β-arrestin和NF-KB与细胞凋亡之间的关系

β-arrestin是一类在提纯β肾上腺素受体激酶(βARK)的过程中发现的一种重要的支架蛋白和信号调控蛋白,在G 蛋白偶联受体(G-protein-coupled receptor,GPCR)信号转导中发挥着重要作用.新近研究发现,β-arrestin是一种肿瘤抑制因子,为内源性核因子-κB (nuclear factor kappaB,NF-κB)的调控蛋白.本文主要探讨β-arrestin和NF-κB之间相互调控的作用和相关分子机制以及它们对细胞生长、凋亡的调控作用.     

OPG/RANKL/RANK系统在口腔领域中的研究进展

骨骼是一种动态组织,随着机械应力、激素和炎症介质等的变化而不断地改建.破骨细胞在骨改建过程中具有重要作用.骨保护素(osteoprogerin,OPG),破骨细胞核因子κB受体活化因子配基(receptor activator of NF-κB ligand,RANKL)和破骨细胞核因子κB受体活化因子(receptor activator of NF-κB,RANK)在破骨细胞分化、成熟过程中起重要调节作用,是骨改建过程中的关键因子.     

肿瘤坏死因子α对肠上皮细胞株HT-29的核转录因子κB信号通路的激活作用研究

目的:研究肿瘤坏死因子α(TNF-α)对肠上皮细胞株HT-29的核转录因子κB(NF-κB)信号通路的激活作用及鼠尾草酚对TNF-α诱导HT-29的NF-κB激活的影响。方法:将HT-29细胞分为空白对照组、TNF-α组和低、中、高剂量鼠尾草酚组。用CCK-8法检测HT-29细胞活力;Western-blot方法检测IκBα、Pi-IκBα和PiIKKα/β蛋白表达;用NF-κB转录活性试剂盒检测HT-29细胞NF-κB转录活性。结果 :实验各组的HT-29细胞活力比较无显著性差异(P>0.05);TNF-α刺激可诱导HT-29的IκBα磷酸化及降解;鼠尾草酚能使TNF-α诱导HT-29的IKKα/β和IκBα磷酸化显著受抑制(均P<0.05),并且可显著降低NF-κB的转录活性(P<0.05)。结论:TNF-α可激活HT-29的NF-κB经典信号通路,鼠尾草酚对TNF-α诱导的NF-κB激活有抑制作用。     

瑞香素对脊髓损伤大鼠运动功能改善作用的TRL4/NF-κB信号通路机制研究

目的探讨瑞香素激活Toll样受体4/核转录因子kappa B(Toll like receptor 4/NF-κB, TRL4/NF-κB)信号通路对大鼠脊髓损伤(spinal cord injury, SCI)后神经再生及功能恢复的影响,为促进SCI的分子机制研究提供依据。方法建立脊髓损伤实验大鼠模型,并分别于术后1 d、8 d、14 d、21 d和30 d,采用Basso Beattie Bresnahan(BBB)运动功能评分和联合行为评分法(combine behavioral score, CBS)评分测试评价各组SCI大鼠治疗后的神经功能;采用相关试剂盒检测脊髓组织中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)、过氧化氢酶(catalase, CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase, GSH-Px)活性及丙二醛(maleicdialdehyde, MDA)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)、白介素-1β(interleukiN-1β, IL-1β)、白介素-6(interleukin 6, IL-6)、白介素-10(interleukin 10, IL-10)的表达量变化;并采用蛋白质印迹法(Western blot)检测术后各组脊髓组织中对实验大鼠脊髓组织中BCL2-Associated X的蛋白质(BCL2-Associated X Protein, Bax)、B淋巴细胞瘤-2基因(B-cell lymphoma-2, Bcl-2)、Caspase-3、细胞色素C(cytochrome C, Cyt-c)、脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor, BDNF)、酪氨酸激酶受体B(tyrosine kinase receptor B, Trk B)、磷酸化酪氨酸激酶受体B(phospho-tyrosine kinase receptor B, p-TrkB)、TOLL样受体4重组蛋白(recombinant toll like receptor 4, TRL4)和核因子-κB p65(nuclear factor-kappa b p65, NF-κB p65)水平的影响。结果瑞香素能够显著性改善实验大鼠BBB评分和CBS评分结果,且联合用药治疗组效果优于单一药物的疗效。此外,瑞香素能够改善实验大鼠脊髓组织中SOD、CAT、GSH-Px活性和MDA含量,能够降低脊髓组织中TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-10含量;Western blot实验结果表明瑞香素对脊髓损伤诱发的凋亡相关蛋白异常表达具有显著的调节作用,并能够显著性调节BDNF/Trk B信号通路和TRL4/NF-κB信号通路。结论瑞香素改善脊髓损伤的作用机制与是激活TRL4/NF-κB信号密切相关。     

