蔗糖磷酸缓冲液对组织标本中RNA的保护作用

目的探讨蔗糖磷酸缓冲液作标本保存剂对组织标本中核酸的影响。方法分别用25％蔗糖磷酸缓冲液，10％中性甲醛(40℃-100~C)固定保存小鼠组织4—48h后，检测其组织结构及RNA完整性和特异性扩增产物。结果组织经25％蔗糖磷酸缓冲液保存，冰冻切片HE染色后组织结构清晰；从中提取的RNA完整性与立即冰冻保存的组织无明显区别。结论25％蔗糖磷酸缓冲液固定标本48h，既能保持组织结构完整又不影响组织标本的RNA提取和扩增。     

从磷酸蔗糖固定OCT包埋冰冻5年的组织中提取RNA

目的磷酸蔗糖固定后OCT包埋冰冻保存5年的组织中提取RNA。方法小鼠的脑、肝、肾等组织,经25%蔗糖磷酸缓冲液固定12~24h后,制备成OCT包埋块,在-20℃冰箱中保存5年后,取出冰冻的OCT包埋组织进行RNA提取,用凝胶电泳、紫外分光光度计及RT-PCR等方法检测所提取的RNA。结果从经25%蔗糖磷酸缓冲液固定冰冻保存5年OCT包埋组织中能提取RNA,所提RNA仍保持较好的完整性,可用于进行RT-PCR,并能扩增出较长的片段。结论从25%蔗糖磷酸缓冲液固定OCT包埋的冰冻时间较长的组织标本中可提取组织RNA,并用于进行RT-PCR扩增。     

病毒感染组织标本保存方法的初探

目的 :探讨病毒组织标本的流行病现场保存方法。方法 :用 2 5 %蔗糖磷酸缓冲液、10 0 %甲醇、70 %乙醇、10 0 %丙酮及 4 %PFA 5种固定剂在室温下固定 76 118株接种的乳鼠内脏。检测其组织结构和总RNA完整性及RT PCR特异性扩增产物。结果 :经 2 5 %蔗糖磷酸缓冲液和 4 %PFA固定 2 4h的石蜡切片 ,组织结构完整清晰 ,其他3种固定剂固定后组织有不同程度收缩 ,其中甲醇固定的收缩程度最小。立即冰冻、2 5 %蔗糖磷酸缓冲液固定保存4 8h、10 0 %甲醇固定 2 4h ,总RNA完整性无损伤 ;70 %乙醇、10 0 %丙酮固定 12h及 4 %PFA固定 4h ,RNA的完整性就开始出现不同程度的损伤。从 2 5 %蔗糖磷酸缓冲液、甲醇、丙酮固定保存 4 8h ,70 %乙醇固定保存 2 4h以及 4 %PFA固定保存 12h的标本中都能用巢式RT PCR扩增出病毒RNA的特异性产物 ;与 2 5 %蔗糖磷酸缓冲液、甲醇相比 ,丙酮固定 4 8h扩增带很弱。结论 :固定剂和固定持续时间的不同对病毒感染组织标本产生不同的影响。 2 5 %蔗糖磷酸缓冲液和甲醇能同时保存好组织结构和核酸的完整 ,在临床或流行病现场采样时 ,应根据研究目的结合其它方法综合运用。     

RNAlater在保存甲状旁腺腺瘤中的研究和探索

目的 探讨不同保存方法对甲状旁腺组织保存的影响,为组织库规范化建设提供理论支持.方法 收集北京协和医院2010年8月至2011年11月的散发甲状旁腺腺瘤组织共22例标本,所有标本均经手术病理证实,其中11例标本用传统液氮法保存（A组）,另11例标本用RNAlater保存（B组）,分别提取组织总RNA,测定OD 260/OD 280值;进行RNA质量评价,琼脂凝胶电泳判断RNA完整性;分别利用Realtime-PCR技术检测内参基因β-actin的表达情况.结果 在RNA的提取纯度和浓度及RNA完整性方面对比2组标本结果差异无统计学意义（P＞0.05）;B组内参基因β-actin的表达量明显高于A组（P＜0.05）.结论 RNAlater在保存RNA和预防RNA降解方面和传统液氮法相比无明显差异,但RNAlater保存法对于长期保存组织标本方面优于传统液氮法.     

血液标本不同保存时间及条件对生化检测结果的影响

目的:探讨血液标本不同保存条件下对生化检测结果的影响。方法:随机选取200份在我院体检的健康者血液标本,每名健康者抽取静脉血两管,每管5 m L,离心后任意取1管上机测定作为对照值,最后分别将两管放入4℃和25℃条件下保存,分别放置12、24、48和72 h测定1次。结果:4℃条件下保存的标本,保存12 h和24h各项检测项目与对照值比较,差异无统计学意义(P>0.05),保存48、72 h后除尿酸(UA)有明显改变外(P<0.05),其他检测项目与对照值比较差异无统计学意义(P>0.05);25℃保存条件下,保存48、72 h后总胆红素(TB)、直接胆红素(DB)、尿酸(UA)、甘油三脂(TG)和肌酸激酶(CK)有明显改变(P<0.05),而其他检测项目与对照值比较差异无统计学意义(P>0.05);根据UA、TB、DB、TG和CK方法学允许误差范围可见,4℃保存48 h和72 h后UA结果未超出实验室可接受范围;25℃保存48 h和72 h后UA、TB、DB、TG和CK结果超出实验室可接受范围。结论:血液标本保存的温度和时间对生化检验结果的准确性有影响,在4℃条件下血液标本至少可稳定保存72 h。     

