对氧磷酶1融合蛋白的表达及其生物活性

目的：利用家蚕表达系统表达含蛋白转导肽P11的人血清对氧磷酶1（paraoxonase 1,PON1）融合蛋白,并对其抗敌敌畏（dichlorvos,DDVP）毒性的生物活性进行初步研究。方法 P11-PON1融合基因构建于家蚕表达载体pFastBac 5B多克隆位点,转化家蚕DH10BmBac 感受态细胞,收集病毒粒子并感染家蚕5龄幼虫,感染96 h 后,收获蛋白;SDS-PAGE 电泳分析P11-PON1融合蛋白占家蚕总蛋白比例,计算蛋白含量;利用小鼠和斑马鱼鉴定P11-PON1融合蛋白抗DDVP毒性的生物活性;每只小鼠灌胃或直肠给P11-PON1融合蛋白1mg,给药后立刻和3 h后,腹腔注射DDVP溶液20 mg/kg,观察小鼠中毒状态,计算存活率;P11-PON1融合蛋白溶于斑马鱼养殖水中,浓度分别为1、2.5、5、10和20 mg/L,给药后立刻和3 h 后加入终浓度为50 mg/L的DDVP溶液染毒,观察斑马鱼的行为变化,计算存活率。结果成功表达了P11-PON1融合蛋白,该蛋白占家蚕5龄虫总蛋白的8%;灌胃给予P11-PON1融合蛋白没有提高染毒小鼠的存活率;直肠给药后立刻染毒也没有显著提高小鼠存活率,而直肠给药3 h后再腹腔注射DDVP染毒,小鼠存活率显著提高（P＆lt;0.01）;斑马鱼给予P11-PON1融合蛋白后立即染毒DDVP,斑马鱼存活率并没有显著性提高,而给予P11-PON1融合蛋白3 h后再染毒DDVP,斑马鱼存活率显著提高,其中融合蛋白20和10 mg/L组24 h存活率均为62.5%,5 mg/L组存活率为50%,与对照组相比,差异显著提高（P ＆lt;0.01）;2.5 mg/L组存活率为41.7%,与对照组相比差异有显著提高（P ＆lt;0.05）。结论家蚕能够表达P11-PON1融合蛋白,该融合蛋白提前给药能降低DDVP对小鼠和斑马鱼的毒性作用。     

致密砂岩气藏敏感性评价及机理探讨———以塔里木盆地B 区块致密气藏为例

致密砂岩气藏储量丰富, 但因其低孔低渗、高毛细管力、高黏土矿物含量、孔喉细小、非均质严重等特 点, 导致其易受到敏感性损害。目前对于致密砂岩气藏敏感性评价手段尚未成熟。以塔里木盆地B 区块致密砂岩气藏为 例, 应用岩心流动实验, 开展模拟高温地层条件下的敏感性评价。结果表明, 该区块敏感性主要表现为弱速敏损害、中 等偏强水敏损害、中等偏弱盐敏损害、中偏弱碱敏损害、弱酸敏损害、强应力敏感损害的特点。同时利用X—衍射、扫 描电镜、铸体薄片等测试手段, 分析B 区块致密气藏矿物类型、含量、形态及分布特征, 认为B 区块敏感性的成因机理 在于储层敏感性矿物及微观孔喉结构。     

复智散对阿尔采末病模型小鼠治疗作用的研究

目的观察复智散(FZS)对Aβ25-35诱导的阿尔采末病(AD)模型小鼠的治疗作用。方法Aβ25-35侧脑室注射制作AD小鼠模型,以不同剂量的FZS灌胃治疗,通过Morris水迷宫和小鼠穿梭程序自动控制仪检测小鼠的认知功能,采用比色法测定小鼠脑内胆碱乙酰基转移酶(ChAT)、乙酰胆碱酯酶(AChE)活性及乙酰胆碱(ACh)含量。结果不同剂量的FZS不仅对AD小鼠的认知功能有明显的改善作用,且能增加AD小鼠脑内的ChAT活性及ACh含量,并降低AChE活性。结论FZS在1.25~10g·kg-1剂量范围内均有治疗小鼠AD的作用,但用1.25g·kg-1剂量时治疗效果最佳。     