Pellino1 SUMO修饰位点突变对TRAF6介导的NF⁃κB信号转导的影响

目的：研究Pellino1蛋白翻译后修饰——小泛素相关修饰物（small ubiquitin?related modifier,SUMO）修饰对肿瘤坏死因子受体相关分子?6（TNF receptor associated factor 6,TRAF6）介导的核因子κB（nuclear factor κB,NF?κB）信号转导的影响。方法：构建Pellino1 SUMO修饰位点突变的质粒,与TRAF6、泛素（ubiquitin,Ub）质粒共转染至HEK?293细胞中,荧光显微镜观察转染效率,免疫共沉淀的方法检测突变型Pellino1与TRAF6的相互结合作用;同时,检测Pellino1和TRAF6的泛素化修饰水平。采用脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导炎症反应,分提胞浆胞核蛋白,Western blot检测核因子κB的抑制蛋白α（inhibitor of NF?κBα,IκBα）的磷酸化和NF?κB P65的核转位,分析Pellino1蛋白SUMO修饰突变对TRAF6介导的NF?κB信号通路的影响。结果：与野生型Pellino1相比,SUMO修饰突变型Pellino1不仅增加Pellino1的自身泛素化修饰水平,而且可增加其与TRAF6的相互结合作用,并增强TRAF6的泛素化修饰;LPS刺激可增加IκBα的磷酸化和NF?κB P65的核转位,转染使Pellino1 SUMO修饰突变高表达可明显增强LPS诱导的NF?κB信号激活。结论：Pellino1 SUMO修饰突变,可通过增加Pellino1的自身泛素化修饰及其与TRAF6的结合,增强TRAF6的泛素化,最终促进TRAF6介导的NF?κB信号通路的激活。     

艾纳香油通过NF-κB非经典信号影响花生四烯酸代谢缓解LPS所致巨噬细胞的炎症反应

【目的】本文旨在探讨艾纳香油(BBO)通过核转录因子κB(NF-κB)非经典通路影响花生四烯酸(AA)代谢通路发挥抗炎作用。【方法】采用豚鼠离体回肠法检测BBO对慢反应物质(SRS-A)生成的影响,ELISA法检测BBO对脂多糖(LPS)诱导巨噬细胞前列腺素E₂(PGE₂)及白三烯B₄(LTB₄)产生的影响,qRT-PCR检测BBO对LPS诱导巨噬细胞COX-2、5-LOX、FLAP和RelB表达的影响,Western blot检测BBO对NF-κB非经典通路蛋白肿瘤坏死因子受体作用因子3(TRAF3)、肿瘤坏死因子受体作用因子2(TRAF2)、NF-κB诱导激酶(NIK)、p100和RelB浓度的影响。【结果】在1mg·mL^-1的BBO药物浓度下减弱了豚鼠回肠的收缩张力(P<0.001),对SRS-A的生成抑制率达到65.34%;与LPS模型组相比,BBO在40-80μg·mL^-1浓度下降低AA代谢通路中PGE₂(P<0...     

内毒素诱导的TLR4信号转导通路研究进展

TLR4是内毒素(LPS)激活信号转导的受体。LPS首先与LPS结合蛋白(LBP)结合，再传递给CD14分子，形成LPS-LBP-CD14复合物，该复合物与TLR4-MD2相互作用，通过激活细胞内的信号通路而最终导致核因子-κB(NF-κB)、活化蛋白-1(AP-1)等核转录因子的活化，从而诱导炎症细胞因子包括TNF-α、IL-1、IL-6、NO等的大量表达引发脓毒症。对TLR4的研究使我们可以从阻断TLR4信号通路中发挥毒性作用的环节来预防和治疗脓毒性休克。     

