雷帕霉素对多柔比星诱导的大鼠肾纤维化模型肾组织趋化因子受体CCR7表达的影响

目的 观察雷帕霉素(RAP)对多柔比星诱导大鼠的肾纤维化模型中肾组织内趋化因子受体CCR7表达的影响,探讨该药对慢性肾纤维化大鼠肾脏保护作用及可能的机制.方法 28只大鼠随机分为:正常对照组(A组,8只)、多柔比星肾病模型组(B组,10只)、RAP治疗组(C组,10只).实验开始第1、2周的第1天,给予B、C组大鼠多柔比星(4 mg/kg)尾静脉注射.自首次注射多柔比星之日起第2周末,C组给予RAP 1.5 mg/(kg·d)灌胃.首次给予多柔比星后7周末收集24 h尿标本后取肾组织标本.BCA法检测24 h尿蛋白,Masson染色并在光镜观察肾组织病理变化,使用肾小球硬化指数及肾小管间质损伤指数评估肾脏病变程度;免疫组化检测肾组织内Ⅰ型胶原、CD45和CCR7蛋白表达.结果 B组24 h蛋白尿排出量明显高于A组[(568±102)mgvs(23±7)mg,P＜0.01],光镜观察到肾小球系膜基质明显增多,肾小管多灶性萎缩和扩张,管腔内可见蛋白管型,大量炎症细胞浸润,免疫组化检测Ⅰ型胶原、CD45和CCR7蛋白表达明显高于A组(P＜0.01);C组肾小球硬化指数、肾小管间质损伤指数,24 h蛋白尿排出量明显低于B组(P＜0.01),Ⅰ型胶原、CD45和CCR7蛋白表达显著降低(P＜0.01),肾组织病理改变减轻.结论 RAP可改善大鼠多柔比星诱导的肾纤维化,机制可能与抑制CCR7受体表达有关.     

足细胞损伤在多柔比星肾损害大鼠病程中变化及意义

目的 通过检测肾组织WT-1的表达变化来动态观察多柔比星肾纤维化大鼠足细胞的数目的变化,探讨其与蛋白尿和肾纤维化发展的时效量效关系.方法 36只SD大鼠随机分为模型组和对照组,尾静脉注射多柔比星建立多柔比星肾纤维化大鼠模型,首次注射多柔比星起,第4、7、10、13周每组处死模型组大鼠5只和对照组4只,留取肾脏标本,应用光镜、电镜观察肾组织的病理改变,BCA法检测24 h尿蛋白排泄率,免疫组化和Western blot的半定量方法检测大鼠肾皮质中WT-1蛋白的表达.结果 第4周开始,肾纤维化组大鼠蛋白尿显著高于对照组(P＜0.01),肾脏病理在第7周时出现局灶肾小球硬化,第10周时呈典型肾小球硬化,第13周时出现广泛的肾小球硬化和小管间质纤维化.随着模型组大鼠肾组织病理改变逐步加重及尿蛋白量逐渐增加,肾皮质WT-1蛋白的表达量逐渐减少,第4、7、10、13周分别较对照组下降24%、42%、56%、 70%.结论 足细胞相对密度及相对数量的减少与蛋白尿的严重程度成正比,并与肾纤维化的发展呈时间依赖性.     

肝细胞生长因子及其受体在蛋白尿慢性肾纤维化大鼠肾组织中表达的动态变化

目的 探讨蛋白尿慢性肾纤维化大鼠肾组织中肝细胞生长因子(HGF)及其受体c-Met表达和意义.方法 36只♂ SD大鼠随机分为对照组和蛋白尿慢性肾纤维化组,应用多柔比星(4 mg/kg)尾静脉注射1周后重复的方法建立大鼠蛋白尿慢性肾纤维化模型,分别于第1次多柔比星注射后第4、7、10、13周末收集标本,观察大鼠24 h尿蛋白、血清白蛋白(ALB)、血甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)及病理变化.应用Western blot与免疫组化技术分别检测肾组织HGF及c-Met蛋白表达.结果 ①模型组大鼠24 h尿蛋白、ALB、TG、TC明显高于对照组(P＜0.01).②4周末时模型组尿蛋白较对照组明显增多,随着病程进展,肾小球硬化程度加重,第7周肾小球硬化呈局灶节段性分布,肾小球肥大,肾小囊扩张,肾小球有不同程度的硬化,间质可见明显纤维化和局灶件炎细胞.10周及13周肾纤维化程度及面积加重.③肾脏HGF及c-Met表达4周时较对照组增加(P＜0.01),7周时开始降低,并随病程呈进一步降低.结论 肾纤维化过程中,肾脏HGF及c-Met的表达早期上升是一种有益的防御反应;后期HGF、c-Met表达逐渐降低,肾纤维化逐渐发展.肾脏HGF及c-Met表达的下降可能是慢性肾纤维化发展的机制之一.     