离心前保存和冷冻保存时间对HCV RNA含量的影响

目的:探讨标本离心前保存和冷冻保存时间对丙型肝炎病毒（HCV）核糖核酸（RNA）含量的影响。方法:筛选高、低载量的HCV RNA 反应性标本各一个,接驳混匀其血浆和浓缩红细胞,从混匀好的2个血袋中各留取48支试管,每12管为一组,分为离心前保存0、4、8、24 h组,比较离心后各组间HCV RNA检测结果。挑选HCV RNA 反应性标本一个,从其浆袋中留取32支试管冷冻保存,每8管为一组,分为冷冻保存1、7、30、40 d组,比较各组间HCV RNA检测结果。结果:4℃保存条件下,高、低载量组在离心24 h内各个时间段的HCV RNA含量差异无统计学意义（P>0.05）,但各时间点高载量组HCV RNA含量明显高于低载量组（P<0.01）;-20℃保存条件下,40 d内不同冷冻保存时间HCV RNA含量差异亦无统计学意义（P>0.05）。结论:血站核酸检测标本4℃保存可在24h内离心,-20℃保存可在40d内完成检测。     

标本保存条件对血液病患者网织红细胞参数测定的影响

目的探讨不同保存条件对血液病患者网织红细胞参数测定的影响。方法观察不同温度、不同时间、不同容器保存的血液标本网织红细胞计数和"分群"的变化。结果 2~8℃保存标本,网织红细胞计数值72 h内无明显变化,未成熟网织红细胞指数(IRF)48 h后逐渐降低;室温保存标本,网织红细胞计数值48 h后逐渐降低,增生性贫血患者IRF 48 h后逐渐降低,白血病患者IRF 24 h后逐渐降低。两种EDTA-K2抗凝管采集的血液标本网织红细胞各参数均无明显变化。结论标本保存的温度及时间对血液病患者网织红细胞计数及IRF均存在影响;两种采血容器对网织红细胞各参数测定无明显影响。     

改良AMU多器官保存液家兔多器官保存效果的形态学评价

目的：研制适合国内自行配制，降低成本，增加保存效果同时方便储存、运输和使用的长效而广谱的多器官保存液。方法：改进的三磷酸腺苷-氯化镁-尿激酶(AMU）保存液组成主要包括：乳糖醛酸（100 mmol/L）、三磷酸腺苷二钠(5 mmol/L)、氯化镁（5 mmol/L）、磷酸二氢钾（25 mmol/L）、蔗糖(60 mmol/L)、低分子右旋糖酐-60（50　g/L）、还原型谷胱苷肽（3 mmol/L）、尿激酶（2万U/L）、地塞米松（20 mg/L）、异搏定(20 mg/L)、氢氧化钾（100 mmol/L-1）；威斯康星大学(UW）保存液成分主要包括：乳糖醛酸（100 mmol/L）、羟乙基淀粉（50g/L:)、木棉糖（30 mmol?L-1）、磷酸二氢钾（25 mmol/L）、还原型谷胱苷肽（3 mmol/L）、别嘌呤醇（1 mmol/L）、腺苷（5 mmol/L）等。分别以AMU和UW灌注以后，从同一动物（兔）同时获取的心、肝、肾、肺各分别保存48、48、96和12 h，观察2种保存液对家兔心脏、肝脏、肾脏和肺脏的低温保存过程中组织形态学的影响，以确定AMU保存液的效果。结果：心脏保存48 h，肝脏保存36 h，肾脏保存72 h，AMU液与UW液比较，光镜下组织结构和电镜下超微结构的变化基本相同；肝脏保存48 h，肾脏保存96 h，AMU液在光镜及电镜下结构变化重于UW液。结论:AMU液对心脏保存48 h、肝脏保存36 h、肾脏保存72 h、肺脏保存12 h与UW的保存效果相同；肝脏保存48 h、肾脏保存96 h AMU液不如UW液。AMU液对各脏器有效保存时间内与UW液比较无明显差异，AMU液保存效果与UW液基本一致。     

保存时间和温度对血清腺苷脱氨酶活性的影响

目的 探讨标本的存放时间和温度对血清腺苷脱氨酶活性的影响.方法 收集25名健康体检者血标本50份,分为两组,分别保存在25℃和-20℃,将1h内测定的腺苷脱氨酶活性作为对照,分别在2h、12h、24h、48h、72h对两组标本进行腺苷脱氨酶的活性测定,比较不同时间和不同保存方式测定的结果与1h小时测定结果的差异性.结果 25℃下24h后腺苷脱氨酶活性和1h腺苷脱氨酶活性的差异有统计学意义(P<0.001);-20℃下72h后腺苷脱氨酶活性和1h腺苷脱氨酶活性的差异有统计学意义(P<0.001).结论 为求结果的真实准确,全血标本25℃下应在12h内完成腺苷脱氨酶的活性测定.-20℃下应在48h内完成测定.     

档案标本中的RNA提取及扩增技术

石蜡包埋组织和其他固定组织代表档案标本,这些组织是前瞻和回顾性分子遗传学或感染疾病研究的巨大资源。用RT-PCR方法扩增福乐马林固定、石蜡包埋组织中的RNA,为固定材料中基因表达和RNA病毒回顾性分析等流行病学问题的研究提供了最有价值、简单方便的方法。1 材 料 用10%的中性福尔马林缓冲液（BNF）固定的肺腺癌组织标本,二甲苯、乙醇、缓冲液、dNTP及逆转录酶,Taq酶。2 方 法2.1 固定材料中的RNA提取 档案材料为福尔马林固定、石蜡包埋组织。首先对材料脱蜡,所用的试剂是二甲苯。脱蜡两次后,用乙醇洗去二甲苯。取脱蜡组…