细辛脑对斑马鱼胚胎发育及运动行为的影响

目的：研究细辛脑对斑马鱼胚胎发育及运动行为的影响。方法以受精后3h（hpf）斑马鱼胚胎为实验模型,分别暴露于不同浓度（25、50、100、200和400μmol/L）细辛脑溶液中,以不加细辛脑为对照组,每隔24 h更换1次细辛脑溶液,分别在24、48、72和96 hpf等时间点用显微镜观察班马鱼胚胎发育形态,记录24 hpf胚胎自主抽动次数,48 hpf心率、畸形率和死亡率,72和96 hpf孵化率和死亡率,利用RT-qPCR检测96 hpf斑马鱼胚胎Sepn1基因表达情况,采用Noldus斑马鱼幼鱼行为视频跟踪系统评价细辛脑暴露对幼鱼运动行为的影响。结果细辛脑各实验组斑马鱼胚胎自主抽动次数随浓度增加而降低,100、200和400μmol/L组与对照组相比有极显著性统计学差异（P＜0.01）;细辛脑各实验组斑马鱼48 hpf心率显著降低,与对照组相比均有显著统计学差异（P＜0.01）;72和96 hpf斑马鱼幼鱼出现了脊柱弯曲、心包水肿、卵黄囊水肿等畸形形态;与对照组相比,100、200和400μmol/L组96 hpf孵化率均下降,具有显著性统计学差异（P＜0.01）;与对照组相比,400μmol/L组死亡率降低,有统计学差异（P＜0.05）;随着细辛脑浓度增加,96 hpf斑马鱼幼鱼运动速度和距离明显减小,200和400μmol/L组与对照组相比均有统计学差异（P＜0.05）;同时200和400μmol/L浓度组活跃度降低,与对照组相比具有显著差异（P＜0.01）;96 hpf时,细辛脑各浓度组胚胎Sepn1基因表达下降,其中100μmol/L组与对照组相比有统计学差异（P＜0.05）,而200和400μmol/L组与对照组相比差异更显著（P＜0.01）。结论细辛脑对斑马鱼胚胎和幼鱼有致畸作用,并且影响其运动行为,建议婴幼儿慎用细辛脑。     

重离子辐射对免疫系统影响的研究进展

重离子是原子序数≥2的原子被剥掉或部分剥掉外周电子后带正电荷的原子核,它主要来自于太阳系外的带电粒子。虽然重离子占宇宙射线的比例只有1%,但由于它能够形成Bragg峰,产生巨大的能量沉积,因此对较为敏感的免疫器官所造成的生物学效应要比电磁辐射等射线严重得多。本文主要简述了重离子对免疫器官、免疫细胞及染色体等几个方面的生物学效应,为研究重离子辐射对免疫系统的影响提供参考。     

血脑屏障分子组成研究进展

血脑屏障（BBB）是维持脑内环境稳定和避免有害物质入侵脑组织所必须的膜性结构。脑微血管内皮细胞之间的紧密连接是BBB的结构基础,是保持BBB完整性的重要因素。紧密连接结构是由胞浆黏附蛋白、claudin、occludin、连接黏附分子和tricellulin共同组成的。外伤、缺血、缺氧、感染、免疫及理化因素等均可能引起紧密连接结构及功能发生改变,造成BBB损害,导致BBB的通透性升高,进而引起脑水肿。本文拟对血脑屏障的分子组成研究进展进行综述。     

毒物及化学战剂快速检测的最佳动物模型

化学武器扩散和国际恐怖活动日益猖獗,毒物形式多种多样,且有由高浓度向低浓度,急性毒性向慢性毒性方向发展的趋势,引起了国际社会的强烈不安。为此世界各国愈发重视毒物、化学战剂快速检测技术及其防治药物的研究和开发。急需灵敏、高效、快速检测的动物模型进行评价。斑马鱼是近年来发展起来的脊椎模式生物。斑马鱼卵体及幼鱼透明,荧光染色或使用其它标记物标记可使细胞观察得更清楚。可观察到原肠期的细胞运动、脑区的形成和心跳等胚胎发育情况,发育异常的突变体也很容易被鉴别出来。全胚组织标本制作及全胚原位杂交都可以在胚胎上实施。斑马鱼胚胎发育快（从受精到孵出大约3 d）,且源于同一母体的胚胎是同步发育的,易于大量收集特定阶段的同期胚胎材料。斑马鱼具有其他生物无可比拟的优势：① 斑马鱼核苷酸序列分析基本完成,中枢神经系统、内脏器官、血液以及视觉系统在分子水平上与人有很高的同源性;② 疾病表达的相关基因与许多脊椎动物相同;③ 全年产卵、体积小,作为胚胎发育模型有丰富的研究背景;④ 使用斑马鱼胚对母体无任何影响,早期身体透明,可对发育过程直接观察;⑤ 斑马鱼胚胎和幼鱼对毒物、药物非常敏感,极微量就会有反应,最小检出量在ng[DK]·L-1级;⑥ 简便易行,只需将被检测物质放入养殖胚胎的水中或快速注射;用量很少;测试周期短;测试样本数可以很大,可以作为毒物、化学战剂的高通量筛选,以确保统计学意义上的显著性。为此,经济合作发展组织(OECD)将斑马鱼列为了健康毒性和环境毒性检测的标准鱼类。国际标准组织(ISO)已将斑马鱼推荐为河水毒性实验鱼种并制定了相应的标准(ISO07346)。利用转基因斑马鱼检测毒物或化学战剂。将毒物或化学战剂作用斑马鱼,找到差异表达基因,将靶基因及其启动子和增强子序列与荧光蛋白基因连接构建转基因斑马鱼,当毒物或化学战剂作用该斑马鱼后,荧光会变化从而显示毒性。国外已有利用芳烃受体、亲电子受体、金属等效应元件与荧光蛋白基因连接构建转基因斑马鱼,当转基因斑马鱼遇到相应物质就会发射荧光,用于检测相应环境毒物,被誉为环境检测“哨兵”和“生态灯泡”。毒物和化学战剂检测及识别能力研究,着重发展灵敏度高、识别能力强、假阳性率低、准确、特异、快速的检测和报警技术。基于斑马鱼上述特点,利用斑马鱼进行毒物和化学战剂的毒性评价,更具优势,是毒物和化学战剂毒性检测的新技术。     

