol/L)、青藤碱高浓度组(青藤碱 5 mmol/L)及联合组(5-Fu 25 mg/L+青藤碱2.5 mmol/L)对SGC7901细胞增殖作用的影响;碘化丙啶染色流式细胞术检测细胞周期变化及凋亡率;免疫细胞化学法测定Bcl-2、Bax和COX-2蛋白表达情况。结果:青藤碱、5-Fu作用SGC7901细胞24、48和72 h后,青藤碱对人胃腺癌SGC7901细胞的增殖具有抑制作用,呈时间、浓度依赖性,与5-Fu联用后协同抑制细胞增殖(P<0.05～P<0.01);5-Fu组、青藤碱各浓度组及联合组的细胞凋亡率均较对照组明显增高(P<0.01),其中联合组均较单药组的凋亡率明显降低(P<0.01)。对照组Bcl-2和COX-2蛋白表达较明显,而青藤碱组、5-Fu组及其联合组染色减弱;与对照组差异均有统计学意义(P<0.05～P<0.01),其中联合组均较单药组阳性率明显降低(P<0.01)。对照组Bax蛋白表达较弱,青藤碱组、5-Fu组及其联合组阳性率相对增加;与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.01),且联合组均较单药组阳性率明显升高(P<0.01)。结论:青藤碱联合5-Fu对人胃腺癌SGC7901细胞增殖具有协同抑制作用,能够上调Bax表达,下调Bcl-2、COX-2表达,可能发挥增敏作用。     

黄独乙素对人胃癌SGC-7901细胞及其耐药细胞株体外抑制作用的研究

目的：研究黄独乙素（Diosbulbin B）对人胃癌SGC-7901细胞与其耐药细胞株的体外抑制作用。方法采用药物浓度递增法诱导人胃癌SGC-7901细胞,分别建立其顺铂、5-FU、阿霉素的耐药细胞株,应用MTT法检测黄独乙素对SGC-7901、SGC-7901/顺铂、SGC-7901/5-FU及SGC-7901/阿霉素的增殖抑制率,比较黄独乙素对以上四种细胞株的增殖抑制率是否有差异。结果黄独乙素对人胃癌SGC-7901细胞及其顺铂、5-FU、阿霉素耐药细胞株均表现出一定程度的剂量依赖性的增殖抑制作用（P＜0.05）,加入黄独乙素后人胃癌SGC-7901细胞的增殖抑制率与其顺铂、5-FU、阿霉素耐药细胞株的增殖抑制率近似（P＞0.05）。结论黄独乙素对人胃癌SGC-7901细胞株表现出较低的交叉耐药性,能够在该细胞对顺铂、5-FU、阿霉素产生耐药后同样发挥增殖抑制作用。     

沉默circPVT1对5-氟尿嘧啶耐药胃癌细胞化疗增敏作用及机制研究

目的:研究circPVT1对胃癌细胞5-氟尿嘧啶（FU）敏感性的作用及分子机制。方法:采用RT-PCR检测胃癌组织、胃癌细胞BGC823和5-FU抵抗胃癌细胞 BGC823/5-FU 中circPVT1的相对表达水平。沉默circPVT1,采用CCK-8试剂盒检测细胞活性,观察其对细胞活性的影响。采用克隆形成实验检测细胞克隆形成能力。采用TUNEL试剂盒和流式细胞仪检测细胞凋亡情况。采用RT-PCR和Western 印迹检测Bcl-2、Bax 和caspase-3基因mRNA和蛋白的表达水平。沉默circPVT1观察裸鼠皮下移植瘤生长。结果:在5-FU抵抗患者胃癌组织中circPVT1的表达水平明显高于5-FU敏感患者（P＜0.01）。与BGC823细胞相比,circPVT1在BGC823/5-FU细胞中的表达水平明显升高（P＜0.001）。下调circPVT1表达可增强5-FU的细胞毒性（P＜0.05）。与5-FU+si-NC组相比,5-FU+si-circPVT1组BGC823/5-FU细胞的克隆形成能力明显降低（P＜0.05）。5-FU+si-circPVT1组BGC823/5-FU细胞的凋亡数目明显高于5-FU+si-NC组（P＜0.01）。沉默circPVT1,与5-FU+si-NC组相比,5-FU+si-circPVT1组BGC823/5-FU细胞中Bcl-2的mRNA和蛋白表达水平明显降低,Bax和caspase-3的mRNA和蛋白表达水平明显升高（P<0.01）。裸鼠移植瘤实验结果显示,5-FU+si-circPVT1组移植瘤体积和重量明显低于5-FU+si-NC组（P＜0.05）。结论:沉默circPVT1可以通过调控Bcl-2、Bax和caspase-3的表达,增强BGC823/5-FU细胞对5-FU的敏感性。     

17肽胃泌素及其受体拮抗剂L-365260对人胃癌细胞株SGC-7901生长的影响

目的 旨在探讨17肽胃泌素(G-17)及L-365260对人胃癌细胞生长的影响及其作用机制。方法 采用G-17及L-365260作用于人胃癌细胞株SGC-7901,通过MTT活细胞染色法检测细胞增殖抑制率,流式细胞仪检测Bcl-2和Bax蛋白表达。结果 G-17在1×10-9～1×10-5mol/L浓度范围内对SGC-7901细胞有明显促进作用。L-365260在1×10-8～1×10-5mol/L浓度范围内对SGC-7901细胞有明显抑制作用。L-365260可明显抑制G-17对SGC-7901细胞的促生长作用。G-17可使SGC-7901细胞中的Bcl-2蛋白表达显著增加,对Bax蛋白无影响。L-365260不仅可使SGC-7901细胞中的Bcl-2蛋白表达显著减少,而且还可使Bax蛋白表达显著增加。结论 G-17对人胃癌细胞生长具有促进作用,而L-365260则对其具有抑制作用。上调Bcl-2蛋白表达,以抑制SGC-7901细胞凋亡可能是G-17促进胃癌细胞生长的机制之一。L-365260可能通过下调Bcl-2、上调Bax蛋白表达,诱导SGC-7901细胞凋亡,以抑制癌细胞生长。