二甲基亚砜对斑马鱼胚胎发育的影响

目的 以斑马鱼为模型,研究二甲基亚砜(DMSO)对斑马鱼胚胎发育的毒性效应.方法 将受精后3h的斑马鱼卵分别暴露于含有0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％、0.6％、0.7％((Ψ))DMSO试液中,观察不同浓度DMSO对鱼卵孵化率、死亡率及畸形情况的影响,评价DMSO对斑马鱼胚胎发育的毒性效应.结果 与对照组相比,在受精后24 h、48 h、72 h、96 h,DMSO浓度≤0.5％对斑马鱼胚胎无明显毒性效应;DMSO浓度≥0.6％时,斑马鱼胚胎在受精后48 h、72 h、96 h孵化率显著下降,死亡率增加并产生大量畸形.结论 用DMSO作为化合物的助溶剂研究化合物对斑马鱼胚胎发育的毒性效应时,应选择DMSO的浓度≤0.5％.     

四种有机溶剂对斑马鱼眼睛发育的影响

目的评估乙醇、异丙醇、丙酮和二甲基亚砜四种有机溶剂对斑马鱼胚胎发育,尤其是眼睛发育的影响,为其作为溶剂在斑马鱼眼睛疾病模型研究中提供参考。方法将发育至12 hpf斑马鱼胚胎暴露于0. 5%乙醇、1%异丙醇、1. 5%丙酮和2. 5%二甲基亚砜至72 hpf,观察其存活率、致畸率及眼睛发育状况。结果对照组和乙醇、异丙醇、丙酮、DMSO暴露组存活率分别为96%和93%、90%、90%、86%。对照组斑马鱼幼鱼形态正常,而有机溶剂暴露组则出现了不同程度形态变化如心包水肿、出血、卵黄缺损和身体弯曲等。其中,以DMSO致畸作用最严重,乙醇的致畸作用最弱。方差分析显示,斑马鱼幼鱼眼睛长度/身体长度比值在有机溶剂暴露组和对照组之间没有显著差异;但是DMSO暴露组斑马鱼幼鱼眼睛面积/身体面积比值显著低于其他组。另外与对照组相比,四种有机溶剂暴露组的视网膜分层均为正常,乙醇、异丙醇、丙酮暴露组视锥细胞、视杆细胞和视网膜神经元细胞信号正常,但DMSO暴露组各细胞信号均较弱。结论因此,在以斑马鱼为模型动物进行眼睛疾病的相关研究时,我们应谨慎选择有机溶剂作为药物或其他化学受试品的溶解载体,并且应该进行预实验来确定其最佳使用浓度。     

淫羊藿苷对受损斑马鱼胚胎血管发生的促进作用

目的 以损伤转基因斑马鱼胚胎为模型研究淫羊藿苷对受损血管发生的影响.方法 采用血管内皮生长因子受体抑制剂（VRI）制备斑马鱼胚胎的血管损伤模型,3h后给予不同浓度（30 100,300 μM）的淫羊藿苷处理24、48 h,之后对胚胎体节间血管和肠下静脉进行拍照并计数.结果 给予VRI作用3h后观察到受损血管数量不到10条.3个浓度的淫羊藿苷均可促进受损的斑马鱼血管发生,其促血管发生的作用在48 h时较为明显,100、300 μM的淫羊藿苷组体节间血管数量分别为22条和26条左右.结论 淫羊藿苷可促进受损的斑马鱼体节间血管和肠下静脉的发生.     

有机溶剂对肿瘤细胞的细胞毒作用

目的:为了给脂溶性的抗肿瘤药物筛选高溶解性、低细胞毒性的有机溶剂。方法:采用MTT法,研究了丙酮、甲醇、乙醇、DMSO(二甲基亚砜)、异丙醇及甘油等6种有机溶剂对U937(人白血病细胞株)、95D(猪肺癌细胞株)及AGS(人胃癌细胞株)三种细胞株的细胞毒性。结果:丙酮对三种细胞株的毒性较弱,在10%的体积分数时也没有明显的毒性,是一种良好的有机溶剂,甲醇在使用时体积分数应低于1%;对U937细胞,乙醇、甘油、异丙醇、二甲基亚砜(DMSO)的IC50分别为6.28%、5.98%、6.41%、14.18%,甲醇对U937细胞不成线性关系,在体积分数<1%时没有明显的细胞毒作用,当浓度达到3%以上时表现出明显的细胞毒作用;对95D细胞,甲醇、乙醇、甘油、异丙醇、DMSO的IC50分别为9.36%、3.23%、7.22%、1.13%、2.15%,对人AGS细胞株,甲醇、乙醇、甘油、异丙醇、DMSO的IC50分别为9.27%、2.52%、7.22%、1.13%、2.15%;结论:丙酮是脂溶性抗肿瘤药物的首选有机溶剂。     

