鞣酸对人食管癌细胞系EC9706的抑制作用

目的 探讨鞣酸对体外培养的人食管癌细胞EC9706的生长抑制作用。方法 不同浓度鞣酸（100、200、300、400、500μmol／L）作用EC9706细胞24、48、72、96h后，通过MTT比色法研究鞣酸对EC9706细胞增殖的影响，采用流式细胞仪观察400μmol／L鞣酸能否诱导EC9706细胞凋亡。^3HTdR、^3HLeucine掺入法研究400μmol／L鞣酸对食管癌细胞DNA复制及蛋白合成的影响。结果 鞣酸呈时间、剂量依赖性方式抑制EC9706细胞增殖；流式细胞术检测显示出典型的凋亡峰，细胞凋亡率为46．8％；^3H—TdR、^3H—Leucine掺入量明显减少。结论 鞣酸可以抑制食管癌细胞增殖，诱导细胞凋亡，可能是预防和治疗食管癌的一种新型化合物。     

人脐带间充质干细胞裂解液对食管癌EC9706细胞中尿激酶型纤溶酶原激活物和基质金属蛋白酶-2表达的影响

目的探讨人脐带间充质干细胞(h UCMSCs)裂解液对食管癌EC9706细胞中尿激酶型纤溶酶原激活物(u PA)及基质金属蛋白酶-2(MMP-2)表达的影响。方法收集h UCMSCs,采用反复冻融法制备h UCMSCs裂解液;不同浓度h UCMSCs裂解液作用于食管癌EC9706细胞60 h,对照组加入体积分数10%胎牛血清的培养液。采用Western blot法检测食管癌EC9706细胞中u PA、MMP-2的表达。结果加入h UCMSCs数<食管癌细胞数的裂解液时,食管癌EC9706细胞中u PA、MMP-2的表达与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);加入h UCMSCs数≥食管癌细胞数的裂解液时,食管癌EC9706细胞中u PA、MMP-2的表达较对照组显著降低(P<0.05)。结论 h UCMSCs裂解液对食管癌EC9706细胞的迁移抑制作用可能与u PA、MMP-2有关。     

体外hEGF对食管癌EC9706细胞增殖影响的研究

目的:研究人表皮生长因子(hEGF)对食管癌EC9706细胞增殖的影响作用,探讨hEGF不同浓度、不同时间对食管癌细胞生长的影响。方法:体外正常条件培养EC9706食管鳞癌细胞株,无血清饥饿细胞,加入hEGF,通过镜下形态观察、MTT染色、流式细胞技术等观察细胞增殖变化情况。结果:hEGF在200ng/ml浓度、24h作用时间点,对EC9706细胞有明显刺激增殖作用;倒置显微镜下观察,hEGF刺激细胞呈长梭形改变,细胞连接紧密;细胞周期分析,hEGF刺激细胞30.03%处于增殖活跃的S期,较之对照组15.52%,有极显著性差异。结论:hEGF能够刺激食管癌EC9706细胞增殖,其对细胞增殖的刺激作用呈量效、时效关系。     

佛波酯对食管癌EC9706细胞NDRG_1表达及细胞增殖影响的研究

目的:探讨12-氧-十四烷酰佛波醇-13-乙酸酯(TPA)作用于食管癌细胞EC9706后,对NDRG1mRNA表达、细胞增殖、细胞周期的影响。方法:采用50nmol/L的TPA作用于EC9706细胞,MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞周期的变化,原位杂交法检测NDRG1mRNA水平。结果:TPA能上调NDRG1mRNA水平,抑制EC9706细胞增殖,细胞周期发生G1→S期阻滞。结论:TPA可能通过上调NDRG1mRNA的表达而抑制EC9706增殖,促进其分化。     

大蒜素对人食管癌细胞株Eca-109生长的抑制作用

目的研究大蒜素对人食管癌细胞株Eca-109增殖抑制作用。方法传代培养人食管癌细胞，MTT法及流式细胞仪检测测定Eca-109细胞增殖抑制率。结果大蒜素对细胞的生长均有明显的抑制作用，且呈浓度、时间依赖性。结论一定浓度的大蒜素能抑制食管癌细胞的生长。     