基于NLRP3炎性体轴和NF-κB信号通路探讨加味三妙丸防治痛风性关节炎的作用及机制

[目的]基于Nod样受体蛋白3(Nod-like receptor pyrin domain 3,NLRP3)炎性体轴和核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)信号通路,探讨加味三妙丸(modified Sanmiao pill,MSMP)对THP-1细胞痛风炎症模型的抗炎作用及机制。[方法]通过尿酸钠(monosodium urate,MSU)和脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)共同诱导建立THP-1细胞痛风炎症模型。以MTT法测定细胞存活率;酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)测定细胞培养基中白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)分泌水平,Western blot检测NLRP3炎性体轴和NF-κB信号通路中相关蛋白表达情况。[结果]MSU与LPS联用可诱导THP-1细胞产生典型痛风炎症。与空白组比较,模型组THP-1细胞分泌IL-1β水平显著升高(P＜0.01);NLRP3炎性体轴相关蛋白NLRP3、含CARD结构域的凋亡相关颗粒样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing CARD,ASC)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-1(cysteinyl aspartate specific proteinase-1,caspase-1)、磷酸化NF-κB p65(phospho-NF-κB p65,p-NF-κB p65)、磷酸化NF-κB抑制蛋白α(phospho-inhibitor of NF-κB α,p-IκBα)、磷酸化IκB激酶α(phospho-inhibitor of NF-κB kinase α,p-IKKα)及上游调节蛋白髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,MyD88)、Toll样受体2(Toll-like receptor 2,TLR2)、Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)表达明显上调(P＜0.01)。与模型组比较,MSMP具有较强的抗炎效果,对NLRP3炎性体轴和NF-κB信号通路两条路径相关蛋白的异常表达均具有明显的调控作用,不同剂量的MSMP显著降低IL-1β的分泌(P＜0.01),明显下调NLRP3、ASC、caspase-1、p-NF-κB、p-IκBα、p-IKKα及MyD88、TLR2、TLR4等蛋白的表达,且具有剂量依赖性(P＜0.05,P＜0.01)。[结论] MSMP在痛风炎症细胞模型上表现出较强的抗痛风性关节炎作用,其机制与调控NLRP3炎性体轴和NF-κB信号通路相关蛋白的表达密切相关。     

IKKβ及其下游因子在盆腔器官脱垂患者骶韧带中的表达及意义

目的 探讨IKKβ及其下游因子IκBα、NF-κBp65在盆腔器官脱垂(pelvic organ prolapse, POP)患者骶韧带中的表达及意义。方法 收集POP分度Ⅱ-Ⅳ度患者(POP组、30例),非盆底功能障碍患者(对照组、28例)的子宫骶韧带组织。通过免疫组织化学和Western blot检测IKKβ、IκBα及NF-κBp65的表达。HE染色和Masson染色观察宫骶韧带组织的病理学改变和胶原纤维分布。结果 POP组患者子宫骶韧带组织结构疏松紊乱，其胶原纤维数量明显减少。与对照组相比，POP组骶韧带组织中IKKβ、NF-κBp65蛋白表达水平显著增加(P<0.01),而IκBα表达水平明显降低(P<0.01)。结论 POP患者骶韧带组织中IKKβ及其下游因子表达水平的变化，提示NF-κB信号通路中的关键因子可能参与POP发病。     

丹皮酚对脂多糖诱导的大鼠血管内皮细胞VCAM-1、TNF-α释放及TLR4/NF-κB信号通路的影响

目的观察丹皮酚(Paeonol,Pae)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的大鼠血管内皮细胞(vascular endothelial cells,VECs)释放血管内皮细胞黏附因子-1(vascular endothelial cell adhesion molecule-1,VCAM-1)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)及Toll样受体-4(toll-like receptor,TLR4)/核因子κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)信号通路的影响,以阐明Pae抑制VECs黏附功能的分子机制。方法组织块预消化贴壁法分离培养VECs,采用LPS诱导VECs炎性损伤;健康大鼠灌胃给予Pae制备含药血清,反相高效液相色谱法测定血清Pae的含量;RT-PCR法检测TLR4mRNA的表达;凝胶迁移试验检测NF-κB蛋白的表达;免疫组织化学检测VCAM-1的表达;放射免疫法检测TNF-α的表达。结果 Pae含药血清(2.5,5,10μg/mL)作用于LPS诱导的VECs 24h,可抑制VECs中TLR4mRNA和NF-κB蛋白表达,以及VCAM-1和TNF-α分泌,呈现一定的剂量依赖性,其中Pae 10μg/mL的抑制作用均具有统计学意义(P<0.05)。结论 Pae降低TNF-α的释放和VCAM-1水平,可能是通过下调LPS诱导的TLR4/NF-κB信号通路的活化而实现的。