钙化大鼠心血管组织肾上腺髓质素及其受体系统的变化

目的:探讨钙化大鼠心血管组织肾上腺髓质素(adrenomedullin, ADM)生成和ADM及其受体系统--降钙素受体样受体(calcitonin receptor-like receptor, CRLR)与受体活性修饰蛋白(receptor activity modifying protein, RAMPs)基因表达的改变及其病理意义.方法:放射免疫法测定血浆、心肌和血管组织ADM含量;半定量RT-PCR方法测定心肌和血管ADM、降钙素受体样受体(CRLR)和RAMP2/3 mRNA水平.结果:与对照组大鼠比较,钙化大鼠心肌和主动脉钙含量分别高342 %和606 %(P<0.01);心肌和主动脉碱性磷酸酶活性分别高66.5 % (P<0.05)和82.7 % (P<0.01).钙化组大鼠血浆、心肌和血管ADM含量分别较对照组高58 %(P<0.01),14.3 %(P<0.01)和27.8 %(P<0.05);心肌ADM、CRLR和RAMP2 的mRNA水平较对照组分别高 90.6 %,157.5 %和119.6 %(均P<0.01), 而RAMP3 mRNA水平较对照组低14.1 %(P<0.01);血管组织ADM、CRLR、RAMP2 和RAMP3 的mRNA水平较对照组分别高37.7 %(P<0.01),41.4 %(P<0.01), 60.1 %(P<0.05)和13 %(P< 0.01).心血管组织中ADM与其受体系统mRNA变化水平有一定的相关性.结论:钙化大鼠心血管组织ADM生成增加,ADM、CRLR和RAMP2/3基因表达亦有不同程度的变化,提示ADM 及其受体系统可能参与心血管钙化的调节过程.     

肾上腺髓质素及其受体系统在自发性高血压大鼠心血管组织中的变化

目的通过观察肾上腺髓质素(ADM)及其受体系统-降钙素受体样受体(CRLR)以及受体活性修饰蛋白(RAMPs)在自发性高血压大鼠(SHR)心血管组织中的改变,以探讨ADM在心血管系统中保护机制。方法通过放射免疫法测定SHR和WKY大鼠心肌和血管ADM含量,半定量RT-PCR测定ADM、CRLR、RAMP2和RAMP3 mRNA水平。结果SHR大鼠有显著的高血压,比对照组高76%,心脏重量与体重之比明显高于对照组46%;血浆、心肌和血管ADM含量分别较对照组高42.5%、68.3%和80.4%;ADM、CRLR、RAMP2和RAMP3 mRNA在心肌组织分别较对照组高46%、62%、41%和54%(P<0.01),而在血管组织高72%、87%、53%和74%(P<0.01)。结论SHR大鼠心血管组织ADM生成增加,ADM、CRLR和RAMP2,3基因表达亦有不同程度的增加。提示ADM及其受体系统可能在自发性高血压中发挥重要的作用。     

参麦对大鼠肾缺血再灌注损伤中TLR4/NF-κB信号通路的影响

目的 观察参麦注射液(SM)对大鼠肾缺血再灌注损伤TLR4/NF-κB信号通路的影响,探讨参麦对肾脏保护作用的机制.方法 建立大鼠肾缺血再灌注损伤模型,随机分为假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(IR组)、参麦预处理组(IR+SM组).HE法观察肾组织病理学形态,自动生化分析仪测定BUN、Cr水平,实时荧光定量PCR法检测肾组织中TLR4和NF-κB p65 mRNA含量,ELISA法检测血浆中ICAM-1和TNF-α表达.结果 IR组较Sham组肾组织病理学明显改变,BUN、Cr水平、TLR4、NF-κB p65 mRNA含量及ICAM-1、TNF-α表达均升高(P＜0.05).与IR组相比,IR+SM组肾组织病理学改变减轻,BUN、Cr水平、TLR4、NF-κB p65 mRNA含量及ICAM-1和TNF-α表达降低(P＜0.05).结论 SM通过抑制TLR4/NF-κB信号通路,下调其下游ICAM-1和TNF-α表达,发挥肾脏保护作用.     