牛膝多糖联合5-氟尿嘧啶对食管癌的作用及相关机制的探讨

目的:探讨牛膝多糖(Achyranthes bidentata polysaccharides,ABPS)及其联合5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-Fu)对食管癌EC9706细胞的作用及可能机制.方法:通过MTT法检测ABPS(3个浓度100、200、300μg/ml)及联合5-Fu对食管癌细胞的增殖的作用;用流式细胞术检测细胞周期改变及凋亡率,Westem blot检测ABPS对食管癌细胞周期相关基因p21和p27表达的影响;免疫细胞化学检测凋亡相关基因bax、bcl-2的表达.结果:(1)ABPS可以抑制食管癌EC9706细胞的增殖;ABPS与5-Fu联合应用对食管癌细胞的增殖抑制作用强于两者单用;(2)ABPS作用后的EC9706出现了G0/G1期的阻滞和早期凋亡;其机制可能分别涉及p21和p27基因表达的增加以及bax基因表达的增加和bcl-2基因表达的减少.结论:ABPS对食管癌细胞的增殖有抑制作用;ABPS与5-Fu联合使用具有协同抗肿瘤作用.     

MiR-338-3p通过靶向WNK1影响食管癌细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的机制研究

目的探讨miR-338-3p影响食管癌细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的分子机制及其对WNK1的靶向调控作用。方法体外培养人正常食管上皮细胞株Het-1A与人食管癌细胞Eca-109、EC-1、EC9706,采用q RT-PCR与Western blot分别检测miR-338-3p、WNK1的表达水平;以EC9706细胞为研究对象,分别将miR-con、miR-338-3p mimics、si-con、si-WNK1、miR-338-3p mimics与pc DNA、miR-338-3p mimics与pc DNA-WNK1转染至EC9706细胞;MTT法检测细胞增殖、流式细胞术检测细胞凋亡、Transwell小室实验检测迁移及侵袭能力;双荧光素酶报告实验检测miR-338-3p与WNK1的靶向关系。结果与Het-1A比较,食管癌细胞Eca-109、EC-1、EC9706中miR-338-3p的表达显著下调(P0.05),WNK1 m RNA及蛋白表达显著上调(P0.05);转染miR-338-3p mimics或si-WNK1可明显降低EC9706细胞的活力、迁移及侵袭细胞数(P0.05),增加EC9706细胞的凋亡率(P0.05);双荧光素酶报告实验证实miR-338-3靶向结合WNK1;共转染miR-338-3p mimics与pc DNA-WNK1可明显逆转转染miR-338-3p mimics对细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的作用。结论 miR-338-3p可靶向下调食管癌中的WNK1,进而抑制食管癌细胞的增殖、迁移及侵袭,和诱导细胞凋亡。     

金喜素对原代培养的人食管癌细胞的抗癌作用

目的: 研究金喜素(Topotecan)对体外原代培养的人食管癌细胞增殖与凋亡作用的影响及可能的机制. 方法: 原代培养人食管癌细胞,MTT法检测金喜素对食管癌细胞增殖作用的影响;吖啶橙染色观察凋亡细胞形态学变化;流式细胞仪定量检测金喜素处理细胞后细胞凋亡情况;底物裂解法检测金喜素对食管癌细胞半胱天冬酶-3(caspase-3)活性的影响. 结果: 金喜素处理细胞48 h后,可明显抑制癌细胞增殖,并呈浓度依赖性;金喜素处理的食管癌细胞经吖啶橙染色可检测到大量凋亡细胞,流式细胞仪检测其凋亡率为(33.4±6.8)%,而未经金喜素处理组几乎未检测到凋亡细胞;金喜素处理食管癌细胞后其Caspase-3活性较未处理组显著增高. 结论: 金喜素可抑制体外原代培养的食管癌细胞增殖,并通过促进Csapase-3活性而诱导细胞凋亡.     

叶黄素对人食管鳞癌细胞诱导分化效应与机制探讨

目的 探讨叶黄素对食管癌EC9706 细胞诱导分化的影响及其机制.方法 食管癌EC9706细胞采用开放式单层贴壁培养.实验设溶剂对照及叶黄素3个剂量组,采用MTT法及流式细胞术,对EC9706 细胞的增殖和细胞周期进行分析,HE染色对细胞的形态学进行观察,酸解DNA甲绿-派洛宁技术了解增殖与分化型细胞比例,免疫组化检测cyclin D1的表达.结果 与溶剂对照组比较,叶黄素(100 μg/mL和150 μg/mL)可明显抑制EC9706 细胞的增殖,阻滞细胞周期于G0/G1期, 降低细胞增殖指数,细胞形态趋向良性分化,cyclin D1 表达水平降低.结论 叶黄素可通过抑制cyclin D1 表达而介导食管癌EC9706细胞增殖抑制和诱导成熟分化.     