17β-雌二醇对斑马鱼初期胚体节形成影响的研究

目的探讨17β-雌二醇(E2)对斑马鱼初期胚胎的毒性作用。方法用1．0、2．5、50、7．5、10、25、50μmol／L的E给受精后3h的斑马鱼胚染毒，进行形态学观察及原位杂交。结果胚胎在受精后48h，5．0、7．5、10、25、50μmol／L试验组的死亡率分别是0％、36％、6．4％、100％、100％。在7．5、10μmol／L染毒组出现脊柱弯曲、心囊水肿、血流停滞等畸形。使用MyoD探针．观察到体节数的减少及MyoD基因表达明显减弱。结论E2有致死、引起体节生成障碍，致使脊柱弯曲等致畸形作用。而且体节生成障碍可能是由于E2对MyoD基因的影响所致。     

MMP21基因表达下调对斑马鱼心脏环化的影响

目的 探讨基质金属蛋白酶21(matrix metallopeptidase 21,MMP21)基因表达下调对斑马鱼胚胎发育的影响.方法 在斑马鱼胚胎1～2细胞期采用显微注射吗啡啉反义寡核苷酸(morpholino antisense oligonucleotides,MO)的方法下调MMP21基因的表达.10体节期用RT-PCR方法检测MMP21-MO的有效性.设置0.5、0.75、1 mmol/L和1.5 mmol/L 4个不同浓度梯度的MMP21-MO注射组,以标准对照吗啡啉反义寡核苷酸(Con-MO)注射组和野生型(WT)组为对照.体视显微镜下观察各组斑马鱼胚胎发育情况,统计分析不同注射浓度斑马鱼胚胎死亡以及畸形数量.整胚原位杂交检测心脏特异性标志物(cardiac myosin light chain 2,cmlc2)在受精后28 h(hours post fertilization,hpf)及受精后48 h的表达,体视显微镜下观察受精后72 h斑马鱼胚胎心脏,分析各时间点斑马鱼心脏环化情况.通过计数各组斑马鱼胚胎受精后24、48及72 h心率和测量各组胚胎受精后72 h时心室收缩分数(ventricular shortening fraction,VSF),评价MMP21基因表达下调对斑马鱼心脏功能的影响.结果 MMP21-MO能够有效抑制MMP21基因的表达.MMP21-MO对斑马鱼胚胎发育的影响存在一定的剂量反应关系.1 mmol/L MMP21-MO注射组胚胎畸形率最高,死亡率较低,畸形主要表现为心前区水肿、心脏环化异常、心脏搏动减弱和心率减慢.整胚原位杂交结果显示MMP21基因的表达下调导致心脏特异标志物cmlc2 mRNA在受精后28 h和受精后48 h时期异常表达,提示心脏环化前期阶段(cardiac jogging)和心脏环化(cardiac looping)过程异常.受精后72 h体视显微镜下观察斑马鱼心脏形态同样发现MMP21-MO注射组斑马鱼心脏环化异常.与对照组比较MMP21-MO注射组胚胎心率减慢,心室收缩分数下降.结论 MMP21基因表达下调导致斑马鱼心脏环化异常及心功能受损,MMP21基因可能在斑马鱼心脏环化过程中发挥重要作用.     

二甲基亚砜、二甲基酰胺、甲醇、乙醇四种溶剂对Hela细胞培养干预效应研究

目的:观察二甲基亚砜(DMSO)、二甲基甲酰胺(DMF)、甲醇、乙醇四种常用有机溶剂对Hela细胞生存率的影响,为开展体外细胞干预实验研究选择溶剂种类和浓度提供参考。方法:采用MTT法检测四种溶剂各9个浓度下Hela细胞的存活率;在此基础上采用AnnexinⅤ-FITC/PI双标记流式细胞术,观察8种不同浓度的乙醇对Hela细胞凋亡的影响。结果:四种有机溶剂不同浓度时对Hela细胞生存率产生不同影响,DMSO最佳浓度为0.5%;DMF最佳浓度0.1%,甲醇的最佳浓度0.1%~0.5%;Hela细胞的存活率和凋亡结果均表明乙醇作为有机溶媒的最佳浓度0.25%。结论:DMSO、DMF、甲醇、乙醇四种溶剂对Hela细胞活性和生存率存在负向影响,程度从小到大依次为乙醇、DMSO、DMF、甲醇,用于体外细胞培养的浓度最大均不可超过0.5%;乙醇是体外细胞培养中较为理想的溶剂,但浓度不可超过0.25%,刺激时间不可超过12h。     