中介素及其受体系统在油酸致大鼠急性肺损伤中的变化和意义

目的:观察油酸(OA)致大鼠急性肺损伤(ALI)模型中,血管活性肽中介素(Intermedin,IMD)及其受体系统--降钙素受体样受体(CL)与受体活性修饰蛋白(RAMPs) 在肺组织中含量的变化及其病理意义.方法:尾静脉注射OA(0.2 mL/kg)制备大鼠ALI模型为OA组,测定大鼠动脉血氧分压(PaO2)、支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞计数及中性粒细胞百分比(%PMN);放射免疫法测定血浆和肺组织匀浆IMD1-53含量; 半定量RT-PCR方法测定肺组织IMD,CL 和RAMP1,-2,-3 mRNA水平; 受体放射配体结合实验检测肺浆膜125I-IMD1-53受体结合力.结果:与正常对照组比较,油酸组大鼠血浆及肺组织匀浆中IMD1-53含量分别下降20.8%和74.5%(均P＜0.05);肺组织IMD,CL,RAMP1,RAMP2的mRNA表达水平分别下降30%,38%,26%和37.9%(均P＜0.01),肺组织中IMD与其受体系统mRNA变化水平有一定的相关性.125I- IMD1-53受体最大结合位点增加.肺组织、血浆中IMD浓度与PaO2呈正相关,与BALF中%PMN呈负相关(P＜0.01或0.05).结论:油酸致急性肺损伤大鼠肺组织IMD1-53含量降低,IMD,CL 和RAMP1,-2,-3基因表达有不同程度的降低,提示IMD及其受体系统参与了OA致急性肺损伤的发病过程.     

辛伐他汀对缺血再灌注损伤大鼠肾脏的保护作用

目的探讨辛伐他汀(Simvastatin)对肾缺血再灌注损伤(IRI)的保护作用。方法建立大鼠肾缺血再灌注损伤模型,随机将动物分为Simvastatin组,缺血再灌注(IR)组,锌原卟啉(ZnPP)组,假手术(sham)组。测定各组大鼠血清尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)的含量,并进行肾组织光镜形态学观察和免疫组化分析血红素加氧酶-1(HO-1)的表达情况。结果 IR组和ZnPP组BUN、Cr值升高,HO-1的表达少或几乎不表达,肾组织结构紊乱;Simvastatin组除HO-1表达明显增多外,还显著逆转上述改变,组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论 Simvastatin可上调HO-1的表达,减轻大鼠肾脏的IRI。     

心肌纤维化大鼠Intermedin1-53及其受体的变化

目的 在大鼠心肌梗死致心肌纤维化模型上观察Intermedin1-53及其受体的变化.方法 通过结扎左冠状动脉前降支制备大鼠心肌梗死模型,4周后检测心功能,梗死区心肌组织的Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达,IMD1-53和心室肌降钙素受体样受体(CL)、受体活性修饰蛋白(RAMP)1/2/3的mRNA表达.结果 与假手术组比较模型组大鼠的心功能明显减低,检测梗死区心肌组织的Ⅰ、Ⅲ胶原蛋白表达增加,心室肌IMD1-53、CL、RAMP1/2/3的mRNA水平分别上调75%(P＜0.01)、57%(P＜0.05)、61%(P＜0.01)、48%(P＜0.05)和80%(P＜0.05).结论 心肌纤维化大鼠的心肌IMD1-53及其受体明显上调,其变化可能参与心肌纤维化的发病过程.     

脂联素介导 APPL1／AMPK 信号通路对小鼠肾脏缺血再灌注损伤后期纤维化的影响

目的：研究脂联素（APN）介导 APPL1／AMPK 信号通路对小鼠肾脏急性缺血再灌注损伤后期纤维化的影响。方法雄性 C57BL／6小鼠48只,随机分为假手术组（Sham 组）、肾脏急性缺血再灌注组（IRI 组）、肾脏急性缺血再灌注＋APN 组（APN／IRI 组）和肾脏急性缺血再灌注＋生理盐水组（NS／IRI 组）,每组各12只。 APN／IRI 组在术前15 min、术后每24 h 分别经腹腔注射 APN 蛋白球状片段5μg／g,共3次;NS／IRI 组在相应时点经腹腔注射等量生理盐水。 IRI 组均行双侧夹闭肾蒂30 min 后开放肾灌注,Sham 组分离肾蒂但不夹闭。各组大鼠分别在术后2 d 随机各取6只小鼠,留取血液及肾组织标本。 PAS 染色观察肾组织病理变化;全自动生化分析仪检测血尿素氮（BUN）及血肌酐（Scr）含量;Western blot 检测肾脏组织 APPL1蛋白表达和 AMPK 磷酸化水平。术后14 d 每组取剩余6只小鼠肾脏标本,天狼星红苦味酸（Sirus red）染色观察肾组织病理变化,real time PCR 检测α平滑肌肌动蛋白（α－SMA）和转化生长因子β1（TGF －β1）的 mRNA 表达。结果术后2 d,与 Sham 组相比,IRI组、APN／IRI 组和 NS／IRI 组小鼠肾组织小管间质损害加重,血 BUN、Scr 升高（P ＜0．05）,APPL1蛋白表达和AMPK 磷酸化水平明显增高（P ＜0．05）;与 IRI 组相比,APN／IRI 组小鼠肾小管损害明显减轻,血 BUN、Scr 明显降低（P ＜0．05）,APPL1蛋白表达和 AMPK 磷酸化水平明显增高（P ＜0．05）。术后14 d,与 Sham 组相比,IRI 组、APN／IRI 组和 NS／IRI 组小鼠肾组织纤维化程度明显增高,α－SMA 和 TGF －β1的 mRNA 的表达明显增多（P ＜0．05）;与 IRI 组相比,APN／IRI 组小鼠肾组织纤维化程度明显降低,α－SMA 和 TGF －β1的 mRNA 的表达量明显减少（P ＜0．05）。结论APN 介导 APPL1／AMPK 信号通路减轻小鼠肾脏急性缺血再灌注损伤后期纤维化。     