TSA对食管癌细胞系EC9706细胞周期作用及分子机制的探讨

目的 研究去乙酰化酶抑制剂曲古菌素A(TSA)对食管癌细胞 EC9706细胞周期的作用及机制.方法 将浓度为0.5、1.0、1.5 μmol/L TSA作用EC9706细胞24 h,用MTT观察不同浓度 TSA 对 EC9706细胞的生长抑制作用;流式细胞仪检测细胞生长及周期;Western Blot检测TSA对食管癌细胞周期相关基因的表达.结果 1.0 μmol/L 浓度的TSA 对EC9706 细胞有明显的生长抑制作用,并呈现一定的量效关系,在1.0 μmol/L浓度之上可明显诱导食管癌细胞EC9706细胞周期阻滞,明显增强p21、p27基因的表达,明显降低 CCND1、CDK4D基因的表达.结论 一定剂量的TSA可抑制食管癌EC9706细胞的生长,通过调控多个细胞周期相关基因诱导食管癌细胞细胞周期阻滞,细胞阻滞的发生与p21、p27基因表达的增加及CCND1、CDK4D基因表达的减少相关.     

ROCK抑制剂对人食管癌EC9706细胞迁移能力的影响

目的研究ROCK特异性抑制剂Y-27632对人食管癌EC9706细胞迁移能力的影响,并探讨其可能的机制。方法体外培养人食管癌株EC9706,加入20μmoL／L的Y-27632溶液（实验组）及等体积的PBS（对照组）培养1h,采用细胞计数、MTF实验检测细胞生长情况,采用Transwell实验观察细胞迁移情况,采用Westernblot检测Cav-1的表达水平,并进行两组的比较。结果细胞计数、MTT、Transwell实验结果显示,Y-27632可以抑制细胞的生长与迁移能力,与对照组比较差异有统计学意义（P均〈0．05）。Westernblot检测结果显示,Y-27632处理细胞1h后,Cav-1蛋白表达水平明显下降,并明显低于对照组（P均〈0．05）。结论ROCK信号通路参与EC9706细胞生长与迁移的调节,Y-27632可以抑制EC9706细胞的生长及迁移能力,其机制可能与下调Cav-1的表达有关。     

活性氧在大黄素联合顺铂诱导食管癌EC-9706细胞凋亡中的作用

目的探讨大黄素联合顺铂诱导人食管癌EC-9706细胞凋亡过程中的作用及可能机制。方法不同浓度大黄素、顺铂与二药联合分别作用于EC-9706细胞,应用吖啶橙/溴化乙锭（AO/EB）双荧光染色法测细胞凋亡（形态学变化）;MTT法检测细胞抑制率;用Annexin V-FITC/碘化丙啶（PI）双染法及流式细胞术检测细胞凋亡情况（计算凋亡细胞百分率）;流式细胞术检测细胞内活性氧变化情况。结果大黄素、顺铂均可明显抑制EC-9706细胞增殖,并且呈一定的时间依赖性;大黄素、顺铂分别及联合作用24 h,细胞早期凋亡率分别为（15.39±3.40）%、（12.80±2.41）%和（23.09±3.97）%,较对照组〔（1.42±0.14）%〕明显增加（P均〈0.05）;两药分别及联合作用2 h,细胞内活性氧的含量分别为（35.57±3.16）%、（29.44±2.43）%和（43.23±3.68）%,较对照组〔（4.73±2.12）%〕明显升高（P〈0.05）。结论大黄素能抑制EC-9706细胞增殖,通过诱导细胞内活性氧的产生促进凋亡,与顺铂联用存在协同作用,其机制可能与通过诱导细胞内活性氧的产生促进细胞凋亡有关。     