不同助溶剂作用下桉叶油对痤疮丙酸杆菌的作用

目的 观察不同助溶剂作用下桉叶油对痤疮丙酸杆菌的作用,为痤疮的治疗提供一定实验参考,同时为开发利用桉叶油资源提供支撑. 方法 采用平板牛津杯法及试管法,观察桉叶油在不同助溶剂作用条件下对痤疮丙酸杆菌的抑菌环直径及最低抑菌浓度. 结果 纯桉叶油(80%浓度)、桉叶油乙醇溶液(40%浓度)及桉叶油丙酮溶液(40%浓度)对痤疮丙酸杆菌能表现出完全抑菌作用, 平板上无细菌生长, 阳性对照药 (16 μg/mL 红霉素) 对痤疮丙酸杆菌平均抑菌圈直径为29.44 mm;助溶剂95%乙醇及丙酮对痤疮杆菌无抑菌作用;空白对照(蒸馏水)对痤疮丙酸杆菌无抑菌作用;当以丙酮为助溶剂时,桉叶油的最低抑菌浓度为浓度0.625%;当以95%乙醇为助溶剂时,桉叶油的最低抑菌浓度为1.25%.结论 桉叶油对痤疮丙酸杆菌有较好的抑菌作用;助溶剂95%乙醇、丙酮对痤疮丙酸杆菌无抑菌作用;助溶剂对桉叶油的最低抑菌浓度有一定的影响,丙酮为助溶剂时较95%乙醇为助溶剂时最低抑菌浓度低.     

吉非替尼对斑马鱼胚胎发育及肿瘤耐药基因表达的影响

目的 研究吉非替尼对斑马鱼早期胚胎发育及abcb4肿瘤耐药基因表达的影响.方法 实验动物采用斑马鱼,实验分为吉非替尼组、阿霉素和吉非替尼的混合液组、空白对照组.将吉非替尼稀释成不同浓度梯度的药液,分别处理受精后0.5～1.5 h(0.5～1.5 hpf)的斑马鱼胚胎,观察胚胎和幼鱼的死亡率、孵化率及畸形率变化.统计各浓度不同时间点的胚胎死亡率,计算出IC50的数值;统计48 hpf和72 hpf的胚胎孵化率及120 hpf的畸形率;收集不同组别的斑马鱼胚胎,通过实时荧光定量PCR,检测斑马鱼胚胎中abcb4基因的表达量.结果 计算出吉非替尼在斑马鱼胚胎中的IC50为16.18 μmol/L.与对照组比较,高剂量吉非替尼(≥20 μmol/L)显著抑制胚胎的孵化,并有明显的胚胎致死效应和致畸效应;吉非替尼组的斑马鱼胚胎abcb4基因的mRNA水平变化不显著,而阿霉素和吉非替尼的混合液组的abcb4基因的mRNA水平有明显变化(P＜0.05).结论 吉非替尼对斑马鱼早期胚胎中abcb4肿瘤耐药基因的表达水平无明显影响(P＞0.05),但是吉非替尼能逆转易耐药药物阿霉素的耐药作用,提示使用斑马鱼可以构建肿瘤耐药模型.     

核酸染料Goodview、Gelred和Gelsafe对斑马鱼胚胎发育的毒性作用

目的研究核酸染料Goodview、Gelred和Gelsafe对斑马鱼胚胎发育的影响。方法将受精后时间(hpf)为3hpf的斑马鱼胚胎随机分组,分别加入0、0.01%、0.02%、0.04%、0.08%、0.16%和0.32%浓度的Goodview、Gelred和Gelsafe 3种核酸染料,观察3种核酸染料对斑马鱼胚胎发育的影响,记录胚胎48 hpf心率,计算72和96 hpf孵化率,96 hpf死亡率及畸形率;同时观察了4、24和48 hpf 3种染料穿透胚胎膜的情况。结果 Goodview、Gelred和Gelsafe 3种核酸染料半数致死浓度(LC50)分别为0.037%、0.092%和0.130%。3种核酸染料0.04%～0.32%浓度组的胚胎48 hpf心率、72和96 hpf孵化率、96hpf死亡率和畸形率与对照组相比都存在显著差异,3种核酸染料96 hpf死亡率、72和96 hpf孵化率还存在剂量-效应关系。Gelsafe 0.08%～0.32%浓度组部分幼鱼出现心囊水肿和脊柱弯曲,0.32%Gelred组染毒后还出现眼点发育不全,Goodview0.04～0.16%浓度组部分幼鱼除心囊水肿和脊柱弯曲外,还出现尾部发育不全等畸形表征。0.01%Goodview 4 hpf能穿透胚胎膜进入胚胎内,随着浓度和时间增加,胚胎内荧光增强。而Gelred和Gelsafe 0.32%浓度下4 hpf未发现明显荧光蓄积点,24hpf和48 hpf仍未发现。结论 3种核酸染料对斑马鱼胚胎发育有毒性,随着使用浓度的增加毒性增加。