核酸染料Goodview、Gelred和Gelsafe对斑马鱼胚胎发育的毒性作用

目的研究核酸染料Goodview、Gelred和Gelsafe对斑马鱼胚胎发育的影响。方法将受精后时间(hpf)为3hpf的斑马鱼胚胎随机分组,分别加入0、0.01%、0.02%、0.04%、0.08%、0.16%和0.32%浓度的Goodview、Gelred和Gelsafe 3种核酸染料,观察3种核酸染料对斑马鱼胚胎发育的影响,记录胚胎48 hpf心率,计算72和96 hpf孵化率,96 hpf死亡率及畸形率;同时观察了4、24和48 hpf 3种染料穿透胚胎膜的情况。结果 Goodview、Gelred和Gelsafe 3种核酸染料半数致死浓度(LC50)分别为0.037%、0.092%和0.130%。3种核酸染料0.04%～0.32%浓度组的胚胎48 hpf心率、72和96 hpf孵化率、96hpf死亡率和畸形率与对照组相比都存在显著差异,3种核酸染料96 hpf死亡率、72和96 hpf孵化率还存在剂量-效应关系。Gelsafe 0.08%～0.32%浓度组部分幼鱼出现心囊水肿和脊柱弯曲,0.32%Gelred组染毒后还出现眼点发育不全,Goodview0.04～0.16%浓度组部分幼鱼除心囊水肿和脊柱弯曲外,还出现尾部发育不全等畸形表征。0.01%Goodview 4 hpf能穿透胚胎膜进入胚胎内,随着浓度和时间增加,胚胎内荧光增强。而Gelred和Gelsafe 0.32%浓度下4 hpf未发现明显荧光蓄积点,24hpf和48 hpf仍未发现。结论 3种核酸染料对斑马鱼胚胎发育有毒性,随着使用浓度的增加毒性增加。     

细胞穿透肽介导外源物质入胞转运研究进度

细胞穿透肽(cell-penetrating peptides, CPP)是一类能够携带外源物质进入细胞的多肽,因其结构和功能的独特性和实用性,近20年里在生物医学领域得到了长足的发展。目前CPP向体内和体外输送物质的方法逐渐成熟。在基础研究领域,已成为研究细胞内分子相互作用的有用工具;在应用方面,CPP药物已进入临床前、临床Ⅰ和Ⅱ期试验,在肿瘤、中枢神经系统疾病和心血管疾病的治疗中显示出明显优势。本文对CPP的发展历程、分类、入胞机制和应用等做一综述。     

敌腐特灵洗消剂对氨水灼伤大鼠皮肤的应急洗消效果

目的评价敌腐特灵对受氨水喷溅的大鼠皮肤的洗消效果。方法将不同剂量敌腐特灵皮肤洗消剂与1.0 mL的1 mol/L氨水混合,利用pH计测定氨水溶液的pH值以观察中和作用;大鼠皮肤以25.0%氨水各灼伤1 min、2 min、5 min后,分别用250 mL生理盐水、敌腐特灵、硼酸溶液进行洗消,观察不同洗消剂洗消后24 h皮肤损伤情况,每组大鼠均随机分为10只。结果敌腐特灵皮肤洗消剂对氨水具有快速高效的中和作用。氨水滞留皮肤1 min后进行洗消,各洗消剂均具有较好洗消效果,皮肤平均损伤反应分值在各组间比较,差异无统计学意义(F=0.462,P0.05);氨水滞留皮肤2 min时进行洗消,敌腐特灵较硼酸溶液、生理盐水具有更好的减轻皮肤损伤作用,组织病理学观察敌腐特灵洗消后皮肤损伤明显减轻。三组溶液洗消后皮肤平均损伤反应分值分别为0.48±0.44、1.22±0.97、4.78±0.67,皮肤经敌腐特灵洗消后的分值与其他两组相比,差异有统计学意义(q=-3.130,P0.05;q=17.441,P0.01);氨水滞留皮肤5 min后进行洗消,皮肤平均损伤反应分值在各组间比较,差异无统计学意义(F=0.412,P0.05)。结论敌腐特灵皮肤洗消剂对氨水具有快速、高效的中和作用,早期迅速应用能明显减轻皮肤损伤。