PTPN14对食管癌的抑制作用及其机制研究

目的探讨蛋白酪氨酸磷酸酶14（PTPN14）对食管癌的抑癌作用及其机制。方法通过转染PTPN14质粒过表达食管癌细胞EC9706 中PTPN14 的表达,实时荧光定量聚合酶链反应及Western blot检测其过表达效果;四甲基偶氮唑盐比色法检测过表达PTPN14对EC9706细胞增殖的影响;流式细胞术检测过表达PTPN14对EC9706 细胞周期的影响;Western blot检测过表达PTPN14 对YAP 蛋白表达的影响。结果转染PTPN14质粒可上调食管癌细胞系EC9706 中PTPN14 的表达;过表达EC9706 细胞中PTPN14 可以抑制食管癌细胞的增殖,使细胞周期阻滞在G1期;过表达EC9706 中PTPN14 可以下调细胞中YAP的表达水平。结论PTPN14可通过下调YAP,阻滞食管癌细胞周期,抑制细胞增殖。     

调控CIAPIN1基因表达对食管癌细胞生长及侵袭性的影响

目的 采用重组慢病毒CIAPIN1表达载体和CIAPIN1沉默载体感染食管癌EC9706细胞,观察调控CIAPIN1基因表达对细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡及体外侵袭转移的影响。 方法 构建CIAPIN1表达慢病毒载体和CIAPIN1 siRNA慢病毒载体,包装得到重组慢病毒;分别感染食管癌EC9706细胞,筛选得到稳定CIAPIN1基因高表达和低表达的细胞。实验分为CIAPIN1表达组、CIAPIN1 siRNA组、无关siRNA对照组和空白对照组。采用RT-PCR和蛋白质印迹法分析CIAPIN1基因和蛋白的表达,MTT实验检测细胞增殖,流式细胞术(FCM)分析细胞周期及细胞凋亡的变化, Boyden小室检测细胞侵袭转移。 结果 与空白对照组、无关siRNA对照组和CIAPIN1 siRNA组比较,CIAPIN1高表达组细胞生长受到抑制(P<0.05);S和G₂/M期细胞比例减少,G₀/G₁期细胞比例增加(P<0.05);平均细胞凋亡率增加(P<0.05),穿透Matrigel的平均细胞数减少(P<0.05)。 结论 以慢病毒为载体介导的CIAPIN1基因高表达可有效抑制食管癌EC9706细胞增殖、促进细胞凋亡和降低细胞侵袭迁移能力。     

调控CIAPIN1基因表达对食管癌细胞生长及侵袭性的影响

目的 采用重组慢病毒CIAPIN1表达载体和CIAPIN1沉默载体感染食管癌EC9706细胞,观察调控CIAPIN1基因表达对细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡及体外侵袭转移的影响.方法 构建CIAPIN1表达慢病毒载体和CIAPIN1 siRNA慢病毒载体,包装得到重组慢病毒;分别感染食管癌EC9706细胞,筛选得到稳定C...     

RASSF1A基因对食管癌细胞EC9706生长抑制作用的研究

目的观察RASSF1A基因对食管癌细胞EC9706生长的抑制。方法将包含RASSF1A基因的质粒转染RASSF1A表达缺失的EC9706细胞,建立稳定转染细胞系,通过MTT法检测细胞活性和增殖能力、流式细胞仪检测其对细胞周期的影响、裸鼠移植瘤实验检测转染细胞的体内成瘤特性。结果稳定表达RASSF1A的EC9706细胞较对照组细胞的RASSF1A蛋白表达增加;细胞生长速度减慢（P〈0．01）;细胞周期中G1期比例增加,S期比例减少（G1期：RASSF1A组细胞：68．53％±3．34％;空质粒组：54．25％±4．61％;未转染组：53．41％±5．60％。S期：RASSF1A组细胞：（23．19±5．04）％;空质粒组：（31．81±2．05）％;未转染组：32．09％±1．99％）（P〈0．01）;同时裸鼠致瘤能力也被抑制（P〈0．05）。结论RASSF1A基因的外源性表达能显著抑制食管癌细胞在体内外的生长,提示该基因在食管癌的发生发展中发挥重要作用。     

姜黄素对食管癌EC-9706细胞增殖的影响

目的观察姜黄素对人食管癌EC-9706细胞增殖的影响并探讨其分子机制。方法应用50～200txmol／L姜黄素处理食管癌EC-9706细胞株12—48h后,应用四甲基偶氮唑蓝（MTF）法检测细胞增殖抑制率、逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）法检测热休克蛋白70（Hsrv0）mRNA的表达。结果经姜黄素干预后,人食管癌EC一9706细胞生长减慢,MTT法检测结果显示增殖抑制率达18．3％～77．5％（P〈0．05）,呈良好的时间一剂量效应关系,HSP70mRNA的表达下调。结论姜黄素能够有效抑制人食管癌细胞EC-9706的增殖．其机制可能与抑制HSP70mRNA的表达有关。     