缺血后处理对肾缺血再灌注损伤大鼠肾组织细胞凋亡及bcl-2和bax基因表达的影响

目的:观察缺血后处理(IPo)对大鼠肾缺血再灌注(I/R)损伤后肾组织细胞凋亡及bcl-2和bax基因表达的影响,并探讨其肾保护的机制.方法:18只雄性SD大鼠随机分为3组:假手术组(S组),缺血再灌注组(I/R组),缺血后处理组(IPo组),每组6只.采用夹闭双侧肾蒂45 min,再灌注6 h制备肾脏缺血再灌注模型.IPo组在夹闭双侧肾蒂45 min后,再灌注10 s,缺血10 s,反复3次,再全面恢复血液灌注.再灌注6 h时处死大鼠,酶法测定血清肌酐(Cr)含量;苦味酸不除蛋白法测定尿素氮(BUN)含量;采用逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)检测肾组织bcl-2 mRNA和bax mRNA表达,表达水平以与其相应的内参β-actin的光密度比表示;原位末端脱氧核苷酸转移酶标记(TUNEL)法检测肾组织中凋亡细胞,计算细胞凋亡指数(AI);苏木素-伊红(HE) 染色,在光镜下观察肾组织病理学变化.结果:与S组比较,I/R组肾组织Cr 和BUN浓度升高(P＜0.05),bcl-2 mRNA表达量降低(P＜0.05),bax mRNA表达量升高(P＜0.05),bcl-2 mRNA/bax mRNA的比值降低(P＜0.05),AI增加(P＜0.05),组织形态学观察可见肾小管上皮细胞水肿,变性坏死,肾小管扩张,间质淤血、水肿、大量中性粒细胞浸润.与I/R组相比,IPo组肾组织Cr和BUN浓度降低(P＜0.05),bcl-2 mRNA表达量升高(P＜0.05),bax mRNA表达量降低(P＜0.05),bcl-2 mRNA/bax mRNA的比值升高(P＜0.05),AI减少(P＜0.05),肾组织形态学损伤减轻.结论:缺血后处理可减轻肾脏I/R损伤,其肾保护作用可能与其上调bcl-2基因和下调bax基因表达,使bcl-2 mRNA/bax mRNA比值升高,从而抑制缺血再灌注损伤后的肾组织细胞凋亡有关.     

CNP及其受体NPR-B在缺血再灌注损伤模型大鼠肾组织中的表达

[目的]观察CNP及其受体NPR-B在缺血再灌注损伤(IR)模型大鼠肾组织中的表达情况.[方法]取雄性Wistar大鼠随机分为假手术组(Sham组)、缺血再灌注0 h组(IR0 h)、1 h组(IR1 h)、2 h组(IR2 h)及4 h组(IR4 h).摘除各组大鼠左侧肾脏,Sham组分离右肾动静脉但不夹闭,IR各组分离右肾动静脉夹闭45 min后取下血管夹恢复肾脏血液供应,建立肾脏IR模型;各组大鼠到达各自时间段立即采集血液测定血清肌酐(Cr)及尿素氮(BUN)值,取各组大鼠肾组织观察NPR-B的分布及CNP和NPR-B mRNA表达情况.[结果]与Sham组比较,IR各组Cr,BUN水平明显升高(P<0.05),且随着再灌注时间的延长升高更为明显;NPR-B分布明显增多(P<0.05),CNP mRNA,NPR-B mRNA表达均显著升高(P<0.05),随着缺血再灌注时间的延长CNP mRNA表达亦随之增加,缺血再灌注4 h时表达水平最高.[结论]肾组织中CNP及NPR-B表达上调的机制认为可能是IR的代偿性保护作用.     

五味子提取物对大鼠肾缺血再灌注损伤保护研究

目的探讨五味子提取物对实验性大鼠肾缺血再灌注损伤（IRI）的保护作用。方法建立大鼠实验性缺血性急性肾损伤模型,在缺血30min后再灌注不同时间点检测血尿素氮（BUN）、血肌酐（SCr）和尿液中N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖酐酶（NAG）。制备肾组织匀浆,分别测定超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）含量,用半定量分析法判断肾小管损伤情况。结果假手术对照组各项指标变化不明显,IRI组BUN、SCr、NAG及MDA含量升高,SOD活性显著降低,以24h最为显著,与假手术对照组相比差异有统计学意义（P〈0.01）;五味子治疗组明显使大鼠BUN、SCr、NAG及MDA含量降低,肾组织SOD活性显著升高（P〈0.01）。结论五味子提取物保护肾缺血性损伤的作用可能与抗自由基损伤和减轻脂质过氧化有关。