Dynamic changes of Nephrin expression in rats with chronic proteinuria renal fibrosis

目的 检测蛋白尿多柔比星肾损伤大鼠足细胞相对数目及Nephrin的表达变化,探讨Nephrin表达变化在蛋白尿发生发展中的意义.方法 36只雄性SD大鼠随机分为对照组(n=16)和模型组(n=20),应用多柔比星(4 mg/kg)尾静脉注射、一周末后重复的方法建立大鼠蛋白尿慢性肾纤维化模型,于第1次注射多柔比星后4、7、10、13周末收集标本,观察大鼠24 h尿蛋白、血生化指标等,光镜、电镜观察肾组织的病理改变,Western blot检测大鼠肾皮质中Nephrin蛋白的表达,免疫组化观察Wilm肿瘤蛋白1(WT1)表达.结果 ①第4周末开始,模型组大鼠蛋白尿显著高于对照组(P<0.01).②肾脏病理在第7周末时出现局灶肾小球硬化,第13周末肾小球呈明显硬化表现,第10周末见足细胞脱离基底膜.③肾皮质WTl蛋白的表达量逐渐减少,但肾脏Nephrin蛋白表达4周末时较对照组增加(P<0.01),7周末后逐渐降低.结论 足细胞相对密度及相对数量的减少可能是蛋白尿发生、发展的重要因素,病程中Nephrin蛋白表达量呈先升后降的变化趋势,疾病早期其表达增加可能是足细胞抵抗损伤的一种代偿反应.     

蛋白尿慢性肾纤维化大鼠肾组织Nephrin蛋白表达动态变化

目的检测蛋白尿多柔比星肾损伤大鼠足细胞相对数目及Nephrin的表达变化,探讨Nephrin表达变化在蛋白尿发生发展中的意义。方法 36只雄性SD大鼠随机分为对照组(n=16)和模型组(n=20),应用多柔比星(4 mg/kg)尾静脉注射、一周末后重复的方法建立大鼠蛋白尿慢性肾纤维化模型,于第1次注射多柔比星后4、7、10、13周末收集标本,观察大鼠24 h尿蛋白、血生化指标等,光镜、电镜观察肾组织的病理改变,Western blot检测大鼠肾皮质中Nephrin蛋白的表达,免疫组化观察Wilm肿瘤蛋白1(WT1)表达。结果①第4周末开始,模型组大鼠蛋白尿显著高于对照组(P<0.01)。②肾脏病理在第7周末时出现局灶肾小球硬化,第13周末肾小球呈明显硬化表现,第10周末见足细胞脱离基底膜。③肾皮质WTl蛋白的表达量逐渐减少,但肾脏Nephrin蛋白表达4周末时较对照组增加(P<0.01),7周末后逐渐降低。结论足细胞相对密度及相对数量的减少可能是蛋白尿发生、发展的重要因素,病程中Nephrin蛋白表达量呈先升后降的变化趋势,疾病早期其表达增加可能是足细胞抵抗损伤的一种代偿反应。     

树突状细胞在多柔比星诱导的大鼠肾纤维化模型中的作用

目的 以多柔比星诱导肾纤维化大鼠为对象,探讨树突状细胞(DC)在慢性肾纤维化启动过程中的作用.方法 52只大鼠随机分为:对照组(n=20)、模型组(n=32).于第1、2周第1天给予多柔比星(4 mg/kg)尾静脉注射建立肾纤维化模型,对照组给予等量生理盐水,首次给药后第4、7、10、13周末收集血、尿标本,测定血甘油...     

肾茶联合泼尼松对多柔比星肾病大鼠核因子-KB、白介素-8水平的干预研究

目的：通过现察多柔比星肾病大鼠核因子-KB、白介素-8水平变化,探讨肾茶联合泼尼松对肾病综合征的保护机制.方法：50只雄性Wistar大鼠随机分为正常组,模型组,肾荼组及肾荼与泼尼松联合治疗组.除正常组大鼠外单次尾静脉注射多柔比星5mg/kg来制备肾病模型,用酶联免疫吸附法检测核因子-KB、白介素-8.结果：各组大鼠尿蛋白、核因子-KB及白介素-8均明显高于正常组（P＜0.01）;肾荼组和联合治疗组的尿蛋白、核因子-KB及白介素-8均低于肾病组（P＜0.01）,但联合治疗组降低更明显,与肾茶组比较差异有显著性（P＜0.01）.结论：肾荼与泼尼松联合治疗组可有效降低核因子-KB和白介素-8水平,其机制可能通过下调核因子-KB和白介素-8表达,从而对多柔比星肾病大鼠起保护作用.     

前列腺素E1脂微球载体制剂对多柔比星肾病大鼠结缔组织生长因子表达的影响

目的研究多柔比星肾病大鼠肾组织中结缔组织生长因子(CTGF)表达,同时探讨前列腺素E1脂微球载体制剂(Lipo-PGE1)对其表达的影响.方法 将24只雌性SD大鼠(体重180～200 g)随机分为对照组、多柔比星肾病模型组和多柔比星肾病Lipo-PGE1治疗组3组.采用尾静脉一次性注射多柔比星7.5 mg/kg的方法建立多柔比星肾病动物模型,第8周开始Lipo-PGE1治疗组给予尾静脉注射Lipo-PGE1,用量200 μg/(kg*d).10周后处死全部大鼠,并观察肾组织病理改变,应用免疫组织化学方法和原位杂交技术检测CTGF在肾组织中的表达. 结果 Lipo-PGE1治疗组大鼠肾小球硬化及基质增生程度比多柔比星肾病组明显减轻,免疫组织化学染色及原位杂交结果显示多柔比星肾病组较正常对照组肾小球和肾小管区CTGF蛋白及CTGFmRNA表达量明显增加(P<0.05).Lipo-PGE1治疗组肾小球和肾小管间质CTGF蛋白及CTGFmRNA表达量明显低于多柔比星肾病组(P<0.05).结论 多柔比星肾病组大鼠第10周肾小球及肾小管间质尤其是肾小管间质区CTGF蛋白及CTGFmRNA表达量明显增加.Lipo-PGE1延缓多柔比星肾病肾损害,其机制可能与通过下调CTGF的表达有一定关系,并且可能通过减少肾小球内细胞增生和细胞外基质(ECM)沉积,延缓慢性肾脏疾病的进展.     

人参皂苷Rg1对多柔比星肾病大鼠足细胞nephrin的影响

目的足细胞的损伤是蛋白尿发生的主要机制,如何修复受损的足细胞已成为研究热点。文中观察人参皂苷Rg1对足细胞病变模型———多柔比星肾病模型的疗效及其对足细胞病变的影响。方法采用单次尾静脉注射盐酸多柔比星建立多柔比星肾病模型。SD大鼠分为空白对照组、模型组、人参皂苷Rg1高剂量组和低剂量组,分别在注射后第7、14、28天收集尿液标本,并处死大鼠,留取肾组织标本。检测24 h尿蛋白排泄量、血生化指标,行肾组织光镜和电镜观察肾小球病变和足突超微结果。采用定量学方法测定足突宽度。免疫组化观察足细胞裂孔膜分子nephrin表达和分布变化。结果人参皂苷Rg1低剂量组和高剂量组均能改善多柔比星肾病大鼠的肾病综合征状况。同时,人参皂苷Rg1低剂量组和高剂量组能明显改善足突融合,增加足细胞裂孔膜分子nephrin表达(P<0.05)。人参皂苷Rg1高剂量组在血生化、肾脏病理和足细胞nephrin的表达上比人参皂苷Rg1低剂量组的改善更加明显(P<0.05)。结论人参皂苷Rg1对多柔比星肾病模型有很好的保护作用,而且人参皂苷Rg1高剂量组比低剂量组治疗作用更明显。     

Effects of Blood Glucose Control on Expression of PTEN and Fibrotic Lesions in Renal Tissue of Diabetic Rats

目的:观察控制血糖前后糖尿病(DM)大鼠肾组织第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源基因(PTEN)表达变化,探讨PTEN与肾小管上皮细胞向间充质细胞的转化(EMT)的关系及控制血糖对PTEN表达及肾纤维化病变的影响.方法:SD大鼠随机分为正常对照组(N)、糖尿病组(DM)、胰岛素治疗组(DMA),尾静脉注射STZ复制DM模型,于成模13周起,DMA组大鼠采用胰岛素个体化治疗,以血糖控制在4～7mmol/L,尿糖阴性为准,分别于16周和24周时处死各组大鼠.生化方法测血糖、血肌酐和24h尿蛋白;观察肾脏病理改变;免疫组织化学和Western blotting检测各组大鼠肾组织PTEN、CollagenⅣ、FN、E-cadherin和α-SMA蛋白的表达;RT-PCR检测PTENmRNA的表达.结果:与N组相比,不同时间点DM组大鼠血糖、血肌酐、24h尿蛋白明显增多(P＜0.05),并出现肾组织纤维化改变;而DMA组大鼠血糖、血肌酐、24h尿蛋白均显著低于DM组(P＜0.05),肾纤维化病变明显改善;不同时间点的DM组大鼠肾组织PTEN蛋白和mRNA的表达均较N组明显减少(P＜0.05),并伴有E-cadherin的表达减少(P＜0.05),α-SMA表达增加(P＜0.05),CollagenⅣ和FN蛋白的沉积增多(P＜0.05);而与DM组相比,DMA组大鼠肾组织PTEN蛋白和mRNA表达均明显增加(P＜0.05),且E-cadherin的表达增加(P＜0.05),α-SMA表达减少(P＜0.05),CollagenⅣ和FN在间质的沉积减少(P＜0.05).结论:控制血糖能上调肾小管上皮细胞PTEN的表达,同时能减少肾小管上皮细胞EMT及肾间质ECM沉积,改善肾纤维化病变.