组织蛋白酶D对CD11b＋髓系来源细胞体外增殖、迁徙和侵袭的影响及侵袭机制

目的：探讨组织蛋白酶D（cathepsin D）对CD11b＋髓系来源细胞（BMDCs）体外增殖、迁徙和侵袭的影响,并初步探索侵袭机制。方法：建立预转移期内胰腺癌原位瘤裸鼠模型L3．6pl组或Colo357组和无瘤荷裸鼠模型,流式细胞术检测骨髓和肝脏中CD11b＋髓系来源细胞的比例,MTT检测细胞增殖能力,Tran-swell侵袭小室实验检测细胞的侵袭及迁徙能力,蛋白质印迹法检测分泌蛋白组织蛋白酶D的表达和CD11b＋髓系来源细胞中基质金属蛋白酶2（MMP-2）的表达。结果：预转移期内胰腺癌原位瘤L3．6 pl组骨髓和肝脏中CD11b＋细胞比例明显高于Colo357组（P〈0．05）。组织蛋白酶D可以促进CD11b＋髓系来源细胞的增殖、迁徙和侵袭,而阻断组织蛋白酶D之后,细胞增殖、迁徙和侵袭则明显地受到抑制。组织蛋白酶D增强CD11b＋髓系来源细胞中MMP-2的表达。结论：组织蛋白酶D在诱导CD11b＋髓系来源细胞的增殖和迁徙中发挥重要作用,并通过对MMP-2的调控来增强CD11b＋髓系来源细胞的体外侵袭能力。     

食管鳞癌上皮细胞间质转化对NK细胞活化及其生物学作用的研究

目的 探讨食管鳞癌上皮细胞间质化（EMT）对自然杀伤（NK）细胞生物学活性的影响。方法 通过Western blot检测EMT化相关蛋白E-cadherin和Vimentin表达,从6株细胞系中筛选出 EMT化和非EMT化食管鳞癌细胞株;收集10例正常人外周血,负性分选NK细胞;根据共培养不同的条件培养基分为RPMI 1640正常培养基刺激-NK组（NC组）、EC9706细胞上清液刺激-NK组（EC9706组）与KYSE150细胞上清液刺激-NK组（KYSE150组）,将不同的条件培养基加入NK细胞共培养72 h,流式细胞术检测NK细胞表面/胞内分子的表达。10 ng/mL 转化生长因子-β（TGF-β）处理KYSE150细胞株7 d诱导EMT化后,收集KYSE150 EMT和KYSE150上清液,分别与NK细胞共培养,72 h后以流式细胞术检测NK细胞表面/胞内分子的表达、CD107a脱颗粒能力、靶细胞K562杀伤效应、NK细胞增殖及凋亡。结果 6株细胞系中筛选出2株EMT化和4株非EMT化的食管鳞癌细胞株,从中各选出一株（EC9706和KYSE150）用于后续实验;NK细胞负性筛选达到90%以上的纯度,T细胞<1%。不同的食管鳞癌细胞上清液刺激后,3组NK细胞表面活化型、抑制型受体,效应分子结果显示:与NC组和KYSE150组比较,EC9706组活化型受体NKP30、NKG2D、NKP44表达,颗粒酶释放均降低（ P<0.05）;抑制型受体NKG2A和CD158b表达增加（ P<0.05）;NKP46、CD226、CD16表达和穿孔素释放在3组间差异无统计学意义。与KYSE150上清刺激比较,KYSE150 EMT上清刺激后,NK细胞活化型受体NKP30、NKG2D、NKP44表达,穿孔素释放均降低;CD107a脱颗粒作用、靶细胞K562杀伤效应均减弱,NK细胞Ki67增殖指数下降（ P<0.05）;抑制型受体NKG2A和CD158b表达增加（ P<0.05）;NKP46、CD226、CD16表达,颗粒酶释放及NK细胞凋亡在两组间差异无统计学意义。结论 食管鳞癌细胞EMT化可能通过抑制NK细胞活化、减少NK细胞杀伤效应分子的分泌来降低NK细胞杀伤效应,从机体免疫监视中